细胞因子信号传导抑制因子-1在树突状细胞介导T细胞分化中的作用

目的 观察细胞因子信号传导抑制因子-1(SOCS1)在不同诱导方法下树突状细胞(DC)的表达及其对T细胞刺激活性的影响.方法 1000 U/ml重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和500 U/ml白细胞介素(IL)-4体外诱导的人外周血单个核细胞来源的DC,经1mmol/L丁酸钠、1 mg/L脂多糖(LPS)、细胞因子鸡尾酒法诱导成熟,分别以流式细胞仪、酶联免疫吸附试验(ELISA)、混合淋巴细胞反应(MLR)检测DC表面标志、IL-12、IL-10分泌和刺激淋巴细胞增殖能力.Western blot和实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)分别检测各组SOCS1蛋白水平及mRNA的表达.结果 丁酸钠诱导的不成熟DC的SOCS1蛋白表达最高(1.61±0.22,P＜0.05);其SOCS1 mRNA表达差异倍数(1.58±0.11)显著高于成熟组DC(0.99±0.04、1.27±0.05,P＜0.05).高表达SOCS1的DC刺激淋巴细胞增殖的能力(1.53±1.04),IL-12分泌量(142.79 ±15.61)较成熟DC显著降低(P＜0.05);而IL-10分泌(3.29±0.21)较成熟DC比较显著升高(P＜0.05).结论 SOCS1是调节DC介导的T细胞分化的关键因子.     

阻断PD-L1通路对膀胱肿瘤患者外周血树突状细胞免疫功能的影响

目的 研究阻断膀胱肿瘤患者外周血树突状细胞(dendritic cell,DC)PD-L1通路对其免疫功能的影响. 方法 通过rhGM-CSF、rhIL-4在体外诱导膀胱肿瘤患者和正常人外周血DC,PD-L1单克隆抗体处理后,流式细胞仪检测CD1a 、HLA和CD83的表达;噻唑盐比色法和酶联免疫吸附法检测其刺激淋巴细胞增殖和分泌IL-10和IL-12能力的变化. 结果 阻断PD-L1通路对DC成熟无明显影响,但可以使膀胱肿瘤患者DC刺激淋巴细胞增殖能力增强(4.00±1.28和1.49±0.45),并增强IL-12[(108.30±21.89)ng/L和(37.17±14.89)ng/L]、减少IL-10[(108.90±21.77)ng/L和(214.99±54.99)ng/L]的分泌(P＜0.05). 结论 阻断PD-L1通路可使膀胱肿瘤患者外周血DC的免疫活性增强,提示可尝试通过PD-L1通路调节膀胱肿瘤患者的免疫功能,为防治膀胱肿瘤复发提供新途径.     

姜黄素诱导的耐受性树突状细胞及其机制

目的 探讨姜黄素(Cur)诱导耐受性树突状细胞(DC)的效果及其机制.方法 分别用不同浓度Cur(0、10、20和30μmol/L)作用于Wistar大鼠来源的不成熟DC,流式细胞仪分析其表型.再以30μmol/L的Cur作用于不成熟DC,加或不加脂多糖(LPS)刺激,流式细胞仪检测其吞噬葡聚糖的能力,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定DC分泌白细胞介素12(IL-12)的能力,Western印迹法检测DC中核因子кB(NF-кB)p65和RelB核转位,NF-кB DNA结合ELISA和荧光素酶报告基因检测核内NF-кB活性,混合淋巴细胞反应检测其刺激Lewis大鼠T淋巴细胞增殖的能力.结果 Cur能显著抑制DC共刺激分子CD80、CD86、CD40的表达,呈剂量依赖性,当Cur的浓度达30 μmol/L时,其共刺激分子的表达与不成熟DC比较,差异无统计学意义.DC在LPS刺激下(LPS组),吞噬葡聚糖的DC占(36.6±7.2)%,IL-12的分泌量达(415.9±42.7)pg/ml,其核内RelB及NF-кB p56高表达,RelB DNA结合活性和NF-кB p65 DNA结合活性分别为0.65±0.08和0.74±0.07,报告基因荧光素酶活性是对照细胞的435%,该DC有较强的刺激同种T淋巴细胞增殖的能力.而先以30μmol/L Cur作用于DC,然后再加入LPS者(Cur+LPS组),吞噬葡聚糖的DC占(78.6±14.2)%,明显高于LPS组(P＜0.01)IL-12的分泌量为(97.5±19.6)pg/ml,明显低于LPS组(P＜0.01);其核内RelB及NF-кB p56低表达;RelB DNA结合活性和NF-кB p65 DNA结合活性分别为0.15±0.06和0.29±0.06,均明显低于LPS组(P＜0.01);报告基因荧光素酶活性是对照细胞的197%,明显低于LPS组(P＜0.01);该DC刺激同种T淋巴细胞增殖的能力明显弱于LPS组.结论 Cur诱导产生耐受性DC可能是通过抑制DC中NF-кB的活化实现的.     

