小鼠蛛网膜下腔出血后海马CA1区mGluR1和ERK1/2的表达变化

目的:探讨小鼠蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)后代谢型谷氨酸受体1(metabotropicglutamate receptor 1,mGluR1)及细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)调控神经细胞凋亡的分子机制。方法:采用非开颅血管内穿线法制备小鼠SAH模型,随机分为3组:假手术组、SAH+生理盐水(SAH+NS)组、SAH+LY367385(mGluR1抑制剂,SAH+LY367385)组,于SAH后10 min侧脑室注射生理盐水或LY367385(500 nmol/L)5μl,术后行神经功能评分。分别在SAH后6、24、48 h 3个时间点取右侧脑组织标本,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测各组mGluR1的表达变化,免疫印迹法(Western Blot)检测p-ERK1/2蛋白的表达,TUNEL法检测右侧海马CA1区神经细胞的凋亡。结果:与假手术组比较,SAH+NS组小鼠神经功能评分均显著降低(P<0.05),随SAH时间延长,各组小鼠mGluR1、p-ERK1/2蛋白均有不同程度增强,凋亡细胞增多(P<0.05)。与SAH+NS组比较,SAH+LY367385组小鼠神经功能评分增加,mGluR1、p-ERK1/2蛋白表达均有不同程度下调,神经细胞凋亡数目有所减少。SAH后6～48 h,mGluR1的表达与p-ERK1/2呈正相关。结论:mGluR1和ERK在SAH的发病机制中发挥了重要作用,SAH后海马内mGluR1的表达增强可通过激活ERK信号途径诱导神经细胞的凋亡。     

拟载脂蛋白E-1410 12肽对脑血管痉挛小鼠代谢型谷氨酸受体/细胞外信号调节激酶途径的调节作用

目的 探讨脑血管痉挛(CvS)后细胞外信号调节激酶(ERK)途径的作用机制,及重组载脂蛋白E( apoE)拟肽对脑血管痉挛损伤的保护作用. 方法 采用非开颅血管内线栓法制备小鼠蛛网膜下腔出血(SAH)并脑血管痉挛模型.将134只健康雄性ICR小鼠随机分为4组:假手术组、模型对照组、拮抗剂组,apoE治疗组.ApoE治疗组将拟apoE-1410以无菌磷酸盐缓冲液溶解后,经尾静脉注射0.6mg/kg,术前30min开始第1次,每12h1次.拮抗剂组于SAH后10 min侧脑室注射生理盐水或LY367385( 500nmol/L)5μl,术后行神经功能评分.分别在SAH后6、24、48h 3个时相点取脑组织标本,在光镜和电镜下观察脑组织病理变化,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测各组代谢型谷氨酸受体1(mGluRl) mRNA的表达变化;免疫印迹法(Western blotting)检测mGluR1、磷酸化细胞外信号调节激酶(ERK1/2)蛋白的表达;用原位缺口末端标记法(TUNEL)检测神经细胞凋亡情况.结果 与假手术组比较,模型对照组小鼠神经功能评分显著降低,随脑血管痉挛时间延长,各组小鼠mGluR1 mRNA、mGluR1和磷酸化ERK1/2蛋白均有不同程度增加,凋亡细胞增多,神经细胞出现变性坏死、细胞器数量减少.与模型对照组比较,拮抗剂组和apoE治疗组小鼠神经功能评分增加,mGluR1 mRNA、mGluR1、磷酸化ERK 1/2蛋白表达均有不同程度下调,神经细胞凋亡数目减少,应用apoE1410拟肽减轻了脑组织形态学和超微结构损伤. 结论 脑血管痉挛后mGluR1的表达增强可通过激活ERK信号途径诱导神经细胞凋亡,apoE拟肽对脑血管痉挛损伤具有抗损坏作用.     

