阿司匹林对体外培养人宫颈癌细胞凋亡作用的研究

目的 探讨阿司匹林诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及对凋亡相关基因Bcl-2和bax的作用.方法 培养人宫颈癌Hela细胞,加入不同浓度阿司匹林(1.0、5.0、10.0 mmol/L)干预培养.应用流式细胞技术检测Hela细胞凋亡和细胞周期的变化;用RT-PCR 检测细胞凋亡相关基因bcl-2及bax转录水平的改变;免疫组化法检测bcl-2及bax蛋白表达的变化.结果 与对照组相比,阿司匹林干预组Hela细胞凋亡率明显增高(P<0.05); 随着阿司匹林浓度增加,G0/G1期细胞比例下降,G2/M期细胞比例升高(P<0.05);阿司匹林干预培养后Hela细胞中bcl-2基因mRNA表达明显降低,而bax基因mRNA表达升高明显,较对照组均有统计学意义(P<0.05);阿司匹林作用48 h后,免疫组化法检测bcl-2蛋白表达下调及bax蛋白表达上调(P<0.05).结论 阿司匹林能诱导宫颈癌Hela细胞凋亡,其机制与抑制bcl-2表达,上调bax表达有关.     

高浓度葡萄糖对胰岛细胞凋亡及凋亡相关基因的影响

目的：观察高浓度葡萄糖体外对胰岛细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响。探讨葡萄糖毒性及其分子机制。方法：应用TUNEL法检测高浓度葡萄糖培养后大鼠胰岛细胞和小鼠βTc3细胞凋亡百分率；应用定量RT-PCR（QRT-PCR1）检测培养后大鼠胰岛细胞和小鼠βTc3细胞bcl-2和baxmRNA的表达；应用定量RT-PCR检测低剂量链脲佐菌素糖尿病大鼠胰岛bcl-2和baxmRNA的表达。结果：高浓度葡萄糖使原代培养的大鼠胰岛细胞和βTc-3的凋亡细胞比例明显增加；胰岛细胞凋亡过程中。诱导凋亡基因bax的mRNA表达水平明显升高，抵抗凋亡基因bcl-2 mRNA表达水平明显下降．致使bcl-2／bax比率明显降低；对低剂量链脲佐菌素糖尿病大鼠胰岛凋亡相关基因QRT-PCR检测也显示同样的结果。结论：高浓度葡萄糖可能通过诱导胰岛细胞凋亡增加而加重糖尿病。其中bcl-2／bax mRNA表达比率变化可能起重要作用。     

丹参酮Ⅱ_A对HeLa宫颈癌细胞凋亡的影响

目的:探讨丹参酮ⅡA对HeLa宫颈癌细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:应用MTT比色法检测不同浓度丹参酮ⅡA对HeLa宫颈癌细胞的增殖抑制,采用烟酸己可碱33258染色法观察丹参酮ⅡA对HeLa细胞凋亡的影响,并用半定量逆转录聚合酶链反应法检测用药后Bcl-2和bax基因mRNA的表达水平。结果:丹参酮ⅡA对HeLa细胞增殖的抑制作用呈剂量依赖性;它能促使HeLa细胞发生凋亡;用药48h后Bcl-2基因mRNA的表达水平明显降低,而bax基因的表达则无明显变化。结论:丹参酮ⅡA对HeLa细胞的增殖具有显著的抑制及诱导凋亡作用。     

