乙型脑炎病毒E蛋白HLA—A＊0201限制性细胞毒性T细胞表位的预测

目的:预测乙型脑炎病毒E蛋白(Japanese encephalitis virus envelope protein,JEV E 蛋白)的HLA-A2限制性CTL表位.方法:采用SYFPEITHI超基序法、量化基序多项式方案分析及延展基序方案联合应用,筛选JEV E 蛋白HLA-A2限制性的九肽细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic lymphocyte,CTL)表位.结果:通过预测获得了9个JEV E 蛋白HLA-A0201限制性的九肽CTL表位.结论:超基序法与量化基序多项式方案分析及延展基序方案的联合应用所产生的JEV E 蛋白CTL表位,为进一步研制新型乙脑肽疫苗奠定了重要的基础.     

HLA-A2限制性人食管癌相关抗原COX-2表位的鉴定和改造

 目的筛选和鉴定食管癌广泛高表达蛋白COX-2的HLA-A2限制性CTL表位。方法运用生物信息学的方法,以SYFPEITHI法初步预测,结合MHCPred 2.0和NetChop3.0 Server在线分析,设计出五条新的抗原肽。通过标准Fmoc固相合成法合成抗原肽,以流式细胞仪对其与HLA-A2分子的结合力和稳定性进行分析,并对结合力较低的P66(FI<0.5)的原始序列进行改造,将其序列第一位的苯丙氨酸替换成酪氨酸(P66Y1),以MTT实验检测抗原肽诱导的特异性CTL对肿瘤细胞的杀伤作用。结果P321对HLA-A2分子有较高的结合力(FI=1.93),同时P66Y1与HLA-A2分子的结合力显著增强(FI=1.48),并且它们与HLA-A2分子的稳定性较好(DC50>2h)。P321和P66Y1对表达COX-2的EC-9706、EC-1的杀伤率分别明显高于P66。结论源于食管癌广泛高表达抗原COX-2的抗原肽P321和P66Y1能分别有效激发HLA-A2限制性CTL的免疫应答并杀伤肿瘤细胞。     

肝癌相关肿瘤抗原AFP新的HLA-A2/A24 限制性CTL表位的预测及分析

目的:预测肝癌肿瘤抗原AFP新的HLA-A2/A24限制性CTL表位,为肝癌CTL表位肽的筛选及鉴定提供依据.方法:选择与肝癌密切相关的肿瘤抗原AFP为研究目标,采用NetCTL 1.2 Server远程预测系统进行HLA-A2/A24限制性CTL表位预测.结果:共预测出与肝癌相关的肿瘤相关抗原AFP的8个HLA-A2 限制性CTL表位,13个HLA-A24限制性CTL 表位.结论:应用NetCTL 1.2 Server法预测CTL表位是一种高效准确的预测方法.所预测的肿瘤抗原AFP的HLA-A2/24 限制性CTL表位经实验筛选、鉴定后,可为肝癌治疗性疫苗的制备选择合适的CTL表位提供依据.     

联合表位肽诱导HLA-A2+人PBMC产生抗原特异性CTL及杀伤活性研究

目的:探讨MAGE-3,MAGE-n抗原表位体外联合诱导的CTL,并研究其特异性杀伤活性。方法:候选抗原表位以固相多肽合成技术合成,并用HPLC进行纯化,质谱法(MS)鉴定,以流式细胞仪筛选HLA-A2 人外周血PBMC,T2细胞负载抗原肽反复刺激活化诱导抗原特异性CTL,LDH检测其杀伤活性。结果:联合表位肽体外刺激人PBMC,能够较强地诱导抗原特异性CTL并产生特异性杀伤。结论:MAGE-3与MAGE-n的HLA-A2限制性CTL表位肽的联合应用能够产生较强的体外抗肿瘤免疫反应。     

食管癌高表达抗原HLA-A2/A3 限制性细胞毒性T 淋巴细胞表位预测

 目的 预测食管癌普遍高表达蛋白COX-2和MAGE-4的HLA-A2/A3限制性CTL表位。方法运用生物信息学的方法,SYFPEITHI初步预测,结合三维构效定量关系和蛋白酶体酶切位点分析。结果 对SYFPEITHI预测〉20的九肽用MHCPred和NetChop3.0作进一步分析,并与已报道抗原肽进行比对,初步筛选出了42个潜在的CTL表位。结论 这42个九肽均未见文献报道,进一步鉴定将为CTL表位疫苗的研究提供更多的线索。其中,MAGE-422-30、202-210、286-294及COX-2479-4874个九肽具有与HLA-A2和HLA-A3超型潜在的交叉免疫活性,将为研制简约的高效广谱食管癌疫苗提供候选肽。     

肝癌MAGE-n抗原HLA-A2限制性细胞毒性T细胞表位的预测

目的 预测肝癌MAGE—n抗原HLA—A2限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位。方法 应用SYFPEITHI超基序多项式法远程预测系统和量化基序多项式法结合的预测方法，筛选MAGE—n抗原HLA—A2限制性CTL表位。结果 筛选到MAGE—n抗原5个HLA—A2限制性CTL表位(九肽)。结论 SYFPEITHI超基序法和量化基序多项式法结合的预测方法是一种高效和准确的表位预测方法。     

