外源性p16基因对wtp53型人肺腺癌细胞生长的影响

目的 探讨Ｐ１６对人肺腺癌的作用及Ｐ１６基因治疗肺癌的可能性。方法 运用分子克隆技术构建重组人Ｐ１６基因表达载,以电穿孔法将Ｐ１６基因导入到该基因缺失的ｗｔｐ５３型的人肺腺癌Ａ５４９和Ｈ４６０细胞中,得到稳定表达Ｐ１６的人肺腺癌细胞。详细研究Ｐ１６基因对ｗｔｐ５３型人肺腺癌细胞周期的影响和细胞增殖的作用。结果 导入Ｐ１６基因能使人Ａ５４９和Ｈ４６０细胞生长速度较对照细胞明显减慢,细胞周期阻滞在Ｇ１     

外源性p16基因表达可抑制人胃癌细胞的恶性增殖

目的探讨ｍｔｓｌ／ｐ１６基因在肿瘤发生发展过程中的作用及在临床基因诊断和基因治疗中的应用前景。方法构建ｍｔｓｌ／ｐ１６基因的表达载体并导入表达水平下调的ＰＡＭＣ８２细胞,用ＰＣＲ、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交、ｍＲＮＡ原位杂交和Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交对获得Ｇ４１８抗性的细胞进行外源性ｍｔｓｌ／ｐ１６基因整合及表达的鉴定。对导入外源性ｐ１６基因的细胞进行裸鼠致瘤能力及病理学特性分析。结果转染ｐ１６基因的ＰＡＭＣ８２细胞（命名为ＰＡＭＣｐ１６）有外源性ｍｔｓｌ／ｐ１６基因的整合及表达,在裸鼠中的致瘤性显著降低。肿瘤组织病理分析结果显示,ＰＡＭＣｐ１６细胞形成的肿瘤,其分化程度优于ＰＡＭＣ８２细胞。结论导入外源性ｍｔｓｌ／ｐ１６基因可抑制肿瘤细胞的恶性增殖和促进细胞分化。     

肾癌p16基因表达及临床意义

位于人类染色体ｑｐ２１上的多肿瘤抑制基因（ＭＴＳ１）编码ｐ１６蛋白，通过抑制细胞周期素Ｄ１／ＣＤＫ４活性参与并调节细胞从Ｇ０期进入Ｇ１期，在细胞周期调节中起重要作用。我们应用ＬＳＡＢ免疫组化方法检测肾癌ｐ１６基因表达，对其与肾癌生物学行为及预后关系进...     

腺病毒介导p16基因转移及诱导黑色素瘤细胞凋亡

目的 进一步了解Ｐ１６基因对肿瘤细胞的作用。方法 通过腺病毒介导外源性Ｐ１６基因转移到Ｐ１６基因突变的人黑色素瘤细胞秒ＷＭ－９８３Ａ,对Ｐ１６基因的表达,细胞生长的抑制与机制和对肿瘤模型的治疗效果进行分析。结果 外源性Ｐ１６基因在靶细胞高水平的表达显著地抑制了ＷＭ９８３Ａ的生长和集落形成,流式细胞仪检测显示细胞Ｇ１的期阻滞并发生了凋亡,瘤内注Ａｄ－ｐ１６对裸鼠体内移植瘤有一定抑瘤作用。结论 Ｐ１６     

前列腺癌中p53和p16蛋白的表达及其临床病理学意义

目的探讨抑癌基因在前列腺癌组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学方法,检测２５例前列腺癌中ｐ５３和ｐ１６基因蛋白产物的表达。结果ｐ５３蛋白阳性率为３２％（８／２５）,明显高于良性前列腺增生（Ｐ＜０．０５）,并在低分化肿瘤中表达高（Ｐ＝０．０４０３）;在临床分期Ⅲ～Ⅳ期癌中表达升高（Ｐ＜０．０５）。ｐ１６的失活率４４％（１１／２５）,也是低分化组高于高分化组（Ｐ＜０．０５）。并发现４例低分化癌中有ｐ５３和ｐ１６共同异常。结论ｐ５３和ｐ１６基因的异常表达均与前列腺癌的形成和恶性程度有关,但两者之间是否具有协同作用尚待进一步证明。     