HMGB1对宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响及其作用机制

目的 观察HMGB1对人宫颈癌HeLa细胞生长及凋亡的影响并研究其可能的作用机制.方法 构建HMGB1高表达质粒和RNA干扰质粒,将HMGB1高表达质粒与RNA干扰质粒分别转染到HeLa细胞中,采用MTT实验、PI单染流式细胞术和Annexin V-PI双标法流式细胞术检测HeLa细胞的增殖活性、细胞周期和凋亡情况.采用RT-PCR和western blot法检测HMGB1基因沉默对Caspase-3、bcl-2 和细胞色素C表达的影响.结果 HMGB1高表达载体(pEGFP-N1-HMGB1)与阴性对照质粒分别转染到HeLa细胞,RT-PCR和Western blot结果显示HMGB1重组质粒转染HeLa后可明显增加HMGB1的mRNA 及蛋白表达(P＜0.05).HMGB1干扰病毒载体(HMGB1 SiRNA)与空白病毒载体分别转染到HeLa细胞中,RT-PCR和Western blot结果显示HMGB1 SiRNA转染HeLa后可明显抑制HMGB1的mRNA及蛋白表达(P＜0.05).MTT法检测HMGB1高表达及基因沉默后HeLa的细胞生长曲线,结果显示HMGB1高表达可明显提高HeLa的细胞生长速度(P＜0.05),HMGB1沉默后HeLa的细胞生长明显受到抑制(P＜0.05).PI 染色流式细胞仪结果显示:HMGB1过表达后,细胞正常增殖周期被加速(P＜0.05);HMGB1沉默后,细胞增殖周期被抑制(P＜0.05).Annexin V-PI双标法流式细胞仪结果显示,HMGB1过表达后,HeLa细胞凋亡率明显下降(P＜0.05);HMGB1沉默后,HeLa细胞凋亡率明显上升(P＜0.05).RT-PCR方法检测不同细胞组Caspase-3和bcl-2 mRNA的表达,结果显示:HMGB1基因沉默后,Caspase-3 mRNA的表达明显增加(P＜0.05),bcl-2 mRNA的表达明显减少(P＜0.05).Western blot结果显示:HMGB1 基因沉默后,细胞色素C和Caspase-3蛋白表达水平增加,bcl-2蛋白表达水平减少(P＜0.05).结论 HMGB1可提高HeLa细胞生长速度、增殖周期,抑制HeLa细胞凋亡.HMGB1基因沉默可抑制Hela细胞增殖,促进其凋亡.影响Caspase-3—细胞色素C途径及调节bcl-2的表达可能是其主要作用机制.     

凋亡基因Bcl-2／Bax与高脂饮食诱导大鼠胰岛细胞凋亡的关系研究

目的 观察凋亡基因Bcl/Bax与高脂饮食诱导大鼠的胰岛细胞凋亡的关系.方法 应用TUNEL法检测高脂饮食诱导的大鼠胰岛细胞凋亡率,应用免疫组化方法检测bcl-2、bax的mRNA的表达.结果 高脂饮食使大鼠胰岛细胞凋亡率明显增加.胰岛细胞凋亡过程中,诱导凋亡基因bax的mRNA表达水平明显升高,抵抗凋亡基因bcl-2 mRNA表达水平明显下降.结论 高脂饮食可能通过诱导胰岛细胞凋亡导致或加重糖尿病,其中bcl-2/bax mRNA表达比率变化可能起重要作用.     

紫杉醇对肝癌SMMC7721细胞凋亡的诱导作用及对相关基因表达的影响

目的：探讨紫杉醇对肝癌SMMC7721细胞凋亡的诱导作用及对bcl-2和bax基因的影响。方法：用浓度为5ug·ml-1的紫杉醇处理肝癌SMMC7721细胞后,利用DNA琼脂糖凝胶电泳,TUNEL法检测其细胞凋亡;通过原位杂交法、免疫组化法,测定紫杉醇诱导肝癌SMMC7721细胞产生凋亡时,凋亡抑制基因bcl-2和凋亡促进基因bax的mRNA和蛋白表达。结果：紫杉醇作用一定时间后,SMMC7721细胞产生凋亡、bcl-2显著下降、bax表达显著增高。结论：紫杉醇通过调节细胞凋亡抑制基因bcl-2和细胞凋亡促进基因bax的作用,从而诱导肝癌SMMC7721细胞产生凋亡。     

