LINC00997在胃贲门腺癌中表达的临床意义及其对SGC7901细胞迁移、侵袭和EMT的影响

目的： 检测LINC00997在胃贲门腺癌（GCA）组织及胃癌细胞中的表达,分析其表达与患者临床病理特征和预后的关系,探讨敲减LINC00997对胃癌SGC7901细胞迁移、侵袭及上皮间质转化（EMT）的影响。 方法： 基于TCGA和GTEx数据库分析LINC00997在胃癌组织中的表达及其与患者预后的关系。应用qPCR法检测68例GCA组织和相应癌旁组织以及胃癌细胞中LINC00997的表达水平,分析其表达与患者临床病理特征及预后的关系。通过划痕愈合、Transwell侵袭实验分别检测敲减LINC00997 对 SGC7901 细胞迁移和侵袭的影响,qPCR 法和 WB 法检测敲减LINC00997对EMT 相 关 标 志 物 E-cadherin、N-cadherin及vimentin表达的影响。 结果： LINC00997在胃癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织（P<0.05）,且LINC00997高表达组患者的OS及DFS显著低于LINC00997低表达组患者（P<0.01 或 P<0.05）。在 68例在GCA组织中,LINC00997的表达水平显著高于癌旁组织（P<0.01）,其表达与患者淋巴结转移、TNM 分期及 OS相关联（P<0.05或P<0.01）。敲减LINC00997的 SGC7901 细胞的迁移和侵袭能力均显著降低（均 P<0.01）,细胞中E-cadherin的表达显著升高,N-cadherin、vimentin的表达均显著降低（P<0.05或P<0.01）。 结论： LINC00997在GCA组织和胃癌细胞中高表达,其高表达可能促进了胃癌细胞的迁移、侵袭及EMT进程,有望成为GCA患者预后评估的分子标志物。     

miR-101通过靶向FGF2抑制非小细胞肺癌的迁移和侵袭

目的：探究microRNA-101 (miR-101)通过靶向成纤维细胞生长因子2（fibroblast growth factor 2，FGF2）抑制非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）细胞迁移和侵袭的分子机制。方法：采用qPCR法检测人正常肺上皮细胞BEAS-2B和NSCLC细胞系A549、H661和SK-MES-1，以及转染后A549细胞miR-101和FGF2的表达水平。分别将miR-NC、miR-101 mimics、miR-IN-NC、miR-101 inhibitor或pcDNA-3.1空质粒、pcDNA-FGF2转染至A549细胞，运用划痕愈合实验和Transwell小室实验，检测A549细胞中过表达miR-101和FGF2对NSCLC细胞迁移和侵袭能力的影响，采用Western blotting（WB）法检测各组A549细胞中FGF2、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、ERK1/2和p-ERK1/2的表达水平。结果：miR-101在NSCLC细胞系中的表达水平明显低于正常肺上皮细胞（均P<0.05），而以A549细胞中表达水平为最低。过表达miR-101可明显抑制A549细胞的迁移（P<0.05）和侵袭（P<0.01），且使细胞中E-cadherin的表达增多（P<0.05）而Vimentin（P<0.05）、N-cadherin（P<0.01）和p-ERK1/2（P<0.05）的表达水平降低。抑制miR-101表达后，可以显著增强A549细胞的迁移和侵袭能力（均P<0.05），引起细胞中E-cadherin表达明显降低而 Vimentin、N-cadherin 和 p-ERK1/2 表达水平增高（均 P<0.05）。采用 WB 法和双荧光素酶报告基因实验验证了 FGF2 是miR-101的直接靶基因，且过表达FGF2后显著增强A549细胞的迁移和侵袭能力（均P<0.01），以及减少细胞中E-cadherin的表达（P<0.01）而增加Vimentin（P<0.01）、N-cadherin（P<0.05）和p-ERK1/2（P<0.05）表达水平。与单独过表达FGF2组相比，共同过表达miR-101和FGF2组A549细胞迁移和侵袭能力明显减弱（均P<0.01），其E-cadherin的表达增多（P<0.01）而Vimentin（P<0.01）、N-cadherin（P<0.05）和p-ERK1/2表达水平下降（P<0.01）。结论：miR-101通过调控靶基因FGF2抑制NSCLC A549细胞的上皮间质转化（EMT）过程及ERK信号通路，进而抑制NSCLC细胞的迁移和侵袭。     

