藻酸双酯钠对类缺血再灌注神经元NF-κB表达的影响

 目的研究藻酸双酯钠对神经元类缺血再灌注损伤的NF-κB表达的影响。方法 利用免疫细胞化学法应用β-Tubulin及Gap-43对培养的皮质神经元进行鉴定，利用流式细胞仪对经藻酸双酯钠处理后的培养的类缺血再灌注损伤后的皮质神经元NF-κB表达情况进行研究。结果 ①在培养的神经元上β-Tubulin及Gap-43表达大概为80%左右；②再灌注30 min时，藻酸双酯钠浓度从0.01～0.1 mg·mL^-1时，检测的NF-κB阳性细胞比率明显增加，当藻酸双酯钠浓度达1 mg·mL^-1时，阳性细胞数明显减少。结论不同浓度的藻酸双酯钠对培养的小鼠皮质神经元在类缺血再灌注时NF-κB的表达有较大影响，小剂量时有促进作用，大剂量时有抑制作用。     

3种不同治法方药对大鼠心肌缺血再灌注损伤核因子-кB信号转导通路的影响

目的:观察中医不同治法方药对大鼠心肌缺血再灌注损伤(I/R)核因子-кB(NF-кB)信号转导通路的影响。方法:将60只SD大鼠随机分为5组:假手术组、模型组、祛痰宽胸组、活血化瘀组及痰瘀同治组。可逆性冠脉左前降支结扎缺血30 min再灌注2 h复制I/R模型,应用Western blotting及RT-PCR法检测各组大鼠心肌核因子IкB诱导激酶(NIK)、IкB激酶β(IKKβ)、核转录因子抑制蛋白(IкBα)及NF-кBp65 mRNA的表达。结果:与模型组比较,各治疗组均能降低心肌NIK,IKKβ,NF-кBp65 mRNA水平并上调IкBα蛋白表达(P0.01)。结论:祛痰宽胸法、活血化瘀法及痰瘀同治法均对I/R大鼠有保护作用,其主要作用机制可能是通过抑制NIK,IKKβ蛋白表达,减少IкBα蛋白的磷酸化降解而增加其蛋白水平,从而抑制NF-кB的过度活化,发挥其对缺血再灌注损伤心肌的保护作用。     

姜黄素对大鼠脊髓缺血再灌注损伤后NF-кB和Hsp70的表达研究

目的 研究姜黄素对大鼠脊髓缺血再灌注损伤后NF-кB和Hsp70的表达,进一步明确其作用机制.方法 72只雄性SD大鼠随机分为姜黄素实验组、缺血模型组和正常对照组,每组24只,前两组经夹闭左右肾动脉之间腹主动脉制作脊髓缺血再灌注损伤模型,对照组不做任何处理.实验组缺血前10 min舌下静脉注射20 mg/kg姜黄素;模型组缺血前10min舌下静脉注射同等量生理盐水;对照组经舌下静脉注射等量的生理盐水.再灌注3,12,24,72 h不同时间点各取6只大鼠腰段脊髓组织,分别经HE染色、免疫组织化学法和western blot法检测NF-кB和Hsp70的表达.结果 NF-кB、Hsp70在前两组脊髓组织中的表达均有统计学意义(P<0.05),姜黄素对各时间点脊髓组织中NF-кB表达的抑制率分别是13.12%,15.14%,19.18%和18.02%;同时可诱导Hsp70蛋白的表达,对Hsp70的诱导率分别为10.40%,12.71%,15.95%和13.18%.结论 姜黄素对大鼠脊髓缺血再灌注损伤后可抑制早期炎症反应的发生,同时对脊髓缺血再灌注损伤具有保护作用,调控Hsp70的表达可能是其作用机制之一.     