新的微管抑制剂YB-13诱导HeLa细胞凋亡及其机制

目的研究吲哚3-草酰胺衍生物YB-13在体外试验中诱导宫颈癌细胞株(HeLa细胞)发生凋亡及其作用机制。方法采用MTT法、细胞生长曲线、细胞集落、荧光显微镜、DNAladder和流式细胞仪等方法进行凋亡检测,用RT-PCR方法检测凋亡过程中相关基因表达的变化;间接免疫荧光观察YB-13对细胞骨架的影响,观察YB-13对微管蛋白聚合和解聚。结果吲哚3-草酰胺衍生物YB-13在体外试验中对HeLa细胞的杀伤力强,荧光显微镜观察到了凋亡小体;DNAladder法检测到凋亡时DNA降解形成的梯带,流式细胞仪检测到了细胞凋亡峰,同时观察到细胞周期的变化。在凋亡过程中,凋亡相关基因bcl-2家族中bcl-2表达下调而bax表达上调;实验观察到YB-13能影响HeLa细胞的细胞骨架,并且YB-13可影响微管蛋白聚合和解聚。结论YB-13在体外试验中能诱导HeLa细胞发生凋亡,其作用机制可能与bax基因表达上调、bcl-2基因表达下调以及对微管蛋白的抑制作用有关。     

异鼠李素诱导A549细胞凋亡的研究

目的观察异鼠李素是否能诱导人肺腺癌细胞株A549细胞凋亡及相关基因的变化。方法20μg/ml异鼠李素处理A549细胞,光镜电镜下观察细胞形态;进行集落形成实验,MTT法测细胞生长抑制率;流式细胞仪检测凋亡峰及bax,bcl-2等凋亡相关基因的表达。结果10～640μg/ml异鼠李素可抑制A549细胞生长,抑制率有剂量依赖性。流式细胞仪检测20μg/ml异鼠李素处理后出现明显凋亡峰;药物可使bax表达上调,bcl-2表达明显下降,表达改变有浓度依赖性。结论异鼠李素可抑制A549细胞生长,诱导其凋亡,其诱导凋亡的作用与凋亡相关基因抗凋亡基因bcl-2表达明显下调,bax表达上调有关。     

金粉蕨素体外诱导人宫颈癌HeLa 细胞凋亡的机制

目的：探讨金粉蕨素（ONY）体外诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用及其分子机制。方法体外培养人宫颈癌HeLa、CaSki、SiHa、ME180细胞,采用MTT法检测ONY对人宫颈癌HeLa、CaSki、SiHa、ME180细胞生长抑制率的影响;Hoechst33258染色检测ONY对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的形态学变化;流式细胞术（FCM）检测ONY对HeLa细胞凋亡率的影响;DNA琼脂糖电泳检测HeLa细胞凋亡的DNA条带;Western blot分析凋亡相关蛋白表达变化。结果 ONY对人宫颈癌HeLa、CaSki、SiHa、ME180细胞生长有较强的抑制作用,呈剂量和时间依赖性,以HeLa细胞对ONY最为敏感,作用24 h的IC50值为10.48μg·mL-1。经ONY作用于HeLa细胞24 h后,细胞出现典型的凋亡形态学改变,表现出典型的凋亡特征的亚二倍体峰,且呈剂量依赖性,同时出现典型的凋亡DNA条带;同时,cytochrome c、caspase-9和caspase-3蛋白表达增加,bcl-2蛋白表达下调,而bax蛋白表达不变, Bcl-2/Bax比值下调（P〈0.05）。结论 ONY可能通过调控线粒体途径相关蛋白抑制宫颈癌HeLa细胞增殖并诱导其凋亡。     

胰淀素对胰岛细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的：观察胰淀素对胰岛细胞凋亡和凋亡相关基因表达的影响。方法：应用放免法检测胰淀素培养后大鼠胰岛细胞和胰岛β细胞瘤细胞系(βTc3)高糖刺激后上清液的胰岛素水平；应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)技术检测胰淀素培养后大鼠胰岛细胞和小鼠βTc3细胞凋亡百分率；应用定量RT-PCR(QRT-PCR)检测培养后bcl-2、bax mRNA的表达。结果：胰淀素使原代培养的大鼠胰岛细胞和βTc3胰岛素分泌功能明显下降，使原代培养的大鼠胰岛细胞和βTc3的凋亡细胞比例明显增加；胰岛细胞凋亡过程中，诱导凋亡的基因bax mRNA表达水平明显升高，抵抗凋亡基因bcl-2 mRNA表达水平明显下降。结论：胰淀素可能通过诱导胰岛细胞凋亡导致或加重糖尿病，其中bcl-2／bax mRNA表达比率变化可能起重要作用。     

