牙胚颈部组织肾被膜下种植实验

目的：观察含上皮根鞘（Hertwig’s epithelial root sheath,HERS）的牙胚颈部组织发育牙根和牙周组织的能力。方法：选择出生后（postnatal,PN）8d的SD大鼠,分离下颌第一磨牙牙胚,横切牙胚,将获得的牙胚冠部和颈部组织分别植入成年大鼠肾被膜下。结果：牙胚颈部组织在肾被膜下发育出形态和结构正常的牙根和牙周组织,而牙胚冠部组织未能发育出牙根和牙周组织。结论：含HERS的牙胚颈部组织具有单独发育牙根和牙周组织的能力。     

大鼠完整牙胚肾被膜下种植实验研究

目的：评价肾被膜作为组织工程牙根和牙周组织的种植环境。方法：分离出生后6 d SD大鼠下颌第一磨牙完整牙胚，种植于成年SD大鼠肾被膜下，4周后收获种植牙胚，组织学观察种植牙胚的牙根和牙周组织发育情况。结果：20个种植牙胚中，4个种植牙胚有牙根和牙周组织生成，剩余种植牙胚仅见牙本质继续发育。结论：肾被膜是组织工程牙根和牙周组织的适宜种植环境。     

大鼠磨牙牙根根端组织异体移植实验

目的:探讨大鼠磨牙牙根根端组织发育牙根和牙周组织的能力.方法:选择出生后25 d的SD大鼠,切取下颌第一磨牙牙根端组织,移植于成年大鼠肾被膜下,4周后取材,组织学观察.结果:大鼠磨牙牙根端组织发育出根尖样组织结构.结论:牙根根端组织具有发育牙根和牙周组织的能力.     

大鼠牙胚同种异体异位移植的组织学观察

目的:观察牙胚在同种异体大鼠体内不同部位的发育情况,为进一步组织工程化牙齿的构建探寻合适的体内生长环境。方法:将封闭群SD仔鼠第一磨牙牙胚分别植入SD成年大鼠肾被膜下、肠系膜内、腹膜外间隙、腹腔内和口腔黏膜下,3周取材,HE染色,观察移植牙胚的发育情况。结果:牙胚在肾被膜下和肠系膜内生长良好,釉质和牙髓牙本质复合体继续发育,牙本质小管结构清晰可见;腹膜外间隙和腹腔内牙胚均未进一步发育,且牙髓腔内和移植物周边淋巴细胞浸润明显;口腔黏膜下未回收到移植物。结论:封闭群SD大鼠肾被膜下和肠系膜内环境有利于同种异体牙胚的生长,可为组织工程化牙齿的体内构建提供新的发育环境。     

大鼠牙胚细胞团块培养法构建组织工程化牙齿

目的探索采用大鼠牙胚细胞团块培养法在体内构建组织工程化牙齿的可行性。方法体外培养SD仔鼠磨牙牙胚细胞,并将牙胚细胞团置于离心管内孵育48h后植入近交系SD大鼠肾被膜下,2周取材,苏木精-伊红染色,观察移植物中的组织新生情况。结果牙胚细胞团块在肾被膜下生长良好,形成典型的牙髓牙本质复合体样组织和少量釉质样结构,牙本质小管样结构清晰可见,内侧可见长柱状的成牙本质细胞有序排列,牙髓样组织中可见少量血管样结构。结论以牙胚细胞为种子细胞,用团块培养法在大鼠肾被膜下成功地构建出组织工程化牙冠样结构。     

种植牙胚的牙冠发育

目的：观察种植牙胚的牙冠发育情况。方法：选择出生后（PN）8天的SD大鼠,完整剥离第一磨牙牙胚,种植到母鼠肾被膜下,4周后取材观察。结果：种植牙胚的牙冠继续发育,冠周有新生牙槽骨,部分釉质外侧生成骨样结构。结论：牙胚种植到肾被膜下后牙冠可正常发育。     

