热休克蛋白A12B在大鼠角膜、晶状体和视网膜组织中的表达

目的　观察大鼠角膜、晶状体、视网膜中热休克蛋白Ａ１２Ｂ（ｈｅａｔｓｈｏｃｋｐｒｏｔｅｉｎＡ１２Ｂ,ＨＳＰＡ１２Ｂ）的表达。方法　取ＳＰＦ级ＳＤ大鼠９只,用水合氯醛处死后立即摘取眼球,采用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ和ＲＴ-ＰＣＲ分别检测大鼠角膜、晶状体和视网膜组织中ＨＳＰＡ１２Ｂ蛋白和ｍＲＮＡ的表达情况;免疫荧光化学法观察ＨＳＰＡ１２Ｂ在角膜、晶状体和视网膜组织中的表达及定位。结果　Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ和ＲＴ-ＰＣＲ检测结果显示:ＨＳＰＡ１２Ｂ在大鼠角膜、晶状体、视网膜均有少量表达,其中角膜组织（０．２８０±０.０３４、０．３７４±０.０３１）中表达强度相对最低,晶状体（０．３３１±０．０３６、０．４５３±０．０４０）次之,视网膜组织（０．４５３±０．０２９、０．６８０±０．０４５）中表达强度最高。免疫荧光化学法结果表明,在角膜组织中ＨＳＰＡ１２Ｂ主要表达于上皮层,其中基底细胞染色最强,而角膜基质细胞上仅有弱表达;在晶状体组织中ＨＳＰＡ１２Ｂ主要表达于上皮细胞和皮质;在视网膜组织中ＨＳＰＡ１２Ｂ主要表达于视网膜神经纤维层、神经节细胞层和内核层,并与ＮｅｕＮ标记的神经元及ＧＳ标记的Ｍüｌｌｅｒ细胞存在共定位。结论　ＨＳＰＡ１２Ｂ在大鼠角膜、晶状体、视网膜组织中均有表达,且呈特异性表达。     

组织激肽释放酶在糖尿病视网膜病变患者血清中的变化及其调节血管新生机制

目的　检测组织激肽释放酶（ｔｉｓｓｕｅｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ,ＴＫＬＫ）、血管内皮细胞生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＶＥＧＦ）和可溶性细胞间黏附分子-１（ｓｏｌｕｂｌｅｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒａｄｈｅｎｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌ-１,ｓＩＣＡＭ-１）在糖尿病视网膜病变（ｄｉａｂｅｔｉｃｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ,ＤＲ）患者血清中的变化,观察ＴＫＬＫ在低氧条件下对人视网膜微血管内皮细胞（ｈｕｍａｎｒｅｔｉｎａｌｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ,ＨＲＭＥＣｓ）中ＶＥＧＦ和ＩＣＡＭ-１表达的影响。方法　收集２型糖尿病患者６０例,按照ＤＲ分期标准将患者分为糖尿病无ＤＲ组（ＤＭ组）、非增生性ＤＲ组（ＮＰＤＲ组）和增生性ＤＲ组（ＰＤＲ组）,收集同期在本院体检的志愿者作为对照组,每组２０例。ＥＬＩＳＡ法检测血清中ＴＫＬＫ、ＶＥＧＦ和ｓＩＣＡＭ-１的水平。体外ＨＲＭＥＣｓ分别进行常氧和低氧培养,不同浓度重组ＴＫＬＫ处理后,检测细胞增殖、凋亡以及ＶＥＧＦ和ＩＣＡＭ-１的表达。结果　ＤＭ、ＮＰＤＲ和ＰＤＲ组患者血清中ＴＫＬＫ、ＶＥＧＦ和ｓＩＣＡＭ-１水平明显高于对照组,４组总体差异有统计学意义（Ｆ＝２８．８０５,Ｐ＝０．００２;Ｆ＝３２．０４１,Ｐ＝０．００２;Ｆ＝２６．１６９,Ｐ＝０．００１）;ＰＤＲ患者血清中ＴＫＬＫ、ＶＥＧＦ和ｓＩＣＡＭ-１水平显著高于ＤＭ和ＮＰＤＲ组（均为Ｐ＜０．００１）。ＴＫＬＫ与ＶＥＧＦ（ｒ＝０．６２３,Ｐ＜０．０１）和ｓＩＣＡＭ-１水平（ｒ＝０．５９８,Ｐ＜０．０１）均呈正相关。１０μｇ?ｍＬ－１ｒｈＴＫＬＫ可显著抑制低氧诱导的ＨＲＭＥＣｓ增殖以及ＶＥＧＦ和ＩＣＡＭ-１的表达,并可促进细胞凋亡（Ｐ＜０．０５）。结论　ＴＫＬＫ通过与ＶＥＧＦ和ＩＣＡＭ-１相互作用而影响ＤＲ的进展。     

