健脾化湿通络方对佐剂关节炎大鼠滑膜血管新生的影响

目的观察健脾化湿通络方对佐剂关节炎大鼠滑膜血管PI3K/AKT/m TOR信号通路及缺氧诱导因子(HIF-1α)、血管内皮细胞生长因子A(VEGF-A)、滑膜微血管密度(MVD)、内皮抑素(ES)的影响。方法 50只大鼠随机均分成5组:正常对照组,模型对照组,甲氨蝶呤组,雷公藤多苷片组,健脾化湿通络方组。除正常对照组外,其余各组均采用弗氏完全佐剂建立佐剂关节炎大鼠模型。造模成功后,各治疗组给予相应药物灌胃,连续30 d。采用免疫组化法检测滑膜血管MVD表达,酶联免疫吸附法检测血清白细胞介素-6(IL-6)、IL-10、HIF-1α、VEGF-A表达,免疫印迹法检测滑膜血管PI3K、AKT、p-AKT、m TOR、ES蛋白表达。结果与正常对照组比较,模型对照组大鼠足跖肿胀度、关节炎指数升高,滑膜组织MVD计数升高,血清IL-6、VEGF、HIF-1α和滑膜血管PI3K、AKT、p-AKT、m TOR、ES表达显著升高,IL-10降低(P0.05或P0.01)。与模型对照组比较,健脾化湿通络方组MVD计数和血清VEGF-A、HIF-1α、IL-6表达降低,滑膜PI3K、p-AKT、m TOR、ES降低,血清IL-10升高。结论健脾化湿通络方通过调节PI3K/AKT/m TOR通路、HIF-1α及ES表达改善滑膜血管新生。     

滑膜液中PI3K/AKT/mTOR信号轴介导巨噬细胞极化对膝骨关节炎促炎反应的作用

目的 已知PI3K/AKT/mTOR信号通路与膝骨关节炎(KOA)的进展有关,本研究旨在探讨PI3K/AKT/mTOR信号轴介导的巨噬细胞极化诱导是否是KOA进展的原因。方法 收集KOA KL-Ⅱ与KL-Ⅲ级患者与正常人的滑膜液,检测滑膜液中M1巨噬细胞(CD80、CD86)与M2巨噬细胞(CD163、CD206)百分比(M1/M2比值),评估巨噬细胞极化细胞因子白细胞介素(IL)-1、IL-6、IL-10、肿瘤坏死因子(TNF)-α、转化生长因子(TGF)-β在KOA滑膜液中的表达,并对KOA滑膜液中PI3K/AKT/mTOR信号轴关键分子PI3K、AKT3、mTORC1和诱导性一氧化氮合酶(iONS)进行检测分析。结果 与正常人的滑膜液相比,KOA患者中M1型巨噬细胞(CD80、CD86)百分比增加(P<0.01),M1/M2比值升高(P<0.001);KOA组滑膜液中IL-1、IL-6、TNF-α表达也高于对照组(P<0.01),KOA组IL-10、TGF-β表达明显减少(P<0.01);KOA组滑膜液中PI3K/AKT/mTOR信号通路中关键蛋白PI3K...     

基于HMGB1探讨“易层”贴敷对KOA大鼠滑膜纤维化的影响

目的 基于HMGB1研究“易层”贴敷对膝骨关节炎（KOA）大鼠滑膜纤维化的影响。方法 30只SPF级SD大鼠,随机均分为空白对照组、模型组及易层组。KOA模型通过碘乙酸钠构建,造模成功后,易层组外敷“易层”贴敷28 d。末次给药后腹主动脉采血并提取各组滑膜组织,HE染色观察滑膜炎症;ELISA检测血清中促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α,抑炎因子IL-4、IL-10、TGF-β含量;Western blot和qPCR检测滑膜HMGB1及α-SMA、TIMP1、CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白和基因表达量。结果 HE染色显示易层组炎性细胞浸润较模型组显著减少,排列较为规则;模型组较空白对照组IL-1β、IL-6、TNF-α含量明显升高（P<0.05）,易层组较模型组IL-1β、TNF-α含量明显降低（P<0.05）,模型组较空白对照组IL-4含量明显升高（P<0.05）,IL-10、TGF-β含量明显降低（P<0.05）,易层组较模型组IL-10含量明显升高（P<0.05）;HMGB1及α-SMA、TIMP1、CollagenⅠ、CollagenⅢ的蛋白和基因水平在模型组较空白对照组表达增加（P<0.05）,易层组较模型组表达下调（P<0.05）。结论 “易层”贴敷能够抑制滑膜纤维化,其作用机制可能与抑制HMGB1、平衡促炎因子和抑炎因子有关。      

