间充质干细胞移植对兔粥样硬化颈动脉损伤后再狭窄的影响

目的探讨间充质干细胞（mesenchymals temcells,MSCs）对球囊损伤的粥样硬化颈动脉再狭窄的影响及可能的作用机制。方法制作颈动脉粥样硬化狭窄大白兔模型38只。分为MSCs移植组（n=28）和对照组（n=10）。MSCs移植组于球囊损伤前经外周血采集MSCs并体外培养扩增,于球囊损伤后即刻、1周和2周经静脉移植MSCs,而对照组给予等量生理盐水。于球囊损伤后4周收集血管标本,经免疫化学染色后观察血管病理形态学特点、计算新生内膜和中膜面积并检测增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）。结果①MSCs移植组外周血分离MSCs经荧光激活细胞分类术（FCAS）鉴定,其表面抗原CD44阳性而CD34和CD45阴性,纯度达95％以上;②MSCs移植组颈动脉内皮细胞少量缺失,管壁部分区域轻度增厚,管腔轻度狭窄,增厚处中膜可见少量泡沫细胞沉积,部分区域伴少量纤维组织增生,呈动脉粥样硬化早中期（脂质条纹-纤维斑块期）改变,而对照组颈动脉见内皮细胞片状缺失,动脉管壁全周明显增厚,管腔狭窄较明显,内膜管腔面可见纤维组织增生形成纤维帽,纤维帽下中膜内可见较多的泡沫细胞沉积,并伴有淡红染无定形物质形成,呈动脉粥样硬化中晚期（纤维斑块-粥样斑块期）改变;⑧与对照组相比较,MSCs移植组新生内膜面积和中膜面积均明显减少,差异有统计学意义[（0．336±0．018）mm^2比（0．845±0．046）mm^2,P〈0．01;（0．245±0．017）mm^2比（0．951±0．024）mm^2,P〈0．01];而两组间新生内膜面积／中膜面积,差异无统计学意义[（1．371±0．158）比（1．534±0．014）,P〉0．05]。同时,血管壁PCNA测定显示：MSCs移植组PCNA阳性细胞率显著低于对照组（0．236％±0．014％比0．881％±0．017％,P〈0．05）。结论MSCs静脉移植可明显降低兔球囊损伤动脉粥样硬化颈动脉的新生内膜增生,促进损伤内皮再生。     

骨髓间充质干细胞移植对损伤血管的内皮修复作用

目的探讨兔颈动脉粥样硬化狭窄血管成形术后,骨髓间充质干细胞(BMSC)移植对损伤血管内皮修复的影响及可能机制。方法制作兔颈动脉粥样硬化狭窄模型48只,随机分成BMSC移植组(n=24)和对照组(n=24)。体外培养兔BMSC,流式细胞仪鉴定BMSC表面标志,DAPI标记后备用。球囊损伤颈动脉的即刻,BMSC移植组以107/kg的细胞数经颈外动脉移植到损伤动脉局部,对照组注射等量的PBS液。术前及细胞移植后3、7、14及28天采集外周血用ELISA法测定血管内皮生长因子水平。移植后7天取材观察DAPI标记BMSC的归巢。移植后14天免疫组织化学染色检测损伤血管组织的血小板-内皮细胞黏附分子(CD31)的表达;移植后28天HE染色后测定损伤血管新生内膜面积、新生内膜面积/中膜面积及再狭窄率。结果 BMSC移植组在移植后各时间点血管内皮生长因子水平均显著高于对照组(P<0.01)。移植后7天BMSC移植组损伤血管的内膜表面见DAPI标记的BMSC。移植后14天血管内膜有CD31的连续性表达,对照组没有表达。与对照组比较,移植后28天BMSC移植组血管新生内膜面积(0.092±0.009比0.189±0.007,P<...     