雷帕霉素抑制结缔组织生长因子诱导的成肌纤维细胞增殖及细胞外基质蛋白的分泌

目的 探讨雷帕霉素（RAPA）对于结缔组织生长因子（CTGF）生物学作用的影响及可能机制。 方法 分别用RAPA 20 μg/L 和40 μg/L预处理成肌纤维细胞（MyoF）30 min后再加入CTGF 100 μg/L,与单独加入CTGF（CTGF组）和未加任何刺激的MyoF（对照组）进行比较。采用BrdU掺入法检测细胞的增殖反应;用Western印迹法检测细胞上清中纤连蛋白（FN）的水平及细胞ERK1/2信号的磷酸化。 结果 与对照组相比,CTGF（100 μg/L）显著促进MyoF增殖（P < 0.01）,增加上清中FN的蛋白水平（P < 0.05）。与CTGF组相比,RAPA 20 μg/L及 40 μg/L 预处理可使细胞增殖率显著下降,分别下降了62% 和70%（均P < 0.05）,但两个剂量之间差异无统计学意义;使细胞上清中FN的蛋白水平分别下降了15%和44%,后者与CTGF组的差异有统计学意义（P < 0.05）。CTGF（100 μg/L ）刺激10 min可致MyoF的ERK1/2发生磷酸化,RAPA 40 μg/L预处理细胞30 min可显著降低CTGF诱导的ERK1/2磷酸化。以ERK1/2活化特异抑制剂PD98059（50 μmol/L）预处理30 min后,可以抑制CTGF诱导的细胞增殖效应（7%±5%比85%±7%,P < 0.01）和FN的分泌效应（1.0±0.1比1.6±0.3,P < 0.05）。 结论 RAPA具有部分抑制CTGF的促增殖和促细胞外基质分泌的作用,其作用可能通过抑制ERK1/2信号通路实现。     

高迁移率族蛋白B1诱导的树突状细胞对T淋巴细胞增殖及功能性极化的影响

目的 观察高迁移率族蛋白B1(HMGB1)诱导的树突状细胞(DCs)对大鼠脾T淋巴细胞增殖反应及功能性极化的影响,并探讨其作用机制.方法 分离正常Wistar大鼠脾脏DC后置于24孔培养板(1×106/孔),采用1 ms/L的HMGB1刺激48 h,DC与脾T淋巴细胞的细胞比例分别为1:50、1:100、1:150、1:200混合,于共同作用后3、5 d观察脾T淋巴细胞增殖及功能性极化的情况.结果 DC与T淋巴细胞以1:50、1:100、1:150、1:200的比例相互作用,脾T淋巴细胞对丝裂原刺激的增殖反应均明显增强、上清液中干扰素(IFN)-γ含量显著升高和白细胞介素(IL)-4含量明显降低(P《0.01),其中细胞比例1:150组最为明显.脾T淋巴细胞对丝裂原刺激的增殖反应增强、IFN-γ含量增加和IL-4含量降低均以第3天最为显著[分别为(0.646±0.028)、(268.08±14.07)、(6.16±0.59)ng/L,P值均《0.01].结论 HMGB1诱导的DC使脾T淋巴细胞对丝裂原刺激的增殖反应明显增强,并促进T淋巴细胞向Th1功能性极化.     