姜黄素对大鼠肾间质成纤维细胞中小分子RNA-21及纤维化相关因子表达的影响

目的探讨姜黄素对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的大鼠肾间质成纤维细胞(NRK49F)中小分子RNA-21(miR-21)及纤维化相关因子表达的影响。方法将NRK49F细胞分为正常组、模型组、姜黄素组。模型组以TGF-β1(10μg/L)诱导NRK49F细胞活化,姜黄素组以高、中、低浓度(20、10、5μmol/L)干预24 h和72 h。免疫荧光方法及高内涵成像分析设备检测并分析NRK49F细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的变化;RT-PCR方法检测NRK49F细胞中miR-21及纤维化相关因子COL1A1、COL3A1、α-SMA、Smad3 mRNA表达的变化。结果 TGF-β1作用于NRK49F细胞72 h后,能明显上调细胞中α-SMA蛋白的表达(P0.01);与模型组相比,姜黄素各组的α-SMA蛋白表达明显下调(P0.01、P0.01、P0.05)。TGF-β1作用于NRK49F细胞24 h后,能明显上调细胞中miR-21、COL1A1、COL3A1、α-SMA、Smad3 mRNA的表达(P0.01);与模型组相比,姜黄素高、中浓度组可明显抑制miR-21、COL1A1、COL3A1、α-SMA、Smad3 mRNA的表达(P0.01或P0.05);姜黄素低浓度组可明显抑制COL1A1、COL3A1、α-SMA mRNA的表达(P0.01),对miR-21、smad3 mRNA的表达有下调的趋势。结论姜黄素能够有效抑制TGF-β1诱导的NRK49F细胞中纤维化相关因子的基因及蛋白表达,其作用与下调miR-21的表达相关。     

基于IRS-1/PI3K/AKT/GLUT4通路探讨二苯乙烯类化合物改善胰岛素抵抗作用机制

[目的] 探讨3种中药（虎杖、桑白皮、何首乌）来源的二苯乙烯类化合物改善胰岛素抵抗（IR）的作用机制。[方法] 利用肿瘤坏死因子-α（TNF-α）作用于3T3-L1脂肪细胞96 h建立IR细胞模型;采用噻唑蓝（MTT）法检测二苯乙烯类化合物白藜芦醇（RES）、虎杖苷（PD）、桑皮苷A（Mul A）、2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡糖糖苷（THSG）对脂肪细胞生存率的影响;葡萄糖氧化酶法检测细胞培养基上清液中葡萄糖含量;采用蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测胰岛素受体底物-1（IRS-1）、磷酸化IRS-1（p-IRS-1）、磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）、磷酸化PI3K（p-PI3K）、蛋白激酶B（AKT）、磷酸化AKT（p-AKT）、葡萄糖转运体4（GLUT4）的蛋白表达水平;采用实时定量荧光聚合酶链反应（RT-PCR）法检测GLUT4 mRNA表达水平。[结果] 与空白对照组相比,模型组的葡萄糖消耗量显著下降,模型组的p-IRS-1（Ser307）蛋白表达显著增加,p-PI3K、p-AKT（Ser473）、GLUT4蛋白表达显著下降,模型组GLUT4 mRNA表达显著降低;与模型组相比,RES、Mul A、THSG组的葡萄糖消耗量显著增加,PD组的葡萄糖消耗量无明显变化,Mul A、THSG组均能显著逆转p-IRS-1（Ser307）、p-PI3K、p-AKT（Ser473）、GLUT4的蛋白表达,RES仅能够逆转p-IRS-1（Ser307）、GLUT4的蛋白表达;与模型组相比,THSG组GLUT4 mRNA表达显著增加。[结论] Mul A、THSG能够通过IRS-1/PI3K/AKT/GLUT4信号通路改善脂肪细胞IR,而RES则通过激活IRS-1和GLUT4,但不通过PI3K/AKT途径发挥改善脂肪细胞IR的作用。PD无降糖活性。     

磷脂酰肌醇3激酶/Akt通路参与TGF-β1诱导人肾小管上皮细胞间质转分化过程

目的：探讨磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）／Akt通路在转化生长因子β1（TGF-β1）体外诱导的人肾小管上皮细胞（HKC）间质转分化（EMT）过程中的作用及意义。方法：将HKC细胞株细胞分成正常对照组、TGF-β1组及TGF-β1＋PI3K特异性抑制剂Wortmannin组，选取不同时相，免疫印迹（Western blot）测定总．Akt、磷酸化Akt（p-Akt）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达的变化；Akt磷酸化水平用磷酸化Akt和总Akt水平的比值表示。结果：正常体外培养的HKC有微量的p-Akt、α-SMA表达，加入10ng／ml TGF-β1刺激0．5h后p-Akt水平显著升高，1h升至顶峰后逐渐减弱；α-SMA在10ng／mlTGF-β1诱导48h后表达显著升高。同时加用Wortmannin 10nmol／L组p-Akt、α-SMA表达明显抑制。结论：PI3K／Akt信号系统参与TGF-β1介导的EMT过程，PI3K特异性抑制剂wo永mannin可有效抑制TGF-β1介导的HKC的EMT过程。     

