间隙连接蛋白43在口腔颌面部鳞癌组织及舌癌细胞株(Tca8113)中表达的研究

目的:探讨间隙连接蛋白43(Cx43)在口腔鳞癌组织(oscc)和舌鳞癌细胞株(Tca8113)中的表达及其生物学行为的关系;细胞分化诱导剂全反式维甲酸(ATRA)对人舌鳞癌细胞株(Tca8113)中Cx43表达的影响。方法:应用免疫组织、细胞化学、免疫荧光及结合免疫印迹技术,观察OSCC组织中以及ATRA对Tca8113细胞株进行培养及分化诱导后Cx43在蛋白水平的变化。结果:Cx43在正常口腔鳞状上皮主要表达于相邻细胞间相互接触的细胞膜上,而在OSCC组织中,Cx43细胞膜表达与组织的分化程度、转移之间有显著性差异(Cx43:х2=7.42、12.43,P<0.05、P<0.01)。免疫细胞化学检测可见舌癌细胞中Cx43异常定位于细胞浆中和/或细胞膜不与邻近细胞接触的游离缘上。Tca8113经ATRA诱导后,Cx43蛋白表达增加。结论:Cx43表达的改变与OSCC的发生和发展有关。ATRA可以通过上调Cx43表达,实现对肿瘤生长的抑制     

间隙连接蛋白43在口腔颌面部鳞癌组织及舌癌细胞株(Tca8113)中表达的研究

目的:探讨间隙连接蛋白43(Cx43)在口腔鳞癌组织(oscc)和舌鳞癌细胞株(Tca8113)中的表达及其生物学行为的关系:细胞分化诱导剂全反式维甲酸(ATRA)对人舌鳞癌细胞株(Tca8113)中Cx43表达的影响.方法:应用免疫组织、细胞化学、免疫荧光及结合免疫印迹技术,观察OSCC组织中以及ATRA对Tca8113细胞株进行培养及分化诱导后Cx43在蛋白水平的变化.结果:Cx43在正常口腔鳞状上皮主要表达于相邻细胞间相互接触的细胞膜上,而在OSCC组织中,Cx43细胞膜表达与组织的分化程度、转移之间有显著性差异(Cx43:x2=7.42、12.43,P＜0.05、P＜0.01).免疫细胞化学检测可见舌癌细胞中Cx43异常定位于细胞浆中和/或细胞膜不与邻近细胞接触的游离缘上.Tca8113经ATRA诱导后,Cx43蛋白表达增加.结论:Cx43表达的改变与OSCC的发生和发展有关.ATRA可以通过上调Cx43表达,实现对肿瘤生长的抑制     

缝隙连接蛋白43和E-钙黏素在口腔颌面部鳞癌组织中的表达及意义

目的 :探讨缝隙连接蛋白 43 (Cx43 )和E 钙黏素 (E cad)在口腔鳞癌组织中的表达及其生物学行为的关系。方法 :SABC法对 8例正常口腔鳞状上皮 ,2 9例不同分化程度的口腔鳞癌 (包括舌癌 )石蜡切片进行Cx43和E cad表达的半定量检测 ;同时应用免疫细胞化学对舌癌细胞株 (Tca8113 )Cx43和E Cad的表达进行检测。结果 :Cx43和E cad在正常口腔鳞状上皮主要表达于细胞膜上 ,Cx43和E Cad表达的阳性面积和灰度值在正常口腔鳞状上皮与高分化鳞癌之间无明显差异 (P >0 .0 5 )。但随着病理分级的升高 ,两指标的下降具有统计学意义 (P <0 .0 5 )。在口腔鳞癌组织中 ,Cx43和E cad的表达与组织的分化程度、转移之间有显著性差异 (Cx43 :χ2 =7.42、12 .43 ,P <0 .0 5、P <0 .0 1;E cad :χ2 =7.79、9.688,P <0 .0 5、P <0 .0 1)。同一标本中Cx43和E cad表达具有正相关性和一致性 (r =0 .5 77,P <0 .0 0 0 5 )。结论 :Cx43和E Cad的表达水平可作为口腔鳞癌分化和转移的生物学标志。     