lncRNA DNM3OS在喉鳞状细胞癌组织和细胞中的表达及其临床和生 物学意义

目的：检测lncRNA DNM3OS在喉鳞状细胞癌（laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC）组织和LSCC细胞株中的表达及其临床意义,探讨其对LSCC TU177细胞体外增殖、迁移及侵袭的影响,并分析DNM3OS与EMT的关系。方法：从河北医科大学第四医院生物标本库选取2014年3月至2018年12月收治的68例LSCC患者手术切除的癌及癌旁组织标本,应用qPCR法检测DNM3OS在LSCC组织和细胞株中的表达水平。采用siRNA敲低TU177细胞中DNM3OS的表达,应用MTS、克隆形成及Transwell小室等方法分别检测敲低DNM3OS表达对TU177细胞增殖、迁移和侵袭等生物学行为的影响。应用qPCR和WB法检测转染si-DNM3OS后对EMT标志物上皮钙黏素（E-cadherin）、神经钙黏素（N-cadherin）、波形蛋白（vimentin）、扭曲蛋白（twist）、锌指转录因子2（SNAI2）mRNA和蛋白的变化。结果：LSCC组织中DNM3OS表达水平明显高于癌旁组织（P<0.01）,并与患者的TNM分期、淋巴结转移及生存期有关联（P<0.05 或 P<0.01）。DNM3OS在LSCC细胞株（Hep-2、AMC-HN-8、TU177、TU212及TU686）中均呈现不同程度的高表达（P<0.05 或 P<0.01）,转染si-DNM3OS后TU177细胞中DNM3OS的表达显著降低（P<0.01）。与对照组相比,DNM3OS表达敲低可抑制TU177细胞的体外增殖、迁移和侵袭能力（P<0.05 或 P<0.01）,可上调 TU177 细胞中E-cadherin的表达而下调 N-cadherin、vimentin、twist和SNAI2的表达（均P<0.01）。结论：DNM3OS高表达与LSCC的恶性进展有关,其可能为预测LSCC患者预后的潜在指标;DNM3OS可能通过影响EMT进程促进LSCC细胞的侵袭和转移。     

lncRNASNHG10靶向调控miR-532-3p促进结直肠癌SW620细胞的侵袭和迁移

目的： 探讨lncRNA SNHG10在结直肠癌组织和细胞中的表达情况及其对结直肠癌细胞侵袭和迁移的影响与可能的机制。 方法： 收集2018年1月至2019年12月在河南省人民医院行根治性结直肠癌切除术的78例患者的癌组织及对应癌旁组织标本,采用qPCR法检测结直肠癌组织、结直肠癌细胞（SW480、SW620、HT-29和LoVo）及人正常结直肠黏膜细胞FHC中lncRNA SNHG10和miR-532-3p的表达水平,并分析其与结直肠癌患者临床病理特征的关系及在组织中表达的相关性。采用双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA SNHG10和miR-532-3p间的靶向关系。向SW620细胞中转染si-SNHG10或miR-532-3p mimic或共转染si-SNHG10+miR-532-3p inhibitor,采用Transwell实验检测其侵袭和迁移能力的改变,采用WB法检测E-cadherin,N-cadherin和vimentin蛋白表达水平变化。 结果： SNHG10 在结直肠癌组织和细胞中呈高表达（P<0.05 或 P<0.01）,其表达水平与TNM分期和远处转移有关（均P<0.05）;miR-532-3p在结直肠癌组织和细胞中呈低表达,其表达水平与TNM分期、淋巴结转移和远处转移有关（P<0.05或P<0.01）,SNHG10和miR-532-3p在结直肠癌组织中的表达呈负相关（r=-0.225, P=0.048）。双荧光素酶报告基因实验证实SNHG10靶向调节miR-532-3p的表达。下调 SNHG10 或上调 miR-532-3p 的表达后,SW620 细胞的侵袭和迁移能力显著降低（P<0.01）,E-cadherin蛋白表达水平升高（P<0.05）、N-cadherin和vimentin蛋白表达水平降低（均P<0.05）。抑制miR-532-3p表达后,敲低lncRNA SNHG10表达对结直肠癌细胞侵袭和迁移的抑制作用被逆转（均P<0.05）。 结论： lncRNA SNHG10在结直肠癌中高表达并与TNM分期和远处转移相关,lncRNASNHG10靶向调控miR-532-3p表达并通过EMT途径影响结直肠癌细胞的侵袭和转移。     