实验性视网膜缺血-再灌注损伤中坏死性凋亡相关因子的表达变化

目的　建立视网膜缺血-再灌注损伤（ｒｅｔｉｎａｌｉｓｃｈｅｍｉａｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙ,ＲＩＲＩ）模型,观察坏死性凋亡是否参与其病理过程。方法　野生型Ｃ５７小鼠随机分为对照组及实验组。对照组不做任何处理,实验组采用前房灌注法建立ＲＩＲＩ模型,并于ＲＩＲＩ后１ｄ、２ｄ、４ｄ、７ｄ分别收集视网膜或眼球,行荧光定量ＰＣＲ、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ、免疫荧光染色检测受体相互作用蛋白（ｒｅｃｅｐｔｏｒｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ,ＲＩＰ）３及ＲＩＰ１、白细胞介素-１β、白细胞介素-６、肿瘤坏死因子-α、Ｃａｓｐａｓｅ８的表达变化。结果　荧光定量ＰＣＲ检测ＲＩＰ３、ＲＩＰ１、白细胞介素-１β、白细胞介素-６、肿瘤坏死因子-α、Ｃａｓｐａｓｅ８的ｍＲＮＡ表达,与对照组比较,实验组在不同时间点均有显著升高,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．００１）。ＲＩＰ３及ＲＩＰ１表达以早期升高为主,后期逐渐下降。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ检测发现ＲＩＰ３在ＲＩＲＩ后１ｄ及２ｄ显著升高,随后呈下降趋势。组织切片免疫荧光染色也发现ＲＩＰ３在ＲＩＲＩ后１ｄ及２ｄ显著升高,随后呈下降趋势。结论　实验性ＲＩＲＩ模型中,坏死性凋亡参与了其病理过程。坏死性凋亡特异性蛋白ＲＩＰ３表达以早期升高为主,后期逐渐下降。     

血清可溶性肿瘤坏死因子受体与2型糖尿病视网膜病变相关性研究

目的　研究血清可溶性肿瘤坏死因子受体（ｓｏｌｕｂｌｅｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒ,ｓＴＮＦＲ）与２型糖尿病视网膜病变的相关性。方法　６６例２型糖尿病患者通过眼底检查和眼底荧光血管造影按照ＥＤＴＲＳ分期分为３组:无糖尿病视网膜病变（ｎｏｄｉａｂｅｔｉｃｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ,ＮＤＲ;ｎ＝２２）组、非增殖型糖尿病视网膜病变（ｎｏｎｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅｄｉａｂｅｔｉｃｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ,ＮＰＤＲ;ｎ＝２４）组和增殖型糖尿病视网膜病变（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅｄｉａｂｅｔｉｃｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ,ＰＤＲ;ｎ＝２０）组。２１名健康人作为对照组。检测４组研究对象血清中肿瘤坏死因子（ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ,ＴＮＦ）-α、ｓＴＮＦＲ-１、ｓＴＮＦＲ-２水平。组间统计分析采用非参数Ｍａｎｎ-ＷｈｉｔｎｅｙＵ检验。结果　血清中ＴＮＦ-α中位数分别为:对照组０ｐｇ·ｍＬ－１、ＮＤＲ组３．４５ｐｇ·ｍＬ－１、ＮＰＤＲ组３．９２ｐｇ·ｍＬ－１、ＰＤＲ组８．１２ｐｇ·ｍＬ－１。对照组与ＰＤＲ组（Ｐ＜０．００１）、ＮＤＲ组与ＰＤＲ组（Ｐ＝０．００８）比较差异均有统计学意义。血清中ｓＴＮＦＲ-１水平中位数:对照组１．５０ｎｇ·ｍＬ－１、ＮＤＲ组１．８８ｎｇ·ｍＬ－１、ＮＰＤＲ组２．５８ｎｇ·ｍＬ－１、ＰＤＲ组３．００ｎｇ·ｍＬ－１。对照组与ＮＰＤＲ组（Ｐ＜０．００１）、对照组与ＰＤＲ组（Ｐ＜０．００１）、ＮＤＲ组与ＮＰＤＲ组（Ｐ＝０．００７）、ＮＤＲ组与ＰＤＲ组（Ｐ＜０．００１）比较,差异均有统计学意义。血清中ｓＴ-ＮＦＲ-２中位数分别为:对照组３．８８ｎｇ·ｍＬ－１、ＮＤＲ组５．０１ｎｇ·ｍＬ－１、ＮＰＤＲ组５．２１ｎｇ·ｍＬ－１、ＰＤＲ组６．３３ｎｇ·ｍＬ－１。除了ＮＤＲ组与ＮＰＤＲ组（Ｐ＝０．０７０）间差异无统计学意义外,其他组间差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。结论　血清中ｓＴＮＦＲ与２型糖尿病视网膜病变密切相关,表明ｓＴＮＦＲ在糖尿病视网膜病变的发生发展中起到了一定的作用。对ｓＴＮＦＲ进行进一步研究可以寻找治疗糖尿病视网膜病变新的靶点。     