E-Cadherin和CD44v6对Tca8113细胞系侵袭性影响的实验研究

目的：通过检测粘附分子在立体胶原凝胶培养系统中对口腔黏膜鳞状细胞癌（SCC）细胞侵袭性的影响，加深了解口腔癌细胞侵袭和转移的可能机制，并评估其作为口腔癌预后判断指标的可行性。方法：应用免疫组织化学方法检测粘附分子E-cadherin(E-cad)和CD44v6在舌鳞癌细胞系Tca8113细胞的表达；同时在体外建立鼠尾胶原凝胶三维立体侵袭系统，在此系统中观察粘附分子对Tca8113细胞侵袭胶原能力的影响。结果：免疫组织化学检测显示，E－cad在Tca8113细胞有阳性表达，而CD44v6表达阴性；胶原凝胶侵袭实验表明：E-cad可以有效地减少Tca8113细胞在胶原凝胶中的浸润细胞数和程度（0．01＜P＜0．05）。结论：虽然粘附分子只是影响肿瘤侵袭和转移的重要因素之一，但体外实验表明：E-cad具有抑制肿瘤细胞胶原侵袭的作用，提示E-cad有可能成为一种较好的临床评判口腔黏膜鳞癌预后的有用指标。     

全反式维甲酸提高HSV-TK/GCV系统治疗舌鳞癌旁观者效应的研究

目的：探讨全反式维甲酸（all-trans retinoic acid,ATRA)对单纯疱疹病毒胸苷酸激酶（herpes simplex virus thymidine kinase,HSV-TK)／丙氧鸟苷（ganciclovir,GCV)系统治疗舌鳞癌旁观者效应的增强作用及机制。方法：应用免疫细胞化学、流式细胞仪等技术，对ATRA诱导舌鳞癌细胞系（Tca8113)细胞间隙连接蛋白基因（Cx43的表达进行分析；采用析因分析法分析ATRA对HSV－TK／GCV系统旁观者效应的影响。结果：舌鳞癌细胞经10^-7mol/L-10^-5mol/L ATRA处理后Cx43蛋白的表达明显提高；阳性细胞计数率由处理前的5．17％上升至30．53％（10^-5mol/L ATRA)，经t检验处理组与非处理组间差异有显著性（P＜0．01）；舌鳞癌细胞经ATRA处理后增强了HSV－TK／GCV系统的旁观者效应，两者间存在交互作用（P＜0．05）。结论：ATRA可显著提高HSV－TK／GCV系统的旁观者效应，该作用可能通过诱导Cx43蛋白的表达而实现。     

EGFRmAb抑制口腔鳞癌细胞增殖的研究

目的 研究表皮生长因子受体单克隆抗体(EGFRmAb)对口腔鳞癌细胞增殖的抑制作用及其作用机理。方法 对Tca8113舌鳞癌细胞系给予不同浓度的EGFRmAb处理，通过分析细胞生长曲线和克隆形成抑制率，观察EGFRmAb225对舌鳞癌细胞的增殖抑制作用，并通过分析细胞周期再分配及细胞周期相关蛋白p27kipl的表达，探讨其作用机制。结果 EGFRmAb可抑制舌鳞癌细胞的增殖和克隆形成，可以导致G1期细胞比例上升和S期细胞比例下降，并使p27kipl的表达上调。结论 EGFRmAb可以抑制舌鳞癌细胞的增殖，其机制与细胞的G1期阻滞有关。     

放疗对舌鳞癌Tca 8113细胞多药耐药蛋白及耐药性的影响

目的：探讨放疗对舌鳞癌Tca 8113细胞和耐药的Tca 8113／CBDEA细胞耐药性的影响。方法：应用免疫组化SP法检测放疗对P-糖蛋白（P-glycoprotein，P—gP）、多药耐药相关蛋白1（muhidrug resistance associate protein 1，MRP1）和谷胱甘肽硫-转移酶π（glutathione S—tranferase π，GST-π）表达的影响和检测放疗对细胞内阿霉素浓度的影响。结果：Tca 8113／CBDEA细胞在放疗后4hP—gP，MRP1，GST-π耐药蛋白表达无明显上升，24h耐药蛋白的表达明显升高（P〈0．01），Tca8113细胞的耐药蛋白表达在4h和24h时均有明显上升（P〈0．01）。放疗以后肿瘤细胞内阿霉素（ADM）浓度有明显下降。结论：放疗可引起舌鳞癌细胞的耐药。提醒我们对舌癌患者进行放疗和化疗的方案设计时应考虑此点。     

