狂犬病病毒磷蛋白的相关研究概况

狂犬病病毒（RV）属于弹状病毒科狂犬病毒属。基因组为不分节段负股RNA,编码5种结构蛋白：核蛋白（N）,磷蛋白（P）,基质蛋白（M）,糖蛋白（G）和大蛋白（L）。病毒RNA聚合酶由L和P蛋白组成,L蛋白是主要的催化组分,P蛋白是非催化的辅助因子[1,2]。病毒RNA由相连的N蛋白、P蛋白和L蛋白紧紧包裹形成典型的螺旋状核糖核蛋白（RNP）复合物,可激活RNA合成。     

营养在基因表达中的作用(上)

在过去20年中,分子生物学领域取得了长足进步。我们正处于加快揭示生物代谢调控的基本原理和生物技术应用于科学研究的潜力的时代。分子生物学概念愈来愈多地被用于食物成分和作为基因表达控制因子的必需养分的研究中。本篇综述报道利用分子生物学技术解决与营养有关问题的几个例子。现有的分子生物学方法,除了可用于估测细胞和组织中的DNA含量外,还可估测转移RNA(tRNA)、核蛋白体RNA(rRNA)和信使RNA(mRNA)的变化。这些方法包括分离细胞DNA、RNA和多腺苷酸RNA的柱色     

流感病毒NP蛋白与宿主蛋白SNRPA的相互作用研究

流感病毒核蛋白(NP)是由病毒RNA节段5编码的主要结构蛋白,与病毒基因组RNA及聚合酶(PB1、PB2、PA)构成核糖核蛋白(vRNP)复合体,是病毒基因组的转录和复制的基本功能单位。本实验室采用酵母双杂交技术从人细胞系cDNA文库中筛选与流感病毒NP蛋白相互作用的宿主蛋白U1 small nuclear ribonucleoprotein A(SNRPA)。本研究通过酵母回交验证、免疫共沉淀(Co-IP)和GST pull down试验进一步证实NP与SNRPA之间存在直接相互作用。利用siRNA干扰基因的表达后,流感病毒的复制滴度在24 h和48 h分别下降2.7倍和1.75倍,表明SNRPA蛋白表达对流感病毒的复制发挥正调控作用。本研究丰富了流感病毒蛋白与宿主蛋白之间的蛋白质调控网络,为进一步研究流感病毒复制调控的机制奠定了基础。     

栗蚕基因组DNA提取方法比较试验

栗蚕蛹中含有大量的脂肪和蛋白质类物质,这些物质易与DNA结合形成粘稠的胶状物,影响栗蚕基因组DNA的提取。针对上述问题,本研究采用十二烷基硫酸钠-蛋白酶K(SDS-PK)消化法和十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法提取栗蚕基因组总DNA进行比较试验。结果表明:CTAB法提取的DNA产量高;SDS-PK法提取的DNA质量好。     

16SrDNA PCR法对实验用小鼠细菌感染的检测试验

通过合成细菌16SrDNA高度保守区引物，采用PCR法对16种标准菌株DNA和小鼠 的基因组DNA、人基因组DNA、乙肝病毒、巨细胞病毒进行扩增，PCR法结果表明：细菌具有371bp 扩增产物，与小鼠基因组DNA、人基因组DNA、巨细胞病毒和乙肝病毒无交叉阳性反应。PCR法最低能检测100fg大肠埃希菌DNA。检测实验动物细菌感染，具有快速、特异性和敏感性高的特点。本研究证实：16SrDNA PCR法能够快速，特异地检测实验动物常见细菌感染，具敏感性高。     

应激颗粒和抗病毒先天性免疫

病毒感染哺乳动物细胞过程中,病毒复制产生的基因组或病毒蛋白激活先天性免疫信号通路后,产生干扰素的同时诱导干扰素下游基因表达,促进细胞的抗病毒反应。与此同时,病毒感染宿主细胞还能引起胞质颗粒的聚集,其成份大多为核糖核蛋白,RNA结合蛋白、翻译起始因子等,这个聚集区域被称之为应激颗粒(stress granules,SG)。先天性免疫通路和SG都是宿主细胞对病毒感染的一种抵抗性反应,而与之相对,一些病毒却通过抑制SG和先天性免疫通路的形成来促进自身复制。由于SG中包含RNA结合蛋白以及一系列病毒或宿主的RNA,而先天性免疫中识别病毒RNA的模式识别分子也能特异性结合病毒RNA,那SG如何协同先天性免疫在宿主抗病毒中发挥一定的作用,本文就SG在病毒感染诱导的先天性免疫中的作用进行简要综述。     

