肝富集转录因子在HBV基因转录与复制中的作用研究

目的观察各种肝富集转录因子对乙型肝炎病毒（HBV）基因转录和病毒复制水平的影响,探讨其在HBV嗜肝性机理中的作用。方法用复制型HBV重组质粒pHBV4．1与肝富集转录因子HNF1、HNF3、HNF4、HNF6、C／EBP或RXRa／PPARa的表达质粒,分别共转染非肝源细胞株NIH3T3、HeLa、293T、SWl353、CV-1和COSl。用Northern吸印杂交检测HBV3．5kb、2．4／2．1kb、0．7kb mRNA的转录情况,Southern吸印杂交检测HBV DNA复制中间体水平。结果用pHBV4．1转染NIH3T3细胞后,在没有肝富集转录因子表达质粒共转染时未能检出3．5kb HBV RNA转录,也无HBV DNA复制;当用肝富集转录因子共转染时,HNF4和RXRα／PPARα的表达能够激活3．5kb HBV RNA转录和HBV DNA复制,而HNF1、HNF3、HNF6和C／EBP未能激活HBV复制。在HeLa、293T、SW1353、CV-1和COS1细胞中,HNF4、RXRα／PPARα对HBV的转录和复制也具激活作用。进一步用突变型HBV重组质粒研究发现,C启动子HNF4结合位点的突变明显减弱了HNF4和RXRα／PPARα对HBV复制的激活作用。结论肝富集转录因子HNF4和RXRα／PPARα可支持HBV在非肝源细胞中的转录与复制;肝特异性基因转录是HBV嗜肝性的决定因素之一。     

乙肝病毒X蛋白增强小鼠体内HBV的转录及复制

目的 观察小鼠体内乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白(HBx)对HBV基因转录和复制水平的影响.方法 应用高压射体内转染法将野生型HBV重组质粒、HBx表达缺失的HBV重组质粒及HBx表达质粒DNA通过尾静脉快速注射入小鼠体内,应用Southern和Northem印迹分别检测小鼠肝组织中HBV DNA复制中间体及HBV mRNA水平.结果 野生型HBx表达缺失的HBV重组质粒注射组小鼠肝组织中均检测到HBV的复制与转录;HBx表达缺失的HBV重组质粒注射组HBV基因转录和复制水平较野生型HBV重组质粒注射组、HBx表达缺失HBV重组质粒与HBx表达质粒共注注射组弱,生理盐水注射组未检测到HBV的转录与复制.结论 HBx的表达缺失可导致体内HBV基因转录和复制水平的下降,而外源HBx的表达可逆转这种因HBx表达缺失引起的HBV复制及转录的减弱,提示HBx增强小鼠体内HBV基因转录和复制.     

丙型肝炎病毒核心蛋白对核转录因子stat3活性的调控作用

目的:探讨丙型肝炎病毒（HCV）核心蛋白对核转录因子stat3活性的调控作用。方法:将表达HCV核心蛋白的真核细胞表达质粒pcDNA3.1-core转染人源肝细胞系QSG7701,建立稳定表达HCV核心蛋白的细胞株QSG7701-core,利用免疫细胞化学、Western blot及凝胶电泳迁移实验（EMSA）等方法检测stat3的磷酸化及DNA结合活性。结果:在表达HCV核心蛋白的QSG7701细胞中,stat3的磷酸化水平明显低于空白质粒转染组和未转染组,而总stat3的表达水平3组无明显差别;核内磷酸化的stat3阳性信号明显减弱; stat3的DNA的结合活性明显低于空白质粒转染组和未转染组。结论:在人源永生化肝细胞系中HCV核心蛋白的表达可能具有抑制stat3的磷酸化和DNA结合活性的作用,从而抑制JAK/ stat3信号转导通路活化,这可能是HCV干扰素治疗效果不佳的原因之一。     

