HL-60细胞端粒酶活性的调控因素

目的 探讨HL－60细胞端粒酶活性的调控因素。方法 用脂质体介导法将LXSN－wt-p53逆转录病毒质粒导入人髓性白血病细胞系HL-60中,用c-myc,bcl-2基因反义脱氧寡核苷酸作用HL－60细胞,用全反式维甲酸（ATRA）诱导HL－60细胞分化后,采用TRAP－ELISA－PAGE法测定端粒酶活性,观察野生型p53基因、c-myc,bcl-2,全反式维甲酸（ATRA）对HL－60细胞端粒酶活性的影响。结果 野生型p53基因不影响HL－60细胞的端粒酶活性;bcl-2及c-myc反义寡核苷酸可下调HL－60细胞的端粒酶活性;ATRA在诱导HL－60细胞分化的同时,可使HL－60细胞的端粒酶活性降低。结论 HL－60细胞端粒酶活性受到c-myc,bcl-2,全反式维甲酸（ATRA）的调节。     

端粒酶反义寡核苷酸对MCF—7细胞端粒酶活性及细胞生长的影响

为探讨端粒酶反义寡核苷酸对人乳腺癌MCF－7细胞端粒酶活性及细胞生长的影响,应用与人端粒酶RNA组分（hTR）模板区互补的硫代反义寡核苷酸处理MCF－7细胞。发现经反义hTR寡核苷酸作用后,细胞端粒酶活性明显受到抑制,至作用后72h,端粒酶活性较对照组降低61.0%（P＜0.05）;细胞生长明显受到抑制;细胞周期发生显著变化,G0／G1期细胞数增多,S期及G2／M期细胞数则减少;细胞增殖指数由0.46降低至0.29;并可观察到凋亡细胞的出现,凋亡发生率为10.7%;而无义寡核苷酸处理组及空白对照组以上各指标均无明显变化。提示：端粒酶反义寡核苷酸可明显抑制乳腺癌细胞端粒酶活性,抑制细胞生长和增殖,诱导细胞凋亡;表明应用反义技术抑制端粒酶活性治疗乳腺癌可能具有广阔的前景。     

端粒酶活性对HeLa细胞生长及化疗敏感性的影响

目的研究抑制端粒酶活性对HeLa细胞在体内外生长和对顺铂敏感性的影响。方法将野生型端粒酶逆转录酶、端粒酶逆转录酶显性负突变体和对照质粒电转染于HeLa细胞中，绘制细胞生长曲线，四甲基偶氮唑蓝法（MTT）检测细胞对顺铂的敏感性，磷脂酰丝氨酸外翻分析（Annexin V）法检测细胞凋亡情况；接种裸鼠观察其致瘤性及对顺铂敏感性的影响。结果端粒酶逆转录酶显性负突变体转染于HeLa细胞后，端粒酶活性显著下降，细胞生长速度延缓，显著增强顺铂诱导的凋亡，端粒酶活性抑制后对裸鼠致瘤性丧失，而端粒酶活性增强后顺铂对肿瘤的抑制作用下降。结论端粒酶活性下降能抑制HeLa细胞生长，增强顺铂的杀伤作用，反之端粒酶活性升高将导致对顺铂耐药。     

逆转录酶抑制剂对恶性胶质瘤细胞端粒酶活性和细胞增殖的影响

目的研究逆转录酶抑制剂（AZT）对胶质瘤细胞端粒酶活性、细胞增殖和细胞周期的影响，为以端粒酶为靶点治疗脑胶质瘤提供理论和实验依据。方法采用MTT法检测AZT对细胞生长增殖的影响。用TRAP—PCR—ELISA法检测端粒酶活性的变化。用流式细胞仪检测细胞周期的改变。结果与对照组比较，12h后1．0mol／L AZT组的端粒酶活性降低（P〈0.05），24h时0.5mol／L AZT组细胞生长增殖受抑制（P〈0．05），1．0mol／L AZT组则呈现出显著性差异（P〈0．01），在实验范围内，呈时间一剂量依赖性。实验组细胞周期中各时相的细胞分布发生改变，0．5mol／L AZT组细胞多阻滞于G2／M期，而1．0mol／L AZT组细胞G1期增多，S期细胞数减少。结论逆转录酶抑制剂能够有效地抑制胶质瘤细胞的端粒酶活性，抑制细胞的增殖，参与了细胞周期及凋亡的调控，具有较好的应用前景。     