白细胞介素-12基因修饰对树突状细胞表面分子表达及细胞因子分泌的影响

目的 观察白细胞介素(IL)-12基因修饰对树突状细胞(DC)表面分子及细胞因子分泌的影响.方法 采用重组逆转录病毒介导IL-12基因修饰人外周血单个核细胞(PBMC)来源的Dc;ELISA法检测各组DCs和各组T细胞上清中IL-12、IL-10、IFN-γ因子的分泌水平;流式细胞仪(FACS)分析各组DC表面CD83、CD86的表达;MTT法检测DC刺激同源T淋巴细胞增殖的能力;统计学分析比较各组间的差异.结果 IL-12基因修饰使得DC高表达CD83和CD86分子,分泌高水平IL-12及IFN-γ,但对IL-10因子的分泌无明显影响,刺激同源T淋巴细胞增殖明显,诱导激活的T细胞上清中IFN-γ水平显著增高、IL-10分泌水平显著降低.结论 经IL-12基因修饰后的DC表型成熟,分泌IL-12及IFN-γ的能力增强,对IL-10因子的分泌无影响,能抑制T细胞分泌IL-10因子,优化抗原提呈的微环境.     

吲哚胺2,3双加氧酶对小鼠CD4+T细胞增殖的抑制作用

目的 探讨吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)抑制T细胞增殖的机制。方法 通过低色氨酸(10μmol/L)培养基(LTM)和/或添加不同浓度(50、100、200和400μmol/L)色氨酸代谢产物(TC),观察小鼠树突细胞(DC)与异系CD4+T细胞培养体系中后者的增殖。Annexin-V及碘化丙锭(PI)双染法测定CD4+T细胞凋亡。结果 LTM中CD4+T细胞增殖指数(2.718 ±0.010)及抑制CD4+T细胞增殖的TC浓度(200μmol/L KYN或50 μmol/L 3-HAA)较正常色氨酸培养基(NTM)(3.385 ±0.013,400 μmol/L KYN或100 μmol/L 3-HAA)显著降低,差异有统计学意义(P＜0.01)。LTM中CD4+T细胞早期凋亡率(33.163±0.556)％显著高于NTM(8.867 ±0.565)％ (P ＜0.01)。NTM中CD4+T细胞凋亡率随3-HAA浓度升高而增加[3-HAA浓度50、100、200和400 μmol/L组中分别为(14.433 ±0.640)％、(22.273±0.629)％、(37.363±0.953)％和(46.643±0.633)％]。结论 LTM及TC均可通过诱导凋亡来抑制CD4+T细胞增殖,两者具有叠加效应。     

不同细胞因子诱导对树突状细胞体外分化的影响

目的 观察不同细胞因子诱导对于体外培养的树突状细胞(DC)免疫刺激活性的影响.方法 通过1000 U/ml人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和500 U/ml白细胞介素(IL)-4体外诱导的人单个核细胞来源的DC,经1000 U/ml肿瘤坏死因子(TNF)-α、1 mg/L脂多糖(LPS)、1 mmol/L丁酸钠、细胞因子鸡尾酒法诱导成熟,分别以流式细胞仪、FITC-Dxtran内吞检测、混合淋巴细胞反应(MLR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)检测DC的表面标志、内吞能力、刺激淋巴细胞增殖能力和IL-12分泌的变化.结果 鸡尾酒法诱导下的DC成熟标志显著上调,内吞能力减弱186.74±38.66,刺激淋巴细胞增殖能力增强18.23 ±2.22,并且IL-12的分泌能力增加(656.18±38.52)ng/L,说明其显著促进DC成熟.而丁酸钠诱导下的各项成熟指标均下调,导致DC免疫刺激源性减弱.结论 细胞因子鸡尾酒法是诱导DC成熟的最佳方法;而丁酸钠可以抑制DC成熟,改变DC的免疫状态.

Abstract：

Objective To investigate the immune effect of different cytokines on immature dendritic cells (DC) in vitro. Methods The human monocyte-derived DCs were induced in the presence of recombinant human GM-CSF (rhGM-CSF, 1000 U/ml) and interleukin (IL)-4 (500 U/ml). The effects of tumor necrosis factor (TNF) -α (1000 U/ml) , lipopolysaccharide (LPS) (1 mg/L), the cocktail of cytokines (TNF-α, IL-6, IL-1β, PGE2) , and sodium butyrate (1 mmol/L) on the DCs were detected by flow cytometry (FCM), endocytic activity, T cells stimulatory proliferation capacity, and IL-12 production. Results The cocktail of cytokines could up-regulate the major histocompatibility complex (MHC) class Ⅱ and costimulatory molecules of DCs, decrease the endocytic activity 186. 74 ±38. 66, induce a stage of Tcell stimulation 18. 23 ± 2. 22 and promote the T helper cell type 1-skewing factor IL-12 production (656. 18 ±38. 52) ng/L. But the sodium butyrate induced reverse result on DCs compared to cocktail of cytokines. Conclusion The most effective method for inducing dendritic cells maturation was cocktail of cytokines. The sodium butyrate could inhibit the development of mature DCs, resulting in impaired DC function, and modify the outcome of the subsequent immune response.     