miR-760 在宫颈鳞状细胞癌组织和细胞中的表达及其对SiHa 细胞恶性 生物学行为的作用

[摘要] 目的: 探讨微小RNA（miR）-760 在人宫颈鳞状细胞癌（CSCC）组织和细胞中的表达及其对SiHa 细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移、EMT影响的分子机制。方法: 选用2015 年4 月至2018 年8 月山东省聊城市妇幼保健院妇科手术切除、经病理确诊的80 例CSCC组织及相应的癌旁组织标本和40 例子宫肌瘤切除术获取的正常宫颈组织标本,应用qPCR检测CSCC组织、癌旁组织和正常宫颈组织、人CSCC细胞系SiHa、HCC94 和人宫颈鳞状上皮永生化细胞株H8 中miR-760 的表达水平,分析miR-760 表达与CSCC患者临床病理特征的相关性。用脂质体转染法,将miR-760 mimics 和NC-mimics 质粒分别转染至SiHa 细胞,用qPCR检测SiHa 细胞中miR-760 的表达,用CCK-8 实验和流式细胞术分别检测SiHa 细胞增殖能力和凋亡水平,用Transwell 实验检测SiHa 细胞的侵袭和迁移能力,WB检测SiHa 细胞EMT相关蛋白上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（vimentin）和神经型钙黏蛋白（N-cadherin）的表达变化。用生物学信息法预测FOXA1 与miR-760 的靶向关系,用双荧光素酶报告基因验证miR-760 对FOXA1的直接靶向调控作用。结果：CSCC组织中miR-760 表达明显低于癌旁组织及正常宫颈组织（均P<0.01）,miR-760 表达与患者淋巴结转移和临床分期密切相关（均P<0.01）。SiHa、HCC94 细胞中miR-760 的表达明显低于H8 细胞（均P<0.01）。通过转染miR-760 mimics 上调miR-760 表达,能够显著抑制SiHa 细胞的增殖能力和侵袭、迁移能力（均P<0.01）、促进其凋亡（P<0.01）,并上调Ecadherin的表达（P<0.01）、下调vimentin 和N-cadherin 的表达（均P<0.01）。FOXA1 是miR-760 的直接靶基因（P<0.01）,上调miR-760 表达显著抑制SiHa 细胞中FOXA1 mRNA和蛋白的表达（均P<0.05）。结论：在CSCC组织和细胞中miR-760 低表达,其通过靶向作用FOXA1 基因调控SiHa细胞的增殖、侵袭、迁移并促进凋亡,同时影响癌细胞的EMT进程。     

转录因子FOXP4在喉鳞状细胞癌组织中的表达及其对喉鳞癌TU177细 胞生物学特性的影响

目的：检测转录因子FOXP4（Forkhead box P4）在喉鳞状细胞癌（laryngeal squamous cell carcinoma，LSCC）组织和细 胞系中的表达，及其对LSCC细胞TU177体外增殖、迁移、侵袭、细胞周期及凋亡的影响，并探讨其与上皮-间质转化（epithelialmesenchymal transition，EMT）进程间的关系。方法：从河北医科大学第四医院生物标本库选取2013年6月至2015年12月收治 的40例LSCC手术患者的癌及癌旁组织标本，应用qPCR法检测FOXP4在LSCC与相应癌旁组织中的表达水平，应用qPCR法和 Western blotting检测FOXP4在人 LSCC 细胞系（AMC-HN-8、TU177、TU686 及 TU212）中的表达水平。采用小干扰 RNA 敲 低 TU177 细胞中 FOXP4 的表达，MTS 实验、克隆形成实验、Transwell 实验及流式细胞术分别检测 FOXP4 敲低对 TU177 细胞增殖、迁移、侵袭、周期及凋亡的影响。应用qPCR法检测si-FOXP4转染TU177细胞后EMT标志物 N-钙黏蛋白（N-cadherin）、 β-连环蛋白（β-catenin）、波形蛋白（Vimentin）、扭曲蛋白（Twist）、转录因子Snail及锌指E盒结合蛋白1（zine finger E box binding homeobox 1，ZEB1）mRNA的变化情况，应用Western blotting测定FOXP4敲低后N-cadherin、 β-catenin、Vimentin及Twist 蛋白水平的改变。结果： 在LSCC组织中FOXP4的表达水平明显高于癌旁组织（P<0.05），且与肿瘤的TNM分期及淋巴结转移 相关（均P<0.05）。FOXP4在LSCC细胞中的表达亦高于癌旁组织（P<0.05或P<0.01）。转染si-FOXP4的 TU177 细胞中 FOXP4 的表达显著低于对照组（P<0.01）。与对照组相比，敲低FOXP4可抑制TU177细胞的体外增殖、迁移和侵袭能力（均 P<0.01）， 敲低 FOXP4 可使细胞周期阻滞于G0/G1期（P<0.01），减少S期的复制（P<0.01），促进细胞凋亡（P<0.01），敲低FOXP4可降低 TU177细胞中N-cadherin、 β-catenin、Vimentin、Twist、Snail、ZEB1 的 mRNA水平（P<0.05或P<0.01）以及N-cadherin、 β-catenin、 Vimentin、Twist的蛋白水平。结论：FOXP4的高表达可能与LSCC的发生和发展相关，FOXP4敲低可以抑制LSCC细胞的体外 增殖、迁移与侵袭能力，使细胞G0/G1期阻滞及促进凋亡，且可能参与EMT进程。     