胃癌组织p16基因及蛋白与胃癌生物学行为

目的 探讨胃癌组织是调控因子Ｐ１６基因纯合笥缺失,Ｐ１６基因蛋白及其与胃癌生物学行为的关系。方法 用ＰＣＲ方法检测胃癌组织中Ｐ１６基因纯合性缺失状况;用免疫组化方法检测Ｐ１６蛋白的表达水平。结果 ８例（２６．７％）胃癌出现不同程度的Ｐ１６基因缺失;１５例（４８％）胃癌出现Ｐ１６失、弱表达,５例（１６％）出现Ｐ１６过度表达。结论 Ｐ１６基因事性缺失参与胃癌的发生发展;Ｐ１６５异常表达与胃癌生物学行为     

多发性骨髓瘤p15、p16基因启动子区甲基化的研究

 目的 探讨 ｐ１５、ｐ１６基因启动子区 ＣＰＧ岛甲基化在多发性骨髓瘤发病中的作用。方 法 利用甲基化特异性 ＰＣＲ技术，研究骨髓瘤细胞株（Ｕ２６６、ＬＰ１、ＫＭ３）及多发性骨髓瘤患者 ｐ１５、ｐ１６基因甲基化状态。结果 Ｕ２６６、ＬＰ１细胞 ｐ１５、ｐ１６基因处于完全甲基化状态；ＫＭ３细胞 则为完全未甲基化模式；ＭＭ患者的ｐ１５、ｐ１６基因启动子区甲基化比例分别为 ５２．３８％及 ５７．１４％。 ｐ１５、ｐ１６基因甲基化与 ＭＭ分期无关（Ｐ＞０．０５）。结论 ｐ１５、ｐ１６基因甲基化在多发性骨髓瘤中 较为常见，这可能为多发性骨髓瘤的治疗提供借鉴。     

前列腺癌中p53和p16蛋白的表达及其临床病理学意义

目的 探讨抑癌基因在前列腺癌组织中的表达及临床意义。方法 应用免疫组织化学方法,检测２５例前列腺癌中ｐ５３和ｐ１６基因蛋白产物的表达。结果 ｐ５３蛋白阳性率为３２％（８／２５）,明显高于良性前列腺增生（Ｐ〈０．０５）,并在低分化肿瘤中表达高（Ｐ＝０．０４０３）;在临床分期Ⅲ￣Ⅳ期癌中表达升高（Ｐ〈０．０５）。ｐ１６的失活率４４％（１１／２５）,也是低分化组高于高分化组（Ｐ〈０．０５）。并发现４例低     

p53、p16基因蛋白在非小细胞肺癌中的表达及意义

应用ＬＳＡＢ免疫组化方法检测了１１７例非小细胞肺癌组织中ｐ５３、ｐ１６基因蛋白的表达。结果显示：ｐ５３、ｐ１６蛋白在肺癌中的阳性表达率分别为４９．６％、４５．３％;在不同组织学类型中,２种蛋白阳性表达率均无显著性差异;ｐ５３蛋白表达与肺腺癌淋巴结转移有显著相关性,ｐ５３蛋白阳性表达者的淋巴结转移能力强（Ｐ＜０．０５）;ｐ５３、ｐ１６蛋白表达与患者预后有关,ｐ５３蛋白阳性表达及ｐ１６蛋白阴性表达者预后差（Ｐ＜０．０５）。结果表明：ｐ５３、ｐ１６基因改变在非小细胞肺癌的发生发展中起重要作用,ｐ５３、ｐ１６蛋白异常表达可作为判断肺癌患者预后的有效指标。     

骨肉瘤中细胞周期素D1,p16蛋白表达的研究

目的;研究细胞周期素Ｄ１,ｐ１６蛋白在骨肉瘤中的表达状态及意义。方法：采用免疫组织化学方法（ＳＰ法）检测了４３例骨肉瘤和１５例骨软骨瘤中２种蛋白的表达,并在２种肿瘤间及骨肉瘤患者不同年龄组,组织类型,分化程度间进行比较。     

喉鳞癌中p73、p63的表达及其临床意义

目的:探讨p73、p63在喉鳞癌(LSCC)组织中的表达及与喉鳞癌发生、发展的关系和生物学意义。方法:应用原位分子杂交方法,检测p73mRNA、p63mRNA在47例喉鳞癌组织、癌旁组织及14例正常喉组织中的表达。结果:p73在正常喉组织中不表达;在喉癌组织、癌旁组织中的阳性表达率分别为57.4%(27/47)、29.8%(14/47),分别与正常喉组织比较,差异有统计学意义(P<0.05);组织分化程度越低、TNM分期越晚、淋巴结转移率越高,则p73 mRNA表达越强(均P<0.05)。p63在喉鳞癌、癌旁组织中的阳性表达率为91.5%(43/47)、93.6%(44/47)、分别与正常喉组织(57.1%)比较,差异有统计学意义(P<0.05);p63与喉癌临床病理特征无关。结论:p73表达有助于判断喉鳞癌的生物学行为和预后。p63对LSCC生物学行为的影响较小。     

