组织因子表达对人胶质母细胞瘤细胞凋亡影响的研究

目的:研究组织因子(TF)对人胶质母细胞瘤细胞药物诱导凋亡的影响。方法:分子生物学方法构建TF-pcDNA3表达载体,以脂质体介导进行基因转染。以Western Blotting检测TF表达。以Western Blotting检测阿霉素诱导的Caspase-3、PARP的裂解。结果:人胶质母细胞瘤细胞系LN-229低表达TF。转染TF-pcD-NA3表达载体的LN-229细胞及对照细胞分别以阿霉素处理,可见转染细胞较对照细胞Caspase-3、PARP的裂解减少(P<0.05)。结论:人胶质母细胞瘤细胞LN-229中TF表达的上调,可降低阿霉素诱导的细胞凋亡。肿瘤细胞中TF的异常高表达可能影响肿瘤细胞对化疗药物的耐受性。     

丹皮酚影响人胶质母细胞瘤细胞组织因子表达的体外研究

目的:研究丹皮酚(Pae)对人胶质母细胞瘤细胞U251中组织因子(TF)表达的调控.方法:以实时定量PCR法检测TF转录水平,以Western Blotting检测TF表达水平.结果:①Pae可呈剂量依赖性下调U251细胞TF的转录水平,当Pae作用浓度分别为47、94、188、376、752和1 504 μmol/L...     

砷剂对神经母细胞瘤MYCN mRNA表达的影响

选取生长良好的神经母细胞瘤LA-N-5细胞,分别按三氧化二砷(As2 O3)终浓度为0.75、1.5、3.0、6.0 ìmol/L加药,作用24.48及72 h.RT-PCR法检测MYCN mRNA的表达.发现不同浓度的As2O3均可使MYCNmRNA的表达减少,以3.0ìmol/L组减少最明显;砷剂的抑制作用出现在用药48 h后,延长时间仍能保持抑制作用.认为砷剂能够抑制神经母细胞瘤细胞MYCN mRNA的表达.     

同型半胱氨酸硫内酯对缺氧神经母细胞瘤系细胞内质网应激途径相关因子表达的影响

目的探讨同型半胱氨酸硫内酯(HTL)对缺氧神经母细胞瘤系细胞内质网应激途径相关因子表达的影响。方法选取人神经母细胞瘤株SHSY5Y细胞采用氯化钴作用24 h制作缺氧模型后,分为模型组、试验A组、试验B组、试验C组、试验D组,每组5例,后4组分别加入HTL 50、100、200和400μmol/L同时刺激。另取处于对数生长期的SHSY5Y细胞为对照组(n=5)。检测各组细胞活性,免疫组织化学染色观察模型组和试验D组、半胱氨酸天冬氨酸酶(Caspase)-12和Caspase-3及TNF-α蛋白表达,ELISA检测各组上述3种蛋白表达。结果与对照组比较,模型组细胞活力明显降低(0.922±0.039 vs 1.143±0.076,P=0.000)。试验A组、试验B组、试验C组、试验D组细胞活力明显低于模型组(P<0.01)。免疫组织化学染色显示,与模型组比较,试验D组TNF-α蛋白表达明显升高(0.34±0.04 vs 0.26±0.01,P=0.014)。模型组、试验A组~D组的Caspase-3、Caspase-12、TNF-α蛋白表达呈上升趋势。与对照组比较,试验C组Caspase-3和试验D组Caspase-3、Caspase-12、TNF-α蛋白表达明显升高(P<0.01)。结论HTL可能通过Caspase-12凋亡途径及TNF-α激活,抑制细胞生长,促进细胞炎性反应发生及凋亡,加重缺氧后损伤。     

选择性COX-2抑制剂CAY10404对人神经母细胞瘤细胞SK-N-SH的影响

采用MTT比色法计算环氧合酶-2（COX-2）抑制剂CAY10404对人神经母细胞瘤（NB）细胞（简称SK-N-SH细胞）的抑制率,台盼蓝拒染法观测细胞群体倍增时间（TD）,倒置相差显微镜观察细胞形态变化,流式细胞仪检测凋亡率和细胞周期变化。不同浓度的CAY1040作用SK-N-SH细胞后,其增殖受到抑制,并呈时间和剂量依赖性,细胞凋亡率升高。提示选择性COX-2抑制剂能抑制人NB细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