miR-762在胰腺癌中的表达及对胰腺癌细胞生物学行为的影响

背景与目的：miR-762在多种恶性肿瘤中存在表达异常,参与肿瘤的增殖、凋亡及侵袭转移。观察miR-762在胰腺癌组织和细胞系中的表达及对胰腺癌细胞增殖、侵袭转移的影响。方法：采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）技术检测于河北医科大学第四医院行胰腺癌根治术的胰腺癌组织和细胞株中miR-762的表达。通过Lipofectamine ^TM 2000将miR-762模拟物（mimics）、miR-762抑制物（inhibitors）及其阴性对照序列（scramble序列）分别转染胰腺癌PANC-1细胞。采用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8,CCK-8）实验检测细胞增殖;采用流式细胞术检测细胞凋亡;采用划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞侵袭转移能力;采用蛋白质印迹法（Western blot）检测上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transformation,EMT）相关分子标志物表达。结果：胰腺癌组织中miR-762 mRNA表达量显著高于癌旁组织（P<0.01）。胰腺癌细胞株BxPC-3、PANC-1、AsPC-1、SW-1990中miR-762 mRNA的表达量也显著高于正常胰腺上皮细胞HPDE（P<0.01）。转染miR-762 mimics后PANC-1细胞miR-762 mRNA表达量显著增加,而转染miR-762 inhibitors后PANC-1细胞miR-762 mRNA表达量显著降低（P<0.01）。同时miR-762 mimics组450 nm处的吸光度（D ₄₅₀ ）值、细胞迁移距离和穿膜细胞数及间质表型细胞标志物N-钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（vimentin）表达量显著增加,细胞凋亡率及上皮细胞标志物E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达量显著降低;而miR-762inhibitors组D ₄₅₀ 、细胞迁移距离和穿膜细胞数及间质表型细胞标志物N-cadherin、vimentin表达量显著降低,细胞凋亡率及上皮细胞标志物E-cadherin表达量显著增加（P<0.05）。结论：miR-762在胰腺癌组织和细胞株中高表达,上调miR-762表达可能通过调控N-cadherin、vimentin、E-cadherin表达促进EMT进程,从而增强PANC-1细胞的增殖和侵袭转移能力。     

长链非编码RNA BC200在非小细胞肺癌患者组织中的表达及作用

  目的  分析长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）BC200在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）组织中的表达情况，并探讨其临床意义及其与上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）相关蛋白E-cadherin、N-cadherin及Snail之间的关系。  方法  采用实时荧光定量PCR（QPCR）法检测2014年1月至2018年6月天津市胸科医院60例癌组织及60例对应的正常肺组织中BC200表达情况，40例癌组织及40例正常肺组织中E-cadherin、N-cadherin及Snail mRNA表达水平，统计分析NSCLC中BC200与E-cadherin、N-cadherin及Snail mRNA表达水平以及两者的相关性，分析BC200与临床病理特征（性别、年龄、TNM分期、肿瘤大小、淋巴结转移及病理类型水平）的关系，应用受试者工作特征（receiver operating characteristic curve，ROC）曲线鉴别诊断NSCLC的效能；采用免疫组织化学法检测E-cadherin、N-cadherin及Snail蛋白在40例NSCLC组织及20例正常肺组织中表达情况，分析其与BC200表达情况的关系。  结果  1）肺癌组织中的BC200、N-cadherin及Snail mRNA的表达水平显著高于正常肺组织中的表达水平（P < 0.05），E-cadherin mRNA的表达量低于正常肺组织（P < 0.05）；2）E-cadherin、N-cadherin及Snail在NSCLC组织中阳性表达率分别为40.0%（16/40）、57.5%（23/40）、57.5%（23/40），在正常肺组织中的阳性表达率为95%（19/20）、5%（1/20）、10%（2/20），表达差异具有统计学意义（P < 0.05）；3）肺癌组织中BC200的高表达与淋巴结转移、临床分期、E-cadherin、N-cadherin及Snail阳性率相关（P < 0.05），BC200的表达与E-cadherin mRNA的表达呈负相关（r=-0.31，P < 0.05），与Snail、N-cadherin mRNA的表达呈正相关（r=0.305、r=0.257，P < 0.05）；4）ROC曲线分析表明，组织lncRNA表达水平对NSCLC的诊断敏感度和特异度均较满意。  结论  BC200在NSCLC组织中高表达，且与淋巴结转移、临床分期、E-cadherin、N-cadherin及Snail阳性率相关，BC200的表达与E-cadherin mRNA的表达呈负相关，与Snail、N-cadherin mRNA的表达呈正相关，提示BC200可能通过上皮间质转化调节肺癌细胞侵袭和迁移能力。在NSCLC诊断上，lncRNA BC200水平有较高的价值，可考虑作为NSCLC诊断的潜在标记物。      