骨髓间充质干细胞对血管成形术后再狭窄的影响

<正> 冠状动脉介入治疗(percutaneous coronary intervention,PCI)是治疗冠心病最有效的血运重建手段,然而再狭窄是影响PCI长期疗效的主要原因。其机制为手术中球囊扩张和支架置人对病变血管内皮造成的机械损伤,导致血管平滑肌细胞(smooth muscle cells,SMCs)从血管中膜向内膜下迁移,增殖、分泌细胞外基质,形成血管新生内膜和收缩性血管重构可能是PCI治疗后再狭窄病理过程的重要环节。因此     

骨髓间充质干细胞局部移植对兔腹主动脉成形术后再狭窄和平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨兔腹主动脉血管成形术后,骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对兔腹主动脉再狭窄和平滑肌细胞增殖的影响及机制。方法将60只新西兰大白兔随机分为对照组、损伤组、移植组各20只。所有动物均穿刺股动脉,对照组不进行球囊扩张损伤腹主动脉,损伤组和移植组送入球囊扩张损伤腹主动脉,损伤组注射等量的磷酸盐缓冲液(PBS),移植组用经4,6-联脒-2-苯基吲哚(DAPI)荧光标记的BMSCs以1×107/kg的细胞数经血管注射到损伤血管的局部。术后4 w取腹主动脉行免疫组织化学染色检测平滑肌肌动蛋白(α-SM-actin)、增殖细胞核抗原(PCNA)在血管内膜上的表达情况,测定PCNA阳性细胞核数量,计算PCNA增殖指数。HE染色行血管形态计量分析包括内膜中膜厚度、内膜中膜面积,衡量血管狭窄情况。结果损伤组新生血管内膜层α-SM-actin表达明显强于对照组(P<0.05),移植组新生血管内膜α-SM-actin表达,与损伤组比较明显增强(P<0.05)。对照组血管内膜无PCNA阳性表达,损伤组PCNA阳性细胞数较对照组明显增多(P<0.05)。移植组PCNA阳性细胞数较损伤组明显减少(P<0.05)。损伤组腹主动脉明显狭窄,内膜厚度、内膜面积、中膜厚度、中膜面积、血管狭窄程度等指标明显高于移植组和对照组(P<0.05),移植组腹主动脉有所狭窄,但血管形态学指标与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论兔腹主动脉球囊损伤后导致血管平滑肌细胞增殖及动脉管腔狭窄。BMSCs血管局部移植可抑制血管平滑肌细胞的增殖,减轻动动脉粥样硬化及狭窄程度。     

骨髓间充质干细胞移植加重大鼠主动脉血管成形术后再狭窄程度

目的探讨骨髓间充质干细胞（MSCs）移植对大鼠血管成形术后再狭窄的影响。方法随机将大鼠分为正常对照、损伤和损伤加MSCs移植组,用经皮冠状动脉腔内成形术（PTCA）导管扩张大鼠胸腹主动脉创建动脉损伤模型。贴壁法培养大鼠MSCs,经4,6-联脒-2-苯基吲哚（DAPI）荧光标记后,以2×10^6数量经导管注入移植组大鼠主动脉内。术后第1、2、6周取材寻找DAPI标记的MSCs,行组织形态学及血小板衍生的生长因子受体（PDGFR）家族干细胞因子的受体（c—kit）,增殖细胞核抗原（PCNA）,平滑肌肌动蛋白（αSMA）免疫组化分析。结果移植术后1～2周,可见DAPI标记MSCs归巢到损伤内膜表面或中膜近内膜处,并表达d—SMA。移植组和损伤组新生内膜表面均表达少量c-kit,两组之间无明显差别。正常对照组血管中膜α-SMA均匀强表达,PCNA表达微弱,无新生内膜。移植组新生内膜中PCNA和α—SMA表达均强于损伤组。术后6周,移植组新生内膜／中膜面积百分比和管腔面积狭窄率均较损伤组明显增加,差异具有统计学意义。结论经主动脉移植的骨髓MSCs可归巢到严重受损的主动脉内膜上,并分化为平滑肌样细胞,参与新生内膜的形成,加重大鼠血管成形术后再狭窄程度。     