同型半胱氨酸对人单核细胞组织因子表达的影响

目的：探讨同型半胱氨酸(HC)是否诱导人外周血单核细胞(Mn)表达组织因子(TF)，并且观察叶酸对其作用的影响。方法：将Mn暴露于不同浓度HC、叶酸一定时间后，采用RT—PCR、流式细胞术和Western Blot检测其TF表达。结果：HC可以诱导Mn表达TF，并且呈时间和剂量依赖性，而且这种诱导作用不能被叶酸抑制。结论：HC可以诱导Mn表达TF，从而在血栓形成中起重要作用。     

组织因子/因子Ⅶ激活人胶质母细胞瘤细胞PI3K/Akt信号途径调控凋亡的研究

目的:研究组织因子(TF)对化疗药物诱导人胶质母细胞瘤细胞凋亡影响的信号转导机制。方法:分子生物学方法构建TF-pcDNA3表达载体,以脂质体介导进行基因转染。以Western Blotting检测TF表达及信号转导途径活化状态。以Western Blotting检测阿霉素诱导的Caspase-3、PARP的裂解。结果:以TF-pcD-NA3真核表达载体转染低表达TF的LN-229细胞,TF表达水平呈剂量依赖性增强。以FⅦ与转染TF的LN-229细胞作用,可观察到磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)信号途径的Akt的显著激活,呈时间依赖性。在转染了TF-pcDNA3真核表达载体的LN-229细胞中,TF获得强制高表达,而阿霉素诱导的Caspase-3、PARP的裂解减弱,PI3K/Akt特异性抑制剂LY294002则可以抵消TF强制表达对阿霉素诱导凋亡的抑制。结论:人胶质母细胞瘤中TF的异常高表达可抑制阿霉素诱导的肿瘤细胞凋亡,此效应可能与TF与FⅦ相互作用后对下游PI3K/Akt信号的激活有关。     

神经母细胞瘤体外细胞系的构建方法

目的 对神经母细胞瘤(NB)进行体外培养，探讨神经母细胞瘤(NB)体外建系的方法。方法 NB患儿新鲜手术标本，采用组织块培养法、酶消化培养法建立原代细胞系；用选择性酶消化法和机械刮除法进行细胞纯化；从细胞形态学、神经特异性烯醇化酶染色、软琼脂克隆形成实验三方面对细胞进行初步鉴定，证实所培养细胞是否为NB细胞。结果 两种细胞培养法均可培养出NB细胞，纯化后可得形态均一的细胞系。结论 可采用适当的细胞培养方法建立神经母细胞瘤的体外细胞系。     

神经母细胞瘤骨髓转移的细胞形态学及免疫组化

神经母细胞瘤在小儿恶性肿瘤中，仅次于白血病及中枢神经系统肿瘤，约占小儿恶性实体瘤的10％。多见于肾上腺、腹膜后、后纵隔等处。此病高度恶性、分化差，常于短期内转移至骨、淋巴结、肝和肺等处。转移至骨的神经母细胞瘤在细胞形态学上常与恶性淋巴瘤、Ewing瘤、小细胞未分化癌等混淆，鉴别颇难，现收集6例，对其细胞形态学及免疫组化观察分析。     

叠氮钠对SH—SYT6人神经母细胞瘤细胞膜电位和胞内β—淀粉样蛋白表达的影响

目的：观察线粒体呼吸链复合体Ⅳ抑制剂叠氮钠对SH－SY5Y细胞的细胞膜电位及胞内β－淀粉样蛋白（Aβ）表达水平的影响，以探讨用叠氮钠建立模拟Alzheimer病（AD）脑中神经细胞能量代谢障碍的细胞模型的可能性。方法：不同浓度的叠氮钠损伤细胞后，用激光共聚焦显微镜观察细胞膜膜电位；用免疫细胞化学法检测细胞内β－淀粉样蛋白前体蛋白（APP）和Aβ的表达水平。结果：叠氮钠在浓度25－100mmol/L时，与细胞共孵育，可使细胞膜电位去极化程度明显增高，并引起胞内Aβ表达显著增高，但对胞内APP表达水平影响不明显。结论：叠氮钠致神经细胞损伤模型可能是模拟AD患者及脑中与线粒体复合体Ⅳ损伤相关的病理改变的较好模型。     