奥美拉唑对胃癌前病变细胞凋亡的影响

目的:研究奥美拉唑治疗对胃癌前病变细胞凋亡的影响。方法:胃镜活检经病理证实为胃癌前病变患者32例,随机分为治疗组(奥美拉唑20mg,qd)与对照组(硫糖铝1.0g,tid)各16例,分别利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和TUNEL方法检测治疗前、后胃癌前病变组织bcl-2、baxmRNA表达率以及凋亡指数的变化。结果:奥美拉唑组治疗后细胞凋亡指数和baxmRNA表达率明显升高,而bcl-2mRNA表达率降低;对照组治疗前后各项指标均无明显变化。结论:奥美拉唑可诱导胃癌前病变组织细胞凋亡,其机制可能与增强baxmRNA的表达,抑制bcl-2mRNA的表达有关。     

土贝母苷甲诱导HeLa细胞周期阻滞和凋亡

目的 :研究土贝母苷甲 (下称苷甲 )抗肿瘤作用的机制 ,探索它对细胞周期和细胞凋亡的影响。方法 :采用MTT法检测苷甲对细胞生长的抑制作用 ;采用流式细胞术 ,光学、荧光和电子显微镜 ,以及DNA琼脂糖凝胶电泳检查和分析苷甲对细胞周期和细胞凋亡的影响 ;采用蛋白免疫印迹法检测凋亡相关基因bcl 2和bax表达的变化。结果 :苷甲对HeLa细胞的生长有强抑制作用 ,其 2 4、4 8和 72h的IC50 值分别为 35 .7,2 3.6 ,17.4 μmol·L-1。在苷甲的作用下 ,细胞周期阻滞在G2 M期 ,细胞在形态学和生物化学上都出现了细胞凋亡的典型证据。蛋白免疫印迹结果揭示bcl 2下调 ,bax过表达。结论 :苷甲诱导的细胞周期阻滞和凋亡在苷甲的抗肿瘤效果中可能起着重要作用 ,而苷甲诱导的细胞凋亡与bcl 2的下调及bax的过表达密切相关。     

氯沙坦对大鼠心肌缺血再灌注诱导心肌细胞凋亡及对bcl-2,bax 和p53基因表达的影响

目的:研究氯沙坦对大鼠在体心肌缺血再灌注后细胞凋亡影响以及与bcl-2,bax和p53基因表达变化之间的关系.方法:用原位末端标记、原位杂交、免疫组化分别检测细胞凋亡、基因表达产物的mRNA和蛋白质,经图象分析系统测量阳性染色区域的平均光密度值,从而对原位杂交和免疫组化检测物质进行量化分析.大鼠分成对照组、治疗组和假手术组.结果:细胞凋亡数各组间差异非常显著(P<0.001);原位杂交和免疫组化bcl-2对照组、治疗组的升高值与假手术组之间差异显著(P<0.05),治疗组和对照组之间无显著差异(P>0.1);免疫组化bax治疗组、假手术组的降低值与对照组间差异非常显著(P<0.001),治疗组和假手术组之间无差异(P>0.9);bcl-2/bax比值由高到低分别为治疗组、对照组和假手术组.原位杂交p53各组间差异非常显著(P<0.001),假手术组>治疗组>对照组;免疫组化p53假手术组显著高于对照组和治疗组(P＜0.001 ),治疗组和对照组间差异无显著性(P>0.1).结论:氯沙坦可抑制缺血再灌注后心肌细胞凋亡,机制可能是通过抑制bax基因表达使bcl-2/bax比值升高,并抑制p53基因表达的降低.     

