盐酸替罗非班对心肌梗死大鼠心肌组织MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TGF-β表达的影响

目的探讨盐酸替罗非班对心肌梗死后大鼠心肌组织基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9)、金属蛋白酶抑制因子(TIMP-1)和转化生长因子(TGF-β)表达的影响。方法将24只清洁级雄性Wistar大鼠建立心肌梗死模型,随机分为对照组及观察组,每组12只。其中,对照组不给药,观察组腹腔注射盐酸替罗非班注射液,给药量为5 mg/(kg·d),疗程均为6周。6周后,比较两组大鼠MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TGF-βm RNA与蛋白的表达情况。结果与对照组比较,观察组大鼠MMP-2、MMP-9及TGF-β的m RNA表达均降低,而TIMP-1 m RNA表达升高,差异有统计学意义(P0.05);观察组MMP-2、MMP-9及TGF-β的蛋白表达降低,TIMP-1的蛋白表达升高,差异有统计学意义(P0.05)。免疫组化染色结果显示,与对照组比较,观察组大鼠MMP-2、MMP-9及TGF-β表达均降低,TIMP-1表达升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论盐酸替罗非班能够有效改善心肌梗死大鼠心肌中MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TGF-βm RNA及蛋白表达水平,显著改善心肌梗死大鼠左室重构。     

地龙2号对大鼠肝纤维化α-SMA、TGF-β1、MMP-13及TIMP-1蛋白表达的影响

目的研究地龙2号对肝纤维化大鼠肝组织α-SMA、TGF-β1、MMP-13及TIMP-1蛋白表达的影响.方法采用四氯化碳皮下注射诱导大鼠肝纤维化模型,52只雄性Wistar大鼠随机分成6组:正常组、阴性对照组、模型组、阳性对照组、地龙2号大剂量组和地龙2号小剂量组,8周末用免疫组织化学染色法检测肝组织中α-SMA、TGF-β1、MMP-13及TIMP-1蛋白表达情况.结果与模型组相比,地龙2号组肝纤维化程度明显减轻,α-SMA、TGF-β1、及TIMP-1蛋白表达均显著降低,MMP-13表达显著升高.结论地龙2号抑制大鼠肝脏纤维组织的形成可能与其降低α-SMA、TGF-β1、TIMP-1蛋白表达并促进MMP-13蛋白表达有关.     

白藜芦醇对高糖诱导的大鼠胸主动脉平滑肌细胞基质金属蛋白酶-2、基质金属蛋白酶-9表达的影响及其作用机制的研究

目的探讨白黎芦醇(Res)对高糖诱导的大鼠胸主动脉平滑肌细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响是否与PI3K/Akt信号通路有关。方法高糖体外培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞,并应用Res和PI3K通路特异性抑制剂LY294002进行干预,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性,免疫组织化学法检测MMP-2、MMP-9表达,明胶酶谱法检测MMP-2、MMP-9活性,Western blot检测p-Akt、Akt蛋白表达。结果不同浓度Res(25、50、100μmol/L)和LY294002(10、20、30μmol/L)均可抑制高糖诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖(P0.05),且均呈剂量依赖性,还可抑制高糖诱导的MMP-2、MMP-9表达和活性(P0.05)。NC、HG、HG+LY294002(10、20、30μmol/L)组总Akt表达无明显改变,HG+Res(25、50、100μmol/L)组总Akt表达较HG组下降,但无剂量依赖性;而不同浓度的Res和LY294002可抑制高糖诱导的p-Akt表达(P0.05),且均呈剂量依赖性。结论 (1)高糖上调VSMCs MMP-2、MMP-9表达,加重VSMCs增殖;(2)Res可能通过抑制高糖激活的PI3K/Akt信号通路,下调VSMCs MMP-2、MMP-9表达并降低其活性,减轻高糖引起的VSMCs增殖。     