RNAi对大鼠T淋巴细胞CD28和OX40基因表达的联合抑制作用

目的 通过RNAi技术干扰T细胞CD28、CD134基因表达后,诱导获得抑制性T细胞(Ts);探讨Ts免疫学特性.方法 设计针对目标基因的siRNA,转染大鼠T淋巴细胞,FCM检测CD28、CD134水平,混合淋巴细胞反应(MLR)检测转染后的T淋巴细胞对异体淋巴细胞的增殖能力的影响,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞因子水平.结果 siRNA转染大鼠T淋巴细胞后,抑制CD28、CD134分子的表达,siRNA转染24 h后,siRNA组CD28、CD134表达受到抑制[转染后及转染前表达分别为(22.35±4.37)%及(34.76±3.51)%(P<0.05)],T淋巴细胞分泌细胞因子IL-10水平增高,转染组及未转染组表达分别为(77.15±12.60)ng/L及(37.56±5.93)ng/L(P<0.01).而转染组及未转染组的IL-2表达分别为(2.79±0.51)及(4.35±1.11)ng/L(P<0.05);干扰素(IFN)-γ表达分别为(277.15±14.8)、(682.7±53.5)ng/L(P<0.05).结论 siRNA可以特异性抑制大鼠T淋巴细胞共刺激分子CD28、CD134基因表达,抑制了IL-2、IFN-γ的表达,提高了IL-10细胞因子表达水平,从而产生了免疫耐受效应.Ts细胞具有抗原特异性,而且在外源性rrIL-2存在时,不能逆转Ts细胞的功能.     

雷帕霉素对肾小球系膜细胞增殖及凋亡的影响

目的 观察不同浓度雷帕霉素对大鼠肾小球系膜细胞增殖及凋亡的影响,探讨其可能的作用机制。 方法 使用不同浓度雷帕霉素（1 μg/L、2 μg/L、4 μg/L、8 μg/L、16 μg/L）处理大鼠肾小球系膜细胞,并设正常对照组。MTT法测不同浓度雷帕霉素干预24 h、48 h、72 h后对细胞增殖的影响,并描记生长曲线。干预72 h后,采用RT-PCR和Western印迹法分别检测各浓度雷帕霉素组细胞周期负调蛋白p27和p53的mRNA和蛋白表达变化;用流式细胞计量术检测各浓度雷帕霉素组细胞周期及凋亡率。 结果 小剂量雷帕霉素（1 μg/L）对系膜细胞增殖即具有明显的抑制作用,停滞于G1期的细胞数明显增加,但对系膜细胞凋亡无明显影响。较大剂量雷帕霉素(8~16 μg/L)能够明显增加肾小球系膜细胞凋亡。雷帕霉素能够增加肾小球系膜细胞p27、p53 mRNA和蛋白表达,且呈剂量依赖性。 结论 雷帕霉素可能通过增加p27、p53表达抑制肾小球系膜细胞增殖和促进系膜细胞凋亡。     

Immunomodulatory effects of combination of pooled human gammaglobulin and rapamycin on cell proliferation and apoptosis in the mixed lymphocyte reaction