兔骨髓间充质干细胞自体移植对缺血心肌心功能的影响

目的 :了解骨髓间充质干细胞 (MSCs)在心肌梗死 (MI)的缺血心肌微环境中转化为心肌细胞并改善心功能的可行性。方法 :结扎兔左前降支制作急性MI模型 ,骨穿抽取骨髓 ,分离培养扩增MSCs ,其中一组于培养基中加入 5 氮胞苷 (5 aza) 10 μmol/L。术后 2周进行MI瘢痕内移植 5 溴脱氧尿嘧啶 (BrdU)标记的MSCs,对照组注射培养基。MI术前、术后 3d及移植后 4周做超声心动图检测心功能 ,移植后 4周从右颈总动脉插管至左心室测左室压力变化 ,随后处死动物取左室标本作冰冻切片 ,采用免疫荧光方法鉴定植入细胞。结果 :细胞移植组左室切片中均可见BrdU染色阳性细胞即植入细胞 ,对照组未见BrdU染色阳性细胞。超声心动图检测证实移植后 4周细胞移植组左室收缩末期直径、舒张末期直径均小于对照组 (分别为P <0 .0 1及P <0 .0 5 ) ,小轴缩短率、射血分数均大于对照组 (均P <0 .0 1)。导管测压显示细胞移植组的左室舒张末期压低于对照组、左室压上升及下降最大速率高于对照组 (均P <0 .0 1)。加 5 aza细胞移植组与不加 5 aza组上述各指标差异无统计学意义。结论 :缺血心肌内注射MSCs可依赖组织微环境转化为心肌细胞修复梗死心肌 ,显著改善心功能 ,可用于MI的治疗。     

兔骨髓间充质干细胞移植后移植细胞凋亡的实验研究

目的利用TUNEL法检测5-氮胞苷体外诱导骨髓间充质干细胞（MSCs）移植后的凋亡情况。方法5-氮胞苷体外诱导骨髓间充质干细胞MSCs向肌源性心肌细胞分化,通过免疫组化,鉴定诱导后的MSCs是否向类心肌细胞转化。建立兔心肌梗死模型,将细胞移植于心梗区域。移值2周后,利用TUNEL法检测植入细胞的凋亡率。结果移植2周后,可见DAPI标记带蓝色荧光的供体细胞核,分布比较广泛,形态呈椭圆形类似心肌细胞核,并与心肌纤维排列方向一致,证明移植细胞已存活。移值细胞表达troponinT,证明移植的MSCs分化为类心肌细胞。移植细胞均出现不同程度细胞凋亡。结论移植的MSCs细胞可在缺血的心肌组织存活,并分化为类心肌细胞,但移植细胞均出现不同程度凋亡。     

骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭

目的 探讨骨髓间充质干细胞移植对阿霉素诱导的心力衰竭大鼠心功能的影响.方法 无菌条件下取8周龄F344大鼠的股骨和胫骨,获得骨髓间充质干细胞(MSCs),在体外纯化、扩增后 ,用5-溴-2'脱氧尿苷(BrdU)进行标记,然后注射到心力衰竭模型细胞移植组和对照组大鼠的心肌组织内,细胞移植后4周,采用生理记录仪测量3组大鼠的心功能 ,处死动物,心脏切片行免疫组化了解移植细胞在受体心脏的存活情况.结果 细胞移植后4周,细胞移植组大鼠死亡率为6.2%,明显低于假细胞移植组12.5%(P<0.01);在受体大鼠的心脏切片上有BrdU标记的移植细胞存活.心功能测定显示:与对照组相比,细胞移植组最大左室收缩末压(LVSP)、心率(HR)、左室内压最大(最小)变化速率(LV±dp/dtmax)均明显下降(P<0.01),而左室舒张末压(LVDP)明显升高(P<0.01);与对照组相比,细胞移植组大鼠的LVSP、HR、LV±dp/dtmax均有明显升高(P<0.01),而LVDP明显降低(P<0.01);与假移植组相比,细胞移植组大鼠的HR、 LV±dp/dtmax仍有明显下降(P<0.01),而LVDP明显升高(P<0.01).结论 MSCs移植可有效改善阿霉素诱导的扩张型心力衰竭大鼠的心功能,减少心力衰竭大鼠的死亡率.     