GM-1对原代培养神经元类缺血再灌注损伤的影响

目的观察类缺血再灌注对大鼠皮质神经元细胞损伤的影响及神经节苷脂（GM-1）对受损神经细胞的保护作用。方法制备培养原代神经元类缺血再灌注损伤模型，应用GM-1分别于再灌注后不同时间进行MTT．凋亡流式细胞检测等。结果进行类缺血再灌注后，任一时间点的缺血组、实验组的细胞活性均低于正常组，凋亡率高于正常组。1h时缺血组与实验组的细胞活性和凋亡细胞染色无明显差别，而流式细胞仪检测细胞凋亡率显示实验组低于缺血组；在随后的不同时间点实验组的细胞活性显著高于缺血组．凋亡率显著低于缺血组。结论GM-1可保护类缺血再灌注后大鼠皮质神经元的损伤。作用从再灌后1h即可出现，6h～24h时这种作用逐渐加强；GM-1可减轻类缺血再灌注诱导的大鼠皮质神经元细胞调亡．增加神经元的存活率，从而对损伤神经元细胞具有保护作用。     

穴位埋药对脑缺血再灌注大鼠海马组织NF-кB表达的影响

目的:研究穴位埋药对脑缺血再灌注大鼠海马组织NF-кB表达的影响.方法:将SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组(24h组、72h组、120h组)、穴位埋药组(24h组、72h组、120h组).采用改良线栓法制备大鼠局灶性脑缺血(MCAO)再灌模型,以胶原川共芎嗪制备的缓释剂(药线),在大椎、双侧内关穴位埋药.运用免疫组化检测法观察各组大鼠海马神经细胞NF-кB-p65核转录因子蛋白的表达与含量.结果:各模型组大鼠缺血侧海马CA1区NF-кB-p65蛋白表达显著高于正常组和假手术组,且随再灌注时间而发生变化,72h表达达高峰.NF-кB移位于核明显;模型各组大鼠缺血侧海马组织NF-кB-p65蛋白表达比同时相穴位埋药各组含量高,有显著性差异.结论:穴位埋药能下调局灶性脑缺血再灌注海马组织NF-кB蛋白水平,阻滞其转位于核,发挥神经保护作用.     

标本配穴电针预处理抗脑缺血再灌注大鼠炎性损伤的研究

目的从SIRT1/NF-κB炎性通路途径,探讨电针预处理抗脑缺血再灌注损伤的可能作用机制。方法将SD雄性大鼠随机分为假手术组(S组)、缺血组(I/R组)和电针预处理组(EA组),每组各20只。I/R组采用改良的MCAO线栓法缺血2 h后行再灌注3 h,制备大鼠右侧局灶性脑缺血再灌注损伤模型。S组仅分离右侧颈总动脉,不给予其它处理。EA组造模前取"百会""肾俞""三阴交"电针仪预处理,疏密波,频率2/100 Hz,强度1 m A,每15 min为一刺激单元(通电10 min,留针5 min),连续重复4次,共计1 h。各组再灌注3 h后进行神经行为学评分; HE染色法观察海马神经元形态; ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)等炎性因子浓度; Western-blot方法检测SIRT1和NF-κB蛋白表达。结果电针预处理后,EA组行为学评分、IL-1β、IL-6、TNF-α炎性因子浓度和NF-κB蛋白表达均较模型组降低(P <0. 01),SIRT1蛋白表达较模型组升高(P <0. 01),神经元形态结构损伤较模型组明显减轻。结论电针预处理可能通过上调内源性脑SIRT1表达,进而抑制NF-κB表达,减轻炎性反应,从而抗脑缺血再灌注损伤。     

电针对脑缺血再灌注大鼠缺血区皮质神经细胞凋亡和NF-κB表达的影响

目的通过观察电针对脑缺血再灌注大鼠缺血区皮质神经细胞凋亡和NF-κB蛋白表达的影响,研究电针对缺血性脑损伤的保护机制。方法采用大脑中动脉线栓法制作模型,电针大鼠的水沟、内关,运用TUNEL法观察各组大鼠皮质神经细胞凋亡,免疫组化法观察各组大鼠缺血区皮质NF-κB蛋白表达。结果电针组缺血皮质中神经细胞凋亡和NF-κB蛋白表达与模型组相比均降低。结论电针通过抑制NF-κB蛋白表达减少神经细胞凋亡来对抗缺血再灌注脑组织神经损伤。     

