白藜芦醇对氧糖剥夺/再复氧损伤后体外小胶质细胞极化的影响

目的 探讨白藜芦醇对氧糖剥夺/再复氧损伤（OGD/R）后小胶质细胞极化的影响。方法 对体外培养的N9小胶质细胞进行氧糖剥夺150 min，复氧培养24 h。实验分为正常组、对照组和白藜芦醇预处理24 h组。细胞计数盒-8(CCK-8)法检测细胞活力，硫代巴比妥酸（TBA）和水溶性四唑盐（WST-1）法分别检测细胞上清液中丙二醛（MDA）含量和总超氧化物歧化酶（SOD）活性，免疫荧光法检测核因子-E2-相关因子2（Nrf2）的核移位，Western blotting和Real-time PCR法检测CD206、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、Nrf2、血红素加氧酶1（HO-1）和苯醌还原酶（NQO1）蛋白和mRNA表达水平。 结果 OGD/R损伤后，白藜芦醇组细胞活力、SOD活力、CD206、Nrf2、HO-1、NQO1蛋白或mRNA表达均显著高于对照组（P<0.05,n=3），而MDA含量和iNOS蛋白或mRNA表达均显著低于对照组（P<0.05,n=3），白藜芦醇组Nrf2 蛋白较对照组明显移位到细胞核。 结论 白藜芦醇预处理可能通过增强Nrf2的激活，调控M1/M2型小胶质细胞极化，从而减轻OGD/R后小胶质细胞的氧化应激损伤。     

白藜芦醇预处理对星形胶质细胞氧糖剥夺/再复氧损伤后活化及炎症反应的影响

目的 探讨白藜芦醇预处理对体外氧糖剥夺/再复氧(OGD/R) 损伤后星形胶质细胞活化及炎症反应的影响。方法 征集20只新生SD大鼠（生后24 h内）,将其原代分离培养的大脑皮层星形胶质细胞行氧糖剥夺150 min,再复氧培养24 h。实验分为正常组(Nor)、对照组(Ctrl) 和白藜芦醇预处理组(Res)。 CCK-8法检测细胞活力,5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷（EdU）法检测细胞增殖,免疫荧光染色法检测胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、S100β蛋白表达,Western blotting 检测GFAP、S100β、波形蛋白(vimentin)、白细胞介素（IL）-10、β干扰素（IFN-β）、肿瘤坏死因子α(TNF-α）和 IL-1β蛋白表达,ELISA法检测IL-10、IFN-β、TNF-α和IL-1β蛋白含量。结果 CCK-8法检测结果显示,随着白藜芦醇浓度（5、20、40 μmol/L）的增高,细胞活力逐渐增高,且与对照组差异有显著性（P<0.01）,以40 μmol/L组细胞活力最强。之后随白藜芦醇浓度(80、100 μmol/L) 的增高,细胞活力显著降低,以100 μmol/L组细胞活力最弱 (P<0.05)。EdU检测显示,在OGD/R损伤后,对照组和白藜芦醇组显著高于正常组EdU阳性细胞比例(P<0.01),而白藜芦醇组显著低于对照组 (P<0.01)。免疫荧光染色、Western blotting和ELISA法显示,对照组和白藜芦醇组GFAP、S100β、vimentin、IL-10、IFN-β、TNF-α和IL-1β 蛋白表达或含量显著高于正常组(P<0.05),但白藜芦醇组除 IL-10 和IFN-β蛋白表达或含量较对照组增高外,其余均低于对照组(P<0.05)。结论 白藜芦醇预处理可抑制 OGD/R 后体外星形胶质细胞的活化,并减轻炎症反应。     