胚胎停止生长绒毛细胞凋亡研究

目的研究胚胎停止生长患者绒毛组织中的细胞凋亡及细胞凋亡调控基因bcl-2和bax在凋亡的作用。方法收集妊娠12周以内经B超证实为胚胎停止生长患者的绒毛组织30例;对照组30例为正常早孕要求人工流产者。所有研究对象均无生殖器畸形和感染性疾病,无内、外科合并症及妊娠并发症。应用TUNEL技术检测绒毛组织中的凋亡细胞,用免疫组织化学SP法观察细胞凋亡调控基因bcl-2和bax在绒毛组织中的表达。结果正常早孕和胚胎停止生长患者绒毛组织中均可见到凋亡细胞,但胚胎停止生长患者的绒毛组织中凋亡细胞显著增多。与正常早孕对照组比较有显著性差异(P<0.05);胚胎停止生长患者绒毛组织中可见bax过表达,与正常早孕对照组比较差异有显著性(P<0.05);而bcl-2在胚胎停止生长患者绒毛组织中表达低于正常对照组,两者比较差异有显著性(P<0.05)。结论胚胎停止生长患者绒毛组织中细胞凋亡指数显著增加且与bax表达呈正相关,而与bcl-2的表达呈负相关。     

Cytoprotective activity of amifostine on HeLa cell cultures treated with daunorubicin and evaluation of gene expression by RT-PCR

There are reports that amifostine protects normal tissues against chemotherapy and radiotherapy in cancer treatment. In this study, daunorubicin effects on cell kinetics parameters and apoptosis were examined both singly and in combination on HeLa cell culture. Optimum doses of daunorubicin and amifostine (0.1, 1?μg/mL, respectively) were applied for 24 and 48?h. Cell kinetic parameters such as growth rate (WST-1 colorimetric assay), mitotic and apoptotic index were applied to identify cytotoxicity that was induced by daunorubicin. In addition, to evaluate the molecular mechanism of cytoprotectivity we studied DNA degradation in agarose gel electrophoresis and expression of two genes, bcl-2 and bax, known to be important for the regulation of apoptosis. The cytotoxic effect correlated with a decline of growth rate and mitotic index, and a significant increase of apoptotic index, when HeLa cells were treated with daunorubicin alone or in combination with amifostine treatment (p?<?0.05-0.001). The enhancement of the cytotoxicity by daunorubicin was closely associated with DNA degradation. Investigation of bcl-2/bax expression level by RT-PCR showed that amifostine did not protect tumor cell lines against daunorubicin cytotoxicity.     

顺铂对人卵巢黄素化颗粒细胞的毒性及凋亡的影响

目的研究顺铂(cisplatin,CDDP)对人卵巢黄素化颗粒细胞的毒性及凋亡的影响。方法收集体外受精—胚胎移植(IVF-ET)时的人黄素化颗粒细胞进行体外培养,采用MTT法检测不同浓度的CDDP(0、0.5、1、2.5、5mg.L-1)对人黄素化颗粒细胞生长的抑制作用;采用Hochest33258荧光染色检测细胞凋亡,流式细胞仪(flowcytometry,FCM)检测bcl-2和bax基因蛋白的表达。结果CDDP浓度≥1mg.L-1可抑制颗粒细胞的生长;1、2.5、5mg.L-1CDPP处理人黄素化颗粒细胞24h后,荧光染色可观察到明显的核浓缩、核碎裂形态。FCM检测bcl-2蛋白表达逐渐减少(P<0.05),各组间比较差别有统计学意义;bax蛋白表达逐渐增加(P<0.05),各组间比较差别有统计学意义。结论CD-DP可抑制人黄素化颗粒细胞生长,促进凋亡,其作用机制可能是通过上调bax和下调bcl-2基因表达实现的。     