BACKGROUND: Multidrug immunosuppressive regimens benefit transplant recipients, reducing side effects and creating synergy between medications with different mechanisms of action. We have shown that pooled human gammaglobulin (intravenous immunoglobulin [IVIG]) inhibits the mixed lymphocyte reaction (MLR) and induces apoptosis primarily in B cells. Rapamycin (RAPA), a potent macrolide immunosuppressant, inhibits B- and T-cell proliferation through G1 cell-cycle blockade and purportedly induces apoptosis. Here we examined the possible synergistic effects of IVIG and RAPA on cell proliferation and apoptosis induction in the MLR. METHODS: MLR was performed with IVIG (0.2-5 mg/mL), RAPA (0.02-40 ng/mL), alone or in combination. Cell proliferation was detected by H-thymidine incorporation, and apoptosis by Annexin V and terminal deoxynucleotide transferase-mediated dUTP nick-end labeling flow cytometry. RESULTS: IVIG or RAPA inhibited cell proliferation in a dose-dependent manner. RAPA (0.02-40 ng/mL) in combination with IVIG (5 mg/mL) significantly augmented the inhibition compared with RAPA alone (70% vs. 34% at 0.2 ng/mL; 90% vs. 76% at 2 ng/mL). Apoptosis was significantly higher in IVIG-treated (5 mg/mL) CD19+ cells and less so in CD3+ cells. However, RAPA (0.2-40 ng/mL) neither induced apoptosis nor altered apoptosis induced by IVIG. CONCLUSIONS: Combined RAPA and IVIG at subtherapeutic concentrations inhibits cell proliferation in the MLR. RAPA neither induces apoptosis nor augments apoptosis induced by IVIG in the MLR. Lower-concentration RAPA (0.2-2 ng/mL) in combination with IVIG (5 mg/mL) versus therapeutic levels (2-50 ng/mL and 10-40 mg/mL, respectively) could represent an effective immunomodulatory drug combination.     

大鼠骨髓来源树突状细胞体外培养体系的优化

目的 探讨优化大鼠骨髓来源树突状细胞(DC)体外培养体系的方法.方法 应用重组大鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(recombinant rat GM-CSF,rrGM-CSF) 20 μg/L和重组大鼠白介素(recombinant rat interleukin,rrIL)- 4 10 μg/L诱导分化Lewis大鼠...     

雷公藤甲素对IgA肾病患者外周血单个核细胞炎性反应及凋亡的影响

目的 探讨IgA肾病(IgAN)患者外周血单个核细胞（PBMC）炎性因子分泌及自身凋亡状态,以及雷公藤甲素(TP) 对其调节的相关机制。 方法 取IgAN患者（n=29）及健康人（n=16）外周血,分别通过酶联免疫吸附试验（ELISA）和硝酸还原酶法（Griess法）检测血浆肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）和一氧化氮(NO)表达情况。体外培养IgAN患者PBMC,以不同浓度TP刺激PMBC,四唑盐比色间接法（MTT）检测TP对细胞生长的抑制效应。根据MTT结果,分别分为IgAN患者PBMC组、植物血球凝集素（PHA,10 mg/L,促细胞分裂原）模型组和PHA（10 mg/L）+TP（12.5 μg/L、25 μg/L）处理组。ELISA法检测上清液中TNF-α、IL-6的分泌情况;Griess法检测上清液中NO含量;流式细胞仪分析细胞凋亡率;RT-PCR法、Western印迹法检测PBMC中B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、半胱天冬蛋白酶（caspase）-9、caspase-3基因和蛋白表达变化。 结果 IgAN患者血浆TNF-α[（131.57±50.61） ng/L比（30.24±18.93） ng/L,P < 0.01],IL-6[（76.36±25.21） ng/L比（35.08±16.59） ng/L,P < 0.01]和NO[（46.36±12.93） μmol/L比（26.61±10.87） μmol/L,P < 0.01]均显著高于健康人,PBMC凋亡率亦显著高于健康人[（16.88±5.66）%比（8.67±3.87）%,P < 0.01]。TP可抑制IgAN患者PBMC分泌 TNF-α、IL-6 和NO,诱导其凋亡;也可抑制Bcl-2表达,增加Bax、caspase-9、caspase-3表达。 结论 IgAN患者体内PBMC处于高度活化状态,并且凋亡率增高。TP能有效抑制IgAN患者PBMC的炎性活化状态,并可能通过线粒体途径改变Bcl-2蛋白家族抗凋亡因子和促凋亡因子平衡而诱导IgAN患者PBMC凋亡。     