Changes of extracellular signal regulated kinase and caspase-8 expression in arteriae cerebri of mice with cerebral vasospasm model

目的:研究细胞外信号调节激酶(ERK)、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-8(caspase-8)在脑血管痉挛(CVS)后早期脑损伤中的作用,并探讨ERK特异性抑制剂U0126通过此途径发挥作用的保护机制.方法:采用非开颅血管内穿线法制备小鼠蛛网膜下腔出血(SAH)并脑血管痉挛模型,给予U0126,术后行神经功能评分,分别在术后12、24、48 h3个时相点取右侧大脑动脉标本,应用免疫印迹检测各组磷酸化ERK1/2( p-ERK1/2)、caspase-8蛋白表达,TUNEL法检测大脑中动脉内皮细胞凋亡.结果:模型组小鼠神经功能评分降低,大脑中动脉出现严重脑血管痉挛,随脑血管痉挛时间延长,各组小鼠p-ERK1/2、caspase-8蛋白均有不同程度增强,凋亡细胞增多.与模型组比较,治疗组小鼠神经功能评分增加,各时相点3项指标的表达均不同程度下调.脑血管痉挛12～48 h p-ERK1/2与caspase-8呈正相关.结论:脑血管痉挛后,ERK表达增强可通过激活caspase-8信号途径诱导大脑动脉内皮细胞凋亡;U0126对脑血管痉挛具有一定的治疗作用,其机制之一可能是通过部分阻抑ERK通路活化,减少凋亡实现的.     

小鼠蛛网膜下腔出血后胰岛素与PI-3K/AKT信号通路的关系

观察胰岛素在小鼠蛛网膜下腔出血后神经元凋亡作用的影响,并进一步探讨其引起该作用的分子机制。健康雄性昆明小鼠,体质量28~32 g,清洁级(SPF),70只,随机分为三组:假手术组(Sham组),蛛网膜下腔出血+生理盐水组(SAH组),蛛网膜下腔出血+胰岛素组(Ins组),蛛网膜下腔出血+胰岛素+PD98059抑制剂组(PD组)。检测方法:(1)神经功能学检测,观察记录小鼠的精神状态、部分感觉和运动能力;(2)HE染色观察小鼠顶叶皮质神经元的形态学改变;(3)RT-PCR检测p-AKT、p-ERK的mRNA水平表达情况;(4)Western blot检测p-AKT、p-ERK的蛋白水平表达情况。结果表明:(1)神经功能学检测:与对照组比较,小鼠SAH后感觉和运动能力呈现不同程度障碍,综合得分明显下降;与SAH组比较,Ins组感觉和运动能力相对较好,综合得分有所上升。(2)HE染色观察:Sham组小鼠神经元排列相对整齐,形态较完整,核质均匀,核仁清晰;SAH组小鼠神经元损伤较重,部分细胞肿胀,排列紊乱,细胞周间隙增宽,部分细胞核固缩深染。(3)RT-PCR结果显示:与Sham组比较,SAH后6h p-AKT有所增加,同时p-ERK增加,与SAH组比较,Ins组p-AKT增加更显著,且p-AKT相对增加,与Ins组比较,PD组p-AKT明显减少,p-ERK明显减少,且与SAH组比较亦有统计学意义。(4)Western Blot结果显示p-AKT、p-ERK蛋白水平变化与mRNA水平一致。胰岛素可通过PI3K-Akt信号转导途径明显抑制小鼠蛛网膜下腔出血后神经元的凋亡,其中Akt激活以及ERK的增加是胰岛素上述抗凋亡效应的关键环节。     

H2 S抑制Ang II引起的神经元活性氧水平升高的机制研究

目的: 探讨硫化氢(H₂S)对血管紧张素II(angiotensin II,Ang II)所致延髓神经元活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平变化的影响,以及H₂S抗氧化应激的相关机制。方法: 采用原代培养的延髓神经元,分组如下:对照组、Ang II处理组、硫氢化钠(NaHS)处理组、NaHS+Ang II处理组和PD98059(p-ERK1/2蛋白的抑制剂)+ Ang II处理组。选用二氢乙啶(DHE)荧光探针法测定各组神经元胞内的ROS水平,Western blotting检测ERK1/2和p-ERK1/2蛋白的表达量,CCK-8法测定神经元的活性。结果: Ang II(终浓度为100 nmol/L)引起神经元ROS水平升高;NaHS(50~200 μmol/L)明显抑制Ang II引起的神经元ROS水平升高,但单独给予NaHS并不影响神经元ROS水平;p-ERK1/2蛋白的抑制剂PD98059也能明显抑制Ang II引起的神经元ROS水平的升高;适宜作用浓度的NaHS能够显著降低Ang II引起的神经元p-ERK1/2蛋白表达。结论: H₂S能够显著抑制Ang II引起的神经元ROS水平升高,其作用机制与MAPK家族中p-ERK1/2蛋白的表达有关。H₂S可能通过降低p-ERK1/2的表达量而产生抗氧化应激作用。     