舌鳞癌p15和p16蛋白的表达及其意义

背景与目的:多种原发性肿瘤中都存在p15、p16表达异常,但它们与舌肿瘤的关系仍不清楚。本研究旨在探讨二者在舌鳞状细胞癌中的表达特点及其与临床病理和预后的关系。方法:采用免疫组化(超敏SP法)和图像分析技术,检测45例舌鳞癌和10例正常舌组织中p15、p16蛋白表达水平,并将结果与临床病理指标及生存时间进行统计分析。结果:正常舌组织鳞状上皮中均有p15和p16蛋白表达;舌鳞癌p15、p16的缺失率分别为46.7％(21/45)和66.7％(30/45);p16蛋白表达阳性的患者中,80％(12/15)伴有p15蛋白表达,而p15缺失标本中有85.7％(18/21)伴随p16蛋白表达缺失;二者共缺失的患者绝大多数处于临床Ⅲ、Ⅳ期(16/18)。临床Ⅰ、Ⅱ期病例p15和/或p16蛋白表达水平比Ⅲ、Ⅳ期者的表达高(P<0.05);无颈淋巴结转移组蛋白附性表达率高于有转移组(P<0.01)。p15单独或与p16共缺失者与p15和p16蛋白均表达正常者比较,其术后3年生存率降低(P<0.05)。结论:p15和p16蛋白的表达与舌鳞癌的临床分期及颈淋巴结转移有关;p15蛋白单独或与p16共缺失时,舌鳞癌的预后较差。p15和p16蛋白可作为临床评估舌鳞癌浸润、转移和预后的参考指标。     

大蒜素联合长春瑞滨促进胃癌细胞株p21和p27的表达

目的:通过检测大蒜素与细胞周期特异性化疗药联合应用对胃癌细胞周期抑制蛋白（cyclindependent kinase inhibitors, CKI）p21、p27表达的影响,探讨大蒜素对肿瘤细胞周期阻滞及与化疗药协同抗肿瘤作用的可能机制。方法： MTT法测定化疗药长春瑞滨（vinorelbine,NVB)、氟尿嘧啶(fluorouracil,5Fu)、丝裂霉素（mitomycin, MMC)对两种胃癌细胞株BGC823和SGC7901的增殖抑制率,并计算这些药物的半数抑制浓度（IC50）,以此作为检测p21、p27蛋白表达时的给药剂量;流式细胞仪检测单独或联合用药时细胞周期的改变;SP免疫组化法检测胃癌细胞p21、p27蛋白的表达。结果：大蒜素作用24、48 h后两种细胞均出现G0/G1期细胞减少、G2/M期细胞增多。大蒜素作用于两种细胞后p21和p27蛋白的阳性表达率随大蒜素质量浓度（5、10、15、20 μg/ml）的增加而依次升高。大蒜素与细胞周期特异化疗药NVB联合作用后,与单一作用相比,两种细胞的p21、p27蛋白的表达均显著增加（P<0.01）;大蒜素分别与5FU或MMC联合作用后,两种细胞中p21、p27蛋白的表达并没有进一步增加。结论：大蒜素与细胞周期特异化疗药NVB联合应用后通过上调p21、p27蛋白的表达使胃癌细胞阻滞于G2/M期。     

骨巨细胞瘤p73、p15蛋白表达研究

目的观察骨巨细胞瘤（GCT）中p73、P15蛋白的表达，探讨其临床意义及相关性。方法30例骨巨细胞瘤标本分别按照Ennecking分期、有无复发、有无转移进行分组。应用S-P免疫组化方法检测标本组中的p73蛋白和P15蛋白的表达。结果p73蛋白和P15蛋白在GCT中的阳性表达率分别为40．0％和56．7％；p73蛋白和P15蛋白的表达强度随Ennecking分期的增高而增加（P〈0．01），二者在复发组的表达均高于无复发组（P〈0．05，P〈0．01）；此外，P15蛋白的表达在转移组高于无转移组（P〈0．01）；p73、P15蛋白在GCT中的表达呈正相关（P〈0．05）。结论p73、P15蛋白的表达与骨巨细胞瘤的生物学行为有相关性，有助于评估肿瘤的预后。p73和P15的相关性可能是肿瘤抑制性基因网络性结构复杂性的表现。     

The predictive value of p53, p53R2, and p21 for the effect of chemoradiation therapy on oesophageal squamous cell carcinoma