骨髓间充质干细胞移植治疗心力衰竭

目的探讨骨髓间充质干细胞移植对阿霉素诱导的心力衰竭大鼠心功能的影响。方法无菌条件下取8周龄F344大鼠的股骨和胫骨,获得骨髓间充质干细胞(MSCs),在体外纯化、扩增后,用5-溴-2’脱氧尿苷(BrdU)进行标记,然后注射到心力衰竭模型细胞移植组和对照组大鼠的心肌组织内,细胞移植后4周,采用生理记录仪测量3组大鼠的心功能,处死动物,心脏切片行免疫组化了解移植细胞在受体心脏的存活情况。结果细胞移植后4周,细胞移植组大鼠死亡率为6.2%,明显低于假细胞移植组12.5%(P<0.01);在受体大鼠的心脏切片上有BrdU标记的移植细胞存活。心功能测定显示:与对照组相比,细胞移植组最大左室收缩末压(LVSP)、心率(HR)、左室内压最大(最小)变化速率(LV±dp/dtmax)均明显下降(P<0.01),而左室舒张末压(LVDP)明显升高(P<0.01);与对照组相比,细胞移植组大鼠的LVSP、HR、LV±dp/dtmax均有明显升高(P<0.01),而LVDP明显降低(P<0.01);与假移植组相比,细胞移植组大鼠的HR、LV±dp/dtmax仍有明显下降(P<0.01),而LVDP明显升高(P<0.01)。结论MSCs移植可有效改善阿霉素诱导的扩张型心力衰竭大鼠的心功能,减少心力衰竭大鼠的死亡率。     

骨髓间充质干细胞对兔肝脏缺血再灌注损伤定向促修复作用

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)对家兔肝脏缺血再灌注损伤的修复作用及其机制。方法①取健康4周龄新西兰大白兔1只,取其BMSCs悬液,并培养扩增至第三代,部分细胞用流式细胞仪分析BMSCs表面CD29、CD44、CD45抗原的表达,余细胞用于移植。②取健康8～12周龄新西兰大白兔32只随机分为缺血再灌注组、缺血再灌注加BMSCs悬液组、缺血再灌注预处理组、假手术组。缺血再灌注组经兔上腹部正中切口,暴露肝门,用无损伤动脉夹钳闭肝门,完全阻断肝血流30 min后除去动脉夹实施再灌注,再灌注30 min。BMSCs组缺血再灌注后颈内静脉缓缓注入1×106/ml BMSC悬液0.5 ml,余同缺血再灌注组。再灌注预处理组,阻断肝门使肝脏缺血5 min,然后开放血流5 min,反复3次,余同缺血再灌注组。假手术组只手术而不用动脉夹钳闭肝门。手术完毕,关腹,饲养1 w后处死,颈内静脉取血3～4 ml,放置10 min,3 000 r/min离心取上清液,置于-20℃冰箱待检。取肝组织。将修整好的肝组织小块固定包埋切片,制备防脱切片,TUNEL法检测肝细胞凋亡情况。结果①分离培养的BMSCs增殖旺盛,纯度较高,且均质性和稳定性好。②缺血再灌注、BMSCs、再灌注预处理组血清AST、LDH及AI较假手术组高,且肝脏组织SOD水平较缺血再灌注组低,肝脏组织病理学损害重于假手术组;BMSC、再灌注预处理组血清AST、LDH及凋亡指数(AI)较缺血再灌注组低,BMSCs组最低,且肝脏组织SOD水平较缺血再灌注组高,BMSCs组最高,肝组织病理学损害明显轻于缺血再灌注组,BMSCs组最轻,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论经颈静脉BMSCs移植,对新西兰大白兔肝脏缺血再灌注损伤有修复作用,且作用优于预处理。     