维生素E对组织因子及其抑制物在冠心病中的干预作用

目的 :探讨冠心病 (CHD)的不同类型中血浆组织因子 (TF)及其抑制物 (TFPI)含量的差异变化及维生素E对急性心肌梗死 (AMI)干预作用。方法 :用ELISA方法检测CHD患者 [包括稳定型心绞痛 (SAP)、不稳定型心绞痛 (UAP)、AMI]入院时及治疗 2周时血浆TF、TFPI含量。结果 :①SAP组血浆TF、TFPI水平及TF/TF PI比值均高于正常对照组 ,但差异无统计学意义 (P >0 .0 5 ) ,且治疗前后无明显变化 (P >0 .0 5 )。②UAP组、AMI组血浆TF、TFPI水平及TF/TFPI比值明显高于正常对照组 ,差异有统计学意义 (P <0 .0 1) ,但两组常规治疗前后差异无统计学意义 (P >0 .0 5 )。③AMI加维生素E组干预治疗后TF值显著下降 (P <0 .0 1) ,与正常对照组比较差异无统计学意义 (P >0 .0 5 ) ,TFPI干预治疗后无明显变化 (P >0 .0 5 ) ,而TF/TFPI比值明显降低 (P <0 .0 1)。④各组TF与TFPI呈明显正相关 (P<0 .0 5 ,r=0 .4 32 )。结论 :TF及TFPI在CHD尤其是急性冠状动脉综合征的发生中起重要作用 ,维生素E的干预显著降低患者血浆TF水平 ,降低TF/TFPI比值而对TFPI无影响。     

Clinical significance of expression of tissue factor and tissue factor pathway inhibitor in ulcerative colitis

AIM: To investigate the clinical significance of expression of tissue factor (TF) and tissue factor pathway inhibitor (TFPI) in ulcerative colitis (UC).METHODS: Thirty UC specimens taken by colonoscopy from patients with active UC treated at the Department of Pathology, Central Hospital Affiliated to Shenyang Medical College from February 2010 to January 2012 were included in an experimental group, and 30 normal colon tissue samples taken by colonoscopy from non-UC patients were included in a control group. Expression of TF and TFPI in UC and normal colon tissue samples was detected by immunohistochemistry.RESULTS: The positive rate of TF in UC was significantly higher than that in normal colon tissue (63% vs 33%, χ² = 5.41, P < 0.05). The positive rate of TFPI in UC was also significantly higher than that in normal colon tissue (43% vs 17%, χ² = 5.08, P < 0.05).CONCLUSION: Positive rates of TF and TFPI expression in UC are significantly higher than those in normal colon tissue. TF and TFPI may play an important role in the pathogenesis of UC.     

心肌组织TF表达对兔无复流作用的实验研究

目的：观察无复流区心肌组织因子（TF）mRNA表达,探讨心肌组织局部TF激活的外源凝血途径在兔实验性无复流（NR）中的作用。方法：将13只新西兰大白兔随机分为TF组（n=10）和对照组（n=3）：均予结扎回旋支（LCX）中段120min,再灌注60min,建立急性心肌梗死（AMI）后再灌注NR模型。在再灌注末,从左心房注入6％硫磺素S1ml／kg使复流区着色,NR区不着色;再于原位重新结扎LCX,TF组从左心房注入Evan’s蓝,使结扎区外着蓝色,缺血区不着蓝色,对照组不予Evan’s蓝。采用RT-PCR法检测TF组NR区、缺血区和正常区心肌组织TF mRNA表达;对照组光镜下观察不同心肌组织血栓形成和心肌损伤情况。结果：TF组NR区TF mRNA表达明显高于缺血区和正常区心肌组织（0．488±0．190对0．310±0．148对0．200±0．091,P〈0．05）,但缺血区和正常区心肌组织TFmRNA表达无统计学差异（P〉0．05）。对照组NR区心肌组织可见较多血栓形成,心肌损伤程度明显加重。结论：NR区心肌组织局部TF表达增强,并在NR发病过程中起到重要促进作用。     