结直癌组织中GP-96肽复合物的提取纯化和体外免疫效应

目的 建立从人结直癌组织中提取gp-96肽复合物方法,并检测体外免疫效应.方法 采取三步蛋白纯化法,即硫酸铵沉淀法、ConA亲和层析法、阴离子交换蛋白亲和层析法,从10例结直癌组织提取、纯化gp-96肽复合物;SDS-PAGE和Western blot鉴定gp-96肽复合物;检测GP-96肽复合物的体外免疫效应.结果 该方法提取的蛋白质经SDS-PAGE和Western blot鉴定,证实是gp-96肽复合物,蛋白质得率为50μg/g;体外免疫效应分析:肿瘤组中gp96肽复合物组肿瘤坏死因子(TNF)-α浓度为(801.54±109.25)ng/L,与阳性对照组(509.17±65.34)ng/L、阴性对照组(156.19±32.08)ng/L比较明显升高,差异有统计学意义(P<0.01);健康人对照组与肿瘤组比较,gp96肽复合物组比较差异有统计学意义(P<0.01).肿瘤组中gp96肽复合物组IL-10浓度为(95.71±17.55)ng/L,与阳性对照组(334.55±69.00)ng/L、阴性对照组(205.75±42.04)ng/L比较,差异有统计学意义(P<0.01);健康人对照组和肿瘤组比较,sp96肽复合物组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 使用该方法提取结直癌组织中gp-96肽复合物具有操作简单、重复性好、获得率高、体外免疫效应强等特点.     

连续性肾替代治疗对多脏器功能不全综合征患者炎性介质清除及内皮细胞功能的影响

目的 研究连续性肾替代治疗（CRRT）对多脏器功能不全综合征（MODS）患者外周血炎性介质清除及内皮细胞功能的影响。 方法 选取我院30例MODS患者,行CRRT治疗,每次治疗时间不短于24 h,分别于治疗开始时（0 h）和治疗后3、6、12、24 h取血检测肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素（IL）1β、IL-4、IL-6、IL-10、E-选择素、可溶性血管细胞黏附分子（sVCAM-1）、可溶性细胞间黏附分子1（sICAM-1）和血小板活化因子乙酰水解酶（PAF-AH）。 结果 CRRT 14 d存活19例（63.3%）,28 d存活17例（56.7%）。患者电解质和酸碱平衡于治疗6 h后恢复正常。IL-1β、IL-4于治疗开始后下降,TNF-α、IL-6、IL-10在12 h时浓度达峰值[（887.88±975.46） ng/L、（132.01±118.14） ng/L、（167.01±161.66） ng/L],与治疗前[（462.24±331.03） ng/L、（106.39±90.82） ng/L、（124.51±118.39） ng/L]比较,差异有统计学意义（均P < 0.05）。但TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-6、IL-10治疗前与治疗后24 h差异无统计学意义。治疗后,死亡组IL-6 [（145.45±14.28） ng/L]显著高于存活组[（106.03±10.86） ng/L]（P < 0.05）;死亡组IL-10[（94.93±16.09） ng/L]显著低于存活组[（143.06±12.24） ng/L]（P < 0.05）。内皮细胞E-选择素、sVCAM-1、sICAM-1于治疗开始后升高,于治疗12 h达峰值,但治疗前后差异无统计学意义。PAF-AH治疗后开始升高,治疗后水平高于治疗前。死亡组E-选择素[（287.13±42.70） μg/L比（266.26±65.26） μg/L]、sVCAM-1[（1697.25±475.24） μg/L比（1488.10±691.67） μg/L]、sICAM-1[（975.33±142.50） μg/L比 （835.40±332.41） μg/L]高于存活组;而PAF-AH低于存活组[（9.07±6.38） μg/L比 （16.32±8.95） μg/L]。 结论 CRRT能纠正MODS患者机体紊乱的内环境,并能部分纠正内皮细胞功能,但外周血炎性介质水平治疗前后差异无统计学意义。IL-6、IL-10水平可作为临床转归的预测指标。     