辽东栎基因组DNA提取方法比较与优化

针对辽东栎叶片组织中多糖含量高严重影响基因组DNA的提取问题,比较了改良SDS法、改良CTAB法1和改良CTAB法2等3种方法的处理效果。结果表明：用改良SDS法提取DNA多糖杂质多,易降解、褐化严重;用改良CTAB法1提取DNA难以去除植物组织中的多糖类杂质;而改良CTAB法2提取的DNA,杂质少,纯度高。     

家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)染色体DNA的分离纯化

为了获取可供家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)单染色体测序的基础材料,通过脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术分离家蚕微孢子虫CQ1株系的染色体DNA,随后切取含有目的染色体DNA条带的琼脂糖胶块,分别利用电洗脱法、柱式胶回收试剂盒法及玻璃奶胶回收试剂盒法进行染色体DNA的分离纯化实验。结果显示3种方法均能回收到目的染色体DNA,但分离纯化的效率和样品质量存在差异:电洗脱法对胶块中的DNA损失较大,回收的染色体DNA含量低,而柱式胶回收试剂盒回收的染色体DNA断裂严重,因此这2种方法获得的样品质量均达不到染色体建库测序的要求;通过优化后的玻璃奶胶回收试剂盒法获得的染色体DNA相对完整且污染较少,质量检验分析133μL样品中的DNA质量浓度为8.495 ng/μL(DNA总量1.13μg),达到后续构建染色体测序文库的要求。玻璃奶胶回收试剂盒法不仅适用于家蚕微孢子虫染色体DNA的分离纯化,也可供基因组较小的物种制备单染色体建库测序材料参考。     

与蜜蜂孢子虫病有关的三种蜜蜂病毒

蜜蜂病毒的构造与其它动物病毒的一样,基本上是由脱氧核糖核酸DNA或核糖核酸RNA和被称作衣壳的蛋白质外壳组成。核酸是含有病毒复制必需信息的基因组。核酸和蛋白质外壳组成了核蛋白壳。而完整的病毒粒子又称壳包核酸,也就是说它既有完     

捕食性真菌Duddingtonia flagrans基因组DNA的提取及基因组survey分析

采用透析膜培养法结合DNA柱式提取法进行基因组DNA提取,同时利用第2代高通量测序技术,分析了捕食性真菌Duddingtonia flagrans基因组概况。结果显示:透析膜培养结合DNA柱式提取法所提取的基因组DNA质量及浓度均能达到测序标准;捕食性真菌Duddingtonia flagrans基因组约为37.6 Mb,GC含量为44.95%,基因组杂合度较低。结果表明:透析膜培养法结合柱式法提取其基因组DNA的方法简便可行,为丝状真菌DNA提取,提供了新的思路;基因组survey分析为捕食性真菌Duddingtonia flagrans全基因组精细图谱的绘制奠定了基础。     

从绵羊脂肪组织提取高质量总RNA方法的改进及应用

目前已有大量文献报道利用各种方法和商业化试剂成功提取高质量的RNA。但是由于组织的特异性,以脂肪组织为材料提取高质量的总RNA存在以下两方面的问题:第一,脂肪组织RNA含量较少,每毫克组织样品所得总RNA的量小于0.05μg,因而所提RNA的得率较低;第二,RNA产品中常伴有基因组DNA污染,当使用这种RNA制品进行RT-PCR定性分析时,基因组DNA可直接充当PCR模板,造成PCR假阳性结果。因此,为获得高纯度的RNA制品,作者以脂肪组织为材料,经反复试验,在商家提供的总RNA提取试剂的操作步骤基础上优化和改进了某些提取步骤,从而得到了符…     

弹状病毒

<正>1概述水疱性口炎病毒(Vesicular Stomatitis Viruses,VSVs)和狂犬病毒是弹状病毒家族的成员。VSVs属于水疱性病毒属,狂犬病毒属于狂犬病毒属。这些病毒具有一个较大(65~185)的子弹形状的病毒颗粒,颗粒由来自宿主的质膜、磷脂包被和一个固有的核糖核蛋白核心组成。在附着动物机体细胞、进行渗透并脱去外壳后,病毒在受感染细胞的细胞质中进行复制。病毒RNA依赖性的RNA聚合酶根据     

