磁性磷脂酶D交联酶聚集体的制备及其酶学性质

以磁性Fe3O4为载体,采用吸附-聚集-交联的方法固定来源于Streptomyces chromofuscus的磷脂酶D （scPLD）。该方法制备的磁性磷脂酶D交联酶聚集体（MCLEA）酶活回收率可达72.89%,酶活为（437±6.60）U/g。与游离酶相比,MCLEA在不同温度和pH下的稳定性都得到了一定程度的提升,但由于与底物的亲和力降低,需要更高浓度的磷脂酰胆碱（PC）和Ca2+作为反应底物与MCLEA结合。另外,还研究了MCLEA的有机溶剂耐受性,发现乙醇、四氢呋喃、叔丁醇、乙酸乙酯、乙醚和甲苯等有机溶剂对MCLEA的酶促反应具有促进作用,此发现为scPLD催化转磷脂酰作用生成磷脂酰丝氨酸（PS）过程中构建双相体系时有机溶剂的选择提供了参考。MCLEA在进行连续13次酶促反应后,酶活仍可保留在76%以上,其半衰期为331.67 min,说明所选择的固定化方案可以提高酶的稳定性,从而提高其在催化反应过程中的重复利用性。     

新型层状交联酶聚集体的制备条件优化与性质研究

以假丝酵母脂肪酶（Candida sp.lipase）为研究对象,开发了一种新型层状交联酶聚集体。用蛋白或氨基酸对纳米氧化锌粒子进行修饰,继以交联剂交联后作为核芯,酶分子再交联在纳米核表面形成层状结构。实验结果表明牛血清白蛋白（BSA）是纳米氧化锌适宜的修饰剂。并且对纳米芯层状交联酶聚集体（BSA-N-LCLEAs）其他制备条件进行了优化,优化后BSA-N-LCLEAs制备条件为：沉淀剂硫酸铵饱和度为58%,交联剂戊二醛浓度为3.5%,交联温度和时间分别为0℃和2 h。BSA-N-LCLEAs酶活收率较传统CLEAs提高了196.5%。扫描电镜表征表明BSA-N-LCLEAs较传统CLEAs孔道大幅增加。纳米芯层状CLEAs的pH稳定性和热稳定性也都比传统CLEAs有所提高,并将该固定化酶用于催化维生素E琥珀酸酯的合成,反应五批次后反应产率还能达90%左右,说明该新型交联酶聚集体具有良好的催化活性和操作稳定性。     

双交联剂体系氨基酰化酶交联聚体的制备

采用酶交联聚集体技术（CLEAs）制备氨基酰化酶(EC 3.51.14)交联聚集体,优化了制备条件。90%（体积比）乙醇为沉淀剂,戊二醛和乙二醇二缩水甘油醚（EGDE）作为混合交联剂,以酶、戊二醛和EGDE的质量比为1.00∶0.75∶2.00,在30 ℃下交联12 h。制备所得氨基酰化酶CLEA酶活保留率为63.42%。氨基酰化酶经固定化后热稳定性得到增强,热失活过程由自由酶的一阶指数失活模型变为二阶指数失活模型,分子间亚基的结合力得到显著加强。自由酶在37 ℃下保存24 h后几乎损失了所有活力,而氨基酰化酶CLEA则保留了43%的酶活力,在57 ℃下保存24 h后仍有32%的酶活力保留。此外,氨基酰化酶CLEA重复使用性能得到明显提升,在重复水解底物10次后仍保留了72%的酶活力。     

蚕蛹蛋白制备多肽的酶解工艺探索

基于蚕蛹蛋白的改性,研究了蚕蛹蛋白制备多肽的酶解工艺。结果表明,用脂肪酶和纤维素酶对蚕蛹蛋白进行脱脂、脱纤维素处理,有助于改善酶解效率;局部酸解、酶解的不同组合对多肽链的长度有可控性。     

AS1.398中性蛋白酶制备水解明胶(Ⅱ)--酶的固定化研究

以壳聚糖为载体、戊二醛为交联剂 ,探讨了影响AS1 398中性蛋白酶的固定的因素。确定了固定化酶制备的适宜条件 :温度为 30℃～ 45℃ ,pH值为 6 5 ,时间为1 0h ,戊二醛含量为 0 1 2 % (质量分数 )和固定化酶中的酶的含量为 2 % (质量分数 )。     

磁响应交联糖化酶聚集体的制备及催化特性

提出了一种采用羧基磁性纳米粒子制备杂化磁响应交联酶聚集体（M-CLEAs）的方法。表面羧基修饰的约10 nm的磁性纳米粒子与酶分子表面的氨基位点通过静电相互作用,形成复合物,在磁场作用下可将磁性纳米粒子-酶复合物从溶液中分离,经戊二醛交联即形成M-CLEAs。传统的表面氨基修饰的磁性纳米粒子与酶需在沉淀剂作用下,从溶液中分离,而后采用戊二醛共交联,而本方法无须沉淀剂,过程更为简化。以糖化酶为对象,对该过程的影响因素（交联时间、pH、酶浓度、戊二醛浓度等条件）进行了探索,并对制得的M-CLEAs的酶学性质进行了较为详细考察。结果表明,最优制备条件为：酶浓度1 mg·ml^-1,磁流体浓度10 mg·ml^-1,戊二醛浓度0.25%（质量体积比）,在pH 6.0下交联反应6 h,最终载酶量可达80 mg·g^-1、比活为50 U·mg^-1。制得的固定化酶pH稳定性、热稳定性和储存稳定性均显著改善,可实现糖化酶重复使用10次,仍保留接近60%的酶活。     