梓醇促大鼠大脑皮质神经元轴突生长的离体研究

目的：观察梓醇对原代培养的新生SD大鼠皮质神经元生存活性及轴突生长的影响。方法：新生24 h内SD大鼠大脑皮质神经元原代培养6 d后,分为空白组、终浓度分别为0.25,0.5,1.0,2.5,5.0 mg·mL-1梓醇干预组和终浓度为1.0 mg·mL^-1胞磷胆碱阳性药物对照组。药物干预48 h后,观察细胞生长情况,用NF-200免疫组化染色鉴定神经元,MTT法检测神经元生存活性,测微尺测量神经元轴突长度。结果：梓醇终浓度在1～5 mg·mL^-1时,可明显促进神经元轴突生长,2.5 mg·mL^-1时作用最强；梓醇各浓度组神经元生存活性与空白组和胞磷胆碱组差异无显著性。结论：梓醇能明显促进皮质神经元轴突生长,但对其生存活性无显著影响。     

NF-кB与脑缺血炎症损伤及中药干预作用

脑缺血可诱导NF-кB的激活,NF-кB通过调控多种基因的表达参与了缺血后的炎症反应,在缺血性脑损伤中具有重要作用.针对NF-кB作为治疗脑缺血损伤的靶点对有效防治脑缺血炎症具有重要的理论和临床意义.     

蒺藜总皂苷对缺氧复氧心肌细胞NF-κB核移位及其调控下游基因表达的影响

目的观察蒺藜总皂苷(GSTT)对模拟缺血再灌注心肌细胞核因子-κB(NF-κB)核移位及其调控下游基因TNF-α、IL-1β蛋白表达的影响。方法利用原代培养的SD乳鼠心肌细胞建立模拟心肌缺血再灌注模型,分为正常组、模型组和GSTT大、小剂量组。放免法检测TNF-αI、L-1β,免疫组化定性观察NF-κB p65核移位。结果与模型组比较,GSTT大、小剂量组TNF-α、IL-1β含量显著降低(P<0.01或0.05),NF-κB p65核移位明显。结论GSTT对模拟缺血再灌注损伤心肌细胞有保护作用,可减轻炎症损伤,其机制与上游调控枢纽核转录因子NF-κB激活有关。     

三种中药复方对脑缺血再灌注大鼠脑组织ICAM-1和 NF-κB表达的动态影响

目的比较三种中药复方(益气活血汤、镇肝息风汤、星蒌承气汤)对脑缺血再灌注大鼠脑组织I-CAM-1和NF-κB蛋白表达的动态影响,探讨其抗脑缺血再灌注炎性损伤的机制。方法采用线栓法大脑中动脉制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,脑缺血2h,分别再灌注24、48和72h。大鼠随机分为假手术组、模型组、益气活血汤组、镇肝息风汤组和星蒌承气汤组。采用免疫组化SABC染色法分别检测缺血半暗带ICAM-1和NF-κB蛋白表达。结果脑缺血2h再灌注各时间点与假手术组比较,ICAM-1和NF-κB蛋白表达阳性细胞数显著增加;再灌注24h各治疗组与模型组比较,ICAM-1蛋白表达阳性细胞数显著减少;再灌注48h各治疗组NF-κB蛋白表达阳性细胞数显著降低,ICAM-1仅星蒌承气汤组显著降低;再灌注72hICAM-1和NF-κB蛋白表达阳性细胞数均显著减少;组间比较24h镇肝息风汤组优于其他组,48h星蒌承气汤组优于其他组,48h益气活血汤组优于其他组。结论上述三种中药复方可以通过降低ICAM-1和NF-κB蛋白表达抗脑缺血再灌注炎性损伤。     