全视网膜激光光凝治疗高危增生型糖尿病视网膜病变的效果分析

目的　分析全视网膜激光光凝术（ｐａｎｒｅｔｉｎａｌｐｈｏｔｏｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ,ＰＲＰ）治疗高危增生型糖尿病视网膜病变（ｈｉｇｈ-ｒｉｓｋｐｒｏ-ｌｉｆｅｒａｔｉｖｅｄｉａｂｅｔｉｃｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ,ＨＲ-ＰＤＲ）临床效果、预后及影响因素。方法　回顾性分析２００８年７月至２０１５年７月西安交通大学第二附属医院眼科ＰＲＰ治疗的糖尿病视网膜病变（ｄｉａｂｅｔｉｃｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ,ＤＲ）患者８５例（１５０眼）的临床资料,依据我国糖尿病视网膜病变临床诊疗指南,根据眼底荧光血管造影（ｆｕｎｄｕｓｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎａｎｇｉｏｇｒａｐｈｙ,ＦＦＡ）检查结果分为两组:严重ＤＲ组包括重度非增生型ＤＲ（重度ＮＰＤＲ）和增生早期ＤＲ（早期ＰＤＲ）组,共９０眼,ＨＲ-ＰＤＲ组包括ＨＲ-ＰＤＲ６０眼。观察两组患者ＰＲＰ治疗的效果、术后３个月的视力,分析ＨＲ-ＰＤＲ的危险因素。结果　严重ＤＲ组ＰＲＰ术后１３．３％（１２／９０）需要补充激光,１６．６％（１５／９０）患眼黄斑水肿加重,２眼发生玻璃出血,１眼发生新生血管性青光眼。ＨＲ-ＰＤＲ组ＰＲＰ术后５５．０％（３３／６０）需要补充激光,３０．０％（１８／６０）患眼黄斑水肿加重,５眼发生玻璃体出血,３眼发生新生血管性青光眼。ＰＲＰ术后３个月,严重ＤＲ组４０．０％（３６／９０）视力下降,而ＨＲ-ＰＤＲ组６５．０％（３９／６０）视力下降。ＨＲ-ＰＤＲ患者主要的危险因素包括:年龄小于５０岁、糖尿病病程长、高糖化血红蛋白、高血脂及颈动脉Ｂ超异常。结论　ＨＲ-ＰＤＲ的概念临床意义重大,其病变进展迅速,ＰＲＰ效果不佳,需要密切随访,及时追加激光或者联合其他治疗方案。     

去整合素echistatin对糖尿病兔后发性白内障形成中信号通路PI3-K/Akt和ERK1/2的影响

目的　观察去整合素ｅｃｈｉｓｔａｔｉｎ对糖尿病兔后发性白内障形成中信号通路ＰＩ３-Ｋ／Ａｋｔ和ＥＲＫ１／２的影响,从分子水平上探讨ｅｃｈｉｓｔａｔｉｎ的作用。方法　建立糖尿病兔模型（ｎ＝２４）,随机分组并行透明晶状体囊外摘出术,术毕前房分别注入０．２ｍＬ灭菌蒸馏水（对照组,ｎ＝１２）或０．２ｍＬ１０．０ｍｇ·Ｌ－１ｅｃｈｉｓｔａｔｉｎ溶液（ｅｃｈｉｓｔａｔｉｎ干预组,ｎ＝１２）。术后１０ｄ及６周（每个时间点６眼）,裂隙灯显微镜观察两组术眼ＰＣＯ分级情况,同时摘取术眼应用ＲＴ-ＰＣＲ法检测后囊膜上信号因子Ａｋｔ和ＥＲＫ１／２ｍＲＮＡ表达情况。结果　术后１０ｄ对照组和ｅｃｈｉｓｔａｔｉｎ干预组ＰＣＯ分级比较差异无统计学意义（Ｐ＝０．０９３）,但ｅｃｈｉｓｔａｔｉｎ干预组ＰＣＯ１级眼数少于对照组;术后６周ｅｃｈｉｓｔａｔｉｎ干预组ＰＣＯ级别明显低于对照组（Ｐ＝０．００６）。对照组和ｅｃｈｉｓｔａｔｉｎ干预组ＡｋｔｍＲＮＡ相对表达量术后１０ｄ分别为０．９８１７±０．３８０４、０．４８１７±０．１６６５,术后６周分别为０．６５１７±０．２０４７、０．４０１７±０．１５１３,ｅｃｈｉｓｔａｔｉｎ干预组均明显低于对照组（Ｐ＝０．０１５,０．０３７）。对照组和ｅｃｈｉｓｔａｔｉｎ干预组ＥＲＫ１／２ｍＲＮＡ相对表达量术后１０ｄ分别为０．９４８３±０．２２７５、０．６１００±０．２８０６,术后６周分别为０．９２１７±０．２９９４、０．４６５０±０．１８００,ｅｃｈｉｓｔａｔｉｎ干预组均明显低于对照组（Ｐ＝０．０４５,０．００９）。结论　去整合素ｅｃｈｉｓｔａｔｉｎ对糖尿病兔后发性白内障的发生和发展有一定的抑制作用,其发生的机制可能与抑制信号因子Ａｋｔ和ＥＲＫ１／２表达,进而阻断信号通路ＰＩ３-Ｋ／Ａｋｔ和ＥＲＫ１／２的转导有关。     