从白羽王鸽的血液中提取基因组DNA方法的比较研究

禽类血液中的蛋白质含量较高,用传统方法提取其血液中的基因组DNA比较繁琐、纯度不高,而且提取的产物中有大量蛋白质残留。本研究采用改良的CTAB法从白羽王鸽全血中提取全基因组DNA,并以传统的酚-氯仿抽提的方法和TAKARA公司基因组提取试剂盒法作对照。结果表明：qCTAB法可以得到大量的、较完整的基因组DNA,并且纯度达到2．00,浓度达到了144．67ng/μL,完全可以满足PCR扩增限制酶切等实验的要求。     

磁珠法提取鸡血液基因组DNA效果研究

为确定一种稳定高效的鸡血液DNA提取方法,满足基因组检测对DNA的要求,研究应用磁珠法、酚-氯仿法和试剂盒法。分别对抗凝血和凝血状态的鸡血液样品进行基因组DNA提取,通过超分光光度计和1%琼脂糖凝胶电泳评价所获得的DNA质量,并对三种提取方法所需成本进行估算和比较。结果显示：三种方法均能从两种不同状态血液样本中提取出基因组DNA,酚-氯仿法最为经济,但耗时长且需要使用危险化学品,磁珠法与试剂盒法具有耗时短和环保的优点,且磁珠法较试剂盒法更经济。研究表明磁珠法使用的试剂量少、操作简单、耗时短、日提取样本数目远大于其他两种方法,是三种方法中最为快捷的方法,可以满足实际生产中大批量鸡血液基因组DNA提取的要求。     

利用正交设计对简易银染法的优化研究

用正交设计研究了DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)凝胶的简易银染中各因素对银染效果的影响,通过PCR技术扩增了山西白猪第六世代15个耳组织基因组的两条微卫星DNA序列,这些序列经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离和500ladder Marker标记跑板后,利用正交法设计简易银染法各因素的组合,对凝胶进行染色。试验结果表明,染色液用AgNO3浓度0.10%、显色用含NaOH1.50%、甲醛0.40%混合液、水温30℃时对PAGE凝胶染色的效果最好。     

对猪肝脏基因组DNA提取与纯化的研究

对血液中提取基因组DNA的方法加以改进,获得了一种提取猪肾组织中DNA的有效方法.试验表明,利用SDS裂解,氯仿、异戊醇抽提母猪肝脏中基因组DNA,得到的DNA纯度较高,可用来进一步进行RAPD分析和PCR扩增,用于各种分子生物学实验.     

猪链球菌核糖体基因分型研究

从青岛农业大学动物科技学院实验室分离培养的15株猪链球菌中提取基因组DNA,利用PstⅠ消化并进行电泳分析,将电泳分离的DNA片段转移至尼龙膜上并固定;以大肠杆菌C83907 16srDNA两侧保守区域设计引物,利用PCR扩增出16srRNA基因片段,用地高辛标记制成探针;该探针与基因组DNA酶切片段进行杂交,通过对杂交带型分析,进而对猪链球菌进行核糖体基因分型。     

牛凝固血基因组DNA提取方法的比较及优化

为筛选出一种从牛凝固血中高效获得基因组DNA的方法,本研究选择64个凝固血样,分别进行匀浆破碎和手动剪碎的预处理,结合酚-氯仿抽提和试剂盒提取方法,提取基因组DNA,并选择抗凝血作为参照,对试验耗时、DNA数量和质量进行比较。结果表明:通过对牛凝血块进行匀浆破碎预处理,不仅缩短了蛋白酶K的消化时间,而且获得了高质量基因组DNA,浓度和纯度均达到抗凝血提取效果(P0.05)。酚-氯仿提取法相比试剂盒法,虽然得到更多量的DNA,但是DNA质量下降,而且试验耗时增加。本研究证实,匀浆破碎预处理后的牛凝固血样可以作为高质量基因组DNA的样本来源,并可替代抗凝血,解决生产中抗凝血不易获得和采集的问题。     

微孢子虫DNA提取方法的比较

本实验采用陈秀改进法、SDS法、CTAB法和TEK改进法对四种微孢子虫SD1、SD2、SD3、SD4基因组DNA进行抽提,并对抽提效果做了对比,结果表明,陈秀改进法对SD1、SD2、SD3基因组DNA抽提效果较好,TEK改进法对SD2、SD3、SD4基因组DNA抽提效果较好,SDS法和CTAB法对四种微孢子虫基因组DNA的抽提效果均不理想,