髓样细胞激活受体2调控氧糖剥夺/复氧模型小鼠小胶质细胞向M2型极化

目的 探讨TREM2调控氧糖剥夺/复氧（OGD/R）模型小鼠小胶质细胞向M2型极化的机制。 方法 体外培养N9小胶质细胞系,采用TREM2过表达慢病毒（LV-TREM2）转染N9细胞,空载病毒LV-scramble作为对照组,并建立OGD/R模型。将OGD/R细胞随机分为OGD/R组、OGD/R+LV-scramble组和OGD/R+LV-TREM2组。Real-time PCR检测TREM2 mRNA在OGD/R 组细胞复氧72 h内表达情况。免疫荧光染色观察慢病毒LV-scramble 和LV-TREM2在正常N9小胶质细胞内转染情况,Real-time PCR和Western blotting验证慢病毒转染效率,Real-time PCR和ELISA检测小胶质细胞M1型标志物肿瘤坏死因子 α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）和诱生型一氧化氮合酶（iNOS）及M2型标志物精氨酸酶 1（Arg-1）和IL-10 mRNA 和蛋白表达情况。Western blotting检测磷酸化-磷脂酰肌醇3激酶（p-PI3K）、PI3K、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、Akt、磷酸化核因子κB抑制蛋白α（p-ⅠκBα）和ⅠκBα蛋白含量,免疫荧光分析核因子κB P65（NF-κB P65）蛋白在细胞内分布情况。 结果 复氧72 h内,OGD/R 组细胞TREM-2 mRNA含量明显增加,高峰位于24 h和48 h;慢病毒LV-TREM2可有效促进OGD/R组细胞TREM2 mRNA和蛋白表达（P<0.001,P<0.01）。与OGD/R组相比,OGD/R+LV-TREM2组TNF-α、IL-1β和iNOS mRNA和蛋白明显降低,而Arg-1和IL-10 mRNA和蛋白含量明显升高（P<0.05）;此外,OGD/R+LV-TREM-2组p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt比值明显升高（P<0.05）,p-ⅠκBα/ⅠκBα比值显著下降（P<0.001）,且NF-κB P65蛋白核转位明显被削弱。 结论 TREM-2过表达可促进OGD/R 模型小胶质细胞向M2型转化从而发挥抗炎作用,该作用与TREM-2调控小胶质细胞PI3K/Akt和NF-κB信号通路有关。     

石杉碱甲的抗炎作用及其对大鼠神经干细胞的保护作用

 目的： 探讨石杉碱甲（HupA）的抗炎作用及其对大鼠神经干细胞的保护作用。方法：取新生SD大鼠海马组织,分离并培养神经干细胞和小胶质细胞,建立Transwell共培养体系。将细胞分成3组：空白对照组、淀粉样β肽（Aβ）组和HupA组。Aβ组小胶质细胞层中加入终浓度为10 μmol/L的Aβ1-42,HupA组于加入Aβ1-42前4 h用1 μmol/L HupA预处理小胶质细胞。液相芯片技术检测炎症因子白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和巨噬细胞炎症蛋白1α（MIP-1α）的表达,流式细胞术和Western blotting检测神经干细胞的凋亡。结果：小胶质细胞与神经干细胞共培养72 h后,与空白对照组相比,Aβ组IL-6、TNF-α和MIP-1α水平以及神经干细胞凋亡率（25.46%）均显著升高(P<0.01);HupA预处理小胶质细胞后,Aβ诱导的小胶质细胞炎症因子分泌显著减少,IL-6、TNF-α和MIP-1α的水平降低(P<0.01),同时神经干细胞凋亡率降低至8.05% (P<0.01)。Western blotting检测结果显示,HupA组Bcl-2/Bax值显著高于Aβ组(P<0.05)。结论：石杉碱甲可以抑制小胶质细胞分泌细胞因子和趋化因子,减弱Aβ诱导的炎症反应,降低神经干细胞凋亡率,从而发挥抗炎和神经保护作用。     

肌肽对脂多糖诱导脑微血管内皮细胞凋亡的保护作用及机制探讨

目的　探讨肌肽对脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）引起脑微血管内皮细胞（HBMEC）凋亡的保护作用及机制。 方法　用倒置显微镜观察细胞形态变化;MTT法检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞内的活性氧（ROS）含量及细胞凋亡情况;Western blot法检测NF-κB P65、白细胞介素-1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）蛋白表达。 结果　与对照组相比,LPS组细胞存活率略降低（P>0.05）,早期凋亡率明显增加,同时ROS含量、核内NF-κB P65及胞浆IL-1β和TNF-α的含量均显著增加（P<0.05）。与LPS组相比,LPS+肌肽组（10 mmol/L、20 mmol/L、40 mmol/L）凋亡率有明显降低,ROS含量、核内NF-κB P65蛋白量及胞浆IL-1β和TNF-α的含量均不同程度显著降低（P<0.05）。 结论　肌肽可能通过抑制LPS诱导ROS释放,避免NF-κB P65过度激活,进而减少IL-1β和TNF-α分泌,对脑微血管内皮细胞发挥保护作用。     