The p53 family regulates cell-cycle arrest, triggers apoptosis or is involved in repair of DNA damage. In the present study, we analysed the expression of some p53 family proteins and their responses to chemoradiation therapy (CRT) in cases of oesophageal squamous cell carcinoma (ESCC). We immunohistochemically investigated the relationship between p53, p53R2, and p21 expression in biopsy specimens of untreated primary tumours and their clinical and histological responses to CRT in 62 patients with ESCC. Chemoradiation therapy consisted of 5-fluorouracil plus cisplatin and 40 Gy of radiation. The rates of clinical and histological responses (complete or partial) to CRT were 71.0% (clinical) and 52.8% (histological). The rate of positive expression was 43.5% for p53, 37.1% for p53R2, and 54.8% for p21 expression. Statistically significant correlations were found between p53 or p53R2 expression and favourable response to CRT (P=0.0001 or 0.041 clinical, P=0.016 or 0.0018 histological, respectively). Furthermore, in p53-negative tumours, CRT was more effective in tumours with p53R2 negative expression than those with p53R2 positive expression (P=0.0014). We demonstrated that the negative expression of p53 and p53R2 expression was closely related to the effect of CRT and should predict the CRT outcome in patients with ESCC.     

p14ARF基因抑制肿瘤细胞增殖的研究

目的：从正常人肝细胞系Ｌ０２细胞中扩增人的肿瘤抑制基因Ｐ１４＾ＡＲＦ,以研究其对人的多种肿瘤细胞生长的影响。方法：应用ＲＴ－ＰＣＲ技术,从培养的下沉人肝细胞系Ｌ０２细胞中扩增出０．４Ｋｂ的Ｐ１４＾ＡＲＦＣＤＮＡ片段,测序正确后郫具核表达载体ｐｃＤＮＡ３上的ＢａｍＨＩ和ＥｃｏＲＩ位点,命名为ｐｃＤＮＡ３ＡＲＦ。此质粒同脂质体Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ＾ＴＭ介导转染肿瘤细胞Ｈｅｐ２、ＫＢ、ＫＢ－ｖ２０     

Mutation and homozygous deletion analyses of genes that control the G1/S transition of the cell cycle in skin melanoma: p53, p21, p16 and p15

Introduction The role of genes involved in the control of progression from the G1 to the S phase of the cell cycle in melanoma tumors is not fully known. Material and methods The aims of our study were to analyse alterations in p53, p21, p16 and p15 genes in melanoma tumors and melanoma cell lines by single strand conformational polymorphism (SSCP), and to detect homozygous deletions. We analysed the DNA from 39 patients with primary and metastatic melanomas, and from 9 melanoma cell lines. Results The SSCP technique showed heterozygous defects in the p53 gene in 8 or 39 (20.5%) melanoma tumors: three point mutations in intron sequences (introns 1 and 2) and exon 10, and three new polymorphisms located in introns 1 and 2 (C to T transition at position 11701 in intron 1; C insertion at position 11818 in intron 2; and C insertion at position 11875 in intron 2). One melanoma tumor exhibited two heterozygous alterations in the p16 exon 1 (stop codon and missense mutation). No defects were found in the remaining genes. Homozygous deletions were more frequent in melanoma cell lines than in melanoma tumors in p21, p16 and p15 (22.2%, 44.4%, and 44.4% versus 7.7%, 2.5%, and 5.1% respectively). TP53 did not show homozygous deletions. Conclusions Our results suggest that these genes are involved in melanoma tumorigenesis; but perhaps not in the major targets. Other suppressor genes that may be informative of the mechanism of tumorigenesis in skin melanomas need to be studied.     

p53、p27、bcl-2在非小细胞肺癌中表达的研究

目的　研究p53、p2 7、bcl 2三种基因蛋白与非小细胞肺癌 (NSCLC)临床病理特征的关系。方法　应用S P免疫组化法检测 76例手术切除NSCLC标本中三种基因蛋白的表达。结果　 76例标本中 2 8例(36 .84% )p53过度表达 ,34例 (44.74% )p2 7过度表达 ,37例bcl 2过度表达 (48.68% ) ,7例患者p53、p2 7、bcl 2均过度表达。p53阳性表达率随分化程度降低而升高 ,bcl 2和p2 7阳性表达率随分化程度降低而降低 ,且高、低分化组间均有显著性差异 (P <0 .0 5)。但是三种蛋白阳性表达率均与肺癌组织学类型、淋巴结转移及病理分期无明显关系 (P >0 .0 5)。结论　p53、p2 7和bcl 2基因过度表达可能与NSCLC的发生、发展有关