糖尿病视网膜病变患者白内障超声乳化术后黄斑水肿的分析

目的　观察糖尿病视网膜病变患者白内障超声乳化术后黄斑水肿情况并分析其部分原因。方法　本研究为前瞻性研究,对在北京大学第三医院眼科中心行常规白内障超声乳化的糖尿病患者分别在术前及术后１个月、３个月时行相关检查并对结果进行统计学分析。结果　共６５例９６眼纳入数据分析。术后１个月、３个月视力分别为（０．０８±０．１３）ＬｏｇＭＡＲ和（０．０７±０．１１）ＬｏｇＭＡＲ,均较术前的（０．５９±０．１８）ＬｏｇＭＡＲ明显升高（均为Ｐ＜０．００１）。黄斑中心厚度术前为（２５３．６±２９．２）μｍ,术后１个月时增加至（２７７．１±１００．２）μｍ（Ｐ＝０．００８）,术后３个月时增加至（２７５．０±９４．１）μｍ（Ｐ＝０．０１０）,而黄斑内环区视网膜厚度则从术前的（３２１．３±２５．０）μｍ分别增加至术后１个月的（３４２．１±６５．６）μｍ（Ｐ＜０．００１）和术后３个月的（３４７．７±８０．０）μｍ（Ｐ＜０．００１）,黄斑外环区视网膜厚度则从术前的（２７８．８±１９．９）μｍ增加至术后１个月的（２８８．６±５０．１）μｍ（Ｐ＝０．０２５）和术后３个月的（２８９．６±５４．１）μｍ（均为Ｐ＝０．０２５）。黄斑容积从术前的（１０．１１±０．７３）ｍｍ３增加至术后１个月的（１０．６５±２．３１）ｍｍ３（Ｐ＝０．００６）和术后３个月的（１０．７３±２．４４）ｍｍ３（Ｐ＝０．００３）。术前共２２眼存在糖尿病性黄斑水肿（ｄｉａ-ｂｅｔｉｃｍａｃｕｌａｒｅｄｅｍａ,ＤＭＥ）,其中中心型ＤＭＥ２眼,非中心型ＤＭＥ１４眼,弥漫型ＤＭＥ６眼。不同ＤＭＥ分组术后１个月及３个月的黄斑中心厚度均值及改变量存在显著差异（均为Ｐ＜０．０５）。患眼术后的黄斑中心厚度与术前糖尿病视网膜病变的严重程度相关（１个月时ｒ＝０．３３１,Ｐ＝０．００１;３个月时ｒ＝０．３１８,Ｐ＝０．００２）。但糖尿病病程长短及术前是否行激光治疗与术后黄斑中心厚度无明显相关性。结论　糖尿病患者行常规白内障超声乳化术后有出现黄斑水肿的可能性,患者术后的黄斑水肿程度与术前黄斑水肿的类型以及术前糖尿病视网膜病变严重程度均相关。     

TGF-β介导的Smad信号通路在增生型糖尿病视网膜病变中的作用和意义

目的　本研究旨在观察转化生长因子β（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ-ｂｅｔａ,ＴＧＦ-β）介导的Ｓｍａｄ信号通路在增生型糖尿病视网膜病变（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅｄｉａｂｅｔｉｃｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ,ＰＤＲ）中的作用和意义,进而阐明其可能的发病机制。方法　收集正常人和糖尿病患者的血液标本,将糖尿病患者依据视网膜受累程度分为２组:无糖尿病视网膜病变（ｎｏｎ-ｄｉａｂｅｔｉｃｒｅｔｉ-ｎｏｐａｔｈｙ,ＮＤＲ）组、糖尿病视网膜病变（ｄｉａｂｅｔｉｃｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ,ＤＲ）组,根据眼底改变又分为非增生型糖尿病视网膜病变（ｎｏｎ-ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅｄｉａｂｅｔｉｃｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ,ＮＰＤＲ）组和增生型糖尿病视网膜病变（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅｄｉａｂｅｔｉｃｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ,ＰＤＲ）组。分别用ＥＬＩＳＡ检测正常人和糖尿病患者血浆中的ＴＧＦ-β１ 和ＴＧＦ-β２,Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测血浆中ＴＧＦ-β１、ＴＧＦ-β２、Ｓｍａｄ３和ｐ-Ｓｍａｄ３的蛋白表达量,比较各组差异。结果　与对照组比较,糖尿病患者各组ＴＧＦ-β１ 和ＴＧＦ-β２分泌量和ＴＧＦ-β１、ＴＧＦ-β２、ｐ-Ｓｍａｄ３的蛋白表达量均明显升高（均为Ｐ＜０．０５）;与ＮＤＲ组比较,ＤＲ各组上述指标均显著增高（均为Ｐ＜０．０５）;ＰＤＲ组上述指标均显著高于ＮＰＤＲ组（均为Ｐ＜０．０５）。结论　ＴＧＦ-β介导的Ｓｍａｄ信号通路参与了ＤＲ的发生,可能是介导ＰＤＲ发生的重要机制。     

局部应用地塞米松对翼状胬肉组织中趋化因子受体CCR3表达的影响及意义

目的　探讨术前局部应用地塞米松对趋化因子受体ＣＣＲ３在翼状胬肉中表达的影响和意义。方法　选取３０例翼状胬肉患者,分为用药组和对照组,术前２周分别局部滴用３ｇ?Ｌ－１妥布霉素地塞米松眼液或３ｇ?Ｌ－１妥布霉素眼液,取手术切除的翼状胬肉组织;ＲＴ-ＰＣＲ及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法检测趋化因子受体ＣＣＲ３ｍＲＮＡ水平及蛋白水平的表达,进一步采用免疫组织化学法检测其蛋白水平的表达。结果　翼状胬肉组织中ＣＣＲ３在ｍＲ-ＮＡ和蛋白水平均存在表达,但用药组ＣＣＲ３ｍＲＮＡ表达明显低于对照组,差异有统计学意义（ｔ＝－５７１３,Ｐ＝０．０１３）,用药组ＣＣＲ３的蛋白表达也明显低于对照组（ｔ＝－３．９１５,Ｐ＝０００１）。免疫组织化学染色显示ＣＣＲ３表达主要分布在结膜上皮细胞及部分血管内皮细胞上。结论　趋化因子受体ＣＣＲ３可能参与翼状胬肉的发生发展。地塞米松引起的ＣＣＲ３表达改变是影响翼状胬肉预后、减少术后复发的可能机制之一。     

