菊芋组织培养中cAMP-磷酸二酯酶的组织化学观察

在高等动物细胞中作为激素第二信使的cAMP早已引起人们的重视,其作用及其重要性已有不少的研究资料可以来说明,但在高等植物细胞中,此项研究工作开展甚少。cAMP在动物体内分布甚广,它具有广泛的生物学效应,它直接地影响许多酶的活性以及细胞内的生理生化过程。然而在植物细胞中cAMP分布情况如何?其生理生化效应又表现在哪些方面?不仅对cAMP的研究是需要的,而且对直接对cAMP起调节作用的腺苷环化酶(adenylate cyclase)和cAMP一磷酸二酯酶(3', 5'-cyclic adenylic acid-phosphodiesterase)的研究也同样是非常需要的。     

糖尿病中G蛋白功能发生异常

一些鸟苷结合蛋白(G 蛋白)在细胞外信号向细胞内传递过程中起桥梁作用。激素与受体结合后可促使腺苷环化酶催化 cAMP 生成,后者可启动细胞内一系列磷酸化级联反应,以产生其激素诱导的特征性细胞内应答。有二种 G 蛋白可与腺苷环化酶相互作用,一种对该酶起刺激作用(Gs);另一种则对该酶活性产生抑制效应(Gi)。Gs 和 Gi 都包括三个亚基:α、β和γ,Gs 和 Gi 的β和γ亚基都非常相似,只是α亚基     

缺血/再灌注小鼠海马组织cAMP和腺苷环化酶mRNA水平的变化

目的:观测缺血/再灌注小鼠海马组织环磷酸腺苷(cAMP)和腺苷环化酶(AC)mRNA水平,探讨缺血/再灌注发病的分子生物学机制.方法:通过双侧颈总动脉线结、连续3次缺血-再灌注,制作缺血/再灌注动物模型,并设立假手术组;术后29 d、30 d分别测试学习和记忆成绩;应用放射免疫法检测小鼠海马组织cAMP水平,应用原位杂交技术检测ACmRNA水平.结果:与假手术组比较,模型组学习和记忆成绩均降低(P＜0.05),且海马组织cAMP水平也降低(P＜0.05),海马CA1区AC mRNA阳性神经元面密度明显降低(P＜0.05).结论:海马组织cAMP和AC mRNA水平降低可能参与了缺血/再灌注后学习和记忆障碍的分子生物学发病机制.     

白念珠菌Ras/cAMP/P KA途径研究进展

白念珠菌引起的真菌感染严重威胁着人类健康。Ras/cAMP/PKA途径在白念珠菌菌丝发育、生物被膜形成、有性生殖以及耐药性中起着重要的调控作用,该通路由GTPases(Ras1和Ras2)、腺苷环化酶(Cyr1)、cAMP水解酶(Pde1和Pde2)以及PKA激酶(包括催化亚基Tpk1和Tpk2,调节亚基Bcy1)构成。环境因子通过Ras/cAMP/PKA途径调控下游转录因子,进而调节白念珠菌多种生物学行为。文中综述了近年来白念珠菌Ras/cAMP/PKA信号通路感应胞外环境因子和调控细胞行为等方面的研究进展。     

鸟苷酸环化酶又发出新的信号

长期以来,鸟苷酸环化酶一直充当腺苷酸环化酶的副手。30年前,这两种酶是在肾上腺素激活糖原代谢时作为细胞内介质的cAMP被鉴定后才发现的。从此,腺苷酸环化酶及其产物cAMP被确定为激素与细胞表面受体结合后所产生的重要的细胞内信号系统。相比之下,鸟苷酸环化酶和cAMP的应用较少,结果常常忽视了这一系统;但这两个独立的系统最近重新受到重视。     