VEGF-expressing Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells Transplantation Improved Heart Function of Myocardial Infarct Rabbits

Objectives To treat myocardial infarction with MSCs transplantation combined with VEGF gene therapy in rabbits and to study its mechanisms. Methods Forty-eight rabbits were randomly divided into MI group (n=12), MSCs group (n=12), VEGF group (n = 12), MSCs VEGF group (M V group, n = 12). Rabbit myocardial infarction models were founded by the ligation of left anterior descending artery. 107 MSCs were injected into the infarct-zone in four sites 2 weeks later in MSCs and M V group. phVEGF gene were injected in infarct-zone in VEGF group and MSCs transfected with phVEGF gene were injected in M V group. Heart function including LVEDP, LVSP, LVDP, -dp/dtmax dp/dtmax, were measured in vivo. The hearts were harvested at 4 weeks after transplantation and sectioned for HE stain, immunohistochemical stain of BrdU andⅧfactor antigen. Results The left ventricular hemodynamics parameters showed that heart function were improved more in M V group than MSCs group, MI group and VEGF group. The numbers of BrdU positive cells in M V group(61±8)were more than in MSCs group (44±8, P < 0.01). The numbers of vessels in infarcted zone were more in M V group (49±8) than in MSCs group (33±6, P < 0.01 ),VEGF group(30±8, P<0.01)and MI group (18±4, P<0.01). Conclusions VEGF- expressing MSCs transplantation could improve heart function after myocardial infarction, and they were more effective than sole MSCs transplantation. Keeping more MSCs survival and ameliorating the blood supply of infarct-zone might be involved in the mechanisms.     

骨髓间充质干细胞移植对大鼠钙化主动脉结构及顺应性的影响

目的研究骨髓间充质干细胞对大鼠大血管钙化是否具有修复作用。方法选用8周龄健康Wister鼠复制维生素D 尼古丁钙化模型,采用左心室直接注射干细胞的方法进行干预移植,4周后检测有创血压、脉搏波传导速度,评价动脉顺应性;采用不同染色方法分析组织中弹性纤维、胶原纤维比例,动脉壁中Ⅰ、Ⅲ型胶原的水平和比例变化及动脉钙化程度;采用原子吸收光谱法测定钙化组织中钙含量。结果维生素D 尼古丁钙化大鼠接受骨髓间充质干细胞干预后弹力/胶原纤维比值发生改变,细胞移植组高于假移植组(1.5%±0.3%比0.9%±0.2%,P<0.01)。骨髓间充质干细胞移植组弹力纤维保持固有形状,与胶原纤维结合紧密;动脉组织局部钙含量较假移植组下降(13.80±1.28mg/g比29.90±1.85mg/g,P<0.01)。上述动脉结构的改变伴有动脉顺应性的改善。结论骨髓间充质干细胞移植能改善细胞外基质成分的构成比例,部分抑制钙在动脉壁中的沉积过程,这种动脉结构的恢复伴有动脉顺应性的改善。     