甘草酸对TGF-β1诱导的NRK-49 F细胞活化及分泌细胞外基质的影响

目的 探讨甘草酸对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的大鼠肾间质成纤维细胞(NRK-49 F)中纤维化相关因子表达的影响.方法 体外培养NRK-49 F细胞,不同浓度甘草酸干预细胞48 h后,CCK-8法检测其对细胞增殖的影响,确定对细胞活性无显著影响的作用浓度.以10μg/L TGF-β1刺激NRK-49 F细胞构建肾间质纤维化细胞模型,加入不同浓度甘草酸进行干预,免疫荧光法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(COL1)表达情况.实时荧光定量PCR、Western Blot法检测纤维化相关因子α-SMA、COL1、Ⅲ型胶原(COL3)mRNA及蛋白表达情况,以评价甘草酸对成纤维细胞活化及细胞外基质分泌的影响.结果 CCK-8结果显示甘草酸在100～600μmol/L浓度范围内对NRK-49 F细胞活性无影响.免疫荧光结果表明,加入甘草酸后可抑制 α-SMA表达及COL1分泌,随甘草酸浓度增加,抑制作用增强.Western Blot结果显示,与模型组相比,甘草酸干预可下调α-SMA、COL1、COL3的蛋白表达,其中甘草酸150μmol/L组COL1的蛋白表达水平降低(P<0.01),甘草酸200μmol/L组COL1、COL3表达均降低(P<0.01).RT-PCR结果表明,与模型组相比,甘草酸干预可下调α-SMA、COL1、COL3表达,甘草酸150μmol/L组COL1 mRNA的表达水平降低(P<0.01),甘草酸200μmol/L组COL1、COL3 mRNA表达均降低(P<0.01).结论 甘草酸能够有效抑制TGF-β1诱导的NRK-49 F细胞中α-SMA、COL1、COL3的mRNA及蛋白表达,其作用机制有待进一步探讨.     

骨关节炎大鼠模型软骨组织中PI3K/AKT信号通路功能与细胞凋亡的相关性研究

目的:研究骨关节炎(OA)大鼠模型软骨组织中脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)信号通路功能与细胞凋亡的相关性。方法:选择清洁级雄性Wistar大鼠作为实验动物,并随机分为OA模型组和对照组;采用木瓜蛋白酶溶液与L-半胱氨酸关节腔内注射的方式建立OA模型。造模后第4周和第8周时,测定关节软骨中PI3K/AKT信号分子、炎症介质、细胞凋亡标志分子、细胞自噬标志分子的表达量。结果:OA组大鼠关节软骨组织中p-PI3K、pAKT的表达量显著低于对照组;OA组大鼠关节软骨组织中白介素(IL)-1β、IL-6、IL-17、IL-18、eIF4E、Bax、Caspase-3、mTOR、Beclin1、Atg5、Atg7的表达量显著高于对照组,且与p-PI3K、p-AKT的表达量呈负相关,Bcl-2的表达量显著低于对照组且与p-PI3K、p-AKT的表达量呈正相关。结论:骨关节炎大鼠模型软骨组织中PI3K/AKT信号通路功能的抑制能够促进软骨细胞的凋亡和自噬。     