翼状胬肉中核糖体S6蛋白磷酸化、细胞周期蛋白D1的表达及意义

目的　研究核糖体Ｓ６蛋白磷酸化（ｒｉｂｏｓｏｍａｌＳ６ｐｒｏｔｅｉｎｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ,Ｐ-Ｓ６）和细胞周期蛋白Ｄ１（ＣｙｃｌｉｎＤ１）在翼状胬肉中的表达及相关性,探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物１（ｍａｍｍａｌｉａｎｔａｒｇｅｔｏｆｒａｐａｍｙｃｉｎｃｏｍｐｌｅｘ１,ｍＴＯＲＣ１）信号通路在翼状胬肉发病机制中的作用。方法　收集翼状胬肉组织３１例,正常结膜组织１７例,利用免疫组织化学和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ进行Ｐ-Ｓ６和ＣｙｃｌｉｎＤ１的检测及比较。结果　Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测６例翼状胬肉组织中Ｐ-Ｓ６蛋白／Ｓ６蛋白表达（１．１９６±０．１０１）显著高于正常结膜组织（０．２９５±０．０５６）,差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。免疫组织化学染色结果显示:翼状胬肉中Ｐ-Ｓ６、ＣｙｃｌｉｎＤ１的阳性表达率均为１００％（２５／２５）,正常结膜组织中Ｐ-Ｓ６阳性表达率为１８．２％（２／１１）、ＣｙｃｌｉｎＤ１阳性表达率为９．１％（１／１１）,正常结膜组织与翼状胬肉组织中Ｐ-Ｓ６与ＣｙｃｌｉｎＤ１表达差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。翼状胬肉组织中Ｐ-Ｓ６与ＣｙｃｌｉｎＤ１的表达呈正相关（ｒ＝０．７５２,Ｐ＜０．０５）。结论　ｍＴＯＲＣ１信号通路在翼状胬肉发病过程中起重要作用,并可能通过调控ＣｙｃｌｉｎＤ１的表达来实现。     

糖尿病小鼠眼opticin蛋白表达的研究

目的　观察发生糖尿病与未发病非肥胖性糖尿病（NOD）小鼠玻璃体内opticin蛋白表达差异。方法　建立糖尿病NOD小鼠模型作为实验组,选用同龄NOD小鼠作为对照。颈椎脱臼法处死两组所有小鼠,摘除眼球,钝性分离玻璃体、视网膜、巩膜。采用蛋白质免疫印迹（Wesrern blot）和实时定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）对比分析实验组和对照组玻璃体、视网膜、巩膜中opticin蛋白及其相关基因（OPTC）mRNA的表达。结果　Western blot检测显示,实验组和对照组玻璃体、视网膜及巩膜中均可见opticin蛋白表达条带,主要位于相对分子质量60×10³处。实验组玻璃体、视网膜中opticin蛋白较对照组显著降低(t=4.42,4.58;P=0.002,0.002),巩膜中opticin蛋白差异无统计学意义（t=0.27,P=0.794）。RT-PCR检测显示,OPTC mRNA表达分布规律为玻璃体、视网膜、巩膜依次递减。实验组玻璃体、视网膜中OPTC mRNA表达较对照组显著降低(t=3.30,2.48;P=0.01,0.04);巩膜中OPTC mRNA表达差异无统计学意义（t=0.27,P=0.80）。结论　糖尿病NOD小鼠玻璃体、视网膜中opticin蛋白表达较未发病NOD小鼠受抑制。      

Toll样受体4对2型糖尿病小鼠视网膜病变的影响

目的　探讨Ｔｏｌｌ样受体４（ｔｏｌｌ-ｌｉｋｅｒｅｃｅｐｔｏｒ４,ＴＬＲ４）对２型糖尿病小鼠模型糖尿病视网膜病变（ｄｉａｂｅｔｉｃｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ,ＤＲ）的影响。方法　取１６周龄的健康雄性ＴＬＲ４基因缺陷小鼠Ｃ３Ｈ／ＨｅＪ（ｍｕｔａｔｉｏｎ,Ｍｕｔ）及相应野生型小鼠Ｃ３Ｈ／ＨｅＮ（ｗｉｌｄｔｙｐｅ,ＷＴ）各１２只,用链脲佐菌素（ＳＴＺ）腹腔注射建立２型糖尿病动物模型,另取４只未处理小鼠做对照,分为Ｍｕｔ组、ＷＴ组与对照组。于模型建成后１个月、２个月、４个月分别取材,每个时间点模型组分别取材４只,对照组分别取１６周龄的两种小鼠各２只眼球。通过电镜观察小鼠视网膜组织超微结构的变化,并应用ＲＴ-ｑＰＣＲ检测视网膜ＴＬＲ４及巨噬细胞炎性蛋白２（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｐｒｏｔｅｉｎ-２,ＭＩＰ-２）的ｍＲＮＡ表达。结果　糖尿病模型造模后１个月的超微电镜显示,小鼠视网膜组织即有神经节细胞及神经纤维水肿,核周间隙增宽,核固缩,胞浆颜色变淡;模型造模后２个月时毛细血管内皮细胞胞浆线粒体水肿,嵴变短,周细胞水肿;模型造模后４个月时基底膜节段性增厚,微绒毛突起,管腔狭窄,各时间点的病变ＷＴ组均重于Ｍｕｔ组。视网膜组织ＲＴ-ｑＰＣＲ结果显示,ＷＴ组和Ｍｕｔ组ＴＬＲ４及ＭＩＰ-２的ｍＲＮＡ的表达在糖尿病模型造模后１个月、２个月、４个月时依次上调（均为Ｐ＜０．００１）,各时间点ＴＬＲ４及ＭＩＰ-２的ｍＲＮＡ的表达以ＷＴ组强于Ｍｕｔ组（均为Ｐ＜０．０５）。结论　２型糖尿病小鼠模型中,随病程发展出现视网膜病变并不断恶化,此过程中视网膜中ＴＬＲ４与ＭＩＰ-２的ｍＲＮＡ表达呈显著性上调趋势;ＴＬＲ４基因突变小鼠的视网膜ＴＬＲ４及ＭＩＰ-２的表达比野生型小鼠减弱,同时视网膜病变减轻。     