白藜芦醇通过上调annexin A1表达促进氧糖剥夺/复氧大鼠小胶质细胞系向M2型极化

目的探索annexin A1(ANXA1)在白藜芦醇调控氧糖剥夺/复氧(OGD/R)大鼠小胶质细胞N9向M2型极化的作用。方法采用慢病毒LV-shAnxA1沉默N9细胞AnxA1表达,慢病毒LV-Scramble作为对照慢病毒,采用Western blot和RT-qPCR验证慢病毒感染效率。慢病毒转染3 d后构建N9细胞OGD/R模型,复氧24 h后采用白藜芦醇连续处理细胞24 h。分组如下:OGD/R(-)组、OGD/R(+)组、OGD/R(+)+Res组、OGD/R(+)+Res+LV-Scramble组、OGD/R(+)+Res+LV-shAnxA1。RT-qPCR和Western blot检测ANXA1、CD11b、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、精氨酸酶-1(Arg-1)、白介素-10(IL-10)mRNA和/或蛋白含量。免疫荧光观察ANXA1在细胞内分布情况。结果 OGD/R(+)+Res组ANXA1 mRNA和蛋白含量较OGD/R(+)组明显增多。OGD/R(+)组ANXA1蛋白主要分布在细胞核,而OGD/R(+)+Res组ANXA1蛋白主要分布在细胞质。有效抑制ANXA1表达后,OGD/R(+)+Res+LV-shAnxA1组ANXA1主要位于细胞核。与OGD/R(+)+Res组相比,OGD/R(+)+Res+LV-shAnxA1组CD11b蛋白含量明显增高(P0.01),TNF-α和IL-1βmRNA含量均明显增高(P0.001),而Arg-1和IL-10 mRNA含量均显著降低。结论白藜芦醇可通过上调ANXA1表达促进OGD/R鼠小胶质细胞系向M2型极化。     

人参皂苷Rg1通过抑制NLRP3炎症小体途径减轻氧糖剥夺/复供后小胶质细胞炎症反应

目的 探讨人参皂苷Rg1通过NLRP3炎症小体途径对小胶质细胞氧糖剥夺/复供损伤后炎症反应的影响,并进一步研究其抗炎的作用机制。方法 将生长状态良好的BV-2小胶质细胞随机分为6组：无处理组（Con）,氧糖剥夺/复供组（OGD/R）,人参皂苷Rg1低、中、高剂量组（剂量分别为0.1、0.2、0.4 mmol/L,简称Rg1L、Rg1M、Rg1H）,MCC950对照组（0.05 mmol/L,MCC950）。采用CCK8法检测细胞增殖;免疫荧光和免疫印迹法检测经不同浓度人参皂苷Rg1和MCC950作用48 h后,BV-2小胶质细胞内NLRP3炎症小体相关蛋白的表达。ELISA检测BV-2小胶质细胞培养液中炎症因子IL-1β、IL-18的表达水平。结果 与Con组比较,经缺氧缺糖/复供处理的BV-2小胶质细胞胞质内可见明显的Iba-1绿色荧光表达;OGD/R处理BV-2小胶质细胞2 h后,加入不同浓度人参皂苷Rg1和MCC950培养48 h后,细胞增殖率呈现明显的下降趋势。OGD/R组呈现明显的NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β和IL-18阳性表达。Rg1L、Rg1M、Rg...     