树突状细胞负载MAGE-n表位肽的体外免疫学效应研究

目的:研究树突状细胞(dendritic cell,DC)负载MAGE-n表位肽QLVFGIEVV体外诱导特异性CTL的能力及其抗肿瘤效应。方法:MAGE-n表位肽以固相多肽合成技术合成,并用HPLC进行纯化,质谱法(MS)鉴定,以流式细胞仪筛选HLA-A2+人外周血PBMC,连续贴壁法分离培养人外周血来源树突状细胞,用成熟的DC负载MAGE-n表位肽QLVFGIEVV反复刺激活化诱导抗原特异性CTL,用51Cr释放法检测CTL的杀伤活性,并用抗HLA-A2分子单抗进行杀伤抑制实验。结果:用DC负载MAGE-n表位肽QLVF-GIEVV可诱导特异性CTL反应,对MAGE-n阳性表达细胞有较强的杀伤作用。结论:DC负载抗原肽QLVF-GIEVV在体外可诱发较强的特异性免疫反应。     

hMAM-A源性HLA-A2限制表位肽诱导CTL对乳腺癌细胞的杀伤作用

目的:探讨hMAM-A源性HLA-A2限制性候选表位(KLLMVLMLAA)负载外周血树突状细胞(dendritic cells,DCs)诱导产生的细胞毒性杀伤细胞(CTL)对乳腺癌细胞的杀伤作用.方法:取HLA-A2+健康志愿者外周血,用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),体外用合成的肽段负载DC,不加肽的DC作为对照,采用流式细胞术测定DC的表型变化,ELISA测定IL-10、IL-12、IFN-γ分泌水平.CCK8法测定两种情况下DC诱导的自体CTL对(HLA-A2+/hMAM-A+)AU-565、(HLA-A2-/hMAM-A+)MDA-MB-415、(HLA-A2+/hMAM-A-)MCF-7乳腺癌细胞的杀伤效果.结果:成功培养出形态典型、功能成熟的DC,经肽负载的DC具有更典型的形态特征,DC表面标记分子(CD80、CD86、CD83、HLA-DR)较对照组稍高,上清中IL-12平均分泌水平较对照组高,IL-10平均分泌水平较对照组低,与T细胞共培养后IFN-γ分泌水平较对照组显著增高(P<0.05),对AU-565的杀伤效果显著优于MDA-MB-415、MCF-7乳腺癌细胞.结论:成功预测出hMAM-A源性HLA-A2+限制性CTL表位肽,其致敏的DC可有效呈递表位肽,诱导的CTL对乳腺癌细胞产生特异性杀伤.     

慢性粒细胞白血病相关抗原HLA-A2.1限制性CTL表位的生物信息学分析

目的:预测慢性粒细胞白血病BCR/ABL融合基因HLA-A2.1限制性细胞毒性T细胞表位.方法:运用BIMAS、SYFPEITHI、Predep、Immune Epitope Database和Analysis Resource(IEDB)软件预测BCR/ABL融合基因可能的HLA-A2.1限制性CTL表位.结果:结合BIMAS、SYFPEITHI、Predep和IEDB预测BCR/ABL融合基因的HLA-A2.1限制性CTL表位,共6条.结论:综合运用多个预测软件可提高预测效率获得目的表位肽,为下一步基础实验打下基础.     

修饰的肿瘤抗原肽CEA_（610D）疫苗的体外抗肿瘤作用

目的:评价修饰的CEA610D抗原肽疫苗体外抗肿瘤免疫的有效性,为其临床应用提供依据.方法:多肽固相合成法合成HLA-A2 CEA修饰肽(CEA610D)、HLA-A2天然肽CEA605-613(天然肽)和HLA-A2无关肽MAGE-3(无关肽),采用同种异体混合淋巴细胞与肽共孵育的方法,诱导肽特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL),利用MTT法检测CTL的增殖和杀伤活性;流式细胞术观察细胞表型;RT-PCR检测细胞穿孔素的表达;ELISA法检测CTL上清中IFN-γ的水平.结果:CEA610D疫苗产生肽特异性CTL的能力最强(P<0.05),其CD8+T细胞数也高于天然肽组和无关肽组;在效靶比为40∶1时,CEA610D和天然肽所诱导的CTL对CEA+HLA-A2限制性人结肠癌细胞T84的杀伤活性可达(56.7±3.73)%和(51.2±1.86)%,而3种肽特异性CTL细胞对CEA+HLA-A2人结肠癌lovo细胞杀伤活性维持在本底水平;CEA610D组的CTL所释放的杀伤相关介质穿孔素和上清中IFN-γ的水平也显著高于其余两组(P<0.01).结论:与天然肽相比,CEA610D疫苗可打破自身表位的免疫耐受,在体外抗肿瘤免疫中更具优势.