重组腺相关病毒载体介导的色素上皮衍生因子对糖尿病大鼠视网膜的影响

目的以重组腺相关病毒载体（rAAV）介导色素上皮衍生因子（PEDF）转染糖尿病大鼠视网膜，观察其表达及其对血管内皮生长因子（VEGF）和视网膜微血管的影响。方法 雄性 Wister大鼠链脲佐菌素腹腔注射诱导糖尿病模型。随机分为1（DM1）、3（DM3）、6（DM6）个月组。右眼玻璃体注射rAAV2-CMV-hPEDF作为治疗组，左眼注射rAAV2-CMV-GFP作为自身对照眼。正常大鼠右眼假注射，左眼不注射。应用半定量逆转录聚合酶链反应和Western blot测定VEGF和PEDF的mRNA和蛋白的表达情况，应用视网膜血管铺片观察视网膜微血管的变化。结果注射后大鼠治疗眼视网膜hPEDF mRNA表达不断增强，持续到6个月，达到顶峰。PEDF蛋白表达亦不断增加，与同时间点对照眼相比差异有统计学意义（t=4.292，10.721，16.692；P＜0.01）。治疗组各时间点视网膜VEGF mRNA及蛋白表达量相互间无统计学意义（t=1.621，0.698，0.758；P＞0.05），均显著高于正常对照组（t=5.171，6.857，7.542；P＜0.05），但与同时间点自身对照眼相比表达显著降低（t=2.343，3.263，4.455；P＜0.01）。糖尿病大鼠治疗眼与自身对照眼视网膜微血管形态在1个月时与正常对照组视网膜相比无显著差异，但3个月与6个月时治疗眼与自身对照眼相比视网膜毛细血管损伤改变明显减轻。结论 rAAV2-CMV-hPEDF玻璃注射可增加糖尿病大鼠视网膜PEDFmRNA和蛋白水平表达，改善其早期视网膜微血管的损害，并抑制VEGF的表达，其调节在mRNA水平。 （中华眼底病杂志，2008，24：259-264）     

胰岛素对链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠视网膜血管内皮生长因子表达的影响

目的 观察胰岛素对链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病大鼠视网膜血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法 60只雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为柠檬酸钠缓冲液对照组(CIT-CON)和STZ诱导糖尿病组(STZ-DM)，每组各30只。16周时，在 CIT-CON组中随机抽取24只大鼠分为柠檬酸钠缓冲液对照组（A组）和柠檬酸钠缓冲液加胰岛素作用组（B组），每组各12只，剩余6只作为阴性对照。同时，在STZ-DM组中也随机抽取24只大鼠分为STZ诱导糖尿病组（C组）和STZ诱导糖尿病组加胰岛素作用组（D组），每组也为12只，同样剩余6只作为阴性对照。胰岛素作用组皮下注射4 IU胰岛素，24 h后处死各组大鼠，3只取眼球、4%多聚甲醛固定，供制备病理切片；9只取视网膜神经上皮层，保存于液氮中。实时聚合酶链反应（Rea l-time PCR）检测视网膜VEGF mRNA表达，免疫组织化学、蛋白免疫印迹（Western Blot）检测VEGF蛋白表达。结果 胰岛素作用于正常对照大鼠和STZ诱导的糖尿病大鼠后，正常大鼠VEGF mRNA 表达为7.71±0.25，蛋白表达为0.492 5±0.012 2，分别与胰岛素作用前比较，差异均有统计学意义（t=5.32，3.97；P<0.05）；STZ诱导的糖尿病大鼠VEGF mRNA表达为9.05±0.28，蛋白表达为0.515 2±0.010 9，分别与胰岛素作用前比较，差异均无统计学意义（t=0.34，0.36；P>0.05）。结论 胰岛素作用于STZ诱导的糖尿病大鼠不能显著上调视网膜VEGF mRNA 和蛋白水平。     

Up-regulation of genes for oxidative phosphorylation and protein turnover in diabetic mouse retina

