遗传性鱼鳞病ALOX12B基因的新型致病位点：1例火棉胶样女婴的家系分析

【摘要】 目的 探讨一家庭连续3胎火棉胶样婴儿的突变基因及遗传方式。方法 先证者因出生时周身广泛皮肤干燥、皲裂的表现被诊断为火棉胶样婴儿。父母表型正常,其第1、2胎出生后均存在皮肤干燥、皲裂,且在出生后数日死亡。提取患儿及其父母外周血DNA,进行全基因组外显子捕获测序,并用Sanger测序验证。结果 患儿携带ALOX12B基因复合杂合突变：错义突变c.1405 C>T（p.R469W）和移码突变c.68_69ins C（p.L24fs）,分别遗传自其父母。结论 患儿诊断为遗传性鱼鳞病,为常染色体隐性遗传。ALOX12B基因错义突变c.1405 C>T和移码突变c.68_69ins C可能为引起该患儿临床表型的病因,该移码突变目前国内外尚无报道。     

Carvajal综合征一例伴桥粒斑蛋白基因新突变

【摘要】 目的 对1例临床表现为羊毛状发，膝盖、掌跖角化性皮损，暂无心脏症状的患儿进行基因突变检测。方法 收集患儿及其父母的临床资料。提取患儿、其父母及100例无关健康对照者外周血DNA，采用二代皮肤靶向测序包检测患儿的基因突变，应用Sanger测序法进行验证。结果 患儿女，3岁，出生头发卷曲，8月龄出现掌跖角化并渐累及膝盖，其父母表型正常。测序发现，患儿桥粒斑蛋白（DSP）基因第23号外显子存在移码突变c.5152dupT（p.L1718Ffs*15），DSP基因第24号外显子检测到无义突变c.C6478T（p.R2160X）。其母亲DSP基因第23号外显子亦存在c.5152dupT移码突变，但第24号外显子未检测到相关突变。其父亲及100例健康对照中均未检测到相关突变。诊断：Carvajal综合征。结论 该例Carvajal综合征患儿存在DSP基因复合杂合突变c.5152dupT（p.L1718Ffs*15）和c.C6478T（p.R2160X），可能与其发病有关。     

Bjornstad综合征致病BCS1L基因的新发突变位点研究

【摘要】 目的 检测1例以先天性头发扭曲和感音性听力丧失为主要表现的Bj-rnstad综合征（扭曲发综合征）患者的致病基因BCS1L的突变情况。方法 收集患者临床资料，提取患者及其父母的外周血DNA，PCR扩增BCS1L基因全部外显子及侧翼序列并进行Sanger测序，测序结果与正常序列进行比对；取患者头发进行扫描电镜检查。结果 患者BCS1L基因存在2处突变：①第4号外显子上存在杂合无义突变，即第144位密码子CGA→TGA，导致其编码氨基酸序列由精氨酸变为终止密码子（p.R144*），此为BCS1L基因突变导致Bj-rnstad综合征新发现的致病突变位点，属国际首例；②第8号外显子上存在杂合错义突变，即第306位密码子CGC→CAC，导致其编码氨基酸序列由精氨酸变为组氨酸（p.R306H）。患者母亲仅在BCS1L基因第4号外显子发生c.430 C>T杂合突变（p.R144*），患者父亲仅在BCS1L基因第8号外显子发生c.917 G>A杂合突变（p.R306H）。扫描电镜显示，患者发干以不规则的间隔出现扁平、沟槽和沿长轴的扭曲。结论 首次报道BCS1L基因第144位密码子CGA→TGA导致的编码终止为该基因突变导致Bj-rnstad综合征的新发突变位点，BCS1L基因复合杂合突变与患者的临床表现相关，基因检测有助于Bj-rnstad综合征的诊断。     

