小干扰RNA逆转Wnt/β-catenin通路对肝癌耐药细胞株HepG2/ADM的影响研究

目的 了解沉默β-catenin基因对肝癌耐药细胞HepG2的影响。方法 实验分为5组：正常肝细胞（LO2）组、HepG2组、HepG2/ADM组、SiNC-HepG2/ADM阴性转染组和Siβ-catenin-HepG2/ADM转染组;细胞免疫荧光技术检测各组β-catenin的表达情况;设计并筛选出抑制效率最高的Siβ-catenin;Western-blot及RT-PCR技术检测各组β-catenin、P-gp、MRP1的mRNA和蛋白的表达水平;MTT法观察各组对阿霉素（ADM）、氟尿嘧啶（5-FU）、环磷腺苷（VCR）和奥沙利铂（OHP）的敏感性;流式细胞仪检测各组细胞凋亡。结果 50 mol/L的ctnnb1-001在HepG2/ADM中抑制效率最高：78.86%（P<0.05）,选其为Si-β-catenin;细胞免疫荧光显示HepG2/ADM中β-catenin荧光最强,转染Si-β-catenin后荧光显著减弱;β-catenin、P-gp和MRP1 mRNA和蛋白在HepG2/ADM组表达较高,mRNA表达分别为：0.92±0.03、7.98±0.43和4.56±0.12（P<0.05）,蛋白表达分别为：1.128±0.214、1.678±0.344和1.405±0.212（P<0.05）;转染Siβ-catenin至HepG2/ADM中,β-catenin、P-gp和MRP1在mRNA及蛋白水平均不同程度表达减少,mRNA表达分别为：0.47±0.03、0.66±0.054和0.74±0.03（P<0.05）,蛋白表达分别为：0.787±0.032、0.797±0.055和1.390±0.050（P<0.05）;Siβ-catenin-HepG2/ADM转染组较HepG2/ADM组对ADM、5-FU、VCR和OHP的耐药系数（RI）分别为0.61、0.55、0.30、0.55,对化疗药物敏感性显著增强（P<0.05）;Siβ-catenin-HepG2/ADM转染组凋亡率（28.05±0.35）%,较其他组明显增加（P<0.05）。结论 Wnt/β-catenin通路在HepG2中异常激活,其中β-catenin可能正性调控肝癌耐药基因P-gp和MRP1,Si-β-catenin能一定程度阻断Wnt通路,并能一定程度逆转肝癌细胞株HepG2的耐药性和增强化疗敏感性,增加凋亡。     

高糖及TNF-α对RAW264.7细胞向破骨细胞分化的影响

【摘要】 目的 观察高糖及TNF-α的培养条件对RAW264.7细胞向破骨细胞诱导分化的影响。方法 在正常、高糖(30 mmol/L)及TNF-α(10 μmol/L)条件下培养RAW264.7细胞后,加入浓度为100 ng/mL的细胞核转录因子κB受体激活物的配体(receptor activator of NF-κB ligand, RANKL)为诱导剂,诱导RAW264.7向破骨细胞分化;诱导9天后,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色,比较各组TRAP+细胞数,RT-PCR及Western Blot检测各组破骨细胞标志基因CTR和MMP-9的表达。结果 不同的培养条件下RANKL均能诱导RAW264.7分化为成熟的破骨细胞,其中TNF-α环境中RAW264.7形成的TRAP+阳性细胞数、CTR和MMP-9的表达最高,而在高糖环境下最低。结论 TNF-α可以促进RAW264.7向破骨细胞分化,而高糖对这个过程可能是抑制作用,这一现象符合Ⅰ型和Ⅱ糖尿病患者骨质破坏的表现;高糖及TNF-α的培养条件下RANKL对RAW264.7的作用可模拟糖尿病足病变微环境中OC的诱导分化的过程。     

3D打印导板在发育性髋关节发育不良全髋关节置换术中的应用

目的：探讨3D打印导板在发育性髋关节发育不良全髋关节置换中的应用价值。方法：回顾分析2016年2月至2018年5月行全髋关节置换术的发育性髋关节发育不良患者25例,男4例,女21例;年龄40~75岁;CroweⅡ型5例,Crowe Ⅲ型14例,Crowe Ⅳ型6例。应用3D打印术中导板组12例,传统全髋关节置换术13例,两组均为同一手术组医师完成。比较两组手术时间、术中出血、术后引流及术后6个月Harris评分,患侧和健侧髋臼外展角、前倾角,旋转中心至坐骨结节连线垂直距离。结果：25例获得随访,随访时间12~26个月,3D打印导板组相对传统手术组手术时间短、术中术后出血量少、术后6个月Harris评分高（P<0.05）。3D打印导板组臼杯位置（旋转中心距坐骨结节连线距离、前倾角、外展角）与健侧髋臼相比差异无统计学意义（P>0.05）;传统手术组患侧旋转中心距坐骨结节连线距离、前倾角与健侧相比差异有统计学意义（P<0.05）,外展角差异无统计学意义（P=0.487）,两组均无术后感染和假体松动。。结论：3D打印术中导板技术对于发育性髋关节发育不良全髋关节置换术是一种个体化、精准化,有应用前景的技术。     