基于PI3 K/AKT/mTOR信号通路研究补肾法对体外培养小鼠卵母细胞成熟的促进作用

目的 研究补肾法对体外培养小鼠卵母细胞成熟的促进作用及其与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)信号通路的关系.方法 给6～8周龄雌性大鼠灌服补肾调经Ⅲ号方制备含药血清.将3～4周龄雌性小鼠随机分为A、B组,A组灌胃蒸馏水,B组序贯灌胃补肾调经系列方(Ⅱ号方和Ⅲ号方),各灌胃12 d.第11天腹腔注射孕马血清促性腺激素(5 IU/只),48 h后剥离卵巢,取出卵丘-卵母细胞复合体(COCs)进行体外培养.将A组COCs分为空白对照组和抑制剂组(25μmol/L LY294002),B组分为补肾组(10％补肾调经Ⅲ号方含药血清)和补肾加抑制剂组(10％补肾调经Ⅲ号方含药血清+25μmol/L LY294002).体外培养18 h后,在显微镜下统计各组第一极体排出量并计算排出率.收集COCs,RT-PCR法检测各组COCs中Bcl-2、Bax、PI3 K、AKT、mTOR mRNA的表达,免疫荧光染色法检测各组COCs中Bcl-2、Bax、PI3 K、AKT、mTOR、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)的蛋白表达.结果 第一极体排出率补肾组高于空白对照组(P<0.05),抑制剂组低于空白对照组(P<0.05),补肾加抑制剂组低于补肾组(P<0.05).RT-PCR结果显示,与空白对照组比较,补肾组COCs中Bcl-2、PI3 K、AKT、mTOR mRNA表达及Bcl-2/Bax值均升高(P<0.05),Bax mRNA表达降低(P<0.05);抑制剂组COCs中Bcl-2、PI3K、AKT、mTOR mRNA表达及Bcl-2/Bax值均下降(P<0.05),Bax mRNA表达升高(P<0.05).与补肾组比较,补肾加抑制剂组COCs中Bcl-2、PI3K、AKT、mTOR mRNA表达及Bcl-2/Bax值均降低(P<0.05),Bax mRNA表达升高(P<0.05).免疫荧光染色结果显示,各组间PI3 K、AKT、mTOR蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);与空白对照组比较,补肾组COCs中Bcl-2蛋白表达、p-PI3 K/PI3 K、p-AKT/AKT升高(P<0.05),Bax蛋白表达降低(P<0.05);抑制剂组COCs中Bcl-2蛋白表达、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR降低(P<0.05),Bax蛋白表达升高(P<0.05).与补肾组比较,补肾加抑制剂组COCs中Bcl-2蛋白表达、p-PI3 K/PI3 K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR降低(P<0.05),Bax蛋白表达升高(P<0.05).结论 补肾调经系列方可通过调控PI3 K/AKT/mTOR信号通路、上调Bcl-2和Bax mRNA及蛋白表达的比值、抑制COCs凋亡从而促进小鼠卵母细胞成熟.     

当归补血汤通过miR-27a/TGF-β1/Smad3通路抑制HK-2细胞纤维化作用及机制研究

  目的  探讨当归补血汤通过miR-27a调控HK-2细胞纤维化的机制。  方法  HK-2细胞分为对照组、高糖组、高糖+空白血清组、高糖+当归补血汤含药血清组。采用MTT法检测各组细胞增殖情况; 采用Western blot法检测纤维化相关因子波形蛋白(Vimentin)、Ⅳ型胶原(COL Ⅳ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、p-Smad3/Smad3和转化生长因子(TGF)-β1蛋白的表达情况; qPCR法检测miR-27a及纤维化相关因子mRNA的表达情况; 通过转染miR-27a抑制剂及Smad3-siRNA并向培养基中加入TGF-β1, 观察miR-27a的表达和纤维化相关蛋白表达的情况。  结果  MTT结果显示, 与对照组相比, 高糖组细胞增殖率明显降低(P < 0.05, P < 0.001), 当归补血汤含药血清作用24、48 h后细胞增殖率明显提高(P < 0.05, P < 0.001)。Western blot结果显示, 当归补血汤含药血清明显抑制高糖诱导的HK-2细胞纤维化相关蛋白COL Ⅳ、α-SMA、Vimentin、TGF-β1、p-Smad3/Smad3的表达(P < 0.05, P < 0.01)。qPCR结果显示, 当归补血汤含药血清明显抑制高糖诱导的HK-2细胞COL Ⅳ、α-SMA、Vimentin、TGF-β1 mRNA和miR-27a的表达(P < 0.05, P < 0.01)。TGF-β1处理细胞后, 细胞纤维化加重, miR-27a的表达升高(P < 0.05, P < 0.01), 当归补血汤含药血清可明显降低TGF-β1诱导的纤维化细胞中miR-27a的表达升高(P < 0.001)。转染miR-27a抑制剂及Smad3-siRNA可明显降低TGF-β1诱导的细胞纤维化蛋白COL Ⅳ、α-SMA、Vimentin、TGF-β1、p-Smad3/Smad3表达的升高(P < 0.05, P < 0.01)。  结论  当归补血汤含药血清可促进HK-2细胞增殖, 并通过miR-27a/TGF-β1/Smad3信号通路调控HK-2细胞纤维化。      