β2肾上腺素受体在口腔鳞癌中的表达研究

目的：探讨B2-AR在口腔鳞状细胞癌（oralsquamous cell carcinoma，OSCC）中的表达及其在口腔鳞癌淋巴结转移中的作用。方法：采用免疫组化染色、RT—PCR和Westernblot，检测β2-AR在65例口腔鳞癌组织、10例正常口腔黏膜组织、Tca8113细胞系中的表达，比较β2-AR表达与口腔鳞癌临床病理参数之间的关系。结果：口腔鳞癌组织中β2-AR的表达与正常口腔黏膜组织中β2-AR的表达之间存在显著差异（P=0．004）。在口腔鳞癌中，有淋巴结转移者的β2-AR阳性率为85．3％，无淋巴结转移者的阳性率为48．3％，两者之间的差异具有显著性（P：0．001）。RT—PCR和Western检测表明，口腔鳞癌组织和Tca8113细胞系中均有β2-AR表达，而正常口腔黏膜组织中无β2-AR表达。结论：β2-AR在口腔鳞癌中的表达显著升高，可能在口腔鳞癌发生和淋巴结转移中发挥一定的作用。     

膜联蛋白A1表达下降在口腔鳞癌中的意义

目的：研究膜联蛋白A1（ANXA1）在口腔鳞癌中的表达及其与临床病理的关系。方法：应用实时定量PCR、Western印迹方法和免疫组化方法检测ANXA1在口腔鳞癌细胞株和30例原发口腔鳞癌中的表达，采用SPSS10．0软件包对数据进行非参数检验。结果：与人永生化口腔黏膜上皮细胞（HIOEC）相比，Tca8113、TSCC、OSC和NT细胞中ANXA1的mRNA表达降低；Tca8113、TSCC、CAL-27、OSC和NT细胞中ANXA1的蛋白表达降低。30例口腔鳞癌组织标本中，ANXA1的mRNA和蛋白表达均较癌旁组织降低（p〈0．001）。ANXA1的表达水平与肿瘤的病理分化程度有关（mRNA：P=0．007；蛋白：P=0．006），与肿瘤大小、临床分期、淋巴结转移无关。结论：ANXA1在口腔鳞癌中表达降低，可能与肿瘤的发生、发展和组织分化有关。     

着丝粒蛋白-H对舌鳞癌细胞增殖促进作用的研究

目的探讨导致恶性肿瘤出现细胞染色体非整倍数现象的着丝粒蛋白-H（CENP-H）在舌鳞癌中的表达情况．及其对舌鳞癌细胞增殖的影响。方法舌鳞状细胞癌组织及其癌旁舌黏膜组织组成配对子．采用RT—PCR、Westen blot分别检测8对配对子的舌鳞癌系TSCCa、Tca8113及原代培养的舌黏膜细胞中CENP-HmRNA水平和蛋白的表达水平：采用免疫组织化学SP法检测同样8对配对子舌黏膜中CENP-H的表达：采用MTT法、克隆形成实验法分析转染CENP—H对TSCCa细胞增殖能力的影响。结果舌鳞状细胞癌中CENP-H在mRNA、蛋白质水平的表达高于舌黏膜上皮,且差异有统计学意义;免疫组化显示CENP—H高表达,且阳性染色定位于肿瘤细胞的细胞核,而在舌黏膜鳞状上皮细胞中未见表达;MTT法、克隆形成试验显示转染CENP—H后舌鳞癌细胞增殖能力明显高于未转染的对照组细胞（P〈0．001）。结论舌鳞癌细胞中高表达的CENP—H对舌鳞癌细胞增殖起到促进作用。在舌鳞癌的发生发展中可能扮演重要角色。     