Diabetic retinopathy is one of the most frequent complications of diabetes and is a leading cause of vision loss in adulthood. To better understand the molecular pathophysiology of diabetic retinopathy, we performed comprehensive gene expression analysis of the mouse retina under diabetic conditions with an in-house cDNA microarray system that was designed to be suitable for the small amount of RNA available from a single mouse retina. Diabetes was induced in male C57BL/6 mice by an intraperitoneal injection of streptozotocin, and the changes in retinal mRNA levels were examined in three pairs of diabetic and age-matched control mice at 1 and 3 months after the injection of streptozotocin. Northern blot analysis with amplified total cRNA confirmed the increase in mRNA levels of several selected genes. Most of the significantly up-regulated genes could be classified into two functional categories: oxidative phosphorylation and protein turnover. All mitochondrial DNA-encoded and most of the nuclear DNA-encoded genes for oxidative phosphorylation were up-regulated in the diabetic retina. This was in sharp contrast with a previous report of a down-regulation of these genes in skeletal muscles of streptozotocin-induced diabetic mice and type 2 diabetic humans. Genes for protein synthesis and ubiquitin were also up-regulated in the diabetic retina, suggesting the increase in turnover rates for at least a part of the protein population. Taken together, the diabetic retina appears to be in a state activated for intermediary metabolism, presumably because of an increase in insulin-independent glucose influx. These results provide insights into possible preventive and therapeutic intervention of diabetic retinopathy.     

Peroxiredoxin6在糖尿病大鼠视网膜中的表达

背景研究表明氧化损伤在糖尿病并发症的发生发展中发挥着重要的作用,Peroxiredoxin6（Prx6）是双功能的蛋白质,其清除磷脂氢过氧化物的活性非常重要,因为细胞质中普遍存在的谷胱甘肽过氧化物酶（GPxl）无此功能。目的观察Prx6在实验性糖尿病大鼠视网膜中的表达,分析随着糖尿病病程的延长其在视网膜的表达情况。方法Wistar大鼠60只,随机分为正常对照组12只和糖尿病组48只。糖尿病组腹腔注射链脲佐菌素（STZ）65mg／kg诱发糖尿病,将造模成功的大鼠随机分为糖尿病1、2、3个月组,每组16只。于各时间点处死大鼠,采用逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）和免疫组织化学法分析Prx6在不同时间点糖尿病组大鼠视网膜中的表达,应用Image—ProPlus6．0图像分析软件测定阳性反应强度,即平均吸光度（A）值。结果免疫组织化学染色结果显示,正常对照组大鼠视网膜内外颗粒层及视网膜、脉络膜血管均有Prx6蛋白的表达,视网膜神经节细胞（RGCs）层有少量Prx6蛋白的表达,表达于细胞质;糖尿病1个月组大鼠视网膜内外颗粒层棕黄色阳性染色细胞增多;2个月组、3个月组大鼠视网膜各层Prx6蛋白的表达均为阴性,各组问总体比较差异均有统计学意义（F=22967．63,P〈0．05）。RT—PCR结果显示,正常对照组大鼠视网膜有Prx6mRNA的表达;糖尿病1个月组视网膜Prx6mRNA表达增高;2个月组Prx6mRNA表达量明显降低,仅有少量表达;3个月组表达阴性,各组问总体比较差异均有统计学意义（F=942．84,P〈0．05）。结论Prx6作为一种抗氧化蛋白存在于视网膜中,可保护组织细胞免受活性氧簇、氧自由基等的损害,随着糖尿病病程的延长,Prx6在视网膜组织和细胞中的表达量逐渐降低,直至消失。     

色素上皮衍生因子对糖尿病大鼠视网膜谷氨酰胺合成酶表达的影响

目的　观察色素上皮衍生因子（PEDF）对糖尿病大鼠视网膜Müller细胞谷氨酰胺合成酶（GS）表达的影响。方法　将Sprague-Dawley大鼠分为模型组、模型对照组、PEDF干预组（干预组）、干预对照组,每组均为8只大鼠。模型组、干预组、干预对照组大鼠链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型。模型组大鼠不作任何干预,模型对照组为相同月龄的正常大鼠,干预组大鼠左眼玻璃体腔注射0.1 μg/μl的PEDF 10 μl,干预对照组大鼠左眼玻璃体腔注射相同容积的磷酸盐缓冲液。采用免疫组织化学法和实时荧光聚合酶链反应（PCR）法检测视网膜GS和白细胞介素-1β（IL-1β）的表达变化。将视网膜Müller细胞置于高糖环境下培养,实验干预组中加入100 ng/ml PEDF,空白对照组加入相同容积的培养液,24 h后通过蛋白质免疫印迹（Western blot）法和实时荧光PCR法检测PEDF对Müller细胞GS和IL-1β表达的改变。流式细胞仪锚定蛋白-异硫氰酸荧光素和碘化丙啶（Annexin V-FITC-PI）双染色法检测100ng/mlPEDF对高糖状态下Müller细胞凋亡的影响。结果　实时荧光PCR法从基因水平和免疫组织化学法从蛋白质水平检测均显示,相对于模型对照组大鼠,模型组大鼠视网膜GS表达降低,而IL-1β的表达升高,实时荧光PCR法：GS: t=4.23, P＜0.01;IL-1β: t=16.73,P＜0.01;免疫组织化学法：GS:t=5.13,P＜0.01;IL-1β: t=9.32, P＜0.01;干预组大鼠玻璃体腔注射PEDF 48 h后,IL-1β的表达下降,GS的表达升高,与干预对照组比较,实时荧光PCR法：GS: t=3.87,P＜0.01;IL-1β: t=3.61,P＜0.05;免疫组织化学法：GS:t=3.32, P＜0.05;IL-1β: t=2.63, P＜0.05。在高糖环境下,通过实时荧光PCR法和Western bot 法检测均显示PEDF可以下调IL-1β的表达,而上调GS的表达,与空白对照组比较,实时荧光PCR法：GS: t=2.89, P＜0.05;IL-1β: t=3.37, P＜0.05;Western blot：GS: t=2.66, P＜0.05;IL-1β: t=3.23, P＜0.05。流式细胞仪检测结果显示,PEDF可以抑制高糖环境下Müller细胞的凋亡,实验组凋亡率与空白对照组凋亡率比较,差异有统计学意义(t=3.21,P＜0.05)。结论　对于糖尿病大鼠,PEDF可能通过下调视网膜Müller细胞中IL-1β的表达来上调GS的表达,从而改善谷氨酸循环,抑制神经节细胞的死亡      