中国对虾Gs基因克隆及其在急性低盐胁迫下功能分析

采用RACE技术对中国对虾cAMP信号通路内鸟嘌呤核苷酸结合蛋白α亚基(Guanine nucleotide-binding protein G(s) subunit alpha)基因进行克隆并对其功能进行分析。将基因命名为FcGs, 该基因cDNA全长为1692 bp, 编码379个氨基酸。对同源性进行分析显示与凡纳滨对虾同源性为99%, 与日本囊对虾同源性为97%。FcGs基因组织表达分析显示, 鳃和肝胰腺表达量较高。急性低盐胁迫使FcGs基因整体呈现上调表达。对中国对虾cAMP信号通路内Gs含量及Gs基因上游多巴胺(DA)含量, 下游环腺苷酸(cAMP)和蛋白激酶A(PKA)含量及腺苷环化酶(AC)和钠钾ATP酶(Na+-K+-ATPase)活力进行测定, 发现急性低盐胁迫后整体均呈上升且变化趋势基本一致。对FcGs基因进行干扰后中国对虾死亡率上升。研究表明, FcGs基因及其所在的cAMP信号通路可以通过调控Na+-K+-ATPase的活力在中国对虾渗透压调节过程中发挥重要作用。     

环腺苷酸及其相关化合物的氧化铝薄板层析

使用极性不同的溶剂系,研究了3',5'-环腺苷酸(cAMP)及其相关化合物在国产中性氧化铝薄板上的层析行为,发现正丁醇:乙醇:水(30:10:13)系统能把cAMP与腺嘌呤、腺苷、3',5'-环鸟苷酸、二腺苷焦磷酸、AMP(GMP GTP ATP)等分离开来。磷酸盐和柠檬酸盐的中性水溶液能定量地洗脱cAMP斑点。从而使方法达到分离定量的目的,用于cAMP化学合成反应液的分析和环核苷酸磷酸二酯酶活力的测定。     

一种快速可靠的3’,5’-cAMP 磷酸二酯酶活力测定法

磷酸二酯酶(PDE; E.C.3.1.4.17.)催化cAMP分解为5′-AMP,它与质膜上催化cAMP生成的腺苷酸环化酶配合,共同控制细胞内cAMP含量.因此,观察PDE活力变化对于研究环腺苷酸在细胞代谢调控中的作用具有重要意义.PDE活力测定多采用放射性同位素标记的cAMP为底物.由于一般粗酶样品中同时存在多种5′-核苷酸酶,使5′-AMP分解而引起误差,因此常将经PDE作用后生成的5′-AMP转化为腺苷测定.基本反应如下.3′,5′-cAMP 5′-AMP 腺苷 Pi     

PKA在盘基网柄菌(Dictyostelium discoideum)多细胞发育中的作用

在盘基网柄菌(Dictyosteliumdiscoideum)多细胞发育中,蛋白激酶A(proteinkinaseA,PKA)发挥多重作用.细胞聚集阶段,PKA调节腺苷酰环化酶的活性,中转cAMP,诱导dut、pdi等一些发育早期的基因表达;参与启动聚集后的细胞分化和形态构成,增强GBF活性,激活前孢子细胞特有基因的表达;它还精密调控前柄细胞特有基因ecmB的表达,准确启动拔顶发育,诱导孢柄和孢子的成熟.子实体形成后,PKA又是维持孢子休眠和保证孢子有效萌发的必需因子.在PKA调控下,盘基网柄菌有条不紊地完成整个发育过程.     

cAMP反应元件结合蛋白:抗抑郁药信号转导通路的交汇点

本文综述了参与抑郁症和抗抑郁药作用的三条信号转导通路:环磷酸腺苷(cAMP)通路、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路、钙调蛋白激酶(CaMK)通路,以及cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein, CREB)作为上述通路交汇点的研究进展,并探讨了新型抗抑郁药的可能作用靶点.     

大肠杆菌棉子糖操纵子a-半乳糖苷酶表达的调节控制

大肠杆菌棉子糖操纵子(raf)位于质粒,其第一结构基因rafA编码的a-半乳糖苷酶为诱导酶。Rat操纵子比乳糖操纵子(lac)或蜜二糖操纵子(mel)对诱导物有更严格的结构特异性。该酶被蜜二糖或棉子糖诱导,也被D-半乳糖微弱诱导,但不受乳糖、PNPG等结构相近糖所诱导。A-半乳糖苷酶的酶诱导形成能力在对数生长末期出现高峰。Rat 操纵子基因结构组成及调节与乳糖操纵子相似。以阻遏物为中介的负调控在raf操纵子调节中起主要作用,同时以环腺苷一代谢降解物基因激活蛋白(cAMP-CAP)为中介的正调控也参与调节。当0．4％葡萄糖加入到其它碳源培养基时,该酶表达水平下降至原活力的1／2—1／3。无论诱导或组成型酶的葡萄糖抑制均未见瞬时抑制。腺苷环化酶(cya)缺失或环腺苷受体蛋白(crP)和cya双缺陷菌株的酶表达则分别下降到原活力的9％和2．5％。Cya突变株或葡萄糖对raf操纵子表达的抑制可被cAMP解除,但cya和crP双缺陷菌株仍有葡萄糖抑制,而且这种抑制不为cAMP抵消,表明通过降低cAMp而影响cAMP-CAP复合体形成还不能解释代谢降解物抑制的全部机制。尚无证据说明吲哚类小分子化合物和低浓度尿素对raf操纵子表达的明显作用。     