FAM83H在食管鳞癌中的表达及对癌细胞生物学行为的影响

背景与目的：食管鳞癌是常见的消化道恶性肿瘤，基因异常表达参与食管鳞癌的恶性生物学行为。探讨转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）诱导的FAM83H在食管鳞癌组织中的表达水平，以及其表达水平与临床病理学参数之间的关系，初步研究FAM83H对食管癌细胞生物学行为的影响。方法：用TGF-β1处理食管癌细胞Eca109后，在倒置显微镜下观察Eca109细胞形态学的变化。应用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，RTFQ-PCR）检测TGF-β1处理前后食管癌细胞中上皮-间充质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）相关标志物以及FAM83H表达水平的变化。应用RTFQ-PCR检测FAM83H在不同食管癌细胞系、67例2015—2017年河北医科大学第四医院生物样本库收集的食管鳞癌组织及癌旁正常组织中的表达情况，并分析其表达水平与临床病理学参数之间的关系。应用MTS实验以及transwell小室迁移、侵袭实验检测FAM83H在体外对食管癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。结果：TGF-β1处理后，Eca109细胞的形态变为细长梭形、纺锤形，呈现出明显的间充质细胞形态；Eca109细胞中E-cadherin表达水平降低，而N-cadherin、vimentin、Snail、Twist 1表达水平均显著升高（P<0.05）。同时，TGF-β1处理后，FAM83H表达水平上调（P<0.01）。FAM83H在食管鳞癌组织中表达升高（P<0.05），与食管鳞癌患者病理学分化程度相关（P<0.05）。FAM83H在食管癌细胞系中表达升高（P<0.01）。转染针对FAM83H的小干扰RNA后，可以显著抑制FAM83H的表达水平（P<0.05）。在体外FAM83H促进食管癌细胞的增殖、迁移及侵袭（P<0.05）。结论：TGF-β1诱导EMT过程以及FAM83H表达，FAM83H表达水平升高可能与食管鳞癌的发生、发展相关，且在体外促进食管癌细胞的增殖、迁移及侵袭。     

BRCA1 通过 Wnt/β-catenin 通路对非小细胞肺癌 H1650 细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的：探讨人乳腺癌易感基因1（breast cancer susceptibility gene 1, BRCA1）通过Wnt/β-catenin通路对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）H1650 细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法：采用 WB 法和 qPCR 法检测 NSCLC 细胞系A549、H1299、H1650和正常肺上皮细胞 BEAS-2B中BRCA1 mRNA和蛋白的表达水平。在H1650细胞中构建稳定BRCA1过表达细胞株（LV-BRCA1）,实验分为空白对照组（NC）、阴性对照组（LV-BRCA1-NC）、实验组（LV-BRCA1）和抑制剂组（LV-BRCA1+XAV-939）。用MTT法、划痕愈合实验和Transwell小室法分别检测各组细胞的增殖、迁移和侵袭能力,WB法检测细胞中BRCA1、cyclin D1、β-catenin、c-Myc和Cox2蛋白的表达水平。结果：NSCLC细胞中BRCA1 mRNA和蛋白的表达水平均显著高于BEAS-2B细胞（均P<0.01）。上调BRCA1可显著提高H1650细胞的增殖、迁移和侵袭能力（P<0.05或P<0.01）,上调细胞中cyclin D1、β-catenin、c-Myc、Cox2和c-Jun蛋白的表达（P<0.05或P<0.01）;XAV-939可显著下调过表达BRCA1细胞的增殖、迁移和侵袭能力（P<0.05或P<0.01）,并降低细胞中cyclin D1、β-catenin、c-Myc、Cox2和c-Jun蛋白的表达（P<0.05或P<0.01）。结论：BRCA1通过激活Wnt/β-catenin通路促进NSCLC H1650细胞的增殖、迁移与侵袭,其有望成为NSCLC诊断标志物和治疗靶标。     

转凝蛋白在结直肠癌组织中的表达及其对SW480细胞恶性生物学行为的影响

目的:探讨转凝蛋白(transgelin,TAGLN)在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)组织中的表达及其对SW480细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法:选取郑州大学附属肿瘤医院2015年5月至2016年8月收治的97例CRC患者的癌及配对的癌旁组织标本,以及人CRC细胞系SW620、SW480、HCT116和正常结直肠黏膜细胞株FHC,用免疫组化染色法检测CRC组织中TAGLN的阳性表达率,并分析其表达水平与患者临床病理特征的关系。用q PCR法和WB法分别检测CRC细胞中TAGLN mRNA及蛋白的表达水平。采用脂质体法将si-TAGLN、si-Ctrl转染进SW480细胞,用CCK-8法、划痕愈合实验、Transwell小室法分别检测沉默TAGLN对SW480细胞增殖、迁移及侵袭的影响,用WB法检测EMT相关蛋白上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(vimentin)的表达水平。结果:TAGLN在CRC组织中的阳性表达率明显高于癌旁组织(P<0.01),其表达水平与CRC患者的TNM分期、肿瘤分化程度和淋巴结转移相关联(P<0.05或P<0.01)。TAGLN mRNA及蛋白在SW480细胞中的表达水平显著高于FHC细胞(均P<0.01)。沉默TAGLN后,SW480细胞的增殖、迁移及侵袭能力均显著降低(均P<0.01),细胞中E-cadherin表达水平升高而N-cadherin和vimentin表达水平降低(均P<0.01)。结论:TAGLN在CRC组织和细胞中高表达,沉默TAGLN可抑制CRC细胞的增殖、迁移及侵袭能力,其在CRC的发生发展中起重要作用。     