糖尿病大鼠视网膜PEDF表达与神经退行性改变

目的观察色素上皮源性因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)在糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠视网膜中的表达以及视网膜神经细胞损伤情况,探讨早期糖尿病视网膜病变发病机制。方法 72只SD大鼠随机分为正常对照组、DM0.5个月组、DM1个月组、DM3个月组及DM5个月组。DM组大鼠利用链脲佐菌素建立DM模型。RT-PCR及Westernblot检测各组大鼠视网膜PEDFmRNA及蛋白的表达,TUNEL法行原位细胞凋亡检查,透射电镜观察视网膜超微结构改变。结果 PEDFmRNA及蛋白在正常大鼠视网膜的表达量分别为0.410±0.016、0.420±0.030;DM0.5个月组表达未见明显改变,分别为0.399±0.032、0.399±0.032,与正常对照组比较,差异均无统计学意义(均为P>0.05);DM1个月组PEDFmRNA及蛋白表达开始减少,分别为0.344±0.044、0.375±0.028,与正常对照组比较,差异均有显著统计学意义(均为P<0.01);DM5个月组PEDFmRNA及蛋白表达量约为正常对照组的1/2,差异均有显著统计学意义(均为P<0.01)。TUNEL染色显示凋亡阳性细胞主要位于视网膜神经节细胞层,随病程延长逐渐增多。透射电镜显示DM0.5个月组仅视网膜神经纤维层发生轻微超微结构损伤,随病程延长,视网膜全层发生神经退行性病变。结论在发生临床可见的微血管病变前,DM大鼠已发生视网膜神经退行性改变,PEDF在视网膜的表达逐渐减少,提示其可能在早期糖尿病视网膜病变的发生、发展中发挥重要作用。     

早期糖尿病大鼠视网膜蛋白激酶C与内皮素系统关系的研究

目的 探讨糖尿病状态下蛋白激酶C(PKC)与内皮素（ET）系统的改变，并采用特异性PKC抑制剂观察对视网膜内皮素-1的影响。 方法 采用链脲佐菌素（STZ）诱导早期糖尿病大鼠模型，酶联免疫吸附法（ELISA）测定大鼠视网膜内PKC的表达，半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）测定视网膜内内皮素ET-1、ET-3、ET-A、ET-受体mRNA的表达，并通过玻璃体内给予PKC抑制剂GF109203X观测对糖尿病大鼠视网膜内ET-1 mRNA表达的影响。 结果 2周糖尿病大鼠视网膜细胞膜PKC活性明显增加（t=3.296, P=0.008），而细胞浆PKC活性无明显改变（t=0.138, P=0.894）；糖尿病大鼠视网膜内ET-1 mRNA 水平较正常组明显升高（P=0.008），而ET-3、ET-A、ET-B受体mRNA水平则无明显改变（P=0.918，P=0.889，P=0.500）；糖尿病大鼠分别予以10-5、10-6、10-7mol/L PKC抑制剂GF109203X玻璃体内注射后,视网膜内ET-1 mRNA水平较对照组下降，呈剂量-反应关系。 结论 早期糖尿病大鼠视 网膜内即存在PKC的激活及ET-1表达的增加，而PKC抑制剂可抑制ET-1的表达。 （中华眼底病杂志，2004，20：168-171）     

糖尿病大鼠视网膜中缺氧诱导因子-1α和血管内皮生长因子表达的研究

目的:检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)与血管内皮生长因子(VEGF)在糖尿病大鼠视网膜中的表达,探讨其在糖尿病视网膜病变(DR)发生发展中的作用。方法:SD大鼠120只随机分为对照组与DR组,DR组采用链脲佐菌素(STZ)一次性建立糖尿病模型。应用免疫组化SP法和RT-PCR技术分别于1,3,6mo检测视网膜中HIF-1α与VEGF蛋白及其mRNA的表达变化。结果:HIF-1α与VEGF蛋白及其mRNA在对照组视网膜中不表达,在DR组中呈进行性表达增强(P<0.05);DR组中HIF-1α与VEGF的表达呈正相关(r=0.605,P<0.05)。结论:DR视网膜中HIF-1α与VEGF表达增强,与DR的发生发展密切相关。