冠心病患者血浆组织因子和组织因子途径抑制物的变化

目的 :通过检测不同类型冠心病 (CHD)患者血浆组织因子 (TF)和组织因子途径抑制物 (TFPI)水平变化 ,探讨其在CHD发病过程中的作用。方法 :以酶联免疫吸附测定法测定CHD患者血浆中TF和TFPI抗原水平。结果 :不稳定型心绞痛 (UAP)和急性心肌梗死 (AMI)患者的血浆TF和TFPI水平与正常对照者和稳定型心绞痛 (SAP)患者相比均有显著性增高 (P <0 .0 5 ) ,以AMI患者尤为明显 (P <0 .0 1) ;UAP和AMI患者的TF PI/TF比值显著降低 (P <0 .0 5 ) ,而SAP患者的上述指标与正常对照者相比 ,其差异均无显著性意义 (P >0 .0 5 )。结论 :UAP和AMI患者TFPI/TF系统失衡 ,标志高凝状态的存在 ;TF和TFPI在这两种类型CHD的发病机制中可能起着重要的作用     

反基因寡核苷酸抑制内皮细胞组织因子表达的体外研究

目的：探讨形成三股螺旋的寡核苷酸(triple helix-forming oligonucleotide，TFO)对内皮细胞组织因子(tissue factor，TF)基因表达的抑制作用。方法：将针对TF基因启动子区的3个Spl/Egr-1位点合成的TFO，与含有人TF基因5’上游序列-244/ 122bp的荧光素酶报告基因质粒PL37，经脂质体转染内皮细胞，接受12dyn/cm^2切应力作用后，检测及分析报告基因活性。结果：反向硫代磷酸酯TFO(antiprarallel-phosphorothioated TFO，apTFO)显抑制荧光素酶表达．抑制率高达70.3％。结论：apTFO能有效抑制切应力诱导的TF基因表达。     

厄贝沙坦对心肌梗死后大鼠心肌组织因子和组织因子途径抑制物的影响

目的观察大鼠心肌梗死后心肌组织因子（TF）和组织因子途径抑制物（TFPI）的mRNA表达及厄贝沙坦对其的影响。方法通过结扎大鼠左冠状动脉前降支建立大鼠急性心肌梗死模型组,另设假手术组（20只）。模型组术后24h存活大鼠随机分为安慰剂组（20只）和厄贝沙坦组（50mg·kg^-1d^-1,20只）。用药4周后处死各组大鼠并分别称其心室重量,计算左心室重量指数及心肌梗死面积,应用反转录聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测心肌TFmRNA和TFPImRNA。结果模型组左心室重量指数大于假手术组（F=7．83,P〈0．05）。模型组内药物组左心室重量指数明显低于安慰剂组（F=8．96,P〈0．05）,心肌梗死面积比较差异无统计学意义（F=0．96,P〉0．05）;模型组TFmRNA、TFPImRNA表达均高于假手术组（F：8．24,P〈0．05）,其中药物组＇IFmRNA较安慰剂组明显降低（F=8．57,P〈0．05）,药物组TFPI mRNA较安慰剂组增加（F=1．35,P〉0．05）。结论大鼠心肌梗死后心肌TF mRNA、TFPI mRNA表达均明显增高。厄贝沙坦可显著降低心肌梗死大鼠心肌TF mRNA的表达。     