lncRNA HCG18/miR-17-5p/HMGA2 分子轴调控非小细胞肺癌细胞增殖及迁移

[摘要] 目的：探讨lncRNA HCG18/miR-17-5p/HMGA2 分子轴调控非小细胞肺癌（NSCLC）细胞增殖及迁移的分子机制。方法：收集2017 年6 月至2018 年6 月承德市中心医院62 例NSCLC组织及对应的癌旁组织标本,以及NSCLC细胞系A549、NCIH1299、H1650、NCI-H460 和人肺上皮细胞BEAS-B,用qPCR法检测NSCLC组织及细胞系中HCG18、miR-17-5p 及高迁移率族蛋白A2（HMGA2）的表达水平。分别用Si-HCG18、miR-17-5p、miR-17-5p+HCG18 或pcDNA3.1-HMGA2 转染A549 和NCI-H460 细胞,用CCK-8 法、Transwell 实验、Wb检测转染细胞的增殖、迁移、侵袭和HMGA2 及EMT相关蛋白的表达。用双荧光素酶报告基因验证HCG18 对miR-17-5p 或miR-17-5p 对HMGA2 的靶向调控作用。构建敲降HCG18 的A549 细胞小鼠移植瘤模型,观察对移植瘤的影响。结果：lncRNA HCG18 在NSCLC 组织和细胞中均高表达（均P<0.01）,发生淋巴结转移及晚期NSCLC 患者中HCG18 的表达显著提高,且HCG18 高表达的NSCLC患者预后较差、生存率较低（均P<0.01）。转染Si-HCG18 显著抑制NSCLC细胞的增殖、迁移及侵袭能力（均P<0.01）,上调上皮钙黏蛋白的表达（P<0.01）、下调神经钙黏蛋白和波形蛋白的表达（均P<0.01）,小鼠移植瘤体积显著减小（P<0.05）。双荧光素酶报告基因验证了HCG18 与miR-17-5p 靶向结合,以及miR-17-5p 与HMGA2 靶向结合。转染miR-17-5p 后NSCLC 细胞的增殖、迁移及侵袭受到抑制（均P<0.01）,促进上皮钙黏蛋白的表达（P<0.01）、抑制神经钙黏蛋白和波形蛋白的表达（均P<0.01）,而转染miR-17-5p+HCG18 后可抑制miR-17-5p 的作用。结论：HCG18通过调控miR-17-5p/HMGA2 分子轴促进NSCLC细胞的增殖及迁移。     

转录因子BATF3通过调控波形蛋白促进肾透明细胞癌细胞的恶性生物学行为

目的：探讨碱性亮氨酸拉链转录因子ATF样蛋白3（BATF3）在肾透明细胞癌（ccRCC）组织中的表达及其调控ccRCC细胞恶性生物学行为的分子机制。方法：收集2019 年3月至2022 年1月间在中国人民解放军联勤保障部队第九八〇医院手术切除的64例ccRCC组织和相应癌旁组织,qPCR 法检测ccRCC组织、癌旁组织和肾癌ACHN、786-O细胞中BATF3 mRNA的表达,免疫组化检测ccRCC 组织、癌旁组织中BATF3蛋白的表达,并分析其与临床病理特征的关系。构建BATF3敲减及过表达质粒,分别转染786-O、ACHN 细胞,通过MTS 法、Transwell 实验检测BATF3 对786-O 或ACHN 细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响,qPCR 法检测敲减或过表达BATF3 对786-O 或ACHN 细胞EMT 相关基因表达的影响,CHIP、双荧光素酶报告基因实验检测BATF3是否与波形蛋白（VIM）启动子区结合并调控其转录,MTS法、Transwell 实验检测同时过表达BATF3及敲减VIM对786-O细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。结果：与癌旁组织比较,ccRCC 组织中BATF3的mRNA和蛋白均呈高表达(均P<0.01),并且BATF3 mRNA 与ccRCC 的分化程度和TNM分期密切关联（均P<0.01）;与正常肾上皮细胞293T相比,BATF3 在ACHN 及786-O细胞中均呈高表达（均P<0.01）。敲减BATF3 表达均能明显抑制786-O 细胞的增殖、迁移、侵袭能力(均P<0.01),过表达BATF3则均能促进ACHN细胞的增殖、迁移和侵袭能力（均P<0.01）,敲减或过表达BATF3能抑制786-O 细胞或促进ACHN细胞的EMT相关基因的表达（均P<0.01）。BATF3可与VIM启动子区的位点结合,直接调控VIM的转录表达。同时过表达BATF3及敲减VIM可逆转过表达BATF3对786-O 细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。结论：BATF3在ccRCC 组织中呈高表达,并与其分化程度和TNM 分期密切关联;BATF3 通过调控VIM 的表达影响ACHN、786-O 细胞的恶性生物学行为,其可作为临床治疗ccRCC的潜在靶点。     