黄芪注射液联合葛根素注射液对2型糖尿病KKAy小鼠肾脏TGF-β1和BMP-7表达的影响

目的: 观察黄芪注射液联用葛根素注射液对2型糖尿病KKA^y小鼠肾脏转化生长因子β₁(TGF-β₁)和骨形态发生蛋白7(BMP-7)表达的影响。方法: 雄性KKA^y小鼠饲养至14周龄时随机分成模型组和黄芪注射液联合葛根素注射液治疗组,同龄雄性C57BL/6J小鼠作为正常组。观察各组小鼠一般状态并测量体重;检测20周龄、24周龄及28周龄小鼠空腹血糖(BG)、血清甘油三酯(TG)、胆固醇 (TC) 和血清肌酐(SCr);免疫组化法测定肾脏组织TGF-β₁蛋白表达情况,RT-PCR法检测肾脏组织BMP-7和TGF-β₁ 的mRNA表达情况。结果: 与正常组相比,模型组小鼠的体重、BG、TG、TC和SCr均有较明显增高;肾组织TGF-β₁蛋白和mRNA表达明显升高,BMP-7 mRNA表达下降。与模型组比较,黄芪注射液联合葛根素注射液治疗组小鼠的体重、BG、TG 、TC 及SCr均有不同程度下降;肾组织BMP-7 mRNA表达升高,而TGF-β₁蛋白及mRNA表达明显下调。结论: 黄芪注射液联合葛根素注射液对2型糖尿病KKA^y小鼠肾脏有保护作用,其机制可能与恢复肾组织BMP-7表达,降低肾组织TGF-β₁过度表达有关。     

Akt与ERK1/2在人骨关节炎软骨细胞中的表达

目的: 观察蛋白激酶B(Akt)与细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)在正常和骨关节炎(OA)软骨细胞中的表达,探讨Akt与ERK1/2在OA病程中的意义。方法: 手术中取5例正常和18例OA人膝关节软骨组织,包埋制备切片,免疫组织化学技术观察 p-Akt及p-ERK1/2在正常和OA 软骨组织中的表达;培养人软骨细胞,甲苯胺蓝染色、免疫组化鉴定并观察聚集蛋白聚糖及Ⅱ型胶原在正常和OA软骨细胞中的表达; Western blotting技术检测Akt、p-Akt、ERK1/2、p-ERK1/2、磷酸化70 kD核糖体蛋白S6激酶(p-p70S6K)及增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白在正常和OA软骨细胞中表达水平; 实时荧光定量PCR技术检测聚集蛋白聚糖及Ⅱ型胶原在正常和OA软骨细胞中mRNA表达水平。结果: 与正常软骨细胞比较,OA软骨细胞内p-Akt和p-p70S6K蛋白表达明显降低(P<0.05),且聚集蛋白聚糖和Ⅱ型胶原mRNA和蛋白在OA软骨细胞中的表达水平降低(P<0.05),而 p-ERK1/2和PCNA蛋白表达明显提高(P<0.05)。结论: Akt可能通过p-p70S6K来调控OA软骨细胞外基质聚集蛋白聚糖及II型胶原的合成,ERK1/2可能通过PCNA来调控OA软骨细胞增殖;Akt与ERK1/2可能参与了OA的病理过程。     

