高香草酸-H_2O_2-HRP荧光酶联免疫分析测定HRP的研究

提出了高香草酸－H2O2－HRP荧光酶联免疫分析测定HRP的新方法。该法基于HRP催化H2O2氧化高香草酸生成能产生荧光的物质，该物质在Ex＝317nm激发光作用下产生荧光，通过测定在Em＝421nm处的荧光强度，间接测定HRP的含量。在所选定的实验条件下，对HRP测定线性范围为1．0×10（-10）～1．0×10（-8）g／mL，检测限为1．0×10（-10）g／mL。     

龙胆酸-H_2O_2-HRP伏安酶联免疫分析体系测定HRP

提出龙胆酸-H202-辣根过氧化物酶（HRP）伏安酶联免疫分析体系。以线性扫描二阶导数伏安法测定HRP催化H2O2氧化龙胆酸的产物,从而可以测定HRP的活性,进而可应用于免疫分析。在BR缓冲溶液中,龙胆酸的氧化产物在-O．58V（vs·SCE）左右产生灵敏的伏安峰。应用此峰测定HRP的检测限为1．4×10-8g·L－l,线性范围为5．0×10－8～1．0×10-5g·L-1测定了酶标记物羊抗免IgG—HRP。     

OAP-H2O2-HRP伏安酶联免疫分析测定烟草花叶病毒

本文提出了邻氨基酚 (OAP) -H2 O2 -辣根过氧化物酶 (HRP)伏安酶联免疫分析体系并用于烟草花叶病毒 (TMV)的测定。本方法以线性扫描二阶导数伏安法检测HRP催化H2 O2 氧化OAP的产物 ,用于HRP测定的检出限为 1 5× 1 0 - 1 mU·L- 1 ,线性范围为 2 5× 1 0 - 1 ～ 1 .0× 1 0 3mU·L- 1 。本法对TMV测定的检测限为 2 .0ng·mL- 1 。用所建立的方法测定病毒感染病叶澄清液的最高稀释比为 1∶3.9× 1 0 6     

3,3'''',5,5''''-四甲基联苯胺-H2O2-HRP分光光度法测定HRP的研究

研究了3,3',5,5'-四甲基联苯胺(3,3',5,5'-tetramethyl benzidine,TMB)-H2O2-辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)分光光度法测定HRP的方法和酶催化反应机理.在辣根过氧化物酶的催化作用下,H2O2氧化3,3',5,5'-四甲基联苯胺生成有色偶氮化合物,以分光光度计在λmax=380 nm处测其吸光度值可以间接测定HRP的含量.此法用于测定游离的HRP,线性范围为4×10-12～4 × 10-9g/mL,检出限为4×10-12g/mL,与同类方法相比灵敏度提高了2个数量级.     

以酚红为底物的伏安酶联免疫分析体系测定HRP

提出酚红 H2 O2 辣根过氧化物酶 (HRP)伏安酶联免疫分析体系。酚红具有醌式结构 ,在滴汞电极上于 - 0 62V(vs .SCE)左右产生伏安还原峰。HRP催化H2 O2 氧化酚红生成非电活性产物 ,使酚红的峰高降低。利用酚红的伏安还原峰的峰高降低 ,可以测定HRP及其标记物 ,并进而可用于酶联免疫分析。以线性扫描二阶导数伏安技术测定HRP的活性 ,其线性范围为 1 .0× 1 0 - 6 ～ 1 .0× 1 0 - 4 g·L- 1 HRP ,检测限为 7.3× 1 0 - 7g·L- 1 HRP。并将该体系应用于烟草花叶病毒的测定。     

3,3′,5,5′-四甲基联苯胺-H_2O_2-HRP分光光度法测定HRP的研究

研究了3,3′,5,5′四甲基联苯胺(3,3′,5,5′tetramethylbenzidine,TMB)H2O2辣根过氧化物酶(horseradishperoxidase,HRP)分光光度法测定HRP的方法和酶催化反应机理。在辣根过氧化物酶的催化作用下,H2O2氧化3,3′,5,5′四甲基联苯胺生成有色偶氮化合物,以分光光度计在λmax=380nm处测其吸光度值可以间接测定HRP的含量。此法用于测定游离的HRP,线性范围为4×10-12～4×10-9g/mL,检出限为4×10-12g/mL,与同类方法相比灵敏度提高了2个数量级。     

OAP-HO-HRP伏安酶联免疫分析测定烟草花叶病毒

本文提出了邻氨基酚(OAP)-HO-辣根过氧化物酶(HRP)伏安酶联免疫分析体系并用于烟草莅叶病毒(TMV)的测定。本方法以线性扫描二阶导数伏安法检测HRP催化HO氧化OAP的产物,用于HRP测定的检出限为1.5×10mU     

以ODA为底物固体电极伏安法测定辣根过氧化物酶及其标记物的研究

以玻碳电极为工作电极研究了邻联茴香胺 ( ODA)为底物微分脉冲伏安法测定辣根过氧化物酶 ( HRP)及其标记物的方法。 HRP能够催化 H2 O2 氧化 ODA,其反应产物在玻碳电极上 - 0 .31 V ( vs.Ag/Ag Cl)左右被还原产生一个灵敏的还原峰 ,还原峰电流随着酶浓度的增大而增大 ,借助此还原电流可以测定 HRP,并可用于以 HRP为标记物的酶免疫分析。对酶催化反应条件和酶催化反应产物的测定条件进行了详细的研究 ,在最佳实验条件下测定游离 HRP的线性范围是 4.0× 1 0 - 10 ～ 6.0× 1 0 - 8g· m L- 1,检测限为3.3× 1 0 - 10 g· m L- 1;测定游离的酶标记物 ( Ig G- HRP) ,稀释范围为 1∶ 2 0 0 0～1∶ 1 0 0 0 0 0 0 ,最大稀释比为 1∶ 1 0 0 0 0 0 0。     