DSP基因突变致皮肤脆性-羊毛状发综合征1例并文献复习

 目的 报告1例以皮肤脆性增加、少毛、厚甲为主要临床特征的遗传性皮肤病病例,并寻找其致病基因及突变位点。方法 收集病例临床资料,采集患者及父母外周血,提取基因组DNA,进行遗传性皮肤病基因靶向二代测序,过滤无效变异,Sanger测序验证可疑致病基因突变。结果 在患者血液基因组DNA中检测到桥粒斑蛋白编码基因DSP基因的c.3805C>T（p.R1269*）和c.7568_7571delAGAC（p.T2524Afs*36）复合杂合突变,父母分别携带其中一个杂合突变位点。结合致病基因及临床表现,患者被诊断为皮肤脆性-羊毛状发综合征。结论 DSP基因双等位基因功能缺失性突变很可能为患者出现皮肤表型的原因。     

常染色体隐性遗传性羊毛状发伴少毛症两家系基因突变分析

目的:检测常染色体隐性遗传性羊毛状发伴少毛患者家系的致病基因。方法:收集2例中国汉族常染色体隐性遗传性羊毛状发伴少毛家系患者及其父母外周血标本,应用二代皮肤靶向测序包检测血样中DNA的基因突变,Sanger测序进行家系验证,Minigene验证剪切突变致病性。结果:先证者1的LIPH基因检测到c.742C>A(p.His248Asn)和c.982+12A>G的复合杂合突变。先证者2的LIPH基因检测到c.629-1＿629delinsTT和c.686delAinsGTAGAACCCAACCTGGCT的复合杂合突变。一代测序验证显示复合杂合突变分别来自母亲和父亲。LIPH c.982+12A>G和c.629-1＿629delinsTT尚未报道过,Minigene验证发现,剪切突变c.982+12A>G会导致内含子滞留;剪切突变c.629-1＿629delinsTT会导致外显子跳跃和外显子缺失。结论:本文报道了LIPH的两个新剪切突变,通过家系验证和Minigene验证了剪切突变的致病性,丰富了LIPH导致常染色体隐性羊毛状发伴少毛的突变谱。     

不伴套叠性脆发的2例Netherton综合征致病基因突变检测

目的:通过基因检测的方法,确诊2例不伴有套叠性脆发表现的Netherton综合征患者。方法:采集患者临床资料,进行皮损组织病理检查及毛发镜检,提取患者及其相关亲属外周血DNA,采用PCR扩增相应可疑致病基因编码区的全部外显子及其侧翼序列并测序。结果:2例患者毛发均未见明显形态学异常。基因检测发现例1及其受累的妹妹SPINK5基因发生c.2260AT纯合突变,导致氨基酸出现p.Lys754*改变,未受累的父母及兄长为该突变的杂合携带者;例2的SPINK5基因发生c.1432CT及c.1693-2del A复合杂合突变,导致氨基酸出现p.Gln478*及剪切位点改变,突变分别来自其健康父母。200例健康正常对照者均未见相同突变。患者CDSN、KRT1、KRT10、KRT2及DSG1基因均未见致病性突变。结论:通过基因检测确诊2例Netherton综合征患者,基因检测为确诊临床表现不典型Netherton综合征的重要方法。     

长岛型掌跖角化病二例SERPINB7基因突变研究

目的 报告2例长岛型掌跖角化病,确定其致病基因突变。 方法 收集患者及其父母外周血和临床资料,提取基因组DNA,PCR扩增SERPINB7基因8个外显子及其侧翼序列,对扩增产物进行DNA测序以查找基因突变位点,并以200例无关健康人DNA作为对照进行扩增测序。 结果 2例患者均存在SERPINB7基因c.796C > T纯合突变,导致编码蛋白质第266位氨基酸出现终止改变（p.R266*）,其父母均为c.796C > T杂合突变,而无关健康对照未发现上述突变。 结论 SERPINB7基因的c.796C > T突变可能是引起2例患者长岛型掌跖角化病的原因。     