抑制或过表达GRK5 基因对星形胶质细胞凋亡及IL-1β和TNF-α表达的影响

目的:探讨抑制或过表达G 蛋白偶联受体激酶5(GRK5)基因对星形胶质细胞(AS)凋亡及IL-1β和TNF-α 表达的影响。方法:培养原代AS,将干扰GRK5 表达的siRNA(GRK5-siRNA)及GRK5 的过表达质粒(pcDNA3.1-GRK5)分别转染AS,通过Western blot 检测转染24 h 后的细胞中GRK5 蛋白的表达;缺氧处理AS,细胞分为空白组、缺氧组、缺氧+pcDNA3.1-GRK5 组和缺氧+GRK5-siRNA 组,缺氧处理24 h 后通过流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率及ROS 含量;RT-PCR检测IL-1β和TNF-α的mRNA 表达;Western blot 检测p53、信号转导与转录因子3(STAT3)和p-STAT3 蛋白表达。结果:与空白组比较,转染GRK5-siRNA 的AS 中GRK5 的表达显著降低,转染pcDNA3.1-GRK5 的细胞GRK5 的表达显著升高(P <0.05);与空白组比较,缺氧组细胞凋亡率、ROS 水平及IL-1β、TNF-α、p53 和p-STAT3 的表达均显著升高(P<0.05);与缺氧组比较,缺氧+pcDNA3.1-GRK5 组细胞凋亡率、ROS 水平及IL-1β、TNF-α、p53 和p-STAT3 的表达均显著降低,缺氧+GRK5-siRNA组细胞凋亡率、ROS 水平及IL-1β、TNF-α、p53 和p-STAT3 的表达均显著升高(P<0.05)。结论:过表达GRK5 可降低AS 凋亡和ROS 水平,下调IL-1β、TNF-α、p53 表达及STAT3 信号通路,抑制GRK5表达反之。     

全麻/控制性降压手术对海马神经元凋亡的影响

 目的：观察全麻/控制性降压手术对海马神经元损伤的影响及其可能的机制。方法：选用12只6～8月龄雄性健康比格犬,随机分为全麻组（A组,n=6）和控压组（C组,n=6）。全麻组采用丙泊酚注射及异氟醚吸入麻醉,控压组在麻醉基础上联合硝普钠行控制性降压,达到目的血压（基础平均动脉压的40％）后维持60 min（2组动物均在相应期间行剖腹探查术）,术毕使血压回升至基础水平72 h后取脑。采用免疫组织化学法检测海马CA1和CA3区白细胞介素 1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）以及凋亡相关蛋白（Bcl-2、Bax和活化型caspase-3)的表达;TUNEL法检测海马神经元凋亡情况。结果：(1)控压组动物海马CA1和CA3区IL-1β和TNF-α阳性细胞率均较全麻组升高（P＜0.01）;(2)控压组CA1和CA3区Bcl-2/Bax阳性细胞比值均较全麻组降低（P＜0.05）;与此相应,控压组海马各区caspase-3阳性细胞率均显著高于全麻组（P＜0.01）;(3)全麻组与控压组CA1和CA3区存在凋亡细胞,但控压组各区细胞凋亡指数均较全麻组显著升高（P＜0.01）。结论：全麻/控制性降压下的手术可诱导海马不同区域促炎细胞因子表达,降低Bcl-2/Bax比值,促进caspase-3的表达,进而导致海马神经元的凋亡。这种术后海马神经元损伤可能与全麻/控压手术诱导的海马炎症反应有关。     

自噬参与低氧预处理抗PC12细胞糖氧剥夺损伤过程

目的:观察低氧预处理(HPC)对氧糖剥夺(OGD)损伤的PC12细胞的作用,同时探讨自噬在其中的作用。方法:培养的PC12细胞按照处理因素分为6组:对照组、HPC模型组、3-甲基腺嘌呤(3-MA)组、低氧预处理后氧糖剥夺(HPC+OGD)组、3-甲基腺嘌呤预处理后行低氧预处理及氧糖剥夺(3-MA+HPC+OGD)组和OGD组。CCK-8检测细胞存活率;caspase-3活性检测试剂盒检测酶活性;TUNEL染色和流式细胞术检测细胞凋亡的情况;Western blot法检测自噬相关蛋白LC3、beclin-1和凋亡相关蛋白caspase-3的表达。结果:与对照组相比,OGD组细胞存活率明显降低;与3-MA+HPC+OGD组及OGD组相比,HPC+OGD组细胞存活率明显升高(P0.05)。与对照组相比,OGD组细胞的caspase-3酶活性明显升高;与3-MA+HPC+OGD组及OGD组相比,HPC+OGD组的caspase-3酶活性明显降低(P0.05)。与对照组相比OGD组细胞凋亡明显增多;HPC+OGD组与OGD组相比凋亡明显减少(P0.05)。此外,与对照组相比,OGD组的激活型caspase-3蛋白水平明显升高(P0.05);且HPC+OGD组与OGD组相比激活型caspase-3蛋白水平明显减少而LC3、beclin-1的蛋白水平明显升高(P0.05)。结论:HPC抗OGD损伤的机制可能与其激活细胞自噬有关。     