针对OX40小于扰RNA供体转染抗大鼠肝移植排斥反应

目的 观察RNA干扰阻断OX40-OX40L共刺激通路对大鼠移植肝存活时间的影响.方法 制作DA大鼠到Lewis大鼠的原位肝脏移植模型,移植前取预先制备的5 ml含5×109pfu的pLVTHM-OX40-siRNA重组慢病毒,灌注感染移植供肝30 min,术后观察受者存活时间,移植肝脏进行组织病理学检查;采用ELISA法检测大鼠外周血IL-2,IFN-γ,的水平,并进行受者大鼠脾细胞对供者大鼠脾细胞的混合淋巴细胞反应(MLR).结果 转染组受者肝脏移植物的存活时间为(74.00±3.79)d,明显长于对照组和未转染组;转染组移植肝组织炎细胞侵润、间质水肿、肝组织坏死程度较对照组和未转染组减轻,实验组大鼠脾细胞刺激T淋巴细胞增殖的能力降低(P<0.01);移植术后的第7天,转染组血清IL-2浓度为(46.0±8.4)ng/L,IFN-γ浓度为(202.7±14.6)ng/L,均显著低于对照组和未转染组(P<0.05).结论 转染靶向OX40的siRNA,在体内可通过阻断OX40-OX40L共刺激通路,抑制大鼠肝脏移植后的排斥反应,延长大鼠移植肝的存活时间.     

氟比洛芬酯术后镇痛对血浆皮质醇、白细胞介素10和肿瘤坏死因子α的影响

目的 观察氟比洛芬酯用于髋关节置换术后患者静脉自控镇痛(patient-controlled intravenous analgesia,PCIA)的临床效果及其对机体血浆皮质醇(cortisol,Cor)、白细胞介素10(interleukin 10,IL-10)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)的影响.方法 选择40例单侧髋关节置换术患者,ASA Ⅰ级～Ⅱ级,按抽签方法随机分为两组,每组20例,Ⅰ组为枸橼酸芬太尼1.2mg/24ml+0.9%生理盐水76ml,负荷量为枸橼酸芬太尼0.001 mg/kg;Ⅱ组为氟比洛芬酯300mg/30ml+0.9%生理盐水70 ml,负荷量为氟比洛芬酯1 mg/kg.分别于麻醉前(T1)、术后第4 h(T2)、24 h(T3)、36 h(T4)和48 h(T5)5个时点抽取静脉血测定血浆Cor、IL-10和TNF-α浓度,于术后4、24、36、48 h用视觉模拟评分法(visual analogue scales,VAS)行静止和活动评分,均由同一麻醉医生在不知道到具体镇痛方式情况下进行.结果 术后各时点VAS评分两组间比较差异无统计学意义(P＞0.05),但Ⅰ组尿潴留、恶心和呕吐发生率40%高于Ⅱ组(P＜0.01).两组在T2时血浆Cor值(275±28.6)μg/I和(276±30.5)μg/L均升高,与T1(203.5±22.3)μg/L和(192.3±21.3)比较差异有统计学意义(P＜0.01),Ⅰ组在T3时血浆Cor水平(256±28.3)μg/L仍明显高于T1值(203.5±22.3)μg/L(P<0.05),在T3(256±28.3)μg/L和T4(235±23.3)μg/L时均高于Ⅱ组水平(176±22.3)μg/L和(172±20.5)μg/L(P＜0.05);两组T3(60.23±3.65)ng/L和(62.35±5.02)ng/L和T4(60.12±3.31)ng/L和(61.34±4.23)ng/L时血浆IL-10水平均高于T1值(55.32±2.61)ng/L和(55.65±2.53)ng/L(P<0.05),组间比较差异无统计学意义(P＞0.05);Ⅱ组在T3、T4和T5时血浆TNF-α浓度(52.56±4.31 ng/L,58.42±5.64 ng/L和59.53±6.02ng/L)均比T1(43.31±1.52)ng/L明显升高(P＜0.01),同时明显高于Ⅰ组(45.12±2.32)ng/L,(42.23±2.21)ng/L和(42.52±2.35)ng/L(P＜0.01).结论 髋关节置换术患者术后行PCIA,氟比洛芬酯与芬太尼的镇痛效果相似,副作用明显减少,且在一定程度上改善机体免疫力.     