常染色体隐性遗传先天性角化不良一例及TERT基因突变研究

【摘要】 目的 报告1例常染色体隐性遗传先天性角化不良，检测其致病基因突变情况。方法 采集先证者及其父母外周血，提取基因组DNA，以100例健康人作为对照，运用Illumina Nextseq500测序仪检测先证者家系皮肤病相关基因编码区域的序列突变情况，致病性突变经PCR?Sanger测序验证。运用生物信息学软件Clustalw2.0、PyMOL、PolyPhen?2、SIFT及FATHMM分别对基因突变位点的保守性、蛋白结构变化及致病性进行预测。结果 先证者临床表现为颈胸部网状皮肤异色、腋窝点状色素沉着，部分趾甲萎缩、表面粗糙及口腔黏膜白斑，血常规及肝功能指标部分异常。基因检测显示，先证者携带TERT基因c.2452G>A（p.Val818Met）与c.2594G>A（p.Arg865His）复合杂合突变，其中c.2452G>A突变在HGMD中未见收录。母亲携带c.2452G>A杂合突变，父亲及100例健康对照TERT基因未见突变。生物信息软件分析显示，多个物种TERT蛋白在818与865位氨基酸位点分别为高度保守与完全保守，基因突变后对应蛋白结构存在差异。依先证者临床表现、基因检测、辅助检查及生物信息分析结果，最终诊断为常染色体隐性遗传先天性角化不良。结论 TERT基因c.2594G>A（p.Arg865His）与c.2452G>A（p.Val818Met）复合杂合突变可能是导致该先证者临床表型的原因。     

常染色体隐性遗传性羊毛状发家系调查及LIPH基因突变分析

目的:检测1例常染色体隐性遗传性羊毛状发患者家系中LIPH和LPAR6基因的突变情况。方法:收集患者临床资料,提取先证者及其家庭成员外周血DNA,采用聚合酶链反应(PCR)法扩增LIPH和LPAR6基因编码区的全部外显子及其侧翼序列并测序。检索文献并总结已有报道的LIPH基因突变位点和临床表现。结果:基因检测发现先证者及其患病弟弟的LIPH基因均发生c.742CA纯合突变,导致氨基酸出现p.His248Asn改变,其父母均为c.742CA杂合突变。结论:在1例常染色体隐性遗传性羊毛状发患者中检测到LIPH基因c.742CA(p.His248Asn)纯合突变,扩展了常染色体隐性遗传性羊毛状发的基因型和临床表型。     

KRT5基因新生突变致重度型单纯型大疱性表皮松解症一家系

【摘要】 目的 报道1例重度型单纯型大疱性表皮松解症,并检测其基因突变。方法 收集患者及其父母资料和外周血,提取基因组DNA,全外显子组测序筛查患儿致病基因,随后采用Sanger测序对家系成员进行验证。结果 患者KRT5基因第7号外显子第1 429位碱基发生G→A（c.1429G>A）杂合突变,导致KRT5基因所编码的蛋白第477位谷氨酸转换成赖氨酸（p.Glu477Lys）,其父母未发现该突变。结论 该例重度型单纯型大疱性表皮松解症患者存在KRT5基因c.1429G>A（p.Glu477Lys）致病突变,属新生突变。     

A case of monilethrix caused by novel compound heterozygous mutations in the desmoglein 4 (DSG4) gene

Monilethrix is a rare condition characterized by a hair shaft anomaly known as beaded hair. It can show either an autosomal dominant or an autosomal recessive inheritance pattern. The autosomal dominant form of monilethrix is caused by mutations in the basic hair keratin genes KRT81, KRT83 or KRT86, while the autosomal recessive form results from mutations in the desmoglein 4 (DSG4) gene. We define the molecular basis of monilethrix in a Japanese patient who has had sparse and fragile scalp hairs since birth. We performed mutation analysis of candidate genes. In addition, we performed co-immunoprecipitation assays and immunofluorescence studies in cultured cells to investigate the functional consequences caused by a mutation. Mutation analysis resulted in the identification of novel compound heterozygous mutations, c.624delG (p.M208IfsX4) and c.2468G>A (p.W823X), in the DSG4 gene of the patient. Furthermore, we show that the mutant DSG4 protein with the mutation p.W823X severely affects the affinity to plakoglobin protein, which may contribute to disruption of desmosomes in the patient's hair shaft. Our results further underscore the crucial role of the DSG4 gene in differentiation of the hair shaft in humans.     