硫化氢通过调控NF-κB通路抑制阿霉素引起的心肌细胞炎症与细胞毒性

 目的：探讨硫化氢（H2S）是否通过调控核因子κB(NF-κB)通路抑制阿霉素（DOX）引起的心肌细胞炎症反应与细胞毒性。方法：应用Western blotting法测定NF-κB p65表达;酶联免疫吸附试验（ELISA）测定白细胞介素（IL）-1β、IL-6及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的分泌水平;细胞计数盒（CCK-8）检测细胞存活率,Hoechst 33258核染色法检测凋亡细胞的形态学及数量的变化。结果：应用5 μmol/L DOX处理H9c2心肌细胞明显上调磷酸化NF-κB p65（p-p65）表达水平,并引起炎症反应和细胞毒性,表现为IL-1β、IL-6、TNF-α的分泌水平升高、凋亡细胞数量增多及细胞存活率降低。400 μmol/L NaHS（H2S供体）预处理30 min能显著抑制DOX对心肌细胞p-p65表达的上调作用,并减轻DOX引起的炎症反应和细胞损伤,使IL-1β、IL-6、TNF-α的分泌水平下降、凋亡细胞数量降低及细胞存活率升高。与NaHS的作用相似,NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC,100 μmol/L）预处理也能阻断DOX引起的心肌炎症反应和细胞毒性。IL-1受体拮抗剂（IL-1Ra, 20 μg/L）与DOX共处理能拮抗DOX对心肌细胞NF-κB p65的激活作用及细胞毒性作用。结论：在DOX引起的心肌细胞炎症中,NF-κB通路与IL-1β之间存在正的相互作用;H2S可通过抑制NF-κB通路保护心肌细胞对抗DOX引起的炎症反应与细胞毒性。     

氧糖剥夺/复氧所致细胞焦亡在肺微血管内皮细胞损伤中的作用

目的:探讨氧糖剥夺/复氧(OGD/R)是否导致人肺微血管内皮细胞(HPMVECs)焦亡及其在细胞损伤中的作用。方法:采用HPMVECs复制OGD/R细胞模型,模拟体外循环中HPMVECs缺血/再灌注过程。将细胞分为对照(control)组(正常培养)、OGD/R组(OGD 8 h+恢复12 h)及VX-765(caspase-1抑制剂)组(在OGD/R之前4 h给予50μmol/L VX-765处理,其余培养条件同OGD/R组)。采用RT-qPCR和Western blot法检测caspase-1、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)及含caspase募集结构域的凋亡相关斑点样蛋白(ASC)的mRNA及蛋白表达水平;采用ELISA法检测上清液中白细胞介素1β(IL-1β)及IL-18水平;采用乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测上清液中LDH的水平。结果:与control组比较,OGD/R组caspase-1、NLRP3和ASC的mRNA和蛋白表达均升高(P<0.05),炎症因子IL-1β和IL-18分泌均增多(P<0.05);使用VX-765可逆转OGD/R造成的caspase-1、NLRP3和ASC mRNA和蛋白表达水平的上调及IL-1β和IL-18的分泌(P<0.05),同时下调OGD/R后的LDH水平(P<0.05)。结论:OGD/R可导致HPMVECs发生焦亡,抑制细胞焦亡可缓解OGD/R对HPMVECs的损伤。     