mfgl2凝血酶原酶/纤维介素基因转录调控元件肝细胞核因子的研究

目的 研究鉴定mfgl2凝血酶原目影纤维介素基因转录激活所必需的调控元件或转录因子。方法应用免疫印迹法检测Balb／c小鼠的巨噬细胞内是否表达肝细胞核因子4(HNF4),共聚焦显微镜免疫荧光技术检测鼠肝炎病毒(MHV)的核心(N)蛋白质是否进入被感染细胞核。应用：DNA电泳迁移差异检测、竞争实验和定点诱变技术鉴定—mfgl2基因转录激活所必需的调控元件或转录因子。结果 免疫印迹法表明巨噬细胞可持续表达HNF4。共聚焦显微镜免疫荧光技术证实MHV的N蛋白质可进入被感染细胞核内。凝胶移位分析和竞争实验显示HNF4和巨细胞病毒早期蛋白基因1．2(IEl.2)均可与特异寡核苷酸竞争结合mfgl2启动子上特定位点而不与非特异寡核苷酸发生竞争。HNF4特异性多克隆抗体竞争试验可见超迁移带。定点突变mfgl2启动子上：HNF4所结合的顺式调控元件可降低野生型mfgl2启动子的转录活动达75％,联合突变IE1-2结合位点未见协同效应。单纯突变IEl．2结合位点后,野生型nl龟12启动子的转录活动仍可保留75％-80％。结论 HNF4具有与mfgl2／fibroleukin启动子结合的特性,为MHV-3N蛋白质诱导mfgl2／fibroleukin基因表达的必备转录因子。     

核因子κB在HBV相关性肝癌中的研究进展

目前大量的研究证明,HBV感染是引起原发性肝癌的主要原因。核因子κB(NFκ-B)的发现,在炎症和肿瘤之间搭起了一座桥梁。HBV通过自身直接或者间接引起NFκ-B的激活,NFκ-B又作用于致癌因子,从而引发肿瘤。但这种相互作用不是单向的,而是级联放大的负反馈。NFκ-B不仅参与肝癌的发生、发展,还与化疗药物耐药有关,NFκ-B在HBV感染引起的肝癌中的作用至关重要。     

丙肝病毒核心蛋白抑制乙肝病毒转录与复制的实验研究

目的观察丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV core)对乙型肝炎病毒(HBV)基因转录和病毒复制的影响。方法将不同剂量的HCVcore表达质粒(pNKF-HC Vcore)转染HepG2.2.15细胞。以空载质粒(pNKF)转染HepG2.2.15细胞作为阳性对照,转染HepG2细胞作为阴性对照。以Northern吸印杂交检测HBV mRNA的转录水平,以Southern吸印杂交检测HBV复制中间体DNA的复制水平。结果20μg pNKF-HCV core转染HepG2.2.15细胞后,可使细胞中HBV mRNA转录水平及HBV复制中间体DNA复制水平明显降低,抑制率分别为51.9%及36.5%。10μg及15μg pNKF-HCV core较pNKF转染的HepG2.2.15细胞的HBV mRNA信号与HBV复制中间体DNA检出信号强度无显著差异。结论HCV核心蛋白达到一定的剂量后能够在一定程度上抑制HBV的转录与复制。     

转录因子S p3在肝细胞癌中的表达意义

目的：研究转录因子Sp3（Sp3）在肝细胞癌（HCC）发生、发展及预后中的作用。方法采用Western blot法和RT‐PCR法检测该院49例HCC组织及其癌旁肝组织中Sp3和β‐Catenin的表达情况,分析二者在 HCC和癌旁肝组织中的表达差异、二者的表达与 HCC临床病理特征的关系,以及Sp3与预后的关系。结果 Western blot和RT‐PCR法的结果均显示：（1）Sp3在HCC中的表达高于癌旁肝组织,差异有统计学意义（P＜0．05）;（2）β‐Catenin在HCC中的表达高于癌旁肝组织,差异有统计学意义（P＜0．05）;（3）Sp3和β‐Catenin在HCC中的表达与肿瘤直径和分级相关;（4）Sp3和β‐Catenin在 HCC中的表达呈正相关（Western blot ：r＝0．681、P＝0．000;RT‐PCR：r＝0．641,P＝0．000）,均与肿瘤大小和分化程度有关;（5）Sp3高表达的病例预后较低表达的病例差（P＜0．05）。结论 Sp3在 HCC发生中起促进作用且与肿瘤恶性程度相关;Wnt通路可能是其参与 HCC发生、发展的途径。     