VCAN通过PI3K/AKT信号通路调控乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖

目的 探讨多能蛋白聚糖（VCAN）通过PI3K/AKT 信号通路对乳腺癌细胞MDA-MB-231 增殖的影响。方法 利用Western Blot 和qRT-PCR 检测VCAN 在正常人乳腺细胞MCF-10A 和三株乳腺癌细胞中的表达水平。选取VCAN 高表达细胞株MDA-MB-231 为实验对象,实验分组为NC 组、siRNA1-VCAN 组和siRNA2-VCAN 组。采用MTT 法及克隆形成法检测转染后的乳腺癌细胞增殖变化。Western Blot 检测p-AKT、AKT、p-PI3K、PI3K 的蛋白相对表达水平。结果 与正常人乳腺细胞相比,VCAN 在乳腺癌细胞中的表达量显著上升（P＜0.05）。下调VCAN 表达量,MDA-MB-231 细胞的增殖显著被抑制（P＜0.05）。同时,下调VCAN 表达量,p-AKT、p-PI3K 蛋白水平显著下降（P＜0.05）。结论VCAN 在乳腺癌MDA-MB-231 细胞中,可能通过PI3K/AKT 信号通路调控细胞增殖能力。     

氧糖剥夺/再灌注损伤小胶质细胞通过上调胸腺素β4影响PI3K/AKT信号通路

探究小胶质细胞表达的胸腺素β4（Tβ4）与脑缺血/再灌注损伤（I/R）后PI3K/AKT通路的关系。方法 拟采用局灶脑I/R的模型［21只成年雄性SPF级SD大鼠分为假手术组（Sham组,6只）和模型组（I/R组,15只）］和使用BV2细胞建立氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)模型（分为对照组、OGD/R组、shRNA Tβ4+Control组、shRNA Tβ4+OGD/R组、Control shRNA+Control组、Control shRNA+OGD/R组）,配合基因干扰技术,使用免疫组化、免疫荧光等方法检测大脑皮层及BV2细胞Tβ4表达水平,蛋白质印迹检测PI3K/AKT通路蛋白水平的变化。结果 与Sham组相比,大鼠局灶脑I/R损伤后,大脑皮层Tβ4蛋白表达显著升高,尤其是I 2 h/R 48 h组（P＜0.0001）。体外实验证实,与Control组相比,OGD/R损伤后Tβ4的在BV2细胞表达明显升高,尤其OGD 6 h/R 48 h组升高最明显（P＜0.0001）, p-PI3K/PIK和p-AKT/AKT比值也升高(P＜0.001),而当Tβ4基因被干扰时,p-PI3K/PIK(P＜0.05)和p-AKT/AKT（P＜0.01）也受到抑制。结论 局灶性脑I/R损伤后,Tβ4在大脑皮质小胶质细胞高表达,并且小胶质细胞高表达的Tβ4可能通过影响PI3K/AKT通路影响大脑缺血/再灌注损伤后的修复。     

运动训练调节PI3K/AKT信号通路抑制凋亡改善大鼠脑缺血再灌注损伤研究

目的 探讨运动训练通过调节PI3K/AKT信号通路抑制凋亡改善大鼠脑缺血再灌注损伤的作用。方法 36只雄性SD大鼠随机分为3组, 即假手术组(Sham)、模型组(MCAO)及运动训练组(EX+MCAO), 每组12只。运动训练采用跑台跑步方法, 在术后24小时进行跑台训练, 连续4周。采用线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO)模型, 运动训练后分别检测各组大鼠神经功能评分, TTC染色观察脑梗死体积, 用HE染色检测脑组织损伤, Tunnel染色检测细胞凋亡, Western blot法检测海马组织PI3K、p-PI3K、AKT和p-AKT蛋白表达水平。结果 与Sham组比较, MCAO组大鼠神经功能评分显著增加, 脑梗死体积明显增大, 脑损伤加重, p-PI3K和p-AKT蛋白表达水平显著降低。与MCAO组比较, 运动训练组大鼠的神经功能损伤明显改善, 脑梗死体积减小, 脑损伤减轻, p-PI3K和p-AKT蛋白表达水平显著升高。结论 运动训练可能通过调控PI3K/AKT信号通路抑制细胞凋亡的过度发生, 从而减轻脑缺血再灌注损伤, 起到脑保护作用。     