阿魏酸钠对大鼠脑缺血再灌注炎症损伤的保护作用及机制分析

目的:观察阿魏酸钠对大鼠脑缺血再灌注炎症损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法:取SD雄性大鼠,建立大脑中动脉阻塞(MCAO)致脑缺血/再灌注损伤模型,造模成功的36只随机分成模型组,阿魏酸钠低、中、高剂量组(25,50,100 mg·kg~(-1)),并另取9只作为假手术组。采用神经功能评分法观察大鼠神经功能情况;苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠脑组织病理学形态变化;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠血清和脑组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL~(-1)β),白细胞介素-6(IL-6)含量变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测缺血周边区核转录因子-кB p65 (NF-κB p65)蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠神经行为学评分升高,神经元坏死,大量炎症细胞产生,血清和脑组织中TNF-a,IL~(-1)β,IL-6水平显著升高(P 0. 01),细胞核/细胞浆NF-κB p65蛋白表达比例显著升高(P 0. 01);与模型组比较,阿魏酸钠可明显降低脑损伤大鼠神经行为学评分(P 0. 05,P 0. 01),抑制神经元坏死,减少炎症细胞产生,并可明显降低血清和脑组织中TNF-a,IL~(-1)β,IL-6水平(P 0. 05,P 0. 01),抑制NF-κB p65由细胞质向细胞核转位(P 0. 05,P 0. 01),最终减轻缺血再灌注造成的神经细胞炎症损伤。结论:阿魏酸钠可通过抑制NF-κB p65核转位减轻缺血再灌注大鼠脑神经细胞炎症反应,维持脑部正常形态,这可能是其发挥脑保护作用的机制之一。     

黄芪多糖对人心脏微血管内皮细胞缺氧再复氧损伤后核因子-κB表达的影响

目的:观察人心脏微血管内皮细胞(HCMEC)缺血再灌注损伤后核因子-κB(NF-κB)的表达变化,探讨黄芪多糖治疗心肌缺血再灌注损伤的机制。方法:以体外缺氧再复氧复制缺血再灌注损伤模型。免疫细胞化学染色法观察NF-κB的蛋白分布,荧光实时定量PCR检测NF-κB mRNA的表达。结果:缺氧再复氧后,NF-κB发生核转位,其mRNA表达较正常对照组明显增加(P<0.05)。黄芪多糖可抑制NF-κB的核转位,并降低NF-κBmRNA的表达,其中黄芪多糖50μg/mL剂量组降低NF-κBmRNA表达的作用与缺氧再复氧组比较差异显著(P<0.05)。结论:黄芪多糖通过抑制缺氧再复氧后HCMEC的NF-κB信号通路,降低炎症相关基因的激活,从而减轻心肌缺血再灌注损伤时的炎症反应。     

芍药苷对大鼠脑缺血再灌注损伤细胞凋亡相关基因的影响

目的探讨芍药苷对大鼠局灶性脑缺血再灌注后缺血区神经元凋亡的影响。方法建立大鼠McA0模型模拟局灶性脑缺血再灌注损伤，观察芍药苷对脑缺血再灌注损伤后动物的神经行为学评分；TUNNEL法检测神经元凋亡的数量改变；用WEST—ERBLOT法及免疫组化法检测β-P38、Fas的表达改变。结果假手术组无神经行为改变．各用药组神经行为学评分明显低于缺血再灌注组（P〈0．01），用药组间无统计学意义。与假手术组相比，缺血再灌注组大鼠缺血侧脑组织TUNEL阳性细胞及Fas阳性细胞增多（P〈0．01）。与模型组相比，各用药组TUNEL阳性神经细胞及Fas阳性细胞表达明显减少（P〈0．01）。大鼠脑缺血再灌注后脑组织磷酸化P38蛋白表达明显增加．注射药物后蛋白磷酸化被抑制，表达减少。结论芍药苷可改变大鼠脑缺血后的神经行为，抑制P38蛋白的表达，下调Fas蛋白表达，有抗神经元凋亡作用。     