强的松增强 HBV 感染小鼠体内病毒复制表达

目的:检测糖皮质激素对HBV感染小鼠体内HBV复制的作用。方法:采用高压注射体内转染法将HBV复制型重组质粒p AAV/HBV1.2导入雄性C57BL/6小鼠,转染后24 h按体重、年龄、血清HBe Ag水平对小鼠进行配对,分为实验组和对照组,分别连续给予强的松或生理盐水灌胃。于第3天和第10天给药后4~6 h处死小鼠。采用Southern杂交检测小鼠肝脏HBV-DNA复制中间体;化学发光法检测血清中HBe Ag和HBs Ag。结果:对HBV感染小鼠连续给予强的松或生理盐水3 d后,所有小鼠肝脏中均可检测到较高水平的HBV-DNA复制中间体,给予强的松的实验组稍高于给予生理盐水的对照组,二者比值为1.127∶1;连续处理10 d后,实验组小鼠肝脏中HBV-DNA复制中间体的水平明显高于对照组,比值为2.534∶1。处理3 d后对照组和实验组小鼠血清HBs Ag平均值分别为:1 618.28μg/μL、1 666.23μg/μL,实验组与对照组无明显差别;小鼠血清对照组和实验组HBe Ag平均值分别为14.68μg/μL、14.95μg/μL,实验组对照组无明显差别;处理10 d后对照组和实验组小鼠血清HBs Ag平均值分别为:8 059.40μg/μL、11 885.87μg/μL,实验组高于对照组。小鼠血清对照组和实验组HBe Ag平均值分别为183.15μg/μL、286.14μg/μL,实验组高于对照组。结论:强的松可增强HBV感染小鼠体内乙肝病毒的复制和表达,并且随着作用时间的延长,作用也越明显。本研究为糖皮质激素及引起HBV再激活的相关研究奠定基础,同时也再次提醒临床医生,应充分重视糖皮质激素的使用中HBV再激活的问题。     

肝细胞核因子的研究进展

肝细胞核因子是调节肝脏内基因特异性表达的一类转录因子,这些转录因子及其相互作用构成的复杂调控网络,精确地控制着肝脏的发育和肝细胞的功能。深入研究肝细胞核因子在胚胎发育和肝癌发生中的作用,可以为胚胎发育的基因调控和寻找更有效的肝癌诊断标志物、治疗靶点提供新思路。     

6-甲基香豆素对乙型肝炎病毒转录和复制的影响

目的 探讨6-甲基香豆素对乙型肝炎病毒(HBV)转录和复制的影响.方法 MTT法检测6-甲基香豆素在HepG2.2.15和HepG2-NTCP细胞中的细胞毒性.使用含0.1％DMSO的生理盐水(阴性对照),6-甲基香豆素(5、10、20μmol/L)及恩替卡韦(25 nmol/L,阳性对照)处理HepG2.2.15和H...     

HBV和HCV感染与原发性肝细胞癌发生的相关性研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，检测２０例肝细胞癌患者肝组织ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ。检测发现８０％的ＨＣＣ癌组织中可检出ＨＢＶ－ＤＮＡ的存在，２５％的病例可以查到ＨＣＶ－ＲＮＡ；所有ＨＢＶ和ＨＣＶ阳性病例均为原发性肝细胞癌，而继发性肝细胞病例未能检出二种病毒核酸序列。本研究揭示我国引起ＨＣＣ发生的肝炎病毒以ＨＢＶ为主，ＨＣＶ也可能起到一定作用。     

β-连环蛋白和核转录因子-κB在胃癌中的表达及意义

目的:研究β 连环蛋白(β Cat)和核转录因子 κB(NF κB)在胃癌组织中的表达及意义。方法:采用 SP免疫组织化学方法检测53例胃癌组织及18 例正常胃组织中β Cat、NF κB的表达情况。结果:β Cat、NF κB在胃癌组织中的表达阳性率明显高于正常胃组织(P<0.05),二者在胃癌组织中的阳性表达率为 69.81%和 66.04%。β Cat的表达与肿瘤病理分化程度、有无淋巴结转移、病理分型、浸润深度密切相关(P<0.05)。NF κB的表达与肿瘤大小、有无淋巴结转移、病理分型、浸润深度密切相关(P<0.05)。β Cat、NF κB在胃癌组织中的表达密切相关(P<0.05)。结论:β Cat和NF κB在胃癌组织中的表达有相关性,β Cat和NF κB的异常表达参与了胃癌的发生、发展,提示β Cat和NF κB可作为判断预后的指标和化疗的靶点。     