芦荟大黄素对阿尔茨海默病大鼠PI3K/AKT/mTOR通路介导自噬的影响

目的 研究芦荟大黄素对阿尔茨海默病（Alzheimers disease,AD）大鼠的神经保护作用以及可能的调控机制。方法 选择健康雄性SD大鼠30只,采用随机分组的方式将大鼠分为空白组、模型组和芦荟大黄素组,每组10只。采用腹腔注射D-半乳糖和双侧颅内海马注射Aβ25-35的方式联合进行AD大鼠模型的复制。芦荟大黄素组大鼠按10 mL/kg给予芦荟大黄素混悬液,空白组和模型组给予等容积纯水,共28 d。Morris水迷宫试验检测大鼠学习记忆能力,苏木精-伊红染色观察海马CA1区神经细胞损伤情况,Western blot法和qRT-PCR法分别检测大鼠海马磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol-3-kinases,PI3K)/蛋白激酶B（protein kinase B, AKT）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（the mammalian target of rapamycin,mTOR）通路蛋白、自噬相关蛋白及其mRNA的表达水平。结果 AD大鼠学习记忆能力明显下降（P＜0.05）,海马CA1区神经细胞出现明显损伤,而芦荟大黄素可显著改善 AD大鼠学习记忆能力（P＜0.05）,减轻海马CA1区神经细胞损伤;AD大鼠海马p-PI3K、p-AKT、p-mTOR、P62蛋白表达水平明显增加（P＜0.05）,Beclin-1和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）,而芦荟大黄素可以显著减少AD大鼠海马p-PI3K、p-AKT、p-mTOR、P62的蛋白表达水平（P＜0.05）,显著增加Beclin-1和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平（P＜0.05）;AD大鼠海马PI3K、AKT、mTOR、P62 mRNA表达水平显著增加（P＜0.05）,Beclin-1和LC3 mRNA表达水平显著降低（P＜0.05）,而芦荟大黄素可以显著减少大鼠海马PI3K、AKT、mTOR、P62 mRNA表达水平（P＜0.05）,显著增加Beclin-1和LC3 mRNA表达水平（P＜0.05）。结论 芦荟大黄素能够显著改善AD大鼠的学习记忆能力,其作用机制可能是通过调控PI3K/AKT/mTOR通路介导的自噬来实现的。     

Adropin对脂肪细胞自噬及磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶通路的影响

目的探讨Adropin对脂肪细胞自噬及磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)通路的影响。方法将小鼠胚胎成纤维前脂肪细胞3T3-L1诱导分化为成熟脂肪细胞,随机分为对照组、Adropin组、自噬激动剂组、Adropin+自噬激动剂组。对照组细胞不予特殊处理,Adropin组细胞加入Adropin (终浓度为1 000 nmol·L-1),自噬激动剂组加入西罗莫司(终浓度为100 nmol·L-1),Adropin+自噬激动剂组细胞加入Adropin(终浓度为1 000 nmol·L-1)和西罗莫司(终浓度为100 nmol·L-1),继续培养2 h;采用单丹磺酰尸胺染色检测各组细胞中自噬空泡情况,细胞免疫荧光染色法检测各组细胞微管相关蛋白轻链3(LC3)表达,采用Western blot法检测各组细胞自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ、p62及PI3K/AKT通路蛋白PI3K、磷酸化PI3K(p-PI3K)、AKT、磷酸化AKT(p-AKT)的表达。结果与对照组比较,Adropin组细胞中自噬空泡相对含量、LC3阳性细胞比例及LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白相对表达量显著降低(P <0. 05),p62、p-PI3K、p-AKT蛋白相对表达量显著升高(P <0. 05)。与对照组比较,自噬激动剂组细胞中自噬空泡相对含量、LC3阳性细胞比例及LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白相对表达量显著升高(P <0. 05),p62、p-PI3K、p-AKT蛋白相对表达量显著降低(P <0. 05)。Adropin+自噬激动剂组与对照组细胞中自噬空泡相对含量、LC3阳性细胞比例及LC3-Ⅱ、Beclin-1、p62、p-PI3K、p-AKT蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。与Adropin组比较,自噬激动剂组、Adropin+自噬激动剂组细胞中自噬空泡相对含量、LC3阳性细胞比例及LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白相对表达量显著升高(P <0. 05),p62、p-PI3K、p-AKT蛋白相对表达量显著降低(P <0. 05)。与自噬激动剂组比较,Adropin+自噬激动剂组细胞中自噬空泡相对含量、LC3阳性细胞比例及LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白相对表达量显著降低(P <0. 05),p62、p-PI3K、p-AKT蛋白相对表达量显著升高(P <0. 05)。4组细胞中PI3K、AKT蛋白相对表达量两两比较差异均无统计学意义(P> 0. 05)。结论 Adropin可抑制脂肪细胞自噬,其机制可能是通过激活PI3K/AKT通路而实现。     