萘哌地尔衍生物YMⅢ对血管紧张素Ⅱ诱导大鼠胸主动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的 研究萘哌地尔衍生物YMⅢ对血管紧张素Ⅱ诱导Wistar大鼠和自发性高血压大鼠胸主动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用及机制.方法 将Wistar大鼠和自发性高血压大鼠胸主动脉平滑肌细胞进行体外培养,采用四甲基偶氮唑盐比色法检测YMⅢ对胸主动脉平滑肌细胞和血管紧张素Ⅱ诱导胸主动脉平滑肌细胞增殖的影响;用实时逆转录聚合酶链反应技术检测血管紧张素原、c-myc mRNA表达.结果 未经血管紧张素Ⅱ处理的胸主动脉平滑肌细胞.0.1 μmol/L YMⅢ能抑制Wistar大鼠和自发性高血压大鼠胸主动脉平滑肌细胞增殖;YMⅢ(0.01、0.05、0.1 μmol/L)能呈浓度依赖性抑制血管紧张素Ⅱ所致Wistar大鼠和自发性高血压大鼠胸主动脉平滑肌细胞的增殖;YMⅢ(0.05～0.1 μmol/L)作用能使血管紧张素Ⅱ所致Wistar大鼠血管紧张素原、c-myc mRNA表达水平下调,而各浓度YMⅢ均能下调血管紧张素Ⅱ所致自发性高血压大鼠胸主动脉平滑肌细胞的血管紧张素原、c-myc mRNA表达.结论 YMⅢ明显抑制血管紧张素Ⅱ诱导大鼠胸主动脉平滑肌细胞的增殖,且抑制增殖作用在自发性高血压大鼠比在Wistar大鼠明显,其作用机制可能与下调血管紧张素原、c-myc mRNA的表达有关.     

同型半胱氨酸对人血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶-9和基质金属蛋白酶抑制物-1表达的影响

目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)对人血管平滑肌细胞(VSMCs)基质金属蛋白酶(MMP)-9和基质金属蛋白酶抑制物(TIMP)-1表达的影响。方法体外培养人VSMCs,分别应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和Westernblot蛋白印迹法检测MMP-9mRNA、TIMP-1mRNA和蛋白表达。结果人VSMCs在不同浓度Hcy(100、200、500、1000μmol/L)孵育24h后MMP-9mRNA和蛋白的表达均显著高于对照组,并提示Hcy呈剂量依赖性诱导人VSMCsMMP-9的表达;但对TIMP-1mRNA和蛋白的表达无影响。结论Hcy可呈剂量依赖性诱导人VSMCsMMP-9的mRNA表达,而对TIMP-1mRNA的表达无明显影响,表明Hcy是在转录水平调控MMP-9的基因表达,这一效应可能是Hcy导致动脉粥样硬化的分子机制之一。     

阿托伐他汀对心肌肥厚大鼠细胞外基质重塑的抑制作用

目的探讨阿托伐他汀对去甲肾上腺素诱导的心肌肥厚大鼠细胞外基质重塑的影响及其可能的机制.方法雄性SD大鼠随机分为三组(1)对照组,(2)去甲肾上腺素组[1.06 mg/(kg·d)×15 d],(3) 去甲肾上腺素+阿托伐他汀组[50 mg/(kg·d)×15 d].去甲肾上腺素ip,2次/d,15 d,建立心肌肥厚模型.应用超声心动图及病理学方法评价整体心肌肥厚及组织胶原表达.用逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)及免疫组化检测细胞外基质调节因子-基质金属蛋白酶(MMP-9)及其生理性抑制剂(TIMP-1)和转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA和蛋白表达.结果去甲肾上腺素组大鼠发生左心室肥厚及纤维化,胶原含量及MMP-9、TIMP-1和TGF-β-1蛋白、mRNA表达显著高于健康对照组(P<0.01).阿托伐他汀能减少心肌中总体胶原及Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成及MMP-9、TGF-β-1表达(P<0.01).结论 MMP-9、TIMP-1和TGF-β-1与心肌肥厚大鼠的细胞外基质重塑有关.阿托伐他汀能有效防治心肌纤维化及细胞外基质重塑,这一效应与其降低心肌中高表达的MMP-9和TGF-β-1有关.     

H2松弛素对慢性阻塞性肺疾病大鼠支气管平滑肌增殖的抑制作用

目的探讨H2松弛素对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠支气管平滑肌增殖的抑制作用。方法观察正常对照组、COPD模型组及松弛素治疗组大鼠肺组织的病理变化,比较各组大鼠支气管壁及平滑肌厚度,检测基质金属蛋白酶(MMP)-1、MMP-9、基质金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP)-1表达水平及MMP-1/TIMP-1、MMP-9/TIMP-1比值。结果与正常对照组大鼠相比,COPD模型组大鼠肺支气管壁及平滑肌厚度显著增厚,且松弛素治疗组大鼠肺支气管壁厚度及平滑肌厚度与COPD模型组大鼠相比显著降低(P0.05)。COPD模型组大鼠组织中MMP-1、MMP-9、TIMP-1的表达水平均高于正常对照组(P0.05),且MMP-1/TIMP-1、MMP-9/TIMP-1比值与正常对照组相比,呈现明显升高趋势(P0.05);而对比COPD模型组大鼠,松弛素治疗组大鼠组织中MMP-1、MMP-9、TIMP-1的表达有所降低(P0.05),且MMP-1/TIMP-1、MMP-9/TIMP-1比值与COPD模型组相比均降低(P0.05)。结论松弛素能抑制大鼠肺组织结构病理变化,抑制COPD气道平滑肌的增殖。     