激素敏感性腺苷酸环化酶的组成及其活性的调节机制

<正> 腺甙酸环化酶(Adenylate Cyclase),[ATP pyrophosphate-lyase(cyclizing),EC4.6.1.1]是迄今所知的体内催化cAMP生成的唯一的酶。由于cAMP和第二信使学说在代谢调节中的重要性,自1962年Sutherland等发现此酶的存在以来,它一直是学者们深入研究的对象。这些研究所取得的成果使我们不仅对其组成和结构有了深入的了解,而且对于激素、神经介质和药物与其相互作用的机理也有了更深入的认识。     

游泳训练后大鼠心肌细胞cAMP、cGMP含量的变化

目的:探讨游泳训练后大鼠心肌环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)含量的变化。方法:用心脏重量(mg)/体重(g)计算心脏系数,放射免疫法测定心肌cAMP、cGMP含量。结果:8周游泳训练导致心脏系数显著增高(P<0.05),心肌cAMP水平升高不显著(P>0.05),cGMP水平显著升高(P<0.05)。结论:8周游泳训练导致心脏代偿性肥大,cAMP/cGMP比值减小。     

妊娠期妇女尿中环3′,5′-一磷酸腺苷含量的变化

自从1962年Sutherland发现并提出环3′,5′——磷酸腺苷(以下简称cAMP)作为“第二信使”参与多种激素的作用以来,有关cAMP在激素作用中及生理上的重要意义的研究报道日益增多,特别是由于建立了较为简单而敏感的cAMP测定方法,更给这方面的研究提供了有利条件。近年来,除了发现cAMP广泛存在于哺乳动物的细胞和体液内,同时还发现它在尿中的排泄量远较细胞内和血浆内的含量为高。曾有些学者通过尿cAMP的测定发现cAMP含量与某些疾病的关系,如甲状旁腺机能亢进、高血压症等尿cAMP水平升高,甲状旁腺机能减退患者尿cAMP水平降低。Taylor(1970)首次报道了妊娠期妇女尿     

呼吸道病毒和干扰素对正常人淋巴细胞环磷酸腺苷产生的影响

将流感病毒和副流感病毒、α和β干扰素作用于正常人外周血淋巴细胞后,发现病毒和干扰素可明显降低正常人淋巴细胞内经异丙肾上腺素刺激后的环磷酸腺苷(cAMP)含量,但不影响淋巴细胞内基础cAMP含量。病毒和干扰素的这种抑制作用,可能是由于病毒和干扰素影响了淋巴细胞β受体的功能所致。     

分离的泌酸细胞的生理学研究

本文介绍近年来用分离的泌酸细胞,研究组织胺、乙酰胆碱和胃泌素以及组织胺、前列腺素(PG)和环一磷酸腺苷(cAMP)在盐酸分泌过程中的作用及其相互关系的一些设想。(1)组织胺、乙酰胆碱和胃泌素均可直接与泌酸细胞上各自的受体相结合而引起盐酸分泌,它们之间有着相互加强的作用;(2)组织胺通过增加泌酸细胞内的cAMP促进酸的分泌;(3)PG从两个方面对胃粘膜产生保护作用,即对抗依赖于组织胺的cAMP形成和促进另一细胞系统内依赖于PG的cAMP的形成。     