肝动脉灌注化疗联合仑伐替尼治疗巴塞罗那临床肝癌B或C期肝细胞癌

目的 观察肝动脉灌注化疗（HAIC）联合仑伐替尼治疗巴塞罗那临床肝癌（BCLC）B或C期肝细胞癌（HCC）效果,分析影响患者生存时间的因素。方法 回顾性分析104例BCLC B或C期HCC患者资料,根据治疗方案将其归入观察组（46例,接受HAIC联合仑伐替尼治疗）及对照组（58例,仅接受HAIC）;比较2组疗效、不良反应及患者总生存期（OS）和无进展生存期（PFS）,以Cox回归分析评估OS影响因素。结果 治疗后3、6个月,观察组改良实体瘤疗效评价标准（mRECIST）评估结果均优于对照组（P均＜0.05）;治疗后1年,组间mRECIST评估结果差异无统计学意义（P＞0.05）。观察组患者总生存率高于对照组（P＜0.05）,而组间无进展生存率差异无统计学意义（P＞0.05）。观察组皮疹发生率高于对照组（P＜0.05）。多因素Cox回归分析结果显示,相比单一HAIC,HAIC联合仑伐替尼［风险比（HR）=0.425,95%CI（0.255,0.791）］可延长患者OS;相比治疗前美国东部肿瘤协作组（ECOG）评分 1、AFP≥400 μg/ml、瘤灶数目≥3及BCLC C期,治疗前ECOG评分 0、AFP＜400 μg/ml、瘤灶数目≤2及BCLC B期均为HCC患者OS独立保护因素（P均＜0.05）。结论 HAIC联合仑伐替尼治疗BCLC B期或C期HCC安全、有效;治疗前ECOG评分、血清AFP水平、瘤灶数目及BCLC分期均为OS影响因素。     

高龄膝骨关节炎患者人工单髁关节置换疗效分析

目的:探讨75岁以上膝骨性关节炎患者行人工单髁关节置换术后临床疗效。方法：自2010年4月至2015年5月应用Oxford第3代人工单髁关节治疗膝内侧间室骨性关节炎患者42例,根据手术单双侧置换情况将患者分为双侧同期置换组和单侧置换组：同期置换组11例,男3例,女8例,年龄（79.18±3.06）岁;单侧置换组31例,男13例,女18例,年龄（78.16±3.48）岁。观察比较患者患膝假体生存现状、术前后血细胞比容变化、术中及术后的失血总量,比较患者术前后膝关节HSS（Hospital for Special Surgery knee-rating）评分。结果：两组术后围手术期并发症比较差异有统计学意义（P<0.05）。42例患者获得随访,时间（5.7±2.3）年。1例既往高血压合病史患者术后第4个月发生脑血栓,1例患者在术后第4个月发生衬垫脱位,2例患者于术后3年因其他内科疾病死亡（1例心肌梗塞,1例肺癌）。双侧同期置换组术后失血总量高于单侧置换组（P<0.05）;4例行双侧同期置换患者术后分别输血2 U。两组术后9个月HSS评分除稳定性评分其他各项评分和总分均高于术前（P<0.05）。结论：内侧单间室退变的75岁以上老年骨性关节炎患者选择人工单髁关节置换术是可行的手术治疗方法。对于双膝病变75岁以上老年患者,双侧同期人工单髁关节置换术同单侧单髁关节置换手术相比,创伤大,会增加围手术期并发症发生率,影响术后快速康复,增加失血量。虽然远期疗效同单侧单髁关节置换手术相当,但为保证手术安全性,仍建议分期手术。     