Netherton综合征一例SPINK5基因突变研究

目的 检测Netherton综合征患者SPINK5基因的突变情况。 方法 收集患者临床资料,提取患者及其相关亲属外周血DNA,用PCR扩增SPINK5基因编码区的全部外显子及其侧翼序列并测序。 结果 直接测序发现患者SPINK5基因的第13号外显子中的第1111位碱基发生C→T杂合突变（c.1111C > T）,导致其编码第371位氨基酸变为终止密码子（p.R371X）;第32号外显子中的第3121位碱基发生C→T杂合突变（c.3121C > T）,导致其编码第1041位氨基酸发生错义突变（p.R1041C）,其健康父母为相应突变的杂合携带者,200例健康对照未见该突变。 结论 SPINK5基因的p.R371X及p.R1041C复合杂合突变可能是引起该患者临床表现的病因之一。     

LEOPARD综合征一例PTPN11基因突变研究

目的 对1例LEOPARD综合征（LS）家系进行PTPN11基因突变检测,以明确其致病基因。 方法 收集该LS家系的临床资料,提取外周血DNA、通过PCR扩增PTPN11基因编码区的全部外显子及其侧翼序列并测序,以表型正常家系成员及50例健康人为健康对照。 结果 发现该家系内患者存在PTPN11基因的错义突变c.836A > G,在家系中正常人及对照者未发现上述突变。 结论 错义突变PTPN11的c.836A > G为导致该家系临床表型的原因。     

表型温和的1型神经纤维瘤病：5个家系基因突变分析

【摘要】 目的 检测表型温和的1型神经纤维瘤病（NF1）患者的基因突变。方法 2017年6月至2020年6月于上海市奉贤区皮肤病防治所皮肤科门诊收集5例表型温和、仅有皮损的NF1先证者及其家系成员,在家系调查的基础上,观察和记录NF1的临床表型,并利用二代靶向基因测序结合Sanger测序来检测和验证致病突变。结果 5例先证者都仅有皮损（包括咖啡斑、雀斑、神经纤维瘤）,无其他系统损害;5个家系先证者共发现5种突变,分别位于NF1基因的不同外显子中,包括1个大片段缺失突变（hg38：chr17：31327199-31335928 del 8 730 bp）、1个剪切突变（c.7970+1G>T）、1个插入突变（c.3011 _3012insTATG,p.N1004fs*）、1个缺失突变（c.1754_1757delTAAC, p.T586Vfs*18）和1个无义突变（c.C503G,p.S168X）,前3种是未经报道的新突变。结论 在5个先证者表型温和的NF1家系中检测出5种突变,鉴定出3种新突变,丰富了NF1的突变谱。     

An autosomal recessive form of monilethrix is caused by mutations in DSG4: clinical overlap with localized autosomal recessive hypotrichosis

Monilethrix is a structural defect of the hair shaft usually inherited in an autosomal dominant fashion and caused by mutations in the hHb1, hHb3, and hHb6 keratin genes. Autosomal recessive inheritance in this disease has been sporadically reported. We encountered 12 Jewish families from Iraq, Iran, and Morocco with microscopic findings of monilethrix, but with no evidence of vertical transmission. Since no mutations were found in these three hair keratin genes, we examined nine chromosomal regions containing gene clusters encoding skin and hair genes. On chromosome 18q, a common haplotype in the homozygous state was found among all seven Iraqi patients, but not in 20 controls (P<0.0001). Sequencing of the main candidate gene from this region revealed four different mutations in desmoglein 4 (DSG4). Mutations in DSG4 have been previously reported in localized autosomal recessive hypotrichosis, a disorder that shares the clinical features of monilethrix but lacks the characteristic microscopic appearance of the hair shaft. Our findings have important implications for genetic counseling to monilethrix patients and families, and suggest that DSG4-associated hair disorders may be more common than previously thought.     