ERK1/2和PI3-K通路在蛛网膜下腔出血大鼠海马区对神经细胞自噬的调控作用

目的:探讨细胞外信号调节激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK1/2)和磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3-K)通路对大鼠蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)后神经细胞自噬的调控作用。方法:雄性SD大鼠160只,分为假手术(Sham)组、模型(SAH)组、ERK1/2抑制剂U0126组和PI3-K抑制剂LY294002组。采用二次注血法制作SAH大鼠模型,HE染色观察海马区神经细胞的形态变化;免疫组织化学染色法检测海马区磷酸化ERK1/2、PI3-K、自噬相关蛋白Beclin-1和微管相关蛋白1轻链(LC3)-II的表达实时荧光定量PCR检测海马区ERK1/2、PI3-K、自噬相关蛋白Beclin-1和微管相关蛋白LC3的表达。结果:SAH组海马区神经细胞存活率低于Sham组,ERK1/2、PI3-K、Beclin-1和LC3的表达水平高于Sham组(P0.05);U0126组和LY294002组海马区神经细胞存活率均高于SAH组,ERK1/2、PI3-K、Beclin-1和LC3表达均低于SAH组(P0.05);U0126组和LY294002组两组间海马区神经细胞存活率差异无统计学意义(P0.05),U0126组ERK1/2、Beclin-1和LC3表达水平低于LY294002组(P0.05),PI3-K表达水平高于LY294002组(P0.05)。结论:ERK1/2和PI3-K通路激活共同参与SAH后神经细胞自噬的调节,且以PI3-K通路更为主要。     

TGF-β1/Smads和ERK表达异常在高盐饮食诱导的大鼠血管重构中的作用

目的: 研究转化生长因子β₁(TGF-β₁)/Smads和细胞外信号调节激酶(ERK)表达在高盐饮食诱导的大鼠血管重构中的作用及替米沙坦的干预效应。方法: 雄性 Wistar大鼠随机分为正常盐对照组(C组),8%高盐模型组和8%高盐+替米沙坦干预组(T组),每2周测量尾动脉压1次,根据尾动脉压又将8%高盐模型组分为模型高血压组(MH组)和模型正常血压组(MN组),喂养共24周。HE染色和Masson染色观察主动脉和肠系膜动脉重构。通过 real-time PCR测定主动脉中膜TGF-β₁、Smad2和Smad3和Smad7 mRNA表达,同时免疫组化法检测主动脉和肠系膜动脉中膜增殖细胞核抗原(PCNA)、TGF-β₁、磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)及Smad7的蛋白表达和分布。结果: 与C组相比,MH组大鼠血压升高(P<0.05), MH组和MN组主动脉和肠系膜动脉中膜胶原容积分数(CVF)和中膜厚度(MT)显著增加(P<0.01),主动脉TGF-β₁、Smad2 和Smad7 mRNA表达增高(P<0.05),主动脉和肠系膜动脉中膜PCNA、TGF-β₁、p-Smad2/3和p-ERK1/2蛋白表达显著升高(P<0.05),Smad7表达明显降低(P<0.05);经替米沙坦干预后,主动脉和肠系膜动脉中膜CVF和MT减小(P<0.01),PCNA、TGF-β₁、p-Smad2/3和p-ERK1/2表达减少(P<0.05),Smad7 表达上升(P<0.05)。结论: TGF-β₁/Smads 和ERK表达异常共同参与高盐饮食致主动脉和肠系膜动脉重构的机制;替米沙坦抗动脉重构的作用可能部分是通过阻断血管紧张素Ⅱ1型(AT₁)受体影响TGF-β₁ /Smads 和ERK表达实现的。     