血必净注射液对内毒素刺激大鼠单核细胞组织因子的影响

目的 观察中药血必净注射液对脂多糖(LPS)刺激大鼠单核细胞组织因子(TF)及蛋白酶激活受体(PAR)表达的剂量一效应关系.方法 分离大鼠外周血单核细胞,培养24 h,采用流式细胞仪检测正常组、LPS组及血必净组细胞PAR-1、PAR-2荧光强度,采用酶联免疫吸附试验检测上清TF、白细胞介素(IL)-6和肿瘤坏死因子(TNF)-а含量.结果 LPS组PAR-1、PAR-2平均荧光强度(30.20±0.62和42.15±0.80)显著高于正常组(26.29±0.42和37.93±0.81,P<0.05或P<0.01),TF、IL-6、TNF-а(832.38±83.50)、(235.56±34.21)、(1183.84±143.71)ng/L较正常组(507.50±40.13)、(111.1l±13.88)、(166.74±8.15)ng/L也明显升高(P<0.01).与LPS组比较,1 g/L血必净组PAR-1表达(25.73±1.13)恢复至正常范围,TF(581.07±101.97)ng/L降低也最明显;10 g/L组IL-6(171.11±10.18)ng/L下降尤为显著;100 g/L组TNF-а(205.61±39.50)ng/L降低最明显,但10 g/L组能显著上调PAR-2(48.95±2.71).结论 低、中、高浓度血必净都可不同程度地下调LPS诱导单核细胞PAR-1,并明显减少TF、IL-6、TNF-а分泌,从而改善单核细胞介导凝血功能与炎症反应.     

Th17细胞和调节性T细胞在肝包虫病免疫逃避中的作用

目的 探讨辅助性T细胞17(Th17)和调节性T细胞(Treg细胞)在肝包虫病免疫逃避中的作用.方法 前瞻性分析2008年8月至2009年9月新疆医科大学第一附属医院74例受试者的临床资料,将74例受试者分为4组:健康对照组20例,肝囊型包虫病组21例,肝复发囊型包虫病组15例和肝泡型包虫病组18例.应用ELISA法检测各组受试者血清中Treg相关细胞因子转化生长因子(TGF-β1)和IL-10,Th17细胞相关细胞因子IL-17和IL-23的表达,并用单因素方差分析,两两比较采用LSD-t法和Pearson相关性检验分析其结果.结果 IL-17在健康对照组、肝囊型包虫病组、肝复发囊型包虫病组和肝泡型包虫病组的表达分别为(16±5)、(13±4)、(13±5)和(11±3)ng/L,4组比较,差异有统计学意义(F=6.35,P<0.05);而肝囊型包虫病组与肝复发囊型包虫病组比较,差异无统计学意义(t=0.22,P＞0.05).IL-23在健康对照组、肝囊型包虫病组、肝复发囊型包虫病组和肝泡型包虫病组的表达分别为(139±50)、(106±53)、(107±48)和(72±27)ng/L,4组比较,差异有统计学意义(F=6.74,P<0.05);而肝囊型包虫病组与肝复发囊型包虫病组比较,差异无统计学意义(t=0.02,P＞0.05).IL-10在健康对照组、肝囊型包虫病组、肝复发囊型包虫病组和肝泡型包虫病组的表达分别为(3.1±0.8)、(4.3±2.0)、(4.2±1.4)和(5.5±2.2)ng/L,4组比较,差异有统计学意义(F=9.78,P<0.05);而肝囊型包虫病组与肝复发囊型包虫病组比较,差异无统计学意义(t=0.14,P＞0.05);TGF-β1在健康对照组、肝囊型包虫病组、肝复发囊型包虫病组和肝泡型包虫病组的表达分别为(26±7)、(37±7)、(33±9)和(38±7)μg/L,4组比较,差异有统计学意义(F=6.73,P<0.05);而3种肝包虫病组比较,差异无统计学意义(t=0.56,1.81,P＞0.05).Th17/Treg(IL-17/IL-10)在健康对照组、肝囊型包虫病组、肝复发囊型包虫病组和肝泡型包虫病组的表达比例分别为5.7±2.6、3.6±1.5、3.4±1.9和2.1±0.7,4组比较,差异有统计学意义(F=13.76,P<0.05);而肝囊型包虫病组与肝复发囊型包虫病组比较,差异无统计学意义(t=0.23,P＞0.05).血清中,IL-17和TGF-β1呈负相关(r=-0.23,P<0.05);IL-17和IL-23呈正相关(r=0.70,P<0.05);IL-10和TGF-β1呈正相关(r=0.46,P<0.05).结论 Th17/Treg相关细胞因子平衡在肝泡型和肝囊型包虫病患者中明显向Treg应答偏倚,Th17/Treg相关细胞因子失衡可能参与肝包虫所致免疫逃避.