寻常型鱼鳞病患者皮损中间丝聚合蛋白及其基因的改变

【摘要】 目的 探讨寻常型鱼鳞病患者中间丝聚合蛋白（FLG）基因突变与FLG及兜甲蛋白在寻常型鱼鳞病患者皮损组织中的表达及其临床意义。 方法 采用SP免疫组化方法检测10例汉族寻常型鱼鳞病患者皮损及14例健康对照皮肤组织内FLG及兜甲蛋白的表达,用图像分析软件ImagePro plus（IPP）判定FLG及兜甲蛋白在寻常型鱼鳞病患者皮损及正常皮肤组织中表达的阳性单位（PU值）。提取10例汉族寻常型鱼鳞病患者及100例健康对照者的基因组DNA,采用PCR及直接测序法,对FLG基因已报道的13个突变位点（3321delA、441delA、1249insG、E1795X、S3296X、R501X、2282del4、R2447X、S2889X、7945delA、3702delG、Q2417X、R4307X）进行测序。 结果 FLG在寻常型鱼鳞病皮损及健康对照皮肤角质层、颗粒层、棘层及基底层细胞均有表达,胞质染色多见;寻常型鱼鳞病皮损阳性染色PU值明显低于健康对照皮肤（分别为0.2082 ± 0.0080和0.2300 ± 0.0228,两组比较,t = 3.30,P < 0.01）。兜甲蛋白在寻常型鱼鳞病皮损及健康对照皮肤颗粒层、棘层及基底层细胞均有表达,胞质及胞核染色多见;寻常型鱼鳞病皮损表达的PU值明显低于健康对照皮肤（分别为0.1370 ± 0.0112和0.1493 ± 0.0073,两组比较,t = 3.07,P < 0.01）。7例寻常型鱼鳞病患者检测到FLG 3321delA突变位点,2例检测到FLG 441delA突变位点,健康对照组未检测到FLG基因突变位点。 结论 FLG（3321delA,441delA）可能是汉族寻常型鱼鳞病患者的突变位点之一。FLG及兜甲蛋白表达下降可能与寻常型鱼鳞病患者皮肤屏障功能障碍有关。     

伴皮肤鳞状细胞癌的角膜炎-鱼鳞病-耳聋综合征一例GJB2基因突变研究并文献复习

目的 以GJB2基因为候选基因,研究1例伴有皮肤鳞状细胞癌的角膜炎-鱼鳞病-耳聋综合征患者的分子病因。 方法 收集1例伴有皮肤鳞状细胞癌的角膜炎-鱼鳞病-耳聋综合征患者临床资料,提取患者及其父母的外周血DNA,用PCR扩增GJB2基因的第2外显子后直接测序,检测患者GJB2基因的突变情况。 结果 患者GJB2基因中核苷酸序列外显子2第148位碱基由G突变为A（c.148G > A）,此突变导致GJB2基因第50位氨基酸密码子由GAC替换为AAC,其编码的连接蛋白Cx26第50位天冬氨酸转换成天冬酰胺（p.Asp50Asn ）。此外,GJB2基因外显子2第79位碱基由G突变为A（c.79G > A）,突变导致连接蛋白Cx26第27位的缬氨酸转换成异亮氨酸（p.Val27Ile）。患者的父母未检测到GJB2基因突变位点。文献检索发现国外已有13例角膜炎-鱼鳞病-耳聋综合征伴皮肤黏膜鳞状细胞癌的病例报道,经过基因测序确诊的7例患者均为GJB2基因c.148G > A突变。结论 GJB2基因突变可能是导致本例角膜炎-鱼鳞病-耳聋综合征临床表型的致病原因,c.148G > A突变位置可能与皮肤鳞状细胞癌发生有关。     

基因检测诊断仅有咖啡色斑表现的儿童Ⅰ型神经纤维瘤病一例

目的 采用基因诊断一例散发的仅具有咖啡色斑的Ⅰ型神经纤维瘤病患儿。方法 在患者家系调查的基础上,收集患者和父母的血样,并采集健康对照血样100份,采用PCR技术对Ⅰ型神经纤维瘤病致病基因NF1基因进行扩增,并对其产物进行测序。结果 该患者父母及健康对照NF1基因为正常,具有咖啡色斑的患儿NF1基因第21外显子存在突变Q1174X,即第3520位碱基由胞嘧啶（C）转化为胸腺嘧啶（T）,形成提前终止密码子。结论 该患儿经基因诊断为一例散发的Ⅰ型神经纤维瘤病,NF1基因Q1174X突变是其致病突变。