腺苷对大鼠心肌钙蛋白Ⅰ及磷脂酰基醇磷酸化的抑制作用

 用差速离心及等密度梯度离心法从大白鼠心肌细胞分离收缩蛋白质及质膜,分别与[γ-~(32)P]ATP保温以观察细胞成分的磷酸化,以及腺苷和腺苷类似物对磷酸化的影响。结果表明,在收缩蛋白质组分,~(32)P主要参入肌钙蛋白I(Troponin I,29000Da);在质膜组分,~(32)P主要参入磷脂酰肌醇-4-一磷酸(PtdIns4P),亦即ATP使磷脂酰肌醇(Ptd Ins)磷酸化。腺苷对此两种磷酸化都有抑制作用,尤以对PtdIns磷酸化的抑制最强烈。cAMP对肌钙蛋白Ⅰ的磷酸化有刺激作用,这与文献报道相符。作者认为,腺苷和cAMP对肌钙蛋白Ⅰ磷酸化的拮抗作用与腺苷和肾上腺素对心肌调节的拮抗作用有明显的相关性。鉴于近年发现,肌醇磷脂转换在调节细胞活动中起重要作用,腺苷对磷脂酰肌醇磷酸化的抑制作用可能有重要的生物学意义。     

新疆哈密大枣中cAMP提取工艺研究

采用传统水浴提取方法,结合高效液相色谱测定环磷酸腺苷（cAMP）提取量,考察提取时间、提取温度、料液比3个单因素对cAMP提取量的影响。结果表明,料液比为主要影响因素,提取时间、提取温度次之。在单因素的基础上,通过正交试验确定了cAMP 最佳提取工艺为料液比 1∶10、提取时间4h、提取温度95℃。     

氨茶碱与柠檬酸盐协同作用促进环磷酸腺苷发酵生产

目的: 探究通过抑制磷酸二酯酶活性促进cAMP发酵合成的工艺方法。方法: 在7 L发酵罐上进行添加氨茶碱的发酵实验,通过对发酵主要参数、关键酶活性、能量代谢水平等进行分析,针对性提出了氨茶碱与柠檬酸盐协同作用促进cAMP合成的发酵工艺。结果: 与对照相比,添加5 mg/L氨茶碱批次的cAMP产量提高25.9%,副产物腺苷浓度减少41.6%,两批次中腺苷酸环化酶和琥珀腺苷酸脱氢酶活性无显著改变,而磷酸二酯酶和5'-核苷酸酶活性明显下降。能量代谢分析结果表明,两批次的胞内ATP/AMP相比于对照批次明显降低,而AMP水平却显著上升,ATP合成水平成为限制产物积累的主要因素。氨茶碱与柠檬酸盐协同添加的cAMP发酵工艺中,cAMP产量达到4.48 g/L,比单独添加柠檬酸钠和氨茶碱分别提高22.1%和13.8%,副产物腺苷浓度仅为0.98 g/L,分别降低51.7%和25.3%。结论: 氨茶碱抑制了磷酸二酯酶和5'-核苷酸酶活性,减少cAMP分解和副产物合成,显著提高cAMP产量,然而ATP合成水平成为产物积累的限制因素。氨茶碱与柠檬酸盐协同添加工艺将抑制磷酸二酯酶活性和提高能量代谢水平相结合,进一步促进了产物发酵合成。     

环磷酸腺苷参与哺乳动物卵泡发育的研究进展

环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate, cAMP)是哺乳动物体内重要且保守的第二信使之一,可通过转导细胞外信号参与调节多种器官和组织的发育及生理功能。已有研究显示,雌性哺乳动物卵母细胞减数分裂进程与cAMP的水平变化密切相关且受到严格调控。卵母细胞中cAMP主要由腺苷酸环化酶3 (adenylyl cyclase 3, AC3)合成,其降解则受磷酸二酯酶3A (phosphodiesterase 3A, PDE3A)调控,这两者共同协调卵母细胞cAMP水平,从而使其在雌性卵巢的卵泡发育和卵子发生过程中发挥关键性作用。研究证明,处于生长卵泡中的卵母细胞胞质内高水平的cAMP可维持卵母细胞第一次减数分裂长期处于阻滞状态,只有当cAMP的合成被下调或其被PDE3A降解时,卵母细胞才能恢复减数分裂并成熟。而新近的研究显示,cAMP在卵子发生的其他阶段也发挥着重要的生理功能。为了能更全面地了解cAMP参与哺乳动物配子发生的调节作用及机制,本文综述了近年来国内外cAMP调节哺乳动物卵泡发育的相关研究成果,以期为深入理解cAMP与生殖细胞发生、发育的关系提供参考。