全髋关节置换治疗强直性脊柱炎髋关节骨性强直

目的：探讨全髋关节置换术在治疗强直性脊柱炎髋关节骨性强直的临床疗效及安全性。方法：自2008年1月至2012年1月,采用全髋关节置换术治疗强直性脊柱炎髋关节骨性强直12例（24髋）,其中男11例,女1例,年龄27~62岁,病程5~32年。统计患者术前及术后髋关节活动度及Harris功能评分,术中及术后并发症。结果：所有患者获得随访,时间60~96个月,平均72.6个月,所有患者术后Harris评分较术前提高,髋关节活动度提高;优3例,良6例,中3例。异位骨化1例,为BrookerⅠ级,无临床症状未处理。1例术前严重屈曲畸形患者术后出现股神经牵拉损伤,随访1年后恢复。末次随访均未出现假体下沉及臼杯松动,无关节脱位、急性感染及下肢深静脉血栓形成等并发症发生。结论：全髋关节置换术是治疗强直性脊柱炎晚期髋关节骨性强直的有效方法。     

基于Kirkpatrick's四级培训评估模型腔镜腹股沟疝培训课程的效果分析

目的探讨腔镜腹股沟疝技术培训班的临床效果。 方法对参加中山大学附属第六医院胃肠、疝和腹壁外科2018年8月20至24日举办的腹股沟疝腔镜技术培训班的64名学员进行回顾性横断面研究。开展腔镜疝修补时间0~6年,平均手术时间（2.1±1.6）年。对学员培训前、培训结束时及培训3~6个月后前后进行问卷调查学员对培训课程的反馈,培训前及培训后3~6个月的手术表现,并基于Kirkpatrick's四级培训评估模型对结果进行分析。腹股沟疝腔镜技术培训班包括腔镜基础技能培训、腹股沟疝手术相关理论授课及手术演示。 结果有64.5%学员对培训课程表示满意。培训后3个月发出调查问卷64份,回收39份,回答率约39/64（60.9%）。回复的学员中,培训前23名有腹腔镜经腹腹膜前疝修补术（TAPP）经验,10名有腹腔镜完全腹膜外疝修补术（TEP）经验,6名是初学者。其中,有TAPP经验的学员中,每一步骤平均自信心得分从培训前的（3.23±0.94）分提高到（3.73±0.68）分,差异有统计学意义（P<0.05）;有TEP经验的10名学员中,每一步骤平均自信心得分从（2.99±0.84）分提高到（3.76±0.58）分,差异有统计学意义（P<0.05）。以初发单侧腹股沟疝为例,TAPP手术时间从培训前的97.6 min减少到培训后76.3 min,TEP手术时间从培训前102.0 min减少到培训后76.5 min（P<0.05）;TAPP手术出血量从培训前13.9 ml减少到培训后7.7 ml,TEP手术出血量从培训前17.0 ml减少到培训后8.4 ml,学员手术表现得到明显提升（P<0.05）。在6名初学者中,有4名已开展TAPP,2名仍未开展TAPP或TEP。 结论开展腹腔镜腹股沟疝手术前参加规范化的腔镜腹股沟疝技术培训课程非常重要,通过参加腹腔镜腹股沟疝技术培训班可以明显提升医师的手术水平。     

基于SEER数据库分析手术在Ⅳ期胆囊癌治疗中的作用

目的 探究手术对Ⅳ期胆囊癌患者预后的影响。方法 从美国SEER数据库筛选2010年1月1日至2015年12月31日间诊断的4 627例Ⅳ期胆囊癌患者,根据是否进行手术治疗分为手术组（3 535例）和非手术组（1 092例）。倾向得分匹配后共得到1 344例,其中手术组和未手术组各672例。采用Cox风险回归模型分析Ⅳ期胆囊癌患者预后的独立风险因素,通过Kaplan-Meier法进行总体和各亚组生存分析和亚组分析,绘制生存曲线并计算中位生存时间（median survival time,MST）。结果 Cox回归模型提示原发灶部位、肿瘤分级、N分期、M分期、放疗、化疗、婚姻状况和手术（HR 0.590,95%CI 0.517~0.672,P<0.001）是Ⅳ期胆囊癌患者预后的独立危险因素。手术组中位（四分位间距）生存时间长于未手术组[7（14）个月 vs 3（8）个月,P<0.001],1年[31.6% vs 16.3%,P<0.001]、3年[9.4% vs 1.4%,P<0.001]生存率均高于未手术组,差异均有统计学意义。亚组分析显示,对于所有原发灶部位、M分期、放疗情况、化疗情况的亚组的Ⅳ期胆囊癌,手术均能改善患者的生存时间和生存结局。结论 手术可以改善Ⅳ期胆囊癌患者的预后情况,且是影响预后的独立危险因素之一。     