All-trans retinoic acid restores gap junctional intercellular communication between oral cancer cells with upregulation of Cx32 and Cx43 expressions in vitro

Objective: All-trans retinoic acid (ATRA) has been demonstrated to inhibit tumor growth by restoration of gap junctional intercellular communication (GJIC) via upregulation of connexin (Cx) expression in some solid tumors. However, the relationship between ATRA and GJIC remains unclear in oral squamous cell carcinoma (OSCC). The aim of this study was to investigate the effect of ATRA on the GJIC function of OSCC. Study design: We measured the effects of ATRA on the viability and cell cycle distribution of SCC9 and Tca8113 OSCC cells. The GJIC function was observed using the scrape-loading dye transfer technique, and the mRNA and protein levels of Cx32 and Cx43 were detected by qRT-PCR, Western blot, and immunofluorescence assays. Results: ATRA inhibited the growth of OSCC cells in a dose- and time-dependent manner (P <0.05) and caused cell cycle arrest. ATRA-treated cells showed a 2.69-fold and 2.06-fold enhancement of GJIC in SCC9 and Tca8113 cells, respectively (P <0.05). Moreover, ATRA induced upregulation of Cx32 and Cx43 at both the mRNA and protein levels in OSCC cells. Conclusion: Our results indicated that restoration of GJIC via enhanced Cx32 and Cx43 expression might serve as a novel mechanism for the anti-tumor effect of ATRA in OSCC. Key words:All-trans retinoic acid, oral squamous cell carcinoma, connexin, gap junctional intercellular communication.     

Cx31.1蛋白在舌癌细胞中的表达及其对细胞通讯功能的影响

目的：探讨细胞缝隙连接蛋白（connexin)Cx31.1在人舌鳞癌细胞系Tca8113中的表达及其对细胞间隙连接通讯的影响。方法：应用流式细胞仪及其Lucifer Yellow划痕荧光传输技术,研究六亚甲基二乙酰胺（HMBA）作用对Tca8113细胞Cx31.1蛋白表达,以及细胞生长状态和间隙连接通讯功能的调节作用,结果：Tca8113细胞经HMBA处理后,流式细胞仪分析,C 31.1蛋白表达的阳性细胞计数率由1．7％上升至30．3％,Tca8113细胞生长明显受到抑制,推测细胞间隙连接通讯功能得到部分恢复,结论：HMBA可上调Cx31.1蛋白在Tca8113细胞中的表达,可能命名细胞间隙连接通讯功能得到恢复,并实现对舌癌恶性表型的逆转作用。     

口腔癌相关成纤维细胞对舌癌细胞株侵袭特性的影响

目的 采用重建基底膜细胞侵袭实验,研究直接分离自舌癌组织旁的癌相关成纤维细胞（CAFs）对舌癌细胞株侵袭特性的影响,探讨CAFs在口腔鳞癌发展中的作用。方法 以Matrigel模拟重建基底膜,采用Transwell小室建立口腔CAFs与舌癌细胞株Tca8113的交互作用模型,观测CAFs对Tca8113侵袭特性的影响。结果 与正常成纤维细胞（NFs）相比,CAFs能促使更多的Tca8113细胞穿透Matrigel（P<0.05）。结论 口腔CAFs能促进舌癌细胞株Tca8113
的侵袭,在口腔鳞癌发展中起重要作用。     

P75神经营养因子受体在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义

目的:研究口腔鳞状细胞癌中p75神经营养因子受体(p75NTR)的表达,探讨p75NTR作为预测口腔鳞状细胞癌预后指标及将其作为肿瘤干细胞标志物的可能性。方法:采用SP免疫化学方法,对舌鳞状细胞癌细胞系Tca8113及43例手术切除口腔鳞状细胞癌标本进行p75NTR表达的检测,另外选取5例癌旁组织及8例正常组织作为对照。应用SPSS16.0软件包,采用行×列表资料的χ2检验进行统计学分析。结果:p75NTR在Tca8113细胞膜中阳性表达。43例口腔鳞状细胞癌组织中,p75NTR阳性表达33例,在癌旁组织及正常对照组中没有表达。p75NTR均定位于细胞膜上,于癌巢中分散分布,且常有聚集性分布趋势。p75NTR表达与临床分期(P<0.05)及有无淋巴结转移(P<0.05)相关。结论:p75NTR的表达可以作为预测口腔鳞状细胞癌预后的指标,但还不能将其单独作为肿瘤干细胞的标志物,其在肿瘤发生、发展中的作用及机制仍需进一步研究。     