iNOS及ERK1/2信号转导通路在17β-雌二醇抑制血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的: 观察诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）及细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）信号转导通路在17β-雌二醇（17β-estradiol,E2）抑制血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）增殖中的作用。方法: 采用MTT比色法和Western blot技术,检测E2预处理前后胎牛血清（fetal calf serum,FCS）对VSMCs中DNA合成、iNOS表达及磷酸化的ERK1/2蛋白表达的影响。结果: E2作用24 h,可明显抑制FCS诱导的VSMCs增殖。Western blot的结果显示,FCS孵育VSMCs后,iNOS蛋白的表达下降,磷酸化的ERK1/2蛋白表达增加。E2预处理后,可增加iNOS蛋白的表达,抑制磷酸化ERK1/2蛋白表达。若提前应用iNOS阻断剂L-精氨酸甲酯（L-NAME）孵育VSMCs,可部分逆转E2诱导的磷酸化的ERK1/2蛋白表达下降的效应。结论: E2可抑制FCS诱导的VSMCs增殖,其作用可能与增加iNOS蛋白的表达,抑制磷酸化的ERK1/2表达有关。     

自噬在血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞迁移和增殖的作用

目的探讨自噬对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)迁移和增殖的影响。方法采用体外培养大鼠胸主动脉VSMCs,采用不同浓度AngⅡ(10-10mol/L~10-6mol/L)刺激VSMCs 24 h,免疫印迹检测细胞自噬标志物LC3、Beclin1的表达;采用最佳浓度AngⅡ(10-7mol/L)对VSMCs刺激不同时间点(0 h、0.5 h、1 h、3 h、6 h、12 h、24 h),同时检测LC3、Beclin1表达。采用AngⅡ1型受体阻断剂(洛沙坦钾)、AngⅡ型受体阻断剂(PD123319)进行预孵,之后采用最佳浓度AngⅡ刺激,检测LC3表达。采用自噬特异性阻断剂3-MA进行预孵,通过损伤愈合试验,CCK8增殖试验检测细胞自噬在AngⅡ诱导的VSMCs迁移和增殖的作用。结果 AngⅡ刺激可引起VSMCs发生自噬,表现为LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1上调,且呈现明显时间、剂量效应(P0.0 5),1 0-7mol/L AngⅡ刺激2 4 h自噬最强。AngⅡ1型受体(AT 1)阻滞剂(洛沙坦钾)能抑制AngⅡ诱导VSMCs的自噬(P0.05),而AngⅡ2型受体(AT2R)阻滞剂(PD123319)不能抑制AngⅡ诱导VSMCs自噬(P0.05)。自噬特异性阻断剂3-MA能抑制AngⅡ诱导VSMCs的迁移和增殖。结论 AngⅡ可通过AT1R诱导VSMCs发生自噬,从而促进VSMCs迁移和增殖。     

Genistein对大鼠肝星状细胞的增殖及TGF-β1、MMP-2和TIMP-2表达的影响

目的:观察4,5,7-三羟基异黄酮(Genistein)对大鼠肝星状细胞(HSC)增殖及TGF-β1、MMP-2及TIMP-2基因表达的影响,探讨其抗肝纤维化的可能机制.方法:将体外培养的大鼠HSC-T6分别给予不同浓度的Genistein作用24 h后,用噻唑兰比色法(MTT)检测测定活细胞数,采用半定量RT-PCR法检测细胞中TGF-β1、MMP-2及TIMP-2的mRNA水平.结果:Genistein作用于大鼠HSC-T6后,活细胞数目减少,12.5、25及50 mg/L 3个作用浓度组与对照组的4值比较有显著性差异(0.306±0.0067,0.256±0.0085,0.1316±0.0049VS 0.4468±0.0299,均P<0.05).不同浓度的Genistein干预HSC-T6,MMP-2 mRNA表达水平与对照组比较均明显增强(均P<0.05);TGF-β1和TIMP-2 mRNA表达水平与对照组比较均明显降低(均P<0.05).结论:Geni Steill可能通过增强大鼠HSCMMP-2 mRNA的表达,同时抑制TGF-β与TIMP-2 mRNA的表达发挥抗纤维化的作用.     