小干扰RNA逆转Wnt/β-catenin通路对肝癌耐药细胞株HepG2/ADM的影响研究

目的 了解沉默β-catenin基因对肝癌耐药细胞HepG2的影响。方法 实验分为5组：正常肝细胞（LO2）组、HepG2组、HepG2/ADM组、SiNC-HepG2/ADM阴性转染组和Siβ-catenin-HepG2/ADM转染组；细胞免疫荧光技术检测各组β-catenin的表达情况；设计并筛选出抑制效率最高的Siβ-catenin；Western-blot及RT-PCR技术检测各组β-catenin、P-gp、MRP1的mRNA和蛋白的表达水平；MTT法观察各组对阿霉素（ADM）、氟尿嘧啶（5-FU）、环磷腺苷（VCR）和奥沙利铂（OHP）的敏感性；流式细胞仪检测各组细胞凋亡。结果 50 mol/L的ctnnb1-001在HepG2/ADM中抑制效率最高：78.86%（P<0.05），选其为Si-β-catenin；细胞免疫荧光显示HepG2/ADM中β-catenin荧光最强，转染Si-β-catenin后荧光显著减弱；β-catenin、P-gp和MRP1 mRNA和蛋白在HepG2/ADM组表达较高，mRNA表达分别为：0.92±0.03、7.98±0.43和4.56±0.12（P<0.05），蛋白表达分别为：1.128±0.214、1.678±0.344和1.405±0.212（P<0.05）；转染Siβ-catenin至HepG2/ADM中，β-catenin、P-gp和MRP1在mRNA及蛋白水平均不同程度表达减少，mRNA表达分别为：0.47±0.03、0.66±0.054和0.74±0.03（P<0.05），蛋白表达分别为：0.787±0.032、0.797±0.055和1.390±0.050（P<0.05）；Siβ-catenin-HepG2/ADM转染组较HepG2/ADM组对ADM、5-FU、VCR和OHP的耐药系数（RI）分别为0.61、0.55、0.30、0.55，对化疗药物敏感性显著增强（P<0.05）；Siβ-catenin-HepG2/ADM转染组凋亡率（28.05±0.35）%，较其他组明显增加（P<0.05）。结论 Wnt/β-catenin通路在HepG2中异常激活，其中β-catenin可能正性调控肝癌耐药基因P-gp和MRP1，Si-β-catenin能一定程度阻断Wnt通路，并能一定程度逆转肝癌细胞株HepG2的耐药性和增强化疗敏感性，增加凋亡。     

一期翻修治疗全膝关节置换术后假体周围慢性感染的实验研究

 目的 通过动物实验探讨一期翻修治疗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌所致假体周围慢性感染的疗效。方法 48只新西兰兔行右膝关节置换,术后 4周接种耐甲氧西林金黄色葡萄球菌建立假体周围感染模型。接种 4周后,随机分为两组院实验组一期翻修,对照组行二期翻修第一步抗生素骨水泥填充术。监测置换前,翻修前,翻修后 1、3、5、7天和 2、4、6、12周的 C反应蛋白和红细胞沉降率。翻修后 12周处死,膝关节取样进行细菌培养。培养结果阳性为再感染,阴性为治愈。结果 5只实验动物出组。实验组再感染率为 22.7%(5/22),对照组再感染率为 14.3%(3/21), 两组差异无统计学意义(χ²= 0.102,P=0.750)。翻修后两组 C反应蛋白均升高,第 3天达峰值,第 4周恢复至初次置换前水平,两组差异无统计学意义(F=0.157,P=0.694)。翻修后两组红细胞沉降率均升高,第 5天达峰值,第 12周恢复至初次置换前水平,两组差异无统计学意义(F=0.936,P=0.339)。结论 在明确菌种及其抗菌谱的前提下,治疗由高毒力细菌引起的膝关节假体周围慢性感染,一期翻修的近期疗效与二期翻修无差异。     

彩色多普勒超声心动图引导介入治疗外伤性肌部室间隔缺损1例

患者男,18岁,因刀刺伤心脏致心脏贯通伤15min入院。入院后急诊手术,修补心脏室壁。术后心脏彩色多普勒超声检查：室间隔距心尖6mm处回声失落,缺损口径8mm;彩色多普勒血流显像（color Doppler flowimaging,CDFI）：收缩期可见五彩镶嵌的穿隔血流由左心室经缺损口进入右心室;脉冲多普勒：取样容积置于缺损口右心室侧,测得分流速度2．2m／s。     

骨盆骨折诊断与治疗的重要性

骨盆骨折属高能量损伤,约占全身骨折的4.21%,男性多于女性,高发年龄为31～40岁;约5～20%合并血管神经损伤,髂动脉的钝性损伤可达3.5%;骨盆后环骨折46%～64%合并神经根损伤。严重不稳定骨盆骨折可引起全身血流动力学的改变。对出血处理不当,可继发凝血功能障碍、酸中毒、休克所致多器官功能衰竭,甚则危及生命。     