RhoA小干扰RNA对舌癌细胞Tca8113增殖、侵袭影响的体外实验

目的 体外实验研究Ras基因家族同源物A(ras homolog gene family,member A,RhoA)小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)在舌癌转移中的作用.方法 登录Genebank确定人RhoA基因序列,利用RNA干扰技术针对RhoA的基因序列设计4条短链RNA,构建干扰表达载体,利用LipofectamineTM2000介导法将RhoA siRNA转染至舌癌细胞系Tca8113.转染细胞后48 h检测瞬时表达效率,经杀稻瘟菌素筛选及克隆化培养获得稳定抗性克隆转染株后,蛋白质印迹法检测RhoAsiRNA转染后的抑制效应,细胞计数绘制细胞生长曲线以观察RhoA siRNA转染前后细胞株的生长速度;划痕实验和Millicell小室实验检测转染细胞株的迁移力与侵袭力.结果 舌癌细胞转染RhoA siRNA后:RhoA蛋白表达下降;细胞倍增时间从38.0 h延长至45.7 h;细胞克隆形成率由35.2%降低至15.8%;细胞迁移能力减弱;细胞侵袭能力由100%降至58.9%,显著减弱.结论 RhoA siRNA能有效抑制舌癌Tca8113细胞中RhoA的表达,从而降低细胞增殖水平以及细胞侵袭力和迁移力,表明RhoA siRNA具有抑制舌癌细胞生物学特性的能力,提示RhoA在舌癌转移中可能发挥重要作用.     

EGFR 抑制剂对舌鳞癌多药耐药细胞 Tca8113／CBP耐药蛋白的影响

目的：探讨表皮生长因子受体（ EGFR）抑制剂在舌鳞癌多药耐药中的作用。方法：免疫细胞化学技术和Western blot方法检测舌癌细胞系Tca8113及多药耐药细胞系Tca8113／CBP EGFR的表达,Western blot检测EGFR受到抑制后舌癌多药耐药细胞Tca8113／CBP耐药蛋白MRP,GTS-π的表达。结果：细胞系Tca8113和Tca8113／CBP均有EGFR的表达（P＞0．05）,EGFR受到抑制后细胞Tca8113／CBP的多药耐药蛋白MRP,GST-π的表达均下降（P＜0．05）。结论：抑制EGFR可下调舌癌多药耐药细胞耐药蛋白的表达。     

E-cad、CD44V6在口腔鳞癌组织中的表达及其相关性研究

目的 :分析E 钙粘蛋白 (E cadherin ,E cad)和CD44V6在口腔黏膜鳞癌及其癌变过程中的表达规律 ,探讨它们的异常表达与口腔黏膜癌变、转移的关系。方法 :采用免疫组织化学SP法分别检测E cad、和CD44V6在 17例正常口腔黏膜、6例口腔黏膜异常增生和 5 2例口腔黏膜鳞癌的不同表达。结果 :其中 ,E cad在正常口腔黏膜、口腔黏膜异常增生的阳性表达率明显高于在口腔黏膜鳞癌中的阳性表达率 ;而CD44V6在正常口黏膜、口腔黏膜异常增生的阳性表达率明显高于在口腔黏膜鳞癌中的阳性表达率 ;同时 ,E cad的阳性表达率随肿瘤的分化程度降低而降低 ,CD44V6的阳性表达率随肿瘤的分化程度降低而升高 ;E cad和CD44V6之间的关系表现为负相关 ,同时 ,CD44V6与肿瘤的转移密切相关。结论 :E cad和CD44V6在口腔黏膜鳞癌的分化和转移过程中起重要作用 ,CD44V6的表达与肿瘤的不良分化和转移密切相关 ,而E cad的表达则对患者有保护趋势。