调节性T细胞促进球囊损伤颈动脉内皮化的作用及机制

目的 探讨调节性T细胞（Treg细胞）促进球囊损伤颈动脉内皮化的作用及机制。 方法 使用Treg细胞分选试剂盒分选大鼠脾脏Treg细胞;构建大鼠颈动脉损伤模型;模型制作成功后分为对照组（尾静脉注射相同体积的生理盐水）、血管内皮生长因子（VEGF）组（尾静脉注射VEGF, 20 μmol/kg）和Treg细胞组（尾静脉注射1×105个Treg细胞）。HE染色检测内皮化情况;ELISA和免疫组织化学法检测血清中白细胞介素（IL）-10、转化生长因子-β（TGF-β）、IL-1β和肿瘤坏死因子α（TNF-α）的含量;流式细胞术检测单核细胞、T细胞和内皮祖细胞（EPC）的比例。 结果 组织学染色结果显示,对照组未见内皮细胞层的形成,Treg细胞组可见较多内皮细胞覆盖在颈动脉内层;免疫组织化学结果显示,对照组与Treg细胞组IL-10、TGF-β、IL-1β和TNF-α蛋白表达差异均有统计学意义（t=8.252,P<0.01;t=3.254,P<0.05;t=6.237,P<0.01;t=7.529,P<0.01）。ELISA结果显示,对照组IL-10、TGF-β、IL-1β和TNF-α的含量分别为（17.38±2.595）μg/L、（4.750±1.549）μg/L、（11.65±1.908）μg/L和（1.163±0.3333）μg/L;Treg细胞组的含量分别为（58.43±6.060）μg/L、（14.17±2.250）μg/L、（1.550±0.3819）μg/L和（0.2100±0.06938）μg/L,差异有显著性（t=6.170,P<0.01;t=3.558,P<0.01;t=5.191,P<0.01;t=2.800,P<0.05）;流式细胞术的结果显示,对照组CD34+VEGFR-2+EPC比例为（0.2838±0.01975）%,Treg细胞组为（0.5667±0.05993）%,差异有显著性（t=4.483,P<0.01）;IL-10阻断组EPC比例为（0.4807±0.03067）%,相对于Treg细胞组,差异不具有统计学意义（t=1.278,P>0.05）;TGF-β阻断组EPC比例为(0.3082±0.02291)%,相对于Treg细胞组,差异有显著性（t=4.029,P<0.01）。 结论 Treg细胞通过诱导EPC动员,促进球囊损伤颈动脉的快速内皮化。     

左旋丁基苯酞抑制氧糖剥夺/复氧所致原代培养小鼠脑胶质细胞内NF-κB和IκB-α蛋白表达

目的 观察左旋丁基苯酞(1-NBP)对原代培养小鼠脑胶质细胞氧糖剥夺/复氧(OGD/R)后NF-κB、IKB-α蛋白表达的影响.方法 体外培养小鼠脑胶质细胞,建立细胞OGD/R损伤模型.将胶质细胞分为5组:正常对照(Nc)组、OGD 24 h/R 24 h组、1-NBP 20、100及500 μmol/L组.Western-blot检测各组细胞核蛋白中NF-κB蛋白表达和胞质蛋白中IκB-α蛋白降解情况.结果 OGD 24 h/R 24 h组NF-κB蛋白表达较NC组明显增加(P＜0.01);I-NBP 100和500 μmol/L组NF-κB蛋白表达较OGD 24 h/R 24 h组明显下降(P＜0.01).OGD 24 h/R 24 h组IκB-α蛋白降解比NC组增多(P＜0.01);1-NBP 500 μmol/L组IκB-α蛋白降解较OGD 24 h/R 24 h组明显减少(P＜0.05).结论 1-NBP能抑制脑胶质细胞OGD/R后炎症反应,表现为减少IκB-α蛋白降解,抑制NF-κB活化.     