不同PPAR配体对LPS诱导的人单核细胞组织因子表达的影响

目的:探讨过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferater-activated receptors,PPAR)α的配体——非诺贝特、WY14643,PPARγ配体——匹格列酮对脂多糖(LPS)诱导的人单核细胞株-THP-1细胞表达组织因子(TF)的影响。方法:采用RT-PCR法检测单核细胞THP-1的TF mRNA表达水平,用免疫细胞化学法检测细胞TF蛋白表达量。结果:PPAR配体处理组中THP-1细胞TF mRNA水平以及蛋白表达量均较单纯LPS刺激组明显降低。结论:3种PPAR配体均可抑制单核细胞TF mRNA以及蛋白表达,可能经此机制减轻动脉粥样硬化病变的发生。     

人组织因子途径抑制物基因在兔颈动脉损伤血栓形成中的作用

Objective To observe the effects of tissue factor pathway inhibitor(TFPI) on thrombosis formation in rabbit carotid arteries after ballon injury. Methods Fouty rabbits with the weight 2.5-3.0 kg were respectively divided into 4 groups, Ad-TFPI, Ad-LacZ, PBS and normal control groups. The normal control group was not given any treatment and other 3 groups were given 0.2 ml Ad-TFPI, Ad-LacZ or PBS reproduced by the Dispatch catheter respectively after the PTCA balloon iniury on the right carotid arteries. Ten days after gene transfer the repeated balloon injury was performed in the 3 groups, and the first balloon injury was performed in the normal control group by the same method. The carotid blood flow was recovered immediately after the injury. Thirty minutes later all the animals were sacrificed. The injured carotid arteries and one part of contralateral normal artery were cut down, scissored along the long axis, flattened and fixed in the 2% glutaral. The platelet aggregation and thrombosis formation on the luminal surfaces was observed under electron microscope. Results The electron microscope results showed that the vascular endothelial cell structure was integrated and lined up in order in the nomal artery which had no any injury. After the balloon injury in the normal control group, the structure of the endothelial cell was disintegrated, and there was some platelet aggregation but no fibrosis formation. A large amount of platelet aggregated but no fibrosis formed in Ad-TFPI group after the repeated balloon injury. A large amount of fibrosis formed and red cells piled up in the Ad-LacZ and PBS group. The positive rate of thrombosis formation among groups had siginificant differences(χ2=14.95, P<0.01). The positive rate in Ad-TFPI group(20%) was lower than that in Ad-LacZ group(80%, χ2=7.20, P<0.01) and PBS group(70%, χ2=5.05, P<0.05), but was higher than that in the normal control group(10%, χ2=0.39, P>0.05). The positive rate in Ad-LacZ group(80%) was higher than in the normal control group(10%, χ2=9.90, P<0.01) and in the PBS group(70%, χ2=0.27, P> 0.05). The positive rate in PBS group(70%) was higher than that in the normal control group(10%, χ2=7.50, P< 0.01). Conclusions The repeated balloon injury method can cause a large amount of fibrosis formation in the rabbit carotid. TFPI gene inhibits thrombosis formation in balloon-injured rabbit carotid arteries.     

氧化低密度脂蛋白对人单核细胞组织因子和基质金属蛋白酶-9活性的影响以及阿托伐他汀的干预作用

目的:探讨他汀类降脂药阿托伐他汀潜在的降脂外机制。方法:人单核细胞来源的巨噬细胞,加入50mg/L氧化低密度脂蛋白(oxLDL)共培养10d,加或不加入不同浓度的阿托伐他汀(浓度范围0.01~0.5μmol/L);酶谱学分析基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的活性;一期凝固法测定组织因子(TF)的促凝活性。结果:阿托伐他汀可抑制单核-巨噬细胞的增殖,呈现一定的剂量依赖关系(P<0.05),加入100μmol/L羟甲戊酸后,这种抑制作用消失;0.1μmol/L的阿托伐他汀可显著抑制单核-巨噬细胞表达MMP-9的活性;阿托伐他汀可呈剂量依赖性抑制TF的促凝活性(P<0.05)。结论:阿托伐他汀不仅可抑制单核-巨噬细胞的增殖,而且可抑制单核巨噬细胞活化下表达的MMP-9的活性以及TF的促凝活性。