小鼠蛛网膜下腔出血后胰岛素与PI-3 K／AKT信号通路的关系

观察胰岛素在小鼠蛛网膜下腔出血后神经元凋亡作用的影响,并进一步探讨其引起该作用的分子机制。健康雄性昆明小鼠,体质量28～32 g,清洁级（SPF）,70只,随机分为三组：假手术组（Sham组）,蛛网膜下腔出血＋生理盐水组（SAH组）,蛛网膜下腔出血＋胰岛素组（Ins组）,蛛网膜下腔出血＋胰岛素＋PD98059抑制剂组（PD组）。检测方法：（1）神经功能学检测,观察记录小鼠的精神状态、部分感觉和运动能力;（2）HE染色观察小鼠顶叶皮质神经元的形态学改变;（3）RT-PCR检测p-AKT、p-ERK的mRNA水平表达情况;（4）Western blot检测p-AKT、p-ERK的蛋白水平表达情况。结果表明：（1）神经功能学检测：与对照组比较,小鼠SAH后感觉和运动能力呈现不同程度障碍,综合得分明显下降;与SAH组比较,Ins组感觉和运动能力相对较好,综合得分有所上升。（2）HE 染色观察：Sham组小鼠神经元排列相对整齐,形态较完整,核质均匀,核仁清晰;SAH组小鼠神经元损伤较重,部分细胞肿胀,排列紊乱,细胞周间隙增宽,部分细胞核固缩深染。（3）RT-PCR结果显示：与Sham组比较,SAH后6h p-AKT 有所增加,同时p-ERK增加,与SAH组比较,Ins组p-AKT增加更显著,且p-AKT相对增加,与Ins组比较,PD组p-AKT明显减少,p-ERK明显减少,且与SAH组比较亦有统计学意义。（4）Western Blot结果显示p-AKT、p-ERK蛋白水平变化与mRNA水平一致。胰岛素可通过PI3 K-Akt信号转导途径明显抑制小鼠蛛网膜下腔出血后神经元的凋亡,其中Akt激活以及ERK的增加是胰岛素上述抗凋亡效应的关键环节。     

U0126对蛛网膜下腔出血小鼠细胞外信号调节激酶途径的调节作用

目的:研究细胞外信号调节激酶(ERK)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-8(caspase-8)在蛛网膜下腔出血(SAH)后早期脑损伤中的作用,并探讨ERK特异性抑制剂U0126通过此途径发挥作用的保护机制。方法:采用稳定的非开颅血管内穿线法制备小鼠SAH模型,并于术前30 min经尾静脉给予U0126(0.1 mg/kg),分别在术后12、24、48 h 3个时相点取右侧大脑动脉标本,HE染色观察大脑动脉的形态改变,并检测大脑中动脉(MCA)的直径变化;应用免疫印迹法检测各组p-ERK1/2、caspase-8蛋白表达,TUNEL法检测MCA内皮细胞凋亡。结果:模型组小鼠MCA出现严重血管痉挛,直径减小,p-ERK1/2、caspase-8蛋白均有不同程度增强,凋亡细胞增多。与模型组比较,治疗组小鼠各时相点上述3项指标的表达均呈不同程度下调,MCA管径增加,脑血管痉挛缓解。SAH 12～48 h时p-ERK1/2与caspase-8的表达呈正相关。结论:SAH后ERK表达增强可通过激活caspase-8信号途径诱导大脑动脉内皮细胞凋亡;U0126可减少大脑动脉内皮细胞凋亡,其机制之一可能是通过阻抑ERK通路活化实现的。     

p53在蛛网膜下腔出血小鼠脑皮质的表达及其与PI3K/Akt信号通路的关系

目的 探讨p53蛋白在实验性蛛网膜下腔出血小鼠脑皮质的表达及其与PI3K/Akt信号通路的关系.方法 将72只小鼠随机平均分为3组,即假手术组(Sham组),蛛网膜下腔出血组(SAH组),抑制剂LY294002组(LY组).采用线栓法制备小鼠蛛网膜下腔出血模型,术后观测6个时相点:0h、3h、6h、9h、12h、24h...     