上皮根鞘结构对牙根发育的影响

目的: 研究上皮根鞘的结构对牙根发育的影响。方法: 选择出生后(postnatal, PN)8 d的SD大鼠, 切取第一磨牙牙胚的颈部组织, 用胶原酶和dispase酶消化, 1组直接离心形成细胞团, 另1组加用胰酶消化后, 离心形成细胞团。将细胞团体外培养4 h后, 种植到母鼠肾被膜下, 4周后取材观察。结果: 胶原酶和dispase酶消化可将上皮根鞘解离成碎片, 加用胰酶消化后, 上皮根鞘被解离为单个细胞。含有上皮根鞘碎片的细胞团种植后形成牙根样结构, 而含有上皮根鞘离散细胞的细胞团则形成管状牙本质和骨样牙本质块。结论: 上皮根鞘的结构对其引导牙根发育具有重要作用。     

SD大鼠下颌第一磨牙牙根发育时序观察

目的研究SD大鼠下颌第一磨牙牙根的发育时序。方法选择刚出生的8只SD大鼠进行饲养,在出生后0、5、10、15、20、25、30、35d各取1只处死,分离下颌,制成石蜡切片,染色,40倍显微镜下观察拍照。结果出生后0～10d,SD大鼠下颌第一磨牙牙胚形成上皮根鞘,但无牙根硬组织形成;出生后15d,牙根硬组织开始形成;出生后35d,大鼠下颌第一磨牙牙根发育完成。结论SD大鼠下颌第一磨牙牙根发育过程与人类相似,且发育时间大大缩短,是研究人类牙根发育的理想动物模型。     

不同时期大鼠牙齿胚基各部分组织发育能力的研究

目的：比较不同发育时期牙胚各部分异位环境下的发育能力,为牙齿再生重组实验提供参考。方法：分离获取SD大鼠帽状期和钟状末期牙胚,分离成釉上皮与牙乳头间充质,分别将完整牙胚、牙间充质、成釉上皮剪碎后异位移植至同种异体大鼠肾被膜下。4周后取材,对移植物进行组织学观察。结果：帽状期牙胚碎组织块移植物中可见部分不规则的牙齿样结构形成。钟状末期牙问充质碎组织块移植组中既有牙本质牙髓复合体样结构形成,还能观察到大量骨样基质形成。而钟状末期成釉上皮碎组织块移植物生成的组织均为骨样的结构。结论：发育早期牙胚的碎组织较发育末期的牙胚碎组织具有更强的牙齿形成能力,所形成的牙齿结构完整包括釉质、牙本质以及牙髓且顺序正确,提示这个时期牙上皮和间充质之间信号网络所提供的微环境可以更加完善和充分地指导牙齿的发育。     

钟状晚期牙胚和牙及牙周组织的特殊染色应用探讨

目的:探讨钟状晚期牙胚和成熟牙及牙周组织的特殊染色应用.方法:钟状晚期的人牙胚和成年大鼠的牙及牙周组织石蜡切片,用改良的Gomori和Mallory染色法染色,镜检染色结果.结果:改良Gomori染色,可将钟状晚期牙胚中的釉质基质与牙本质基质、牙及牙周组织中的硬组织与软组织、骨与软骨、染成2 种不同的颜色,便于识别和区分.各种组织结构和细胞形态清晰.结论:牙发育和牙及牙周组织教学科研切片,用改良的Gomori染色,利于观察研究,取得满意结果.     

大鼠第一腮弓肾被膜下种植的成牙能力研究

目的:观察E12.5d大鼠第一腮弓肾被膜下的成牙能力。方法:切取E12.5d大鼠第一腮弓(下颌突),种植于肾被膜下,4周后收获种植的组织块,组织学观察种植的第一腮弓的发育情况。结果:种植4周,第一腮弓在肾被膜下继续发育,形成牙齿样结构,包含牙釉质、牙本质、牙髓、成牙本质细胞、上皮根鞘样结构及骨样组织。形成的组织结构与正常发育的牙齿形态结构相似。结论:E12.5d大鼠第一腮弓在肾被膜下可以模拟体内牙齿的发育过程,继续发育形成牙齿样结构。     