杭州市某医院甲型H1N1流感220例临床分析

甲型H1N1流感是由甲型H1N1流感病毒引起的新发传染病,截至2009年12月4日已波及207个国家和地区,呈现暴发流行之势。杭州市第六人民医院作为杭州市甲型H1N1流感病例的定点收治单位,2009年6月10日-12月5日共收治甲型H1N1流感住院患者220例,为总结这一新发传染病的临床特征和发病规律,笔者对这些病例资料进行了回顾性分析,以期对该病的进一步防治提供依据。     

栓塞治疗复杂责任血管引发肺结核咯血1例

患者男,40岁,主因＂肺结核10年,间断性咯血1个月、加重1天,累计咯血量约1000ml＂入院。RBC：2.5×1012/L,Hb：58g/L。胸部CT平扫示左上及左下肺结核（图1）。急行支气管动脉及其他责任血管造影,见左侧2支支气管动脉均增粗、扭曲,动脉晚期出现明显片状染色区（图2A）,用明胶海绵碎屑进行栓塞;右支气管动脉与右上肋间动脉共干,发出分支与左侧交通（图2B）,用同样的方法进行栓塞;逐个进行肋间动脉造影,发现左侧第7、8肋间动脉及左膈下动脉也为     

主动脉弓上缘变异支气管动脉介入治疗经验

支气管动脉起源变异是引起介入操作失败的主要原因之一,而起源于主动脉弓上缘的支气管动脉更是一种少见变异。现回顾性分析我科近3年接受支气管动脉介入操作的患者,对其中起源于主动脉弓上缘的变异支气管动脉进行分析。     

胎儿颈部水囊状淋巴管瘤3例

患者1,女,35岁,孕20＋6周,孕2产0,既往体健。常规产前超声检查：胎儿发育与孕周相符,脊柱排列整齐,于胎儿颈部皮下可见大小约65mm×38mm的囊性回声,边界清,形态不规则,内部透声尚可,可见分隔（图1）。羊水增多,最大深度90mm,胎儿双侧胸腔可见积液。超声诊断：胎儿畸形,     

上颌窦海绵状血管瘤动脉栓塞后切除1例

患者女,24岁,主因“右侧鼻腔通气差,间断流黄水1个月”入院。查体：外鼻无畸形,右侧上颌窦区、筛窦区压痛,右鼻腔外侧壁凸出一白色新生物,鼻中隔受压轻度左偏,肿物下方可见下鼻甲。鼻与鼻窦CT显示右侧上颌窦肿物,右鼻腔外侧壁骨质受压移位;增强扫描肿物明显不均匀强化（图1）。术前穿刺抽出新鲜血液,穿刺处渗血较多。患者于术前经右股动脉插管,接受双侧颌内动脉、面动脉造影及栓塞治疗。     

骨盆骨折内固定术后克氏针移位腹腔镜取出1例报告

患者,男,48岁,2008年7月5日因高空作业不慎跌落,左髂部外伤肿痛半小时急诊入院。入院时体检：神志清楚、检查合作、血压120/80mmHg,瞳孔等大,反应正常,无头部外伤,无恶心、呕吐、颈软,胸廓正常,心肺正常,腹平软,无压痛,左髂部、臀部外侧青紫肿胀,局部压痛。骨盆挤压分离试验（＋＋）,双下肢感觉正常,活动良好,CR摄片提示左髂骨翼粉碎性骨折（见图1a）。     

介入治疗永存动脉干矫治术后升主动脉假性动脉瘤1例

患者女,22岁,因＂永存动脉干矫治术后5年复查＂入院。查体：心率68次/分,血压99mmHg/65mmHg,胸骨左缘2、3、4肋间闻及3/6级收缩期杂音。超声心动图：升主动脉前外侧壁探及约0.5cm破口,其外侧形成假性动脉瘤约5.8cm×3.5cm,内见中等回声包绕无回声区,假性动脉瘤外包膜完整,瘤内可见少许血流信号与升主动脉交通（图1）。主动脉CTA：升主动脉左侧壁可见假性动脉瘤形成,约7.6cm×5.4cm,内见附壁血栓形成（图）。     

改良手法整复固定踝部骨折并距骨外侧脱位38例

踝部骨折是临床中常见多发损伤,踝部关节结构复杂,易受伤,在较重的损伤类型中以踝部骨折并距骨外侧脱位多见。自2004年1月至2009年5月对该类型损伤采用改良手法整复固定治疗,取得了较满意的治疗效果。