H2S通过MAPK信号通路影响缺血再灌注损伤大鼠回肠上皮细胞凋亡

 目的: 建立大鼠肠缺血再灌注(I/R)损伤模型,研究H₂S对I/R损伤大鼠回肠上皮细胞凋亡、MAPK信号通路表达的影响。方法: 30只雄性Wistar大鼠随机分为假手术(sham)组、I/R组、I/R+NaHS组。建立大鼠肠I/R损伤模型。再灌注前10 min时经大鼠尾静脉注入100μmol/kg NaHS,随后按1 mg·kg^-1·h^-1输注直到再灌注2 h。RT-PCR检测回肠组织ERK、JNK和p38MAPK的mRNA表达,Western blot检测回肠组织p-ERK、p-JNK、p-p38MAPK、p-NF-κB P65的蛋白水平。TUNEL染色检测回肠上皮细胞凋亡。敏感硫电极法测定血、回肠组织匀浆中的H₂S浓度。结果: I/R组的H₂S浓度、ERK、mRNA、p-ERK均低于sham组和I/R+NaHS组,JNK mRNA、p38MAPK mRNA、p-JNK、p-p38MAPK、p-NF-κB P65和凋亡指数高于sham组和I/R+NaHS组。结论: H₂S通过下调ERK的mRNA表达及磷酸化,上调JNK、p38MAPK mRNA的表达,促进JNK、p38MAPK、NF-κB磷酸化,从而减轻I/R损伤大鼠的回肠上皮细胞凋亡。     

Differential roles for mGluR1 and mGluR5 in the persistent prolongation of epileptiform bursts.

Transient activation of group I metabotropic glutamate receptors (mGluRs) with the selective agonist (S)-3,5-dihydroxyphenylglycine (DHPG) produces persistent prolongation of epileptiform bursts in guinea pig hippocampal slices, the maintenance of which can be reversibly suppressed with group I mGluR antagonists. To determine the relative roles of mGluR1 and mGluR5 in these group I mGluR-dependent induction and maintenance processes, subtype-selective antagonists were utilized. In the presence of picrotoxin, DHPG (50 microM, 20-45 min) converted interictal bursts into 1- to 3-s discharges that persisted for hours following washout of the mGluR agonist. 2-methyl-6-(phenylethynyl)-pyridine (MPEP, an mGluR5 antagonist; 25 microM) and (+)-2-methyl-4-carboxyphenylglycine (LY367385, an mGluR1 antagonist; 20-25 microM) each significantly suppressed the ongoing expression of the mGluR-induced prolonged bursts. However, LY367385 was more effective, reducing the burst prolongation by nearly 90%; MPEP only produced a 64% reduction in burst prolongation. Nevertheless, MPEP was more effective at preventing the induction of the burst prolongation; all 10 slices tested failed to express prolonged bursts both during and after co-application of DHPG with MPEP. Co-application of DHPG with LY367385, in contrast, resulted in significant burst prolongation (in 68% of slices tested) that was revealed on washout of the two agents. These results suggest that while both receptor subtypes participate in both the induction and maintenance of mGluR-mediated burst prolongation, mGluR1 activation plays a greater role in sustaining the expression of prolonged bursts, whereas mGluR5 activation may be a more critical contributor to the induction process underlying this type of epileptogenesis.     

Regulation of main olfactory bulb mitral cell excitability by metabotropic glutamate receptor mGluR1

In the rodent main olfactory bulb (MOB), mitral cells (MCs) express high levels of the group I metabotropic glutamate receptor (mGluR) subtype, mGluR1. The significance of this receptor in modulating MC excitability is unknown. We investigated the physiological role of mGluR1 in regulating MC activity in rat and mouse MOB slices. The selective group I agonist (RS)-3,5-dihydroxyphenylglycine (DHPG), but not group II or III agonists, induced potent, dose-dependent, and reversible depolarization and increased firing of MCs. These effects persisted in the presence of blockers of fast synaptic transmission, indicating that they are due to direct activation of mGluRs on MCs. Voltage-clamp recordings showed that DHPG elicited a voltage-dependent inward current consisting of multiple components sensitive to potassium and calcium channel blockade and intracellular calcium chelation. MC excitatory responses to DHPG were absent in mGluR1 knockout mice but persisted in mGluR5 knockout mice. Broad-spectrum LY341495, MCPG, as well as preferential mGluR1 LY367385 antagonists blocked the excitatory effects of DHPG and also potently modulated MC spontaneous and olfactory nerve-evoked excitability. mGluR antagonists altered spontaneous membrane potential bistability, increasing the duration of the up and down states. mGluR antagonists also substantially attenuated MC responses to sensory input, decreasing the probability and increasing the latency of olfactory nerve-evoked spikes. These findings suggest that endogenous glutamate tonically modulates MC excitability and responsiveness to olfactory nerve input, and hence the operation of the MOB circuitry, via activation of mGluR1.     