大鼠牙乳头与成釉器重组肾被膜下种植的研究

目的：观察大鼠牙乳头对成釉器上皮的诱导作用。方法：出生后7dSD大鼠下颌第一磨牙根部的牙乳头与出生后2d的第二磨牙成釉器分别重组，出生后2d冠部牙乳头与成釉器重组为对照组。体外培养2d后种植于成年大鼠肾被膜下，1周，4周后取材，组织学观察上皮分化情况和硬组织形成情况。结果：1周后实验组重组体生成薄层的牙本质结构，内侧成牙本质细胞排列整齐，牙源性上皮未分化成成釉细胞，而有大量的骨样物质生成，对照组形成较为完整的牙冠结构。4周后，实验组重组体形成类牙根形态但仍无釉质形成。结论：根部牙乳头不具有促进成釉上皮分化的能力。     

Root development of rat tooth germs implanted in the tooth socket and in the subcutaneous tissue

Objective: This study was designed to investigate root development of a rat tooth germ implanted in a tooth socket or in a subcutaneous region. Materials and methods: Tooth germs of the upper left first molars in 2‐week‐old rats were extracted and implanted in the original tooth socket or in the subcutaneous region of the back. The upper right first molar was used as a control. The rats were fixed in weeks 1, 2, 4, 8 and 12. The root development was examined quantitatively with X‐ray radiographic morphometry. The cellular activity of producing matrix proteins was assessed using in situ hybridization for type I collagen. Results: Root development was observed in the implanted teeth in the tooth socket as also in the control teeth. In contrast, roots hardly developed in subcutaneously implanted teeth. Histology showed that periodontal ligaments were arranged around roots of implanted teeth in the tooth socket as around control teeth, but few periodontal ligaments were identified in the subcutaneous implantation. Dentin and cementum formed in both the implanted teeth as also in the control teeth and odontoblasts, cementoblasts and cementocytes expressed type I collagen. Conclusion: Tooth sockets may possess specific environments that allow root development of a tooth germ.     

大鼠切牙颈环结构成牙能力的实验研究

目的:观察大鼠切牙颈环结构种植于鼠肾被膜下形成牙齿样结构的能力。方法:取出生后3~4d的SD仔鼠切牙,将切取的颈环结构种植到母鼠肾被膜下,建立组织工程牙齿的体内培养模型。2~4周后取材,常规固定,HE染色观察。结果:下切牙颈环结构在体内形成了包含釉质和牙本质牙髓复合体的牙齿样结构,上切牙颈环结构仅形成了牙本质牙髓复合体的牙齿样结构。结论:大鼠切牙颈环结构在体内能够形成牙齿样结构,其中颈环中的上皮干细胞起着重要的作用。大鼠肾被膜下种植可以做为体内组织工程化牙齿样结构构建的立体培养模式。     

牙本质磷蛋白和成釉蛋白在组织工程牙胚的表达模式研究

目的：采用大鼠牙胚细胞与胶原蛋白构建组织工程牙齿,通过免疫荧光组织化学分析牙齿特异性蛋白在组织工程牙齿的表达模式。方法：采用出生后4dSD仔鼠磨牙牙胚细胞,培养后将牙胚细胞与胶原蛋白溶液混合构建组织工程牙胚,2W后取材,HE染色观察移植物中的成牙能力,免疫荧光组织化学染色观察牙本质磷蛋白DSP和成釉蛋白AM的表达模式。结果：组织工程牙胚移植后2W可在肾被膜下形成乳白色矿化组织,HE染色可见典型的牙髓牙本质复合体样组织和釉质样结构,免疫荧光组织化学染色观察可见成釉蛋白AM阳性的釉质样结构和牙本质磷蛋白DSP阳性的牙乳头样组织,与正常牙齿组织表达模式一致。结论：采用牙胚细胞可与胶原蛋白进行重新排列形成组织工程牙胚,本实验从组织和蛋白分析上证实了其具有较强的成牙能力,为以后的临床应用提供了理论基础。