中药心康方对大鼠心力衰竭模型心肌胶原代谢的影响

目的观察中药心康方对大鼠心力衰竭模型心肌胶原代谢的影响。方法阿霉素腹腔注射法建立大鼠心力衰竭模型,随机分为对照组(10只)、模型组(9只)、心康方组(9只)和卡托普利组(9只)。Masson染色观察心肌胶原变化,Western blot检测心肌Ⅰ型、Ⅲ型胶原、转化生长因子β1(TGF-β1)、核因子κB的抑制蛋白(IκB)和p56的表达,Western blot和RT-q PCR分别检测心肌基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)-1和TIMP-2的蛋白和mRNA表达水平。结果与对照组比较,模型组大鼠心肌Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达显著增加,胶原容积分数显著升高(均为P<0.01);TGF-β1和p56表达显著增加,IκB显著降低(均为P<0.05);MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2的蛋白和mRNA表达水平显著升高(P<0.01或P<0.05)。与模型组比较,心康方组和卡托普利组大鼠的心肌Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达显著减少,胶原容积分数显著降低(均为P<0.01);TGF-β1和p56显著降低,IκB显著升高(均为P<0.05);MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2的蛋白和mRNA表达水平显著降低(P<0.01或P<0.05)。结论中药心康方可减轻心力衰竭大鼠的心肌胶原沉积,其机制可能与抑制核因子κB介导的TGF-β1上调有关。     

三羟异黄酮对TGF-β1诱导的人胰腺癌细胞Panc-1侵袭力的影响及机制

检测不同浓度三羟异黄酮作用于转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人胰腺癌细胞Panc-1后侵袭能力的变化、尿激酶型纤溶蛋白酶原激活物(uPA)的mRNA、uPA蛋白和基质金属蛋白酶2(MMP-2)、9(MMP-9)蛋白的表达.结果发现,三羟异黄酮作用于TGF-β1诱导Panc-1细胞后其侵袭能力较对照组明显下降,并呈剂量依赖性;uPA mRNA、蛋白表达以及MMP-2蛋白表达亦均明显少于对照组.认为三羟异黄酮抑制TGF-β1诱导的Panc-1细胞侵袭能力可能与其下调uPA和MMP-2的表达有关.     

重组腺病毒介导的人p27kip1基因高表达对体外培养的大鼠主动脉血管平滑肌细胞迁移的影响

目的　探讨重组腺病毒介导的p2 7kip1基因及其蛋白产物高表达对血管平滑肌细胞 (VSMCs)迁移的抑制作用。方法　将含人p2 7kip1cDNA的重组腺病毒 (Adhp2 7kip1)及含 β 半乳糖苷酶基因的重组腺病毒 (AdLacZ)在体外转染原代大鼠主动脉VSMCs,用Westernblot及Boyden趋化小室检测外源性p2 7kip1蛋白在细胞内的表达及对VSM Cs迁移的影响。结果　转染后 2 4h ,Adhp2 7kip1转染的VSMCs内p2 7kip1蛋白高表达 ,而AdLacZ转染的VSMCs内仅显示极低水平的内源性p2 7kip1蛋白表达 ;Boyden趋化小室检测显示未转染的VSMCs、AdLacZ及Adhp2 7kip1转染的VSMCs血清诱导后的迁移细胞数分别为 139± 2 6、10 6± 16及 6 8± 14。结论　外源性p2 7kip1基因及蛋白产物在VSMCs内高表达可显著抑制VSMCs的迁移     

AcSDKP对大鼠心脏成纤维细胞MMP-1、TIMP-1及Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响