Metabotropic glutamate receptors in the main olfactory bulb drive granule cell-mediated inhibition

Main olfactory bulb (MOB) granule cells (GCs) express high levels of the group I metabotropic glutamate receptor (mGluR), mGluR5. We investigated the role of mGluRs in regulating GC activity in rodent MOB slices using whole cell patch-clamp electrophysiology. The group I/II mGluR agonist (+/-)-1-aminocyclopentane-trans-1,3-dicarboxylic acid (ACPD) or the selective group I agonist (RS)-3,5-dihydroxyphenylglycine (DHPG) depolarized ( approximately 20 mV) and increased the firing rate of GCs. In the presence of ionotropic glutamate and GABA receptor antagonists, DHPG evoked a more modest depolarization ( approximately 8 mV). In voltage clamp, DHPG, but not group II [(2S,2'R,3)-2-(2',3'-dicarboxycyclopropyl)glycine, DCG-IV] or group III [L(+)-2-amino-4-phosphonobutyric acid, L-AP4] mGluR agonists, induced an inward current. The inward current reversed polarity near the potassium equilibrium potential, suggesting mediation by closure of potassium channels. The DHPG-evoked inward current was unaffected by the mGluR1 antagonist (S)-(+)-alpha-amino-4-carboxy-2-methylbenzeneacetic acid (LY367385), was blocked by the group I/II mGluR antagonist (alphaS)-alpha-amino-alpha-[(1S,2S)-2-carboxycyclopropyl]-9H-xanthine-9-propanoic acid (LY341495), and was absent in GCs from mGluR5 knockout mice. LY341495 also attenuated mitral cell-evoked voltage-sensitive dye signals in the external plexiform layer and mitral cell-evoked spikes in GCs. These results suggest that activation of mGluR5 increases GC excitability, an effect that should increase GC-mediated GABAergic inhibition of mitral cells. In support of this: DHPG increased the frequency of spontaneous GABAergic inhibitory postsynaptic currents in mitral cells and LY341495 attenuated the feedback GABAergic postsynaptic potential elicited by intracellular depolarization of mitral cells. Our results suggest that activation of mGluR5 participates in feedforward and/or feedback inhibition at mitral cell to GC dendrodendritic synapses, possibly to modulate lateral inhibition and contrast in the MOB.     

Mitofusin-2在大鼠蛛网膜下腔出血后大脑动脉内表达的变化

目的 研究Mitofusin-2(Mfn2)在大鼠蛛网膜下腔出血（SAH）后大脑动脉中表达的变化,寻找Mfn2基因与脑血管痉挛(CVS)之间的关系。 方法 蛛网膜下腔出血模型由刺破颈内动脉的颅内动脉分叉处诱导。146只SD大鼠被随机分为6组：假手术组（sham组）,SAH后24h、48h、72h、7d 和14d各组。计算动物死亡率,测定神经功能学评分及脑水含量。组织学检测观察形态学变化,采用Western blotting及RT-PCR 分别检测SAH后不同时间点的大鼠主要大脑动脉Mfn2蛋白及mRNA 水平的表达变化。 结果 围绕在基底动脉周围的血块随着时间逐渐消失,形态学观察显示SAH 24h组基底动脉出现严重的痉挛。SAH7d组的基底动脉中层无阳性的免疫组织化学阳性染色。Western blotting结果显示,Mfn2蛋白表达 sham组与SAH48h组和SAH72h组相比,均显著增加(P<0.05),SAH 7d出现显著性降低(P<0.05),SAH14d 恢复至 sham 和SAH24h 组水平。而mRNA 水平变化与蛋白水平变化相类似。Mfn2基因参与到SAH后血管的自我调节过程中,表达随着时间增加而增加,并在72h到达高峰,7d时显著下降,14d左右恢复至sham组水平。 结论 Mfn2在SAH后的早期以及迟发型脑血管痉挛中起重要作用,为揭示SAH后脑血管痉挛的机理提供实验依据。