交联柚苷酶聚集体水解柚皮苷制备普鲁宁

为了提高普鲁宁的收率、简化分离提纯的工艺、得到较高纯度的普鲁宁,本实验采用交联柚苷酶聚集体水解柚皮苷制备普鲁宁,以普鲁宁浓度为优化指标,研究了底物浓度、p H、温度、加酶量、反应时间对制备普鲁宁的影响。利用正交设计对水解过程进行优化,确定最佳工艺条件为:柚皮苷浓度13.79 mmol/L、p H=8.0、温度65℃、加酶量18.0 mg/m L、反应时间12.0 h,优化后制备得到的普鲁宁浓度为13.36 mmol/L、收率达到96.87%。连续使用3个批次后,普鲁宁的收率可以达到91.29%,交联酶聚集体的稳定性较好。采用聚酰胺树脂对水解产物进行吸附,体积分数为40%~60%的异丙醇线性梯度洗脱,从0.36 g柚皮苷反应液中可以分离得到0.22 g普鲁宁。     

AS 1.398中性蛋白酶制备水解明胶(Ⅲ)——固定化酶的稳定性研究

以壳聚糖为载体 ,戊二醛为交联剂制得的固定化AS 1 398中性蛋白酶。对其pH稳定性、热稳定性和操作稳定性进行了研究。其结果表明 ,酶被固定化后 ,上述稳定性有明显提高     

特殊反应体系中交联β-葡萄糖苷酶聚集体催化合成红景天苷

采用具有较高操作稳定性的交联b-葡萄糖苷酶聚集体,在离子液体-混合有机溶剂-缓冲溶液的非常规反应体系中酶催化直接糖基化合成红景天苷,筛选反应体系的组成和各成分的比例. 结果表明,反应体系的组成为(%, j)：1,4-二氧六环42.5, 离子液体C4MIm×PF6 8.5, 乙酸乙酯34, pH 6.0柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲溶液15.0. 该体系在水含量高达15%(j)的条件下水活度为0.66,适合直接糖基化反应. 底物b-D-葡萄糖100 g/L、对羟基苯乙醇200 g/L时,在50℃及250 r/min下反应120 h达到平衡,红景天苷最大浓度可达25.32 g/L.     

蛋白酶产生菌LN02发酵玉米黄粉蛋白的条件优化

通过单因素实验和正交实验初步优化了蛋白酶产生菌LN02发酵玉米黄粉蛋白的条件。结果表明,菌株LN02发酵玉米黄粉蛋白的最佳条件为：初始pH值5.5、装液量60 mL/250 mL三角瓶、发酵温度35℃、发酵时间5 d。     

碱性蛋白酶水解蚕蛹蛋白集总动力学

引言蚕蛹是养蚕业主要的副产物,蚕蛹蛋白质量占干蚕蛹质量的45%～50%。蚕蛹蛋白含有18种氨基酸,其中8种人体必需氨基酸含量占氨基酸总量40%以上,是一种优质蛋白源。文献报道蚕蛹蛋白酶解后的多肽具有抗氧化、降血压、抗疲劳、提高免疫力和抑制癌细胞扩散等作     

介孔二氧化硅载体在酶蛋白固定化中的应用

介孔二氧化硅材料因制备简单、生物相容性良好、比表面积和孔径可控、表面修饰基团多样等特点,被广泛应用于酶蛋白的固定化.主要综述了介孔二氧化硅对水解酶、氧化还原酶等酶蛋白的固定化效果及其影响固定化效果的因素,展望了介孔二氧化硅在酶蛋白固定化中的应用前景及存在的挑战,为介孔二氧化硅更好地应用于固定化酶制剂的制备奠定基础.     

酶解-膜分离耦合技术制备米糠蛋白活性多肽的研究

为了探索米糠蛋白活性多肽的最佳酶法制备方法,进行了三种酶解-膜分离耦合反应模式制备活性多肽的研究.结果表明,间歇反应条件下蛋白转化率为47.50%,生产效率为1.98g肽/AU酶,均为传统方法的1.27倍;连续补水反应模式蛋白转化率最高,即68.54%,分别是传统方法的1.84倍、间歇反应模式的1.47倍、连续补料反应模式的1.19倍;连续补料反应模式的蛋白转化率为57.61%,是传统制取方法的1.54倍,其生产效率最高,即11.46g肽/AU酶,分别是传统方法的7.37倍、间歇反应模式的5.79倍、连续补水反应模式的2.81倍.上述结果显示,三种酶膜耦合反应模式都能强化反应过程、提高蛋白转化效率和生产效率.就来源广泛的米糠蛋白而言,连续补料酶膜耦合反应模式是一种比较好的多肽制备方法,蛋白转化率和酶利用率均显著提高.     

酶交联螺蛳蛋白/Ca2+絮凝剂处理高浊度废水的研究

以螺蛳蛋白(Msp)为原料,通过转谷氨酰胺酶(TGase)钙双交联反应制备了大分子质量的酶交联螺蛳蛋白/Ca²⁺絮凝剂(TGase-Msp/Ca²⁺),利用FT-IR、SEM-EDS、Zeta电位对其结构进行表征,考察了TGase-Msp/Ca²⁺对高岭土悬浮液絮凝性能的影响。结果表明,Ca²⁺浓度影响TGase-Msp/Ca²⁺的絮凝性能,在Ca²⁺浓度为0.2 mol/L时TGase-Msp/Ca²⁺因具有良好的桥接作用和电荷中和能力,表现出优秀的絮凝性能并具有较小污泥体积。在TGase-Msp/Ca²⁺用量为1.25 mL、pH为6时,浊度去除率达到99.89%,污泥体积分数为28 mL/L。同时,TGase-Msp/Ca²⁺具有很宽的絮凝范围,在pH 2～12的范围内去除率达到97%以上,絮体粒径达到18μm,沉降速度为2.21 mm/s。