TLR4对氧化低密度脂蛋白作用巨噬细胞后凋亡和炎症因子的影响

目的：研究Toll样受体4（TLR4）对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）作用后巨噬细胞凋亡和炎症因子的影响。方法：巨噬细胞Ana-1分为Con（不做处理）、ox-LDL（50 pg/ml ox-LDL处理）、TAK-242（50 pg/ml ox-LDL和20 μmol/L的TLR4阻断剂TAK-242处理）。流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved Caspase-3）、核因子-κBp65（NF-κBp65）、TLR4蛋白水平,二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)法检测细胞中ROS水平,ELISA检测培养液上清中TNF-α、IL-6、IL-1β水平。结果：ox-LDL处理后的Ana-1细胞中TLR4表达水平升高,而TLR4阻断剂TAK-242可以部分降低细胞中TLR4水平。ox-LDL细胞凋亡率从（6.12±0.95）%升高到（45.35±2.71）%,而TAK-242作用后的凋亡率降低至（29.59±4.23）%,同时ox-LDL细胞中Bax、Cleaved Caspase-3、NF-κBp65水平和ROS水平均明显高于Con（P<0.05）,而TAK-242细胞中Bax、Cleaved Caspase-3、NF-κBp65水平ROS水平均明显低于ox-LDL（P<0.05）。ox-LDL细胞培养液上清中TNF-α、IL-6、IL-1β水平均明显高于Con（P<0.05）,而TAK-242细胞培养液上清中TNF-α、IL-6、IL-1β水平均明显低于ox-LDL（P<0.05）。结论：巨噬细胞经过ox-LDL作用后细胞中TLR4表达升高,细胞凋亡增多,细胞分泌的炎症因子水平升高,细胞中ROS水平和NF-κBp65水平均升高,而敲低TLR4能够抑制ox-LDL的上述作用。     

咪达唑仑减轻氧糖剥夺/复糖复氧诱导的小鼠神经元损伤

目的 探讨咪达唑仑对氧糖剥夺(OGD)/复糖复氧(R)诱导的小鼠神经元细胞系HT22损伤的影响。方法 用OGD/R诱导建立神经元细胞HT22损伤模型,将HT22细胞分为OGD/R组、咪达唑仑低、中和高剂量组、咪达唑仑高剂量+KG-501(CREB抑制剂)组,另设常规培养HT22细胞为对照组。ELISA检测TNF-α、IL-6水平;商品化试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA);MTT和Edu实验检测细胞增殖;流式细胞术测量细胞凋亡率;RT-qPCR检测CREB mRNA和PGC-1α mRNA表达水平;Western blot检测Ki-67、Bcl-2、Bax、CREB、PGC-1α蛋白表达水平。结果 与对照组相比,OGD/R组细胞A₄₉₀值(24、48 h),增殖率、SOD、CAT活性、CREB mRNA和PGC-1α mRNA表达水平、Ki-67、Bcl-2、CREB、PGC-1α蛋白表达水平显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、TNF-α、IL-6、MDA、Bax蛋白表达显著升高(P<0.05)。与OGD/R组相...     

Prdx1基因敲减促进氧糖剥夺/复氧诱导的小鼠神经母细胞瘤N2a细胞凋亡

目的:观察过氧化还原蛋白1(Prdx1)基因敲减对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导的小鼠神经母细胞瘤N2a细胞凋亡的作用,并进一步探讨其可能机制。方法:体外培养小鼠神经母细胞瘤N2a细胞,构建OGD/R诱导的N2a细胞损伤模型。将对数生长期的N2a细胞随机分为正常对照组、OGD/R组、OGD/R+c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂(SP600125)组、OGD/R+阴性对照序列(siNC)组、OGD/R+siPrdx1组和OGD/R+siPrdx1+SP600125组。用siRNA转染细胞;CCK-8比色法检测细胞活力;TUNEL染色法检测细胞凋亡;RT-qPCR检测Prdx1 mRNA的表达;Western blot检测Prdx1、JNK、磷酸化JNK(p-JNK)及凋亡执行蛋白cleaved caspase-3的蛋白水平。结果:体外培养的小鼠神经母细胞瘤N2a细胞经OGD/R处理后出现明显损伤,表现为细胞活力显著降低(P0.05),细胞凋亡率显著增高(P0.05);此外,Prdx1蛋白表达水平亦增高(P0.05)。Prdx1基因敲减显著促进了OGD/R诱导的JNK和caspase-3激活(P0.05),细胞活力显著降低(P0.05),同时显著加剧细胞凋亡(P0.05)。SP600125可显著抑制OGD/R诱导的JNK和caspase-3激活(P0.05),减少细胞凋亡(P0.05),逆转OGD/R条件下Prdx1基因敲减对N2a细胞的损伤作用。结论:Prdx1基因敲减促进OGD/R诱导的小鼠神经母细胞瘤N2a细胞凋亡,其机制与进一步激活JNK/caspase-3信号通路有关。     