大蒜素对CNE-2Z细胞增殖及端粒酶活性的影响

目的研究大蒜素对鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖及端粒酶活性的影响。方法不同浓度的大蒜素作用于CNE-2Z细胞后,MTT法检测细胞的增殖抑制作用,TRAP-PCR-ELISA法研究细胞端粒酶活性的变化。结果大蒜素对CNE-2Z细胞的增殖具有一定程度的抑制作用,并呈时间、浓度依赖性;不同浓度的大蒜素能下调CNE-2Z细胞的端粒酶活性,且同样呈时间、浓度依赖性。结论大蒜素可抑制CNE-2Z细胞的增殖及端粒酶活性,可能是其抗肿瘤的重要机制之一。     

二甲基亚砜对HL-60细胞端粒酶活性和细胞周期的影响

探讨二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）对ＨＬ－６０细胞端粒酶活性和细胞周期的影响。采用ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ方法检测二甲基亚砜处理前后的ＨＬ－６０细胞端粒酶活性的改变,以流式细胞仪分析细胞周期的改变。二甲基亚砜作用于ＨＬ－６０细胞后,其端粒酶活性明显受到抑制,且细胞周期明显改变,Ｓ期细胞数显著减少。二甲基亚砜可抑制ＨＬ－６０细胞的端粒酶活性,阻止细胞周期的进程。     

AZD9291通过抑制PI3K-AKT-mTOR通路抑制鼻咽癌细胞的增殖和迁移

目的 探讨AZD9291对鼻咽癌细胞增殖和迁移的影响。方法 体外培养鼻咽癌HNE1和CNE2Z细胞,在HNE1细胞加入浓度分别为0、0.5、1、2、4、8 μmol/L 的AZD9291,CNE2Z细胞加入分别为0、1、2、4、8、16 μmol/L的AZD9291。采用CCK8法检测细胞存活率;集落克隆实验检测AZD9291对细胞的增殖抑制作用;细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞修复和迁移能力;Western blot法检测EGFR相关信号通路蛋白及迁移相关蛋白的表达。结果 CCK8和集落克隆实验结果显示AZD9291可显著抑制HNE1和CNE2Z细胞增殖（P<0.01）;细胞划痕实验和Transwell实验结果显示AZD9291抑制HNE1和CNE2Z细胞迁移能力（P<0.01）;Western blot结果显示,随着浓度增加,AZD9291可通过调控EGFR下游PI3K-AKT-mTOR信号通路磷酸化蛋白的下调（P<0.01）,抑制HNE1和CNE2Z细胞迁移（P<0.01）。结论 AZD9291可通过抑制EGFR/PI3K/AKT/mTOR信号通路,抑制鼻咽癌HNE1和CNE2Z细胞的增殖并降低其修复和迁移能力,为后续AZD9291尝试用于鼻咽癌的治疗提供依据。     

PCR-ELISA定量检测as-hTERT对HepG2.2.15细胞端粒酶活性的抑制作用

目的：采用PCR－ELISA方法探讨人类端粒酶催化亚单位（hTERT)基因关键区段的反义寡核苷酸（as-hTERT)对HepG2.2．15细胞端粒酶活性抑制作用。方法：通过PCR合成as-hTERT及无关对照序列，体外作用于HBV DNA转染的HepG2.2.15细胞，用PCR－ELISA定量检测反义核酸作用后的端粒酶活性，MTT法观察as-hTERT对细胞生长的抑制作用，ELISA法检测as-hTERT对HBsAg和HBeAg表达的影响。结果：as-hTERT作用浓度为10μmol/L时，定量检测端粒酶活性，A450nm值为0．42，低于无关序列与生理盐水对照的A450nm值（分别为1．46，1．49），as-hTERT可抑制细胞生长，对HBsAg和HBeAg的最佳抑制率分别为76％和56％，结论：as-hTERT在体外可明显降低HepG2.215细胞的端粒酶活性，抑制细胞的生长，并可影响HBV抗原表达。     