骨髓间充质干细胞诱导分化后脾内移植治疗急性肝损伤的研究

背景：近年干细胞的研究为肝脏疾病的治疗提供了新契机。研究证实骨髓间充质干细胞（MSCs）不仅可分化为与其组织来源一致的细胞．且具有跨系或跨胚层分化为不同组织来源细胞的潜能。目的：探讨骨髓MSCs诱导分化后脾内移植治疗急性肝损伤的可行性。方法：密度梯度离心法联合贴壁培养分离、扩增BALB／c小鼠骨髓MSCs。体外诱导向肝系细胞分化，逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、免疫细胞化学法检测肝系细胞的标志。制备BALB／c小鼠ccL急性肝损伤模型．脾内移植DAPI标记的诱导分化21d的MSCs。荧光显微镜下观察细胞的迁徙、定位．行血清肝功能指标、肝脏组织病理学检测移植效果。结果：诱导后7、14d，均检测到甲胎蛋白（AFP）mRNA和蛋白的表达，14、21d检测到白蛋白（ALB）mRNA和蛋白的表达。移植后实验组肝脏和脾脏均发现DAPI标记细胞。与对照组相比，实验组肝功能显著改善（P〈0．05），肝脏病变程度减轻。结论：脾内移植诱导分化的骨髓MSCs对急性肝损伤具有修复作用。     

转染人血管内皮生长因子165基因的骨髓间充质干细胞移植改善兔心肌梗死后心功能

目的探讨将骨髓间充质干细胞移植和血管内皮生长因子基因治疗相结合治疗兔心肌梗死的疗效及其机制。方法将48只新西兰大白兔随机分为心肌梗死组、骨髓间充质干细胞移植组、血管内皮生长因子组和骨髓间充质干细胞 血管内皮生长因子组。建立兔心肌梗死模型,在心肌梗死后2周取107个骨髓间充质干细胞移植至梗死区。移植后4周测定心功能,梗死区骨髓间充质干细胞进行鉴定及计数,进行Ⅷ因子免疫组织化学染色。结果血流动力学比较发现,骨髓间充质干细胞 血管内皮生长因子组各项参数明显优于骨髓间充质干细胞组;心肌梗死区BrdU阳性细胞数骨髓间充质干细胞 血管内皮生长因子组明显多于骨髓间充质干细胞组(61.24±8.51个/视野比44.21±7.68个/视野,P<0.01);梗死区血管的数量骨髓间充质干细胞 血管内皮生长因子组(48.75±7.96个/视野)明显多于骨髓间充质干细胞组(33.08±6.12个/视野,P<0.01)、血管内皮生长因子组(29.98±8.04个/视野,P<0.01)和心肌梗死组(18.32±3.88个/视野,P<0.01)。结论转染血管内皮生长因子基因的骨髓间充质干细胞移植可改善兔心肌梗死后的心功能,其疗效明显优于单纯骨髓间充质干细胞移植及血管内皮生长因子基因治疗,可能是通过增加骨髓间充质干细胞的存活及改善梗死区的血供而起作用的。     

普罗布考对兔颈动脉血管成形术后血管内膜生长因子的影响及其对再狭窄的干预作用

目的研究普罗布考对兔颈动脉血管成形术后血管内膜生长因子表达的影响及其对再狭窄的干预作用。方法将32只普通级大耳白兔随机分为高胆固醇组和普罗布考组。喂养1周后以球囊损伤颈总动脉,分别用高胆固醇食物及普罗布考粉剂饲养8周后处死,切取颈总动脉,HE染色观察血管管腔面积和内膜面积的变化,用免疫组织化学法检测胰岛素样生长因子1受体和血管内皮生长因子的表达。结果与高胆固醇组相比,普罗布考组管腔面积明显扩大(P<0.01),内膜面积明显减少(P<0.05),胰岛素样生长因子1受体和血管内皮生长因子表达明显减少(P<0.01)。结论普罗布考显著减轻兔颈动脉血管成形术后再狭窄的形成,抑制胰岛素样生长因子1受体和血管内皮生长因子的表达。     

骨髓间充质干细胞治疗缺血性脑损伤的研究进展

骨髓间充质干细胞在体外特定的条件下,可诱导分化成神经细胞,这一生物学特性为缺血性脑损伤的细胞和基因治疗带来了新的希望,为神经系统疾病的治疗和康复展示了美好的前景。文章对其研究现状及进展做了综述。     