目的探讨N-乙酰基—丝氨酰—天门冬酰—赖氨酰—脯氨酸（AcSDKP）抗心肌纤维化的可能机制。方法将大鼠心脏成纤维细胞随机分为三组,对照组予0.4%胎牛血清的DMEM;转化生长因子（TGF）-β1组在0.4%胎牛血清的DMEM中加入终质量浓度为5 ng/ml的TGF-β1;AcSDKP组在5 ng/ml的TGF-β1诱导刺激同时加入终质量浓度为10-9mol/L的AcSDKP。Western blot法检测MMP-1、TIMP-1、Ⅰ和Ⅲ型胶原表达。结果 TGF-β1可使MMP-1表达下降,TIMP-1表达升高,MMP-1/TIMP-1值下降;AcSDKP抑制TGF-β1对MMP-1的作用,使MMP-1表达增加,但对TIMP-1表达无明显影响,MMP-1/TIMP-1值增加。同时AcSDKP减弱由TGF-β1诱导的Ⅰ和Ⅲ型胶原表达,并降低Ⅰ/Ⅲ型值。结论 AcSDKP抗纤维化的作用机制可能是调节胶原合成/降解代谢的平衡,加速细胞外基质降解,同时抑制Ⅰ和Ⅲ型胶原生成。     

干扰素-γ对兔动脉损伤后平滑肌细胞增殖和迁移的作用

目的　探讨干扰素 -γ(IFN-γ)对动脉损伤后平滑肌细胞 (SMC)增殖和迁移的作用及其作用机制。方法　建立兔髂动脉球囊损伤动物模型 ,培养损伤后动脉 SMC,实验分 4组 :对照组、转化生长因子 -β1(TGF-β1)组、IFN-γ组、TGF-β1+ IFN-γ组。每组细胞加培养液或加入 10μg/L TGF-β1或 (和 ) 50 0 k U/L IFN-γ刺激 72 h,细胞计数和四甲基偶氮唑盐 (MTT)法测定各组 SMC的增殖 ,同时测定 SMC迁移。明胶酶谱分析 SMC中基质金属蛋白酶 -2 (matrix metalloproteinase-2 ,MMP-2 ,66k D蛋白 )的活力。结果　与对照组比较 ,72 h后 TGF-β1组细胞数和迁移距离增加 (P <0 .0 1) ,MTT A值检测细胞增殖抑制率为 -19.4% ;IFN-γ组细胞数和迁移距离减少(P <0 .0 1) ,细胞增殖抑制率为 15.8% ;TGF-β1+ IFN-γ组细胞数和迁移距离低于 TGF-β1组 ,细胞增殖抑制率为 -9.1%。明胶酶谱分析显示各组细胞均可检测到 MMP-2。,TGF-β1组还可检测 MMP-2酶原 (pro-MMP-2 ,72k D蛋白 )的表达。与对照组 (10 0 % )比较 ,TGF-β1组 MMP-2相对活力为 14 3 % ,IFN-γ组为 95% ,TGF-β1+ IFN-γ组为 10 9%。结论　 IFN-γ可抑制动脉损伤后的 SMC增殖和迁移并减轻 TGF-β1的促 SMC增殖和迁移的作用。并且 ,IFN -γ可以抑制 SMC MMP-2活力     

奥美沙坦对动脉粥样硬化大鼠斑块稳定性的影响

目的 观察奥美沙坦对动脉粥样硬化(AS)大鼠斑块中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、血管平滑肌细胞、巨噬细胞数量的影响,探讨其稳定AS斑块的作用及可能机制.方法 应用高脂饮食建立AS大鼠模型,将16只健康雄性Wistar大鼠随机分为两组,每组8只.模型组饲喂含1%胆固醇、5%猪油的高脂饲料;奥美沙坦组饲喂含1%胆固醇、5%猪油高脂饲料加奥关沙坦10mg/(kg·d),连续用药3个月.免疫组化法检测AS斑块中MMP-9的蛋白表达水平及粥样斑块中血管平滑肌细胞和巨噬细胞数量.结果 免疫组化显示,奥美沙坦组与模型组相比MMP-9蛋白表达显著减少(P<0.05),平滑肌细胞数量显著增加(P<0.05),巨噬细胞数量明显降低(P<0.05).结论 奥美沙坦可通过下调MMP-9的水平,增加斑块中平滑肌细胞数量,减少斑块内巨噬细胞的数量来稳定AS斑块.     

