Tenascin-C在风湿性心脏病患者血清及心脏瓣膜中的分布及意义

目的:确定肌糖蛋白-C(Tenascin-C,TN-C)在风心病患者血清及心脏瓣膜中的分布及意义.方法:临床收集正常人、先天性瓣膜畸形和风湿性心脏病患者血清,以夹心ELISA方法检测血清中TN-C浓度;手术获取先天性畸形瓣膜及风湿性心脏病瓣膜,免疫组织化学法检测TN-C的表达.结果:与正常人和先天性瓣膜畸形患者相比,风心病患者血清中大片段TN-C浓度明显增高;正常人和病情轻的先天性瓣膜畸形患者TN-C主要表达于内皮细胞下基底层,而风心病瓣膜中TN-C广泛表达.结论:TN-C在一定程度上可以作为风心病的活性标志物;TIN-C可能参与了风湿性心脏瓣膜病的病理过程.     

周期性机械牵张对人支气管上皮细胞(16HBE)STAT3的影响

目的 探讨周期性机械牵张力对人支气管上皮细胞(16HBE)信号转导子与转录激活子3(STAT3)表达的作用效应.方法 利用周期性机械牵张加力装置对16HBE细胞进行不同作用力、不同作用时间刺激,采用RT-PCR检测STAT3 mRNA的表达,Western blot测定STAT3蛋白的表达及磷酸化水平变化.结果 不同机械牵张力刺激16HBE细胞30 min时,3 kPa作用力对STAT3酪氨酸705残基(Tyr705)磷酸化程度最高.在3 kPa的周期性机械牵张刺激下,STAT3的酪氨酸残基的活化具有时间依赖性,在30 min时与对照相比差异有统计学意义(P＜0.05);1 h时磷酸化程度最高(P＜0.01);机械牵张力不影响丝氨酸727(Ser727)残基的磷酸化、STAT3蛋白表达量以及STAT3基因转录水平.结论 STAT3通过Tyr 705磷酸化修饰参与支气管上皮细胞对周期性机械牵张刺激的应答,在支气管上皮细胞对机械信号的应答和转导中起着重要作用.     

TGF-β1诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞向间质细胞转变

目的 检测转化生长因子（TGF-β1）能否在体外诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞-间质细胞转变（epithelial-mesenchymal transition,EMT）及其相应的信号转导机制.方法 在体外培养的大鼠肺泡Ⅱ型细胞（RLE-6TN）中加入TGF-β1后,于不同时间段收取细胞,分别采用Real-time PCR及Western blot检测上皮及间质细胞标志物表达的改变;Western blot检测TGF-β1对RLE-6TN细胞p-Smad 2/3表达的影响;TGF-β1诱导的RLE-6TN细胞形态学的改变采用倒置相差显微镜观察,超微结构的改变采用透射电子显微镜观察.结果 加入TGF-β1到RLE-6TN细胞后,其间质细胞标志物表达上调,上皮细胞标志物的表达下调;加入TGF-β1到RLE-6TN细胞后,其p-Smad 2/3的表达明显上调;形态学上,TGF-β1诱导RLE-6TN细胞向成肌纤维细胞样细胞转变;超微结构上,TGF-β1诱导RLE-6TN细胞特有的嗜锇性板层小体发生变性、肿胀并随TGF-β1作用时间延长最终完全消失.结论 TGF-β1能在体外诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞向间质细胞转变,其机制部分与Smad信号转导途径相关.     

风湿热患者外周血淋巴细胞和血清对心脏细胞的毒性作用

用26例风湿热患者外周血淋巴细胞和血清分别加到原代培养的人胚心肌细胞和心肌间质细胞中,观察其对上述两种细胞的毒性作用,结果发现:①风湿性心脏炎患者外周血T淋巴细胞和血清抗心肌抗体对心肌细胞和心肌间质细胞均有毒性作用。②单纯风湿性关节炎患者和风湿性心脏病风湿活动静止期患者外周血T淋巴细胞和血清对心肌细胞和心肌间质细胞无毒性作用。提示体液免疫和细胞免疫均参与风湿性心脏炎的发病机制。     

周期性机械牵张对人支气管上皮细胞（HBE）AOP5的影响

目的探讨周期性机械牵张对人支气管上皮细胞（HBE）水通道蛋白5（AQP5）表达的影响及可能的作用机制。方法利用周期性机械牵张加力装置对HBE细胞进行不同作用时间刺激,采用RT—PCR检测AQP5mRNA的表达,Western blot测定AQP5蛋白的表达及ERK的磷酸化水平变化。结果2000／zstrain机械牵张刺激时间依赖性的提高HBE细胞AQP5基因转录水平;加力3h时,AQP5蛋白表达量明显增加,至12h达到峰值。在2000μtstrain的周期性机械牵张刺激下,HBE细胞ERK的磷酸化活化具有时间依赖性,在1h时即与对照相比差异极显著（P〈0．01）。结论2000μstrain机械牵张刺激增加人支气管上皮细胞AQP5基因表达,ERK的磷酸化修饰有可能参与HBE细胞对周期性机械牵张刺激的应答。     