移植冠心病患者骨髓间充质干细胞治疗心肌梗死大鼠的机制探讨

目的:在大鼠心肌梗死模型上移植冠心病患者来源的骨髓间充质干细胞,探讨人骨髓间充质干细胞改善心肌梗死后心功能的作用机制。方法:抽取冠心病患者骨髓,用人骨髓间质细胞专用培养液进行体外培养、扩增、标记。结扎大鼠冠状动脉左前降支制作心肌梗死模型,2周后使用超声筛选出合格的动物模型。然后动物随机分为细胞移植组(n=14)和培养液注射组(对照组,n=13)。在移植前后对心脏的收缩、舒张功能和心室重构指标进行超声评价和对比,取材后进行病理学检查和分子生物学检测。结果:移植后进行超声评价,治疗组较对照组射血分数值和缩短分数值显著改善。免疫组化显示移植细胞在宿主体内可以向肌源性细胞分化。逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)显示细胞治疗组梗死区心肌Ⅰ型、Ⅲ型胶原基因表达水平明显高于对照组,而在非梗死区低于对照组。细胞治疗组梗死区间质细胞源因子、血管内皮生长因子、Bcl-2基因表达水平均明显高于对照组。结论:冠心病患者骨髓间质细胞移植后可以提高心肌梗死后心脏收缩功能,减轻左心室重塑。作用机制可能为新血管生成增加、细胞外基质改变、旁分泌、抗凋亡和心肌再生等共同作用的结果。     

骨髓间充质干细胞与心肌修复

骨髓间充质干细胞 (MSC)具有多向分化潜能 ,在一定的诱导条件下可以分化为多种细胞。 5 氮胞苷可以诱导离体MSC出现心肌表型。MSC移植研究表明 ,在心肌组织微环境中 ,MSC可向心肌分化并与宿主心肌功能整合 ,从而修复损伤坏死心肌、改善心脏功能     

骨髓间充质干细胞体外诱导分化为心肌细胞

目的观察5-氮杂胞苷(5-aza)体外诱导分化骨髓间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells,MSCs)成为心肌细胞的作用,并为进一步体内研究而进行细胞标记.方法提取小型猪骨髓20ml,体外分离培养骨髓间充质干细胞,分为对照组和诱导组,其中诱导组在培养第3天加入5-aza(10 μmol/L),分别在培养2周和4周时观察两组细胞光镜、电镜下形态,4周时进行磷钨酸-苏木素染色(PTAH)和肌动蛋白(actin)免疫组化染色.诱导组MSCs加入5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU,5μg/ml),分别在作用后第2周和第4周,利用BrdU单克隆抗体免疫组化检测BrdU标记方法.此外,用含有LacZ基因的复制缺陷腺病毒转染诱导组MSCs,利用X-gal染色检测LacZ基因表达的半乳糖苷酶,观察诱导分化后MSCs的体外标记情况.结果体外能够成功地分离骨髓MSCs,5-aza诱导分化2周和4周后的MSCs在光镜下明显成为梭形,形态类似肌细胞.电镜下诱导分化后的MSCs在2周时出现肌丝结构,4周时肌丝明显增多.PTAH染色显示超过70%的细胞具有横纹肌的染色性质,actin免疫组化染色显示超过80%的诱导后MSCs肌动蛋白呈阳性表达.体外BrdU单克隆抗体检测BrdU掺入到MSCs细胞核中,X-gal染色证明LacZ基因能够进入MSCs并表达,两种体外标记方法在标记2周和4周时都为阳性.结论5-aza能够诱导骨髓MSCs成为心肌细胞,BrdU掺入和含有LacZ基因的复制缺陷腺病毒转染能够成功对诱导分化后MSCs进行标记,并且标记持续至少4周.