基于缺氧组织中NLRP3炎症小体的活化研究膝痹宁减轻KOA滑膜炎症的效应机制

目的 基于缺氧组织中NLRP3炎症小体的活化研究膝痹宁减轻膝骨关节炎滑膜炎症的效应机制。方法 大鼠分为空白组、KOA组、膝痹宁组。膝痹宁组药液灌胃,空白组、KOA组消毒生理盐水灌胃作为对照;第56天处死大鼠提取滑膜组织;HE染色评估滑膜炎症;缺氧探针免疫荧光染色观察大鼠膝关节滑膜组织缺氧程度;qPCR和Western blot检测缺氧转录因子1α（HIF-1α）、Caspase-1 p10、NLRP3及GSDMD的mRNA和蛋白表达;ELISA法测定NLRP3炎症小体活化下游IL-1β、IL-18的水平。结果 HE染色发现,KOA组滑膜组织较空白组表现出更多的炎性细胞浸润,衬里层细胞排列紊乱,膝痹宁组较KOA组炎性细胞浸润减少。大鼠滑膜组织的探针免疫荧光染色显示,KOA组与较空白组缺氧程度加重,膝痹宁组则较KOA组减轻。同时,KOA组滑膜组织中HIF-1α的mRNA和蛋白表达水平均较高于空白组（P<0.01）,膝痹宁组则较KOA组降低（P<0.01）。此外,KOA组Caspase-1 p10、NLRP3、GSDMD的mRNA及蛋白表达水平均高于空白组（P<0.05）,而膝痹宁组较KOA组有所降低（P<0.05）。KOA组滑膜组织中IL-1β、IL-18的水平较空白组升高（P<0.01）,膝痹宁组较KOA组降低（P<0.01）。结论 膝痹宁能有效改善KOA滑膜组织缺氧状况,降低HIF-1α的表达,减少NLRP3炎症小体的活化,减轻滑膜炎症。      

定坤丹对子宫内膜异位症大鼠PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响

目的 探索定坤丹对子宫内膜异位症(EMs)大鼠PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响。方法 通过异位移植子宫内膜组织,构建EMs大鼠模型,随机分为5组：模型组(M组)、定坤丹低(1.13 g/kg)剂量组(DKP-L组)、定坤丹中(2.26 g/kg)剂量组(DKP-M组)、定坤丹高(4.52 g/kg)剂量组(DKP-H组)、孕三烯酮(60 mg/kg)组(GES组),每组12只,另取12只正常SD大鼠只开腹不异位移植子宫内膜组织,设为假手术组(Sham组),以药物分组干预后处死大鼠,测定各组大鼠异位子宫内膜质量与体积,免疫组织化学染色检测大鼠异位子宫内膜微血管密度(CD31阳性率)与VEGF、MMP-9表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清VEGF、MMP-9、iNOS、TNF-α水平;蛋白免疫印迹实验检测大鼠异位子宫内膜PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白的表达。结果 与Sham组相比,M组大鼠异位子宫内膜微血管密度、VEGF与MMP-9表达、血清VEGF、MMP-9、iNOS及TNF-α水平、异位子宫内膜织p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/...     

姜黄素对肝纤维化大鼠肝组织中α-SMA、PDGF-BB和TGF-β1表达的影响

目的 观察姜黄素对肝纤维化大鼠肝组织中α-SMA、PDGF-BB和TGF-β1表达的影响，探讨姜黄素抗大鼠肝纤维化的作用机制。方法 用四氯化碳制作大鼠肝纤维化模型，同时分别予低（100mg/kg）、中（200mg/kg）、高（300mg/kg）剂量姜黄素灌胃，设立溶质对照组；分别于实验第4、7、21、42天，各组随机处死5只大鼠，取同部位肝组织行HE, V-G染色，并用免疫组化方法检测各组α-SMA、PDGF-BB和TGF-β1 的表达。结果 溶质对照组不表达或微量表达α-SMA、PDGF-BB和TGF-β1；模型组α-SMA、PDGF-BB和TGF-β1的表达随造模时间延长明显增强，姜黄素可显著减少α-SMA、PDGF-BB和TGF-β1的表达，其作用强度与剂量和时间有关。结论 姜黄素可抑制大鼠肝纤维化模型中PDGF-BB和TGF-β1的表达，这可能是其抗肝纤维化的作用机制之一。     