3，4－二羟基苯甲醛－H_2O_2－HRP伏安酶联免疫分析新体系的研究

首次提出了３，４－二羟基苯甲醛－Ｈ２Ｏ２－ＨＲＰ伏安酶联免疫分析新体系，并用于ＨＲＰ的测定。该方法是将ＨＲＰ催化Ｈ２Ｏ２氧化３，４－二羟基苯甲醛的酶催化反应与３，４－二羟基苯甲醛的氧化产物的电极还原反应相偶合，在－１．０３Ｖ（ＳＣＥ）附近产生一灵敏的示波极谱波，测定ＨＲＰ的检测限为１．０×１０－１０ｇ／ｍＬ，线性范围为１．０×１０－１０～９．０×１０－９ｇ／ｍＬ。     

聚天青A/辣根过氧化物酶电极的制备及性能

以循环伏安法在玻碳电极表面电化学聚合天青 A的同时实现了辣根过氧化物酶 ( HRP)的固定化 ,制备了聚天青 A/辣根过氧化物酶 ( PAA/HRP)电极。该电极对 H2 O2有很好的生物电催化还原作用 ,可在没有电子传递体的情况下催化 H2 O2 的还原 ,催化电流与 H2 O2 浓度在 1 .0× 1 0 - 6～ 6.0× 1 0 - 3mol· L- 1的范围内呈良好的线性关系 ,相关系数 r=0 .9993( n=1 6)。该酶电极制备简单 ,重现性良好 ,用于 H2 O2 的测定 ,可使用 60次以上。     

联苯胺-H_2O_2-HRP伏安酶联免疫分析新体系酶催化反应机理的研究

首次利用红外光谱法、紫外 可见光谱法对联苯胺 Ｈ２Ｏ２ 辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）伏安酶联免疫分析新体系酶催化反应产物进行了鉴定。结果表明,在ｐＨ４条件下,ＨＲＰ能催化Ｈ２Ｏ２氧化联苯胺生成偶氮联苯胺,提出了相应的反应机理。     

表面活性剂对联苯胺-H_2O_2-HRP伏安酶联免疫分析体系测定HRP的影响及其机理探讨

考察了多种表面活性剂对联苯胺－Ｈ２Ｏ２－辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）伏安酶联免疫分析体系测定ＨＲＰ的影响，并对其作用机理进行了探讨。结果表明，表面活性剂在一定的浓度范围内对反应具有增敏作用，并且对还原电位产生一定的影响。据此可通过加入适当的表面活性剂提高分析方法的灵敏度。     

以铍试剂Ⅱ为底物电化学法测定辣根过氧化物酶

提出了以铍试剂 作为辣根过氧化物酶 ( HRP)底物伏安法测定辣根过氧化物酶活性的新方法。铍试剂 本身为偶氮结构 ,具有电化学活性 ,能够在汞电极上发生还原反应而产生一个灵敏的二阶导数还原峰 ;以 H2 O2 为氧化剂 ,加入 HRP催化 H2 O2 氧化铍试剂 反应的进行 ,使底物被氧化分解 ,其平衡浓度降低 ,对应的还原峰电流降低 ,峰电流的降低值同 HRP的加入量在 8.0× 1 0 - 7～ 8.0× 1 0 - 6 g·m L- 1之间呈线性关系 ;对酶催化反应和测定条件进行了详细的研究     

硫酸对氨基二乙基苯胺－H_2O_2－HRP分光光度法测定HRP的研究

提出了硫酸对氨基二乙基苯胺－Ｈ２Ｏ２－ＨＲＰ催化动力学光度法测定ＨＲＰ的新方法。ＨＲＰ催化Ｈ２Ｏ２氧化硫酸对氨基二乙基苯胺生成有色化合物，通过测定此有色化合物在λｍａｘ＝５５２．８ｎｍ处的吸光度值间接测定催化剂ＨＲＰ的含量。在所选定的实验条件下，对ＨＲＰ测定的线性范围为１．０×１０－１０～４．０×１０－９ｇ／ｍＬ，检测限为５．７×１０－１１ｇ／ｍＬ。     

DPDAP－H_2O_2－HRP显色光度法测定HRP的研究

首次提出了Ｎ，Ｎ－二氯二甲基对苯二胺一Ｈ２Ｏ２－ＨＲＰ光度法测定ＨＲＰ的方法。ＨＲＰ催化Ｈ２Ｏ２氧化Ｎ，Ｎ－二氯二甲基对苯二胺生成有色化合物，通过测定有色化合物在λｍａｘ＝５５３．６ｎｍ处的吸光光度值，间接测定ＨＲＰ的含量。在所选定的实验条件下，ＨＲＰ的线性范围为１．０×１０－１０～１．０×１０－８ｇ／ｍＬ，本法用于游离ＨＲＰ的测定，与经典的ＥＬＩＳＡ显色光度法相比，灵敏度提高了一个数量级。ＨＲＰ的检测限为５．１×１０－１１ｇ／ｍＬ。