周期性牵张力对人牙周膜细胞中成骨样细胞表型碱性磷酸酶和骨钙素mRNA表达的影响

目的：了解机械力介导的牙周膜细胞中成骨样细胞特性的改变,以利于深入研究正畸牙齿移动的机制。方法：应用地高辛标记寡核苷酸探针进行细胞原位杂交,检测在间歇性机械牵张力作用下人牙周膜细胞中的成骨样细胞表型蛋白碱性磷酸酶和骨钙素在mRNA转录水平的表达改变。结果：间歇性牵张力作用增强人牙周膜细胞碱性磷酸酶和骨钙素基因的表达。结论：间歇性牵张力作用诱导人牙周膜细胞向成骨样细胞的分化。     

钙化性主动脉瓣疾病瓣膜间质细胞的生物学特征分析

目的初步分析钙化性主动脉瓣疾病(calcific aortic valve disease,CAVD)瓣膜间质细胞的生物学特征,为后续研究奠定基础。方法采用组织块接种和免疫磁珠法分选正常主动脉瓣和CAVD瓣膜间质细胞,观察其形态学和行为学特征。通过免疫细胞化学染色和流式细胞术分析CAVD瓣膜间质细胞免疫表型的改变。结果与正常主动脉瓣瓣膜间质细胞相比,CAVD瓣膜间质细胞呈肌纤维母细胞和成骨细胞形态,当细胞达到一定密度后细胞自发性收缩、聚集样生长并形成钙化结节。体外培养的CAVD瓣膜间质细胞表达肌纤维母细胞标志物α-SMA和成骨细胞标志物碱性磷酸酶(ALP)。结论 CAVD瓣膜间质细胞生物学特征的改变可能是导致主动脉瓣增厚、钙化和交界融合的重要因素。     

风湿热患者外周血淋巴细胞和血清对心脏细胞的毒性作用

用26例风湿热患外周血淋巴细胞和血清分别加到原代培养的人胚心肌细胞和心肌间质细胞中，观察其对上述两种细胞的毒性作用，结果发现；①风温性心脏炎患外周血T淋巴细胞和血清抗心肌抗体对心肌细胞和心肌间质细胞均有毒性作用。②单纯风湿性关节炎患和风湿性心脏病风湿活动静止期患外周血T淋巴细胞和血清对心肌细胞和心肌间质细胞无毒性作用。提示体液免疫和细胞免疫均参与风湿性心脏炎的发病机制。     

雷帕霉素对大鼠主动脉瓣膜间质细胞增殖的影响

目的利用雷帕霉素靶向抑制mTOR并探讨其对大鼠心瓣膜间质细胞增殖的影响。方法体外分离大鼠瓣膜间质细胞后 培养并鉴定;细胞随机分为两组：雷帕霉素组与对照组;MTT法检测并绘制大鼠瓣膜间质细胞用药前后的生长曲线;流式细胞 仪检测雷帕霉素对细胞周期的影响;RT-PCR 检测细胞中S6、P70S6K的mRNA表达水平;Western blotting 检测细胞中S6、 P70S6K、P-S6、P-P70S6K蛋白的表达水平。结果体外分离获得的大鼠瓣膜间质细胞分离培养成功;对照组细胞活性显著高于 加药组细胞（P<0.05）,加药组细胞生长变缓。流式细胞术检测发现加药组和对照组细胞的各周期占比均没有明显差别;加药组 细胞的S6蛋白与P70S6K蛋白的磷酸化水平降低（P<0.05）。结论雷帕霉素能抑制瓣膜间质细胞的增殖其原因,可能不是通过 改变细胞周期而是通过抑制mTOR后下调其靶蛋白S6和P70S6K的磷酸化水平引起的。     

实时定量反转录-聚合酶链反应检测机械力对人牙周膜细胞骨钙素表达的影响

目的观察周期性牵张力作用下人牙周膜细胞(HPDLCs)成骨分化关键基因骨钙素的表达变化,以明确周期性牵张力对HPDLCs成骨分化的诱导作用。方法利用自行研制的多通道细胞牵张应力加载系统对体外培养的HPDLCs施加12%形变率、0.1Hz周期性牵张力1,2,3,5d,实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测其成骨分化基因骨钙素(BGLAP)表达的时序性变化。结果体外培养HPDLCs骨钙素基因表达量极低,加力1、2、3、5d后骨钙素基因表达依次升高,并且在加力5d时表达量明显增高为对照组的71.6倍。结论周期性牵张力可以诱导HPDLCs向成骨方向分化,骨钙素在机械力诱导成骨分化的后期发挥作用。