沉默泛素结合酶E2O对人非小细胞肺癌细胞增殖和侵袭的影响

  目的  研究泛素结合酶E2O（ubiquitin-conjugating enzyme E2O,UBE2O）蛋白在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）细胞增殖、细胞周期、迁移、侵袭中的作用。  方法  通过慢病毒介导的shRNA靶向抑制人NSCLC细胞株A549中UBE2O基因的表达,应用CCK-8法、流式细胞术分别检测UBE2O对A549细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响,应用Transwell实验检测下调UBE2O表达后对A549细胞迁移、侵袭能力的影响,应用Western blot检测细胞上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）两种标志分子E-cadherin蛋白、N-cadherin蛋白和PI3K-Akt信号通路相关蛋白表达量的变化。  结果  下调UBE2O表达后,A549细胞UBE2O mRNA和蛋白表达均下调（均P < 0.01）,CCK-8实验结果显示沉默UBE2O可以抑制A549的增殖（P < 0.001）,Transwell实验显示下调UBE2O的表达能够抑制A549细胞的迁移、侵袭（均P < 0.001）。Western blot结果表明下调UBE2O的表达可使A549细胞中的E-cadherin蛋白表达水平升高、p-Akt蛋白表达水平下降。  结论  UBE2O蛋白能够促进NSCLC细胞侵袭和迁移,作用机制可能是通过诱导肺癌细胞发生EMT和促进pI3K-Akt信号通路的激活。      

干扰FBXO2表达对胃癌细胞增殖、侵袭、迁移及EMT的影响

目的：探讨F框蛋白2（F-box only protein 2,FBXO2）基因在人胃癌细胞系中表达及其对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭和EMT 的影响。方法：选择胃癌细胞系 MGC-803、AGS、SGC-7901、MKN-28以及正常胃黏膜上皮细胞株 GES-1,qPCR 法检测细胞中FBXO2 mRNA表达水平。设计靶向抑制FBXO2表达的特异siRNA,并瞬时转染MGC-803细胞,转染siRNA无义序列的为阴性对照。qPCR法检测转染48 h后MGC-803细胞中FBXO2 mRNA表达水平;用MTT法、细胞划痕愈合法、Transwell小室法检测降低 FBXO2表达对细胞增殖、迁移和侵袭的影响,WB 法检测细胞中 EMT 相关蛋白 E-cadherin、N-cadherin、vimentin的表达。结果：4种胃癌细胞中FBXO2 mRNA表达水平显著高于胃黏膜上皮细胞GES-1（P<0.05或P<0.01）。与阴性对照组相比,siRNA[1]FBXO2组MGC-803细胞中FBXO2 mRNA表达下调（P<0.01）,该细胞的增殖、迁移和侵袭能力受到显著抑制（P<0.05或P<0.01）,E-cadherin蛋白表达明显升高（P<0.01）,N-cadherin、vimentin蛋白表达显著降低（均 P<0.01）。结论：低表达的 FBXO2可抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,该抑制作用可能与EMT过程有关。     

miR-126在口腔鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义

目的:检测miR-126在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)中的表达,分析其表达与患者临床病理特征及预后的关系,探讨其过表达对Tca8113细胞恶性生物学行为的影响。方法:选取2016年6月至2018年6月在郑州大学第一附属医院手术治疗的62例OSCC患者的癌及癌旁组织标本,以及人舌鳞癌细胞株Tca8113和人口腔角质细胞株HOK,用qPCR法检测癌组织及细胞中miR-126的表达,分析miR-126表达与患者临床病理特征和预后的关系。利用脂质体转染技术,将miR-126 mimics、miR-NC质粒分别转染进Tca8113细胞,分别采用MTT法、流式细胞术及Trasnwell小室法检测细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力,WB法检测凋亡、迁移和侵袭相关蛋白的表达水平。结果:miR-126在OSCC组织和Tca8113细胞中的表达水平明显低于癌旁组织和HOK细胞(均P<0.01)。miR-126表达与OSCC患者的TNM分期、淋巴结转移相关联(均P<0.05),miR-126高表达患者的总生存率显著高于低表达组(P<0.05)。转染miR-126 mimics后,Tca8113细胞的增殖、迁移及侵袭能力明显降低(P<0.05或P<0.01),凋亡率明显升高(P<0.01);细胞中Bcl-2、N-cadherin和vimentin表达水平明显降低(均P<0.01),Bax和E-cadherin表达水平明显升高(均P<0.01)。结论:miR-126在OSCC组织及Tca8113细胞中低表达,上调miR-126可抑制Tca8113细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并促进细胞凋亡。     