眼针疗法对脑缺血再灌注大鼠脑源性神经营养因子表达的影响

目的观察眼针疗法对脑缺血再灌注损伤大鼠脑皮质脑源性神经营养因子（BDNF）表达的影响,探讨眼针在脑缺血再灌注损伤中的治疗作用。方法线栓法制备SD大鼠大脑中动脉梗死（MCAO）再灌注模型。将SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、模型组、眼针组。于再灌注24h后采用ZeaLonga评分法进行大鼠神经功能评分;采用实时定量PCR方法检测缺血脑皮质BDNF mRNA的表达;采用免疫组织化学法、蛋白免疫印迹法检测缺血脑皮质BDNF的表达。结果缺血再灌注24h后,眼针组大鼠神经行为评分显著低于模型组;眼针组大鼠脑皮质BDNF mRNA的表达和蛋白的表达较模型组均有明显减少。结论眼针疗法能诱导大鼠缺血再灌注后脑皮质BDNF表达水平,有利于缺血再灌注损伤后神经元损伤的保护。     

当归补血汤对高糖条件下系膜细胞增殖及TGF-β_1 mRNA和NF-κB表达的影响

目的:研究当归补血汤对培养在高糖条件下肾小球系膜细胞(GMC)增殖及GMC中转化生长因子-β1mRNA(TGF-β1mRNA)及核转录因子(NF-кB)蛋白的表达的影响,探讨其在糖尿病肾病(DN)防治中的意义。方法:①利用噻唑蓝(MTT)比色法动态观察各种处理因素的作用下各组GMC增殖情况;②用荧光定量PCR的方法检测各种处理因素的作用下各组GMC中TGF-β1mRNA表达的情况;③用Western-blot的方法检测各种处理因素的作用下各组GMC中NF-кB蛋白的表达情况。结果:高糖能明显刺激体外培养的GMC增殖,同时细胞中TGF-β1mRNA及NF-кB蛋白表达也增加(P0.05)。而当归补血汤能明显抑制GMC增殖及细胞中TGF-β1mRNA及NF-кB蛋白表达也相应减少(P0.05或P0.01),并呈一定量效关系,即随糖或药物浓度的增加,GMC增殖及细胞中TGF-β1mRNA及NF-кB蛋白表达也相应增加或减少。结论:高糖可促进GMC增殖及GMC中TGF-β1mRNA和NF-кB蛋白的表达增加,当归补血汤能明显抑制高糖条件下GMC增殖,抑制细胞中TGF-β1mRNA及NF-кB蛋白表达增加,说明当归补血汤能直接抑制GMC增殖、GMC中TGF-β1mRNA及NF-кB蛋白表达增加,从而发挥预防和治疗肾小球硬化和间质纤维化的发生、发展,进而延缓DN的进展。     

参附注射液对缺血再灌注大鼠肠黏膜NF-κB和TNF-α表达的影响

目的观察参附注射液(SF)对大鼠肠缺血再灌注时肠黏膜核转录因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,以探讨SF对肠黏膜保护作用的分子机制。方法健康SD大鼠36只随机分为C组(假手术组)、A组(缺血再灌注+生理盐水组)和B组(缺血再灌注+SF组),通过钳闭肠系膜上动脉复制大鼠小肠缺血再灌注模型。采用免疫组织化学技术检测再灌注2h肠组织NF-κB的活化和表达并进行图像分析;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测同时点肠组织和血浆中TNF-α的含量;并观察肠黏膜组织形态学改变及评分。结果B组能显著抑制缺血再灌注2h时肠黏膜NF-κB活化,降低肠组织和血浆中TNF-α水平,且减轻肠黏膜损伤程度,与A组比较差异有显著性;各组肠黏膜组织中NF-κB的表达与小肠组织中TNF-α的水平呈正相关。结论SF对肠黏膜缺血再灌注损伤有着显著的保护作用,其机制与抑制肠组织中NF-κB的活化、减少TNF-α的表达有一定关系。     