多西紫杉醇和顺铂联合用药对人乳腺癌MCF-7细胞hTERT及C-myc基因表达的影响

目的研究多西紫杉醇和顺铂联合应用对人乳腺癌MCF-7细胞的作用及其机制。方法MCF-7细胞传代培养后分组加药：第1组加入多西紫杉醇（多西紫杉醇组）；第2组加入顺铂（顺铂组）；第3组加入多西紫杉醇和顺铂（联合用药组）；对照组为未加药的MCF-7细胞。加药24、48、72 h后收集细胞，MTT法检测各组细胞生长抑制率，PCR-ELISA法检测各组细胞端粒酶活性，RT-PCR法检测端粒酶逆转录酶hTERT mRNA的表达，Western blot技术检测C-myc蛋白的表达。结果联合用药组人乳腺癌MCF-7细胞的生长和增殖受到明显抑制，多西紫杉醇联合顺铂对端粒酶活性、hTERT mRNA及转录调控基因C-myc表达的抑制呈明显的时效和效量相关性。结论多西紫杉醇和顺铂联合应用对人乳腺癌MCF-7细胞的抑制具有协同加强作用，其机制可能是对MCF-7细胞的端粒酶活性及其端粒酶转录调控基因C-myc有较强的抑制作用。     

端粒酶逆转录酶显性负突变体对乳腺癌细胞端粒酶活性的抑制作用

目的：观察端粒酶逆转录酶显性负突变体（DN-hTERT）对乳腺癌细胞MCF7端粒酶活性的抑制作用.方法：将携带DN-hTERT基因的真核表达载体IRES2-EGFP空载体通过脂质体2000介导转入MCF7细胞,以G418进行稳定筛选,得到阳性克隆;倒置荧光显微镜观察转染细胞的生长情况;逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测转染细胞hTERT mRNA的表达;TRAP-ELISA方法检测转染细胞端粒酶活性.结果：MCF7细胞转染DN-hTERT后生长受到抑制;转染DN-hTERT的MCF7细胞（MCF7/DN）hTERT mRNA表达升高;改进端粒重复序列扩增法（TRAP-ELISA）检测MCF7/DN细胞端粒酶活性与转染空载体MCF7细胞（MCF7/I）比较显著降低（P＜0.05）.结论：DN-hTERT能特异性抑制MCF7细胞生长和端粒酶活性.     

口虾蛄乙酸乙酯提取物对鼻咽癌细胞生长和分化的影响

目的研究口虾蛄乙酸乙酯提取物对人低分化鼻咽癌细胞CNE-2Z生长和分化的影响。方法采用系统溶剂法，对口虾蛄进行分离；采用台盼蓝染色测定该提取物对CNE-2Z细胞的抑制作用；用免疫细胞化学爬片法检测提取物对CNE-2Z细胞角蛋白表达的影响。结果生长曲线测定结果显示，乙酸乙酯提取物可抑制CNE-2Z细胞的生长；NCNE-2Z细胞中角蛋白的表达随提取物浓度的增高而增加，且高于对照组（P〈0．01）。结论口虾蛄乙酸乙酯提取物能够抑制鼻咽癌CANE-2Z细胞的生长，并可能会促进CNE-2Z细胞的分化。     

EB病毒体外感染NPC病人及IgA/VCA~+者的PBMC上清的作用

本文用EB病毒体外感染鼻咽癌病人,IgA/VCA~+,IgA/VCA~-者和新生儿的外周血单个核细胞,观察其上清对CNE-2Z和Raji细胞生长的影响。结果表明,鼻咽癌病人对CNE-2Z有明显抑制作用,生长指数为0.67～0.74,IgA/VCA阳性者和阴性者对CNE-2Z无明显作用。上述感染组对Raji细胞则均有抑制作用,生长指数为0.49～0.69。未经EBV诱导的5天上清对Raji细胞生长呈促进作用。生长指数为1.31～1.44,但对CNE-2Z细胞无明显作用。经EBV和未经EBV感染的新生儿对两种细胞均呈促进生长的作用。     