小檗碱改善高糖高脂诱导的胰岛NIT-1细胞凋亡的分子机制

目的观察小檗碱对高脂高糖诱导后NIT-1胰岛β细胞凋亡的改善情况,探讨小檗碱抗凋亡的分子机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法,在培养基中加入高糖高脂及小檗碱共同培养24h后,比较不同浓度的小檗碱对体外培养及高糖高脂诱导的NIT-1胰岛β细胞活力的影响;AnnexinV/PI双标记法流式细胞术检测细胞凋亡情况;RT-PCR法检测凋亡相关基因bcl-2、bax和caspase-3mRNA表达水平;免疫荧光法检测caspase-3表达。结果与正常对照组相比,模型组NIT-1细胞凋亡率明显升高(P<0.01),bcl-2mRNA表达明显降低(P<0.01),而bax和caspase-3mRNA表达明显增高(P<0.01),且胞质caspase-3表达增加;与模型组相比,小檗碱组NIT-1细胞凋亡率明显降低(P<0.01),bcl-2mRNA表达增高(P<0.01),而bax和caspase-3mRNA表达降低(P<0.01),小檗碱组胞质caspase-3表达亦降低。结论小檗碱抑制高糖高脂诱导NIT-1细胞的凋亡可能与其激活bcl-2和抑制bax和caspase-3的表达有关。     

油菜花粉脂溶性提取物对人前列腺癌细胞PC-3的体外生长抑制研究

目的探讨油菜花粉脂溶性提取物(BPE)对体外培养的人前列腺癌细胞PC-3的杀伤效应。方法光镜观察用药前后PC-3细胞形态,透射电镜观察细胞凋亡的形态变化;流式细胞术检测BPE对PC-3细胞凋亡的影响;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测bax/bcl-2基因表达。结果 BPE对PC-3细胞增殖有抑制作用,PC-3细胞随着BPE浓度的增高其活细胞数下降,呈负相关。透射电镜下可见:核结构破坏,染色质稀疏,有些凝聚成团。随着时间的延长,细胞凋亡率上升,BPE与多西他赛能一同促进PC-3细胞发生凋亡。BPE的作用效应不是通过bax/bcl-2基因。结论 BPE可抑制人前列腺癌细胞PC-3的增殖,诱导细胞的凋亡。     

Effects of antidigoxin antiserum on endoxin levels, apoptosis and the expression of Bax and Bcl-2 protein in ischaemia-reperfusion myocardium

The aim of the present study was to investigate the effects of antidigoxin antiserum (ADA), an endoxin special antagonist, on endoxin levels, apoptosis and the expression of the apoptosis-related protein bcl-2 and bax in myocardial ischaemia-reperfusion (MIR). The left anterior descending coronary artery was subjected to 30 min ischaemia followed by 45 min reperfusion in open-chest anaesthetized rats. The rats were divided randomly into seven groups: a sham-operated group, an MIR group, a vehicle control (normal saline) group, and groups receiving verapamil (5 mg/kg) or ADA (9, 18 and 36 mg/kg). The drugs were injected into rats via the femoral vein before reperfusion was commenced. Myocardial endoxin levels were measured by radioimmunoassay. Apoptotic cells was detected using the terminal deoxyribonucleotidyl transferase-mediated dUTP-digoxigenin nick end-labeling method. The expression of the apoptosis-related proteins bcl-2 and bax was detected by immunohistochemistry and their semiquantification scores were recorded by a computer image analysis system. Myocardial endoxin levels, the number of apoptotic cells and bax protein expression were increased in the MIR group compared with the sham group. Although bcl-2 protein expression was elevated in the MIR group, there was no significant difference between the MIR and sham groups. However, the ratio of bcl-2/bax was significantly decreased in the MIR group. In the group receiving 36 mg/kg ADA, myocardial endoxin levels, the number of apoptotic cells and bax protein expression were significantly decreased; bcl-2 protein expression was enhanced. The bcl-2/bax ratio was increased. The results suggest that ADA inhibited myocardial apoptosis induced by MIR in rats. The mechanisms involved require further investigation, but the present study may suggest that ADA prevents bax upregulation and enhances bcl-2 upregulation by antagonizing the effects of endoxin.