circAGFG1靶向miR-4429对胆管癌QBC939细胞增殖、迁移与侵袭的影响及其可能的机制

目的： 探讨circAGFG1对胆管癌QBC939细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制。 方法： 收集2017年4月至2019年10月于联勤保障部队第九八八医院接受手术的 33 例胆管癌患者的癌组织及对应癌旁组织,qPCR 法检测组织中circAGFG1 和 miR-4429 表达水平。体外培养胆管癌 QBC939 细胞,分 别 转 染 si-circAGFG1 、miR-4429 mimic 、共 转 染si-circAGFG1与anti-miR-4429后,采用CCK-8法和克隆形成实验检测对细胞增殖的影响,划痕实验和Transwell法分别检测对细胞迁移和侵袭的影响,WB 法检测对细胞中 E-cadherin 和 N-cadherin 蛋白表达的影响。双荧光素酶报告基因实验验证circAGFG1 和 miR-4429 之间的靶向调控关系。 结果： 胆管癌组织中 circAGFG1 的表达量高于癌旁组织（3.89±0.26 vs 1.00±0.08,P<0.05）,而miR-4429的表达量低于癌旁组织（0.28±0.03 vs 1.00±0.05,P<0.05）。干扰circAGFG1或过表达miR-4429后,QBC939细胞增殖水平、克隆形成数、划痕愈合率、侵袭细胞数及细胞中 N-cadherin 蛋白表达均显著降低（均P<0.05）,而E-cadherin蛋白表达显著升高（P<0.05）。circAGFG1可靶向结合miR-4429,且干扰circAGFG1会 促 进 QBC939 细 胞 中 miR-4429表达（均P<0.05）。下调miR-4429表达能够逆转干扰circAGFG1对QBC939细胞增殖、迁移和侵袭的影响（均P<0.05）。 结论：circAGFG1在胆管癌组织中表达升高,其可能通过靶向抑制miR-4429促进胆管癌QBC939细胞的增殖、迁移和侵袭。     

乳腺癌组织和细胞中低表达的LZTS2 通过PI3K/AKT信号通路抑制癌细胞增殖、迁移和EMT

[摘要] 目的：探讨亮氨酸拉链肿瘤抑制因子2（leucine zipper tumor suppressor 2, LZTS2）基因在人乳腺癌组织和细胞系中的表达及其对乳腺癌细胞增殖、迁移和EMT的影响及其作用机制。方法：收集2016 年1 月至2016 年12 月开封中心医院乳腺外科收治的50 例女性乳腺癌患者的癌及癌旁组织标本和乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-468 以及正常人乳腺上皮细胞株HBL-100,用qPCR 和Western blotting 检测乳腺癌组织和细胞中LZTS2 mRNA和蛋白表达水平。构建pcDNA-LZTS2 真核表达载体并采用脂质体转染MCF-7 细胞,同时转染pcDNA3.1 作为阴性对照。用Western blotting 检测转染48~72 h 后MCF-7 细胞中LZTS2 蛋白表达水平;用MTT法、Transwell 小室法检测LZTS2 过表达对细胞增殖、迁移和侵袭的影响,同时用Western blotting检测细胞中EMT相关蛋白Cyclin D1、波形蛋白、神经钙黏蛋白、上皮钙黏蛋白以及PI3K/AKT信号通路中相关蛋白的表达。结果：人乳腺癌组织中LZTS2 mRNA和蛋白表达水平均明显低于癌旁组织（P<0.05 或P<0.01）;乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231 和MDA-MB-468 细胞中LZTS2 mRNA和蛋白表达水平显著低于乳腺上皮细胞HBL-100（P<0.05 或P<0.01）。与空白对照组和pcDNA3.1组相比,pcDNA-LZTS2 组MCF-7 细胞中LZTS2 蛋白表达水平明显上调（P<0.01）,细胞增殖、迁移和侵袭能力显著受到抑制（P<0.05 或P<0.01）,同时过表达LZTS2 细胞中Cyclin D1、波形蛋白和神经钙黏蛋白表达水平均明显降低（P<0.05 或P<0.01）、上皮钙黏蛋白表达水平明显升高（均P<0.01）,显示LZTS2 过表达通过降低p-PI3K和p-AKT 表达而抑制PI3K/AKT信号通路。结论：LZTS2 在乳腺癌中低表达,过表达LZTS2 能够抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,可能与抑制细胞EMT过程的PI3K/AKT信号通路有关。