亚低温减轻氧糖剥夺所致的大鼠海马神经元损伤

 目的： 研究亚低温（31～32　℃）对氧糖剥夺（OGD）损伤的大鼠海马神经元的保护作用并探讨其保护机制。方法：本实验通过体外培养大鼠海马神经元并予以OGD处理,建立了模拟大脑缺血、缺氧的神经元OGD模型;将实验细胞随机分为正常对照组、单纯亚低温组、单纯OGD组以及亚低温+OGD组,通过形态学观察、神经元凋亡率检测以及胞浆内caspase-3活性检测,研究亚低温对神经元OGD的保护作用及其机制。结果：神经元OGD后出现明显的细胞损伤,凋亡率明显升高(P＜0.01);与单纯OGD组比较,亚低温+OGD组细胞损伤明显改善,细胞形态学改善,凋亡率下降(P＜0.05),同时caspase-3活性亦下降(P＜0.05);神经元OGD后caspase-3活性升高,与凋亡率呈正相关（r=0.823,P＜0.05）,神经元经过亚低温和OGD后caspase-3活性与凋亡率亦呈正相关（r=0.841,P＜0.05）。结论：OGD可使caspase-3的活性升高及神经元凋亡率增加。亚低温对神经元OGD的保护作用可能与其抑制caspase-3的活性有关。     

硫化氢对氧糖剥夺/复氧诱导小鼠脑皮层神经元损伤的体外观察

目的 探讨硫化氢（H₂S）对氧糖剥夺/复氧（OGD/R）诱导神经元损伤的影响。方法 小鼠皮层神经元用无糖厄尔氏平衡盐溶液（EBSS）于2% O₂、5% CO₂、93% N₂ 37℃培养4h,换用neurobasal + B27培养基于37℃ 5%CO₂培养箱中继续培养12h,建立OGD/R模型。以硫氢化钠(NaHS)作为H₂S的供体,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞存活率;用fura-2/AM和显微荧光成像系统检测神经元胞质钙离子浓度（［Ca ²⁺ ］i）;利用比色法检测乳酸脱氢酶（LDH）释放率;碘化丙啶（PI）染色检测细胞损伤。 结果 200、300与600 μmol/L NaHS预处理30min再OGD/R,神经元存活率显著提高（n=4）;300 μmol/L NaHS预处理后再OGD/R,［Ca ²⁺］i（n=5）、LDH释放率（n=4）和细胞损伤率（n=6）均低于OGD/R组,且使用10 μmol/L钙螯合剂BAPTA也降低OGD/R诱导的LDH释放率和细胞损伤率。 结论 H₂S减轻OGD/R所致皮层神经元损伤,其机制与H₂S抑制OGD/R诱导神经元钙超载有关。     

巨噬细胞迁移抑制因子对氧糖剥夺/复氧PC12细胞的作用

目的:研究巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)条件下PC12细胞的保护作用及其机制。方法:将PC12细胞分为对照组(control)、氧糖剥夺/复氧组(OGD/R)、MIF处理组(MIF)、ISO-1处理组(ISO-1)和MIF联合MIF抑制剂ISO-1处理组(ISO-1+MIF)。利用无糖无血清培养液及低氧处理PC12细胞建立OGD/R诱导的神经元损伤模型,利用CCK-8试剂盒检测细胞活力,利用DCFH-DA探针检测胞内ROS水平;利用乳酸测试盒检测细胞培养上清中的乳酸水平;real time RT-PCR检测细胞中Bax,Bcl-2和葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)mRNA的表达;Western Blot检测细胞中Bax,Bcl-2,GLUT1,乳酸脱氢酶A(LDHA)和M2型丙酮酸激酶(PKM2)蛋白的表达;免疫荧光染色检测细胞中凋亡相关蛋白caspase-3,Bax和Bcl-2的表达变化。结果:与control组相比,OGD/R组细胞活性降低,凋亡增加。同时,OGD/R降低了葡萄糖代谢相关蛋白GLUT1,PKM2和LDHA的表达,降低了乳酸的形成量并增加了ROS生成。MIF的给药促进了OGD/R下PC12细胞的活力并抑制其凋亡,增加了GLUT1,PKM2和LDHA蛋白表达以及乳酸含量,并且降低了ROS水平。相反,ISO-1可以抑制MIF对PC12细胞的保护作用。结论:MIF通过发挥抗凋亡、抗氧化应激和增加葡萄糖代谢对PC12细胞发挥保护作用。