黄连解毒汤对大鼠心肌缺血再灌注损伤核因子NF-κB信号转导通路的影响

目的观察黄连解毒汤对在体大鼠急性心肌缺血再灌注损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法将56只SD大鼠随机等分为7组:假手术组、缺血再灌注组、溶剂(1%CMC-Na)对照组、复方丹参组及黄连解毒汤(HLJDT)低、中、高剂量组,连续给药7 d,末次给药24 h后,复制大鼠心肌缺血再灌注损伤模型(开胸结扎左冠状动脉前降支30 min,再灌注40 min)。免疫印迹法检查心肌NF-κB的活性,并检测各组大鼠心肌核因子IκB诱导激酶(NIK)、IκB激酶β(IKKβ)、核转录因子抑制蛋白(IκBα)的表达。结果与假手术组比较,缺血再灌注组NF-κB活性显著增加,NIK、IKKβ水平明显增高,IκBα的表达明显降低。与溶剂对照组比较,HLJDT中高剂量组与复方丹参组的NF-κB活性显著降低,NIK、IKKβ水平明显降低,IκBα的表达明显增加。结论黄连解毒汤对大鼠心肌缺血再灌注有保护作用,其作用机制与抑制NIK、IKKβ水平的表达,减少IκBα蛋白的磷酸化降解,从而抑制NF-κB的过度活化有关。     

益气活血方和补肾生髓方对大鼠脑缺血恢复期GAP-43和SYP表达的影响

目的：探讨益气活血方和补肾生髓方对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠恢复期缺血半暗带生长相关蛋白（GAP－43）和突触素（SYP）表达的影响。方法：以线栓法阻塞大鼠左侧大脑中动脉，复制局灶性脑缺血再灌注模型，缺血2小时再灌注1、2、3周，用免疫组织化学染色SABC法分别检测皮质缺血半暗带GAP－43和SYP的表达。结果：各时间点益气活血方、补肾生髓方组皮质缺血半暗带GAP－43（1周除外）和SYP表达阳性细胞平均吸收光密度显著升高，与模型组比较有显著性差异（P〈0．05或0．01）；在1周、2周GAP－43表达阳性细胞平均吸收光密度，益气活血方优于补肾生髓方组，两组间比较有显著性差异（P〈0．01）。结论：益气活血方、补肾生髓方能通过促进皮质脑缺血半暗带GAP－43和SYP表达，有利于脑缺血后突触重塑和神经细胞轴突的再生，促进脑卒中后神经功能恢复。     

三七总皂苷预处理对肾缺血再灌注损伤大鼠NF-κBp65、IL-1β表达的影响

目的:探讨不同剂量三七总皂苷预处理后对大鼠肾缺血再灌注损伤NF-κB信号通路的影响。方法:SD大鼠40只,随机分为空白对照组,肾缺血再灌注损伤组,三七总皂苷40、80、160 mg/kg组,前两组给予生理盐水,后3组分别给予三七总皂苷40、80、160 mg/kg连续给药5天。后4组在最后1次给药1h后通过切除右肾、夹闭左肾动脉45min再灌注3h的方法制备肾缺血再灌注损伤模型。术后处死大鼠,检测血肌酐、尿素氮,HE染色观察肾组织病理学改变,免疫组化法和PT-PCR法分别检测核因子-κBp65、白细胞介素-1β蛋白水平和mRNA表达。结果:肾缺血再灌注损伤组BUN、SCr水平明显增高,光镜下可见肾小管损伤明显,肾组织NF-κBp65、IL-1β蛋白水平和mRNA表达明显增高。三七总皂苷40、80、160 mg/kg组BUN、SCr水平明显降低,肾组织病理学改变明显减轻,NF-κBp65、IL-1β蛋白水平和mRNA表达显著降低,其中三七总皂苷160 mg/kg组的效果最明显。结论:三七总皂苷可能通过抑制肾缺血再灌注损伤肾组织中NF-κBp65、IL-1β的表达,减轻氧化应激损伤,从而对肾组织起到有效的保护作用。