白细胞介素-10对大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞迁移的影响

目的探讨白细胞介素(IL)-10对大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)迁移的影响。方法取3个月自发性高血压大鼠胸主动脉细胞作为大鼠平滑肌原代细胞,细胞培养后分为IL-10组、空载体组、未处理组。加入细胞迁移诱导剂白细胞介素(IL)-1β。进行细胞划痕实验,Transwell实验,Snail转录因子mRNA荧光定量PCR,波形蛋白的表达测定。结果 IL-10组与其他两组相比,细胞迁移距离、细胞迁移数目、Snail转录因子mRNA的表达量、波形蛋白的表达均明显减少(P0.05)。结论 IL-10抑制IL-1β诱导的大鼠胸主动脉VSMC迁移。     

重组腺病毒介导的人p27kipl基因高表达对体外培养的大鼠主动脉血管平滑肌细胞迁移的影响

目的探讨重组腺病毒介导的p27kip1基因及其蛋白产物高表达对血管平滑肌细胞(VSMCs)迁移的抑制作用.方法将含人p27kip1cDNA的重组腺病毒(Adhp27kip1)及含β-半乳糖苷酶基因的重组腺病毒(AdLacZ)在体外转染原代大鼠主动脉VSMCs,用Western blot及Boyden趋化小室检测外源性p27kip1蛋白在细胞内的表达及对VSMCS迁移的影响.结果转染后24h,Adhp27kip1转染的VSMCs内p27kip1蛋白高表达,而AdLacZ转染的VSMCs内仅显示极低水平的内源性p27kip1蛋白表达;Boyden趋化小室检测显示未转染的VSMCs、AdLacZ及Adhp27kip1转染的VSMCs血清诱导后的迁移细胞数分别为139±26、106±16及68±14.结论外源性p27kip1基因及蛋白产物在VSMCs内高表达可显著抑制VSMCs的迁移.     

骨髓间充质干细胞共培养对转化生长因子β1诱导的ARPE-19上皮间充质转化的影响

目的分析间充质干细胞(MSCs)共培养对转化生长因子(TGF)β1诱导的ARPE-19细胞上皮间充质转化(EMT)的影响。方法常规培养人视网膜色素上皮(RPE)细胞系ARPE-19细胞并进行分组处理:正常组(CON组)常规培养不作处理;TGFβ1组给予5 ng/ml浓度的重组人TGFβ1诱导EMT;共培养组(MSCs组)在MSCs与ARPE-19共培养的基础上诱导EMT。利用CCK8法检测细胞增殖活性;检测各组EMT指标α-平滑肌肌动蛋白(SMA)、Vimentin、闭锁连接蛋白(ZO)-1及E-cadherin表达变化;利用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测基质金属蛋白酶抑制因子(TIMP)-1和基质金属蛋白酶(MMP)-9水平。结果 TGFβ1组ARPE-19细胞的增殖活性显著低于CON组,而MSCs组细胞增殖能力显著高于TGFβ1组。TGFβ1刺激可引起细胞内α-SMA与Vimentin蛋白与mRNA表达显著增高,ZO-1与E-cadherin蛋白与mRNA表达水平显著降低(P0.05);MSCs共培养预处理能逆转TGFβ1诱导的EMT水平,降低α-SMA与Vimentin蛋白及mRNA表达,提高ZO-1与E-cadherin蛋白与mRNA表达水平。此外,TGFβ1组MMP-9、TIMP-1及MMP-9/TIMP-1水平均显著增加,而MSCs组能逆转TGFβ1刺激效应,显著降低MMP-9、TIMP-1及MMP-9/TIMP-1水平(P0.05)。结论 MSCs共培养能减轻TGFβ1诱导的ARPE-19细胞EMT水平,且对ARPE-19细胞增殖有一定影响。     

胰岛素对大鼠平滑肌细胞表达MMP-9、TIMP-1及内皮细胞表达sES的影响

目的探讨胰岛素对SD大鼠平滑肌细胞表达基质金属蛋白酶9(MMP-9)、组织抑制因子1(TIMP-1)以及内皮细胞表达可溶性E-选择素(s ES)的影响。方法原代培养SD大鼠颈内动脉平滑肌细胞及主动脉内皮细胞,用不同剂量的胰岛素作用后,以酶联免疫吸附实验(ELISA)分别测定上清液MMP-9、TIMP-1及s ES的水平。结果与对照组(无胰岛素)相比,胰岛素组MMP-9及s ES水平显著增高,TIMP-1则显著降低(P0.05)。经Pearson相关分析显示,胰岛素浓度与MMP-9(r=0.815,P0.001)及s ES(r=0.841,P0.001)呈正相关,与组织抑制因子1(r=-0.740,P0.001)呈负相关。结论胰岛素促进SD大鼠平滑肌细胞MMP-9及内皮细胞s ES表达,抑制平滑肌细胞TIMP-1表达,并呈剂量依赖性。