鼻咽癌细胞株中乳腺癌转移抑制基因表达的研究

目的:检测乳腺癌转移抑制(BRMS1)基因在不同转移习性的人鼻咽癌细胞株中的表达情况。方法:应用免疫组织化学法和逆转录聚合酶链式反应法在mRNA和蛋白2方面检测人鼻咽癌细胞株高分化磷癌、低分化磷癌、低分化细胞株、高成瘤高转移性细胞株、低成瘤低转移性细胞株中BRMS1的表达。结果:5种细胞株中BRMS1的蛋白表达皆为阳性,在不同转移习性的细胞株中其表达强度明显不同。4种细胞株中扩增出BRMS1 mRNA,而BRMS1 mRNA在高转移性细胞株中未扩增出,高分化鳞癌、低分化鳞癌、低分化细胞株BRMS1mRNA表达水平均显著高于低成瘤低转移性细胞株(P<0.01)。结论:BRMS1的表达与细胞株的转移能力有明显相关性,表明BRMS1可能作为鼻咽癌细胞转移的重要指标。     

DNA pol β,Ku80与鼻咽癌放射敏感性的关系

目的:研究人鼻咽癌细胞系CNE-2Z亚克隆株F1、S1放射后DNA修复相关基因DNA pol β和Ku80的表达,探讨CNE-2Z存在放射敏感性异质性的可能机理。方法:裸鼠体内移植瘤实验观察F1、S1放射后的体内增殖能力,采用Western blot、免疫细胞化学和免疫组织化学方法检测放射后F1和S1 DNA修复相关蛋白(DNA pol β、Ku80)的表达,Feulgen染色法和图像分析方法检测放射后F1、S1裸鼠体内移植瘤的DNA倍体及细胞周期分布情况。结果:未照射前F1细胞DNA pol β和Ku80的表达高于S1;放射后S1细胞DNA pol β及Ku80表达上调的时间较F1早,上调辐度大于F1。鼻咽癌细胞系CNE-2Z确实存在放射敏感性的异质性,放射后S1体内增殖能力大于F1,较多细胞处于有利于DNA修复的G2/M期(P<0.01)。放射后F1、S1裸鼠移植瘤细胞和组织中,DNA pol β和Ku80蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:本实验进一步证实了鼻咽癌细胞系CNE-2Z确实存在放射敏感性的异质性,F1、S1放射敏感性的差异与两株细胞的DNA修复相关基因(DNA pol β、Ku80)的表达差异所致的DNA SSB、DSB修复的速度和忠实性有关。     

白细胞介素24对鼻咽癌CNE-2Z细胞株增殖的影响

目的探讨白细胞介素24(IL-24)对鼻咽癌CNE-2Z细胞株增殖的影响。方法取鼻咽癌CNE-2Z细胞株,进行细胞培养;用细胞计数、四甲基偶氮唑蓝(MTT)抑制试验,以IL-240 pg/L为对照组,检测不同浓度、不同时间的IL-24对鼻咽癌CNE-2Z细胞株增殖的影响。结果细胞计数及MTT比色法检测得出:体外培养的鼻咽癌CNE-2Z细胞株在培养的48 h增殖状况最差,并且随着IL-24浓度的增加,其活细胞数也随着减少,当IL-24为50 pg/L时,其增殖状况最差;当IL-24为100 pg/L时,其增殖状况反而好转。结论 IL-24可呈时间和剂量依赖性地抑制鼻咽癌CNE-2Z细胞株增殖。     