核转录因子-κB(NF-κB)在乙型肝炎病毒相关性肾炎中的表达

目的 研究核转录因子NF-κB在乙型肝炎病毒相关性肾炎(HBVGN)肾组织中的表达及其在HBVGN发病机制中的可能作用.方法 利用原位杂交法,检测20例HBVGN、20例原发性膜性肾病及6例正常肾组织中NF-κB蛋白的表达.结果 NF-κB蛋白在HBVGN组织中的表达明显高于原发性膜性肾病(P＜0.01)及正常肾组织(P＜0.01)中的表达,NF-κB主要表达于细胞质中,细胞核中表达明显增多;结论 HBVGN膜性肾病肾组织有NF-κB的高表达,乙型肝炎病毒(HBV)可能与NF-κB的表达上调有关,NF-κB和HBV可能共同参与了肾组织的病理损害过程.     

核转录因子-κB（NF-κB）在乙型肝炎病毒相关性肾炎中的表达

目的研究核转录因子NF-κB在乙型肝炎病毒相关性肾炎（HBVGN）肾组织中的表达及其在HBVGN发病机制中的可能作用。方法利用原位杂交法,检测20例HBVGN、20例原发性膜性肾病及6例正常肾组织中NF-κB蛋白的表达。结果 NF-κB蛋白在HBVGN组织中的表达明显高于原发性膜性肾病（P〈0.01）及正常肾组织（P〈0.01）中的表达,NF-κB主要表达于细胞质中,细胞核中表达明显增多;结论 HBVGN膜性肾病肾组织有NF-κB的高表达,乙型肝炎病毒（HBV）可能与NF-κB的表达上调有关,NF-κB和HBV可能共同参与了肾组织的病理损害过程。     

肝细胞浆内HBV DNA与HBV感染状态关系的探讨

在原位杂交研究的基础上,本文对慢性乙肝患者胞浆型HBV DNA及肝内其它乙肝指标进行综合分析。发现胞浆型HBV DNA可分3种类型:①肝内同时有核衣壳蛋白(HBcAg)与包膜蛋白(HBsAg)表达,此与HBV复制的产物表达特征一致;②肝内仅有HBsAg表达,此与HBVDNA和宿主基因组整合后的表达特点相似;③肝内HBsAg、HBcAg表达均缺如,可能代表一种HBV非复制状态。由此表明在HBV非复制期,出现胞浆HBV DNA杂交信号可能系DNA RNA杂交体所致。     

正常人肝细胞中HBV—PHSA受体基因表达的研究

作者根据乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ａｄｒ型ＰｒｄＳ２基因序列设计合成一对聚合酶链反应（ＰＣＲ）引物，经特异性试验后，用于扩增正常人肝细胞中多聚人白蛋白受体（ＰＨＳＡｒ）基因转录产物。结果：ＲＴ－ＰＣＲ及ＲＮＡ－ＰＣＲ扩增结果均为阳性，而相应骨骼肌总ＲＮＡ扩增结果呈阴性，提示乙型肝炎病毒ＰｒｅＳ２区与ＰＨＳＡｒ基因外显子序列具有一定程度的同源性；同时表明ＰＨＳＡｒ基因在肝组织中处于表达状态，而对ＨＢＶ不     

核转录因子在动脉粥样硬化形成中的作用

目的了解核转录因子(NF-κB)家族及其与动脉粥样硬化(AS)关系的研究进展。方法复习国内外相关文献,综述NF-κB家族的组成、生物学特征及其在AS发生发展中的作用。结果NF-κB主要参与许多与炎症反应有关的基因的表达调控,在参与AS发生发展的血管平滑肌细胞、内皮细胞和巨噬细胞内均有NF-κB表达。结论NF-κB的激活可能是AS发生发展的始动机理之一,抑制NF-κB的活化,可望为AS的防治开辟新的途径。