miR-214靶向PTEN介导PI3K/AKT信号通路对糖尿病肾病大鼠的保护机制

目的 探讨微小RNA（miR-214）靶向磷酸酶与张力蛋白同源物（PTEN）介导磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B（PI3K/AKT）信号通路减轻糖尿病肾病(DN)大鼠的氧化应激和肾间质纤维化的作用和机制。方法 将40只SD雄性大鼠分为对照组（control组）、模型组（DN组）、miR-214阴性对照组（DN+miR-NC组）和miR-214模拟物组（DN+miR-214 mimics组）,每组10只;qRT-PCR检测各组大鼠肾组织中miR-214的表达;电子天平称量各组大鼠体质量和肾质量,计算肾指数;血糖仪测定各组大鼠的空腹血糖（FPG）;双缩脲法测定各组大鼠24 h尿蛋白（UP）水平;全自动生化分析仪检测各组大鼠血清肌酐（Scr）和血清尿素氮（BUN）的水平;HE染色观察各组大鼠肾组织病理变化;Masson染色观察各组大鼠肾组织间质纤维化;ELISA检测各组大鼠血清中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽（GSH）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）的表达;免疫组织化学法检测各组大鼠肾组织中转化生长因子β1（TGF-β1）的表达;生物信息学工具预测靶基因;双荧光素酶报告基因检测基因或蛋白之间的相互作用;Western blot检测各组大鼠肾组织中PTEN、p-PI3K、p-AKT和磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）的表达。结果 miR-214在DN大鼠肾组织中呈低表达,在DN+miR-214 mimics组大鼠肾组织中表达显著上调（均P＜0.001）;miR-214 mimics使大鼠的体质量升高,肾指数、FPG、UP、Scr及BUN水平下调（均P＜0.05）;DN+miR-214 mimics组大鼠肾组织中肾间质中的炎性细胞浸润减少,胶原纤维沉积减少（P＜0.01）;miR-214 mimics使大鼠血清中MDA的水平降低,SOD、GSH、GSH-PX的水平升高（均P＜0.05）,大鼠肾组织中TGF-β1的表达水平下降（P＜0.05）;miR-214与PTEN存在靶向关系;miR 214 mimics使大鼠肾组织中PTEN蛋白表达下调,p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白表达上调（均P＜0.05）。结论 miR-214在DN大鼠肾组织中低表达,过表达miR-214对DN大鼠的肾组织有保护作用,可能与降低肾组织的氧化应激水平、TGF-β1蛋白表达和抑制PI3K/AKT通路激活有关。     

新风胶囊通过miR-23a-3p/PTEN/PI3K/AKT/mTOR抑制骨关节炎CD4+T与软骨细胞共培养的免疫炎症

目的 观察新风胶囊（XFC）含药血清通过调控miR-23a-3p /PTEN/PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制骨关节炎（OA）CD4+T与软骨细胞共培养中免疫炎症反应的作用机制。方法 选取30例OA患者（OA组）及30例正常人（NC组）检测miR-23a-3p、10号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因（PTEN）、磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（AKT）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）的表达,观察临床指标：红细胞沉降率（ESR）、超敏C反应蛋白（hs-CRP）、IgA、IgG、IgM、补体 C3、补体C4的表达,并观察通路与临床指标的相关性。观察 30 例 OA 患者经 XFC 治疗后通路及临床指标的变化。分离及提取 OA-CD4 +T 细胞,transwell小室培养OA-CD4+T细胞与OA-CH,SD大鼠给药灌胃制备XFC含药血清;采用CCK8法检测OA-软骨细胞的细胞增殖;双荧光素酶报告实验分析miR-23a-3p和PTEN的靶向关系;RT-PCR技术检测共培养细胞中miR-23a-3p、PTENmRNA、PI3KmRNA、AKTmRNA、mTORmRNA 的表达;采用 ELISA 法检测 IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α的水平;Western blotting 检测PTEN、PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR蛋白表达。结果 与NC组相比,OA组miR-23a-3p、PTEN、PI3K、AKT、IL-1β、IL-6、TNF-α表达显著上调,而PTEN、IL-10表达显著下调（P<0.01）;相关性分析表明：miR-23a-3p与IL-6呈正相关（P<0.01）,PI3K与IL-10呈正相关,mTOR与IL-6、IL-10、补体C3、补体C4呈正相关（P<0.01或P<0.05）;加入XFC含药血清,miR-23a-3p及PI3K/AKT/mTOR通路被抑制,L-1β、IL-6、TNF-α表达水平下降、IL-10表达水平升高（P<0.01）;Model组miR-23a-3p、PI3K、AKT、mTOR、IL-1β、IL-6和TNF-α表达水平升高,PTEN、IL-10表达水平降低（P<0.01）;miR-23a-3p经过表达后,miR-23a-3p、PI3K、AKT、mTOR、IL-1β、IL-6和TNF-α表达水平显著升高,PTEN、IL-10表达水平显著降低（P<0.01或P<0.05）;XFC组IL-1β、IL-6、TNF-α表达降低,IL-10表达升高,miR-23a-3p、PI3K、AKT、mTOR表达下调,PTEN表达上调（P<0.01或P<0.05）。结论 XFC可通过下调miR-23a-3p的表达,抑制PTEN/PI3K/AKT/mTOR通路的活化,改善IL-1β、IL-6,IL-10和TNF-α的表达,降低OA患者炎症反应。