小檗碱对人鼻咽癌CNE-2细胞端粒酶活性的影响

目的:观察小檗碱(Berberine)对人鼻咽癌CNE-2细胞端粒酶活性的影响。方法:不同浓度的小檗碱处理体外培养的人鼻咽癌CNE-2细胞72 h,聚合酶链反应-端粒重复扩增(PCR-TRAP)法测定端粒酶活性,噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖抑制。结果:小檗碱可抑制CNE-2细胞端粒酶活性,随小檗碱浓度增大,端粒酶活性抑制增强。MTT结果显示小檗碱抑制CNE-2细胞增殖且抑制有浓度依赖性。结论:端粒酶活性的抑制可能是小檗碱发挥抗癌活性的作用机制之一,小蘖碱作为鼻咽癌的辅助治疗可能提高疗效。     

肿瘤坏死因子的细胞同步化作用对鼻咽癌放射敏感性的影响

目的 探讨肿瘤坏死因子(TNFα)使细胞周期同步化对增加鼻咽癌的放射敏感性的影响.方法 用体内实验证实鼻咽癌细胞系中确实存在放射抵抗亚克隆株,然后用流式细胞仪检测TNFα对CNE-2Z-S1细胞周期同步化的作用,应用克隆形成实验及裸鼠实验,于体外体内测定经细胞周期同步化后S1细胞对射线的敏感性.结果 (1)CNE-2Z细胞群中确实存在着放射抵抗的亚群.(2)TNFα能阻滞CNE-2Z-S1细胞周期,达到细胞周期同步化的作用.(3)体外研究证实经TNFα预处理可使CNE-2Z-S1细胞对放射的敏感性显著提高.(4)体内研究提示TNFα有可能提高CNE-2Z-S1细胞对放射的敏感性.结论 TNFα可通过促进CNE-2Z-S1细胞周期同步化进而增加放射敏感性.     

姜黄素对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨姜黄素对人鼻咽癌(NPC)CNE-2细胞增殖及凋亡的影响.方法 不同浓度(0、10、20、40、60 μmol/L)姜黄素处理NPC细胞株CNE-2,利用噻唑蓝(MTT)实验检测CNE-2细胞增殖活性,利用流式细胞仪检测CNE-2细胞周期及凋亡率,利用Hoechest33258荧光染色法观察细胞凋亡情况.结果 姜黄素可明显抑制CNE-2细胞增殖作用,且随姜黄素浓度增加,CNE-2细胞抑制率呈上升趋势(P＜0.05),姜黄素作用CNE-2细胞24、48、72 h的半抑制浓度(IC50)分别为(23.54±0.36)、(18.31±0.42)、(8.56±0.37)μmol/L,即姜黄素可明显抑制CNE-2细胞增殖作用,且呈现明显浓度、时间依赖性;流式细胞检测结果显示,0、10、20、40、60 μmol/L姜黄素处理CNE-2细胞,凋亡率随着姜黄素浓度增加而上升;荧光染色结果可见,CNE-2细胞未给予姜黄素处理,细胞呈圆形或者椭圆形,细胞核大小均匀一致,染色质分布均匀的淡蓝色荧光;10 μmol/L姜黄素处理CNE-2细胞24h后,细胞胞体缩小,细胞核染色质凝聚,呈颗粒状亮蓝色荧光;20 μmol/L姜黄素处理CNE-2细胞24 h后,细胞出现胞体缩小,细胞核浓缩、染色质不均匀,出现凋亡小体,甚至出现核碎裂;40和60 μmol/L姜黄素处理CNE-2细胞24 h后,细胞凋亡小体数量增多,出现大量核碎裂.结论 姜黄素对NPC细胞株CNE-2细胞增殖具有明显抑制作用,且促进CNE-2细胞凋亡.     

血管内皮生长因子受体-2(KDR)在鼻咽癌细胞系(CNE-2)中表达的研究

目的了解KDR是否特异性表达于鼻咽癌组织微血管,为研究特异性杀伤鼻咽癌微血管的自杀基因治疗系统提供启动子。方法通过以人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)为对照组,采用细胞免疫组化染色方法鉴定细胞系CNE-2的KDR表达。结果结果显示KDR在HUVEC细胞系中表达,而鼻咽癌细胞系CNE-2中不表达KDR。结论KDR可作为启动子用应用于特异性杀伤鼻咽癌微血管的自杀基因治疗系统的研究。