骨桥蛋白与ras基因蛋白在喉鳞癌中表达意义及相关性

目的探讨骨桥蛋白（osteopontin,OPN）与ras基因蛋白在喉鳞癌组织中的表达意义及二者相关性。方法采用免疫组织化学染色方法检测42例喉癌组织（喉癌组）与25例癌旁组织或声带息肉组织（对照组）中OPN与ras基因蛋白的表达情况,分析其与临床病理学特征的关系。结果喉癌组OPN和ras基因蛋白阳性表达率分别为54．8％和73．8％,明显高于对照组（24．0％和48．0％）（P〈O．05）;喉癌组OPN阳性表达率在肿瘤T分期、分化程度及淋巴结转移上差异有统计学意义（P〈0．05）,在患者年龄、临床分期上差异无统计学意义（P〉0．05）;ras基因蛋白阳性表达率在肿瘤临床分期、淋巴结转移上差异有统计学意义（P〈0．05）,在患者年龄、T分期、分化程度上差异无统计学意义（P〉0．05）;OPN阳性表达与ras基因阳性表达呈正相关（r=0．329,P=0．033）。结论OPN和ras基因蛋白在喉癌的发生、发展中起重要作用,可能成为喉癌生物学特性及评价预后的重要标记物。     

人骨形态发生蛋白-2重组慢病毒载体转染羊骨髓间充质干细胞及其成骨调节作用

目的探讨人骨形态发生蛋白-2（bone morphogenetic protein-2,BMP-2）基因转染对体外培养的骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）增殖和骨向分化的影响。方法构建携带人BMP2基因的慢病毒载体,转染诱导羊第4代BMSCs为转染组,选择未转染的BMSCs为对照组。采用Western blot检测2组细胞BMP-2与成骨相关蛋白表达情况,采用实时定量PCR法检测细胞I型胶原、骨钙素、骨桥蛋白mRNA相对表达量的变化情况。结果转染组骨钙素、骨桥蛋白mRNA及蛋白表达量较对照组增高,差异有统计学意义（P〈0．05）,2组I型胶原mRNA及蛋白表达量差异无统计学意义（P〉0．05）。结论BMP-2基因转染可增强羊BMSCs增殖和骨向分化的能力,可作为组织工程骨的种子细胞。     

病毒白细胞介素-6对抑癌基因p16启动子区甲基化及蛋白表达的影响

目的观察病毒白细胞介素-6（viral interleukin-6,vIL-6）对抑癌基因p16启动子区甲基化及蛋白表达的影响。方法以vIL-6真核表达质粒转染293T细胞（转染组）为实验,空载体转染的293T细胞（空载体组）和未转染的293T细胞（未转染组）为对照,3组均采用Western blot法检测DNA甲基转移酶1的表达情况,甲基化特异性PCR法检测p16启动子区甲基化状态,荧光定量RT—PCR和Western blot法检测p16基因的表达。结果转染组DNA甲基转移酶1蛋白表达较未转染组和空载体组增加;转染组p16基因启动子区出现甲基化改变;转染组p16 mRNA表达量明显低于未转染组和空载体组,差异有统计学意义（P〈O．05）;转染组P16蛋白表达较未转染组和空载体组降低。结论vIL-6可上调DNA甲基转移酶1表达,导致抑癌基因p16启动子区甲基化,抑制p16基因表达;vIL-6所致的DNA甲基化改变,可能是其致瘤机制之一。     

ARHI和环氧化酶-2蛋白在子宫颈腺癌组织中的表达及其意义

目的探讨ARHI蛋白和环氧化酶-2（COX-2）蛋白在子宫颈腺癌发生中的作用及其相互关系。方法采用免疫组织化学法检测40例子宫颈腺癌及30例慢性子宫颈炎组织中。ARHI蛋白及COX-2蛋白的表达情况。结果ARHI在40例子宫颈腺癌组织阳性率为50．0％（20／40）,低于慢性子宫颈炎患者子宫颈组织阳性率90．0％（27／30）,差异有统计学意义（X^2=12．43,P〈0．05）;COX-2在40例子宫颈腺癌组织阳性率82．5％（33／40）,高于慢性子宫颈炎患者子宫颈组织阳性率0（0／30）,差异有统计学意义（x^2=46．16,P〈0．05）;ARHI蛋白阳性表达率与子宫颈腺癌临床分期（x^2=3．96,P〈0．05）及组织分化程度高低有关（x^2=7．04,P〈0．05）。COX-2蛋白与子宫颈腺癌组织分化程度有关（x^2=7．04,P〈0．05）,与临床分期无关（P〉0．05）;ARHI蛋白和COX-2蛋白与淋巴结有无转移均无关（P均〉0．05）;ARHI蛋白和COX．2蛋白表达有关联（r=0．31,P〈0．05）。结论子宫颈腺癌的发生与ARHI基因失活和COX-2蛋白表达异常有关,两者可能协同作用参与子宫颈腺癌的发生。     

利用Gateway技术构建重组腺病毒载体pAd-LMP-1

背景:目前大多采用Adeasy系统来构建和包装腺病毒载体,整个过程需要多次酶切,连接和转化筛选,并且在BJ183菌中的重组阳性率很低,还可能存在假阳性的可能,整个过程耗时、繁琐.目的:应用Gateway技术较快速构建大鼠LIM矿化蛋白1基因重组腺病毒载体.方法:从SD大鼠成骨细胞内提取总RNA,并设计LMP-1特异性引物进行RT-PCR,获取LMP-1基因后利Invitrogen公司的TOPO定向克隆技术创建入门克隆pENTR/D-LMP-1,转化TOP10细菌后挑取阳性克隆摇菌提取质粒,入门克隆再与表达载体pAD/CMV/V5-DEST进行同源重组反应得到病毒载体pAD/CMV/V5-LMP-1,转化细菌后挑选阳性克隆摇菌提取重组病毒质粒,用Pac Ⅰ内切酶线性化后用转染293A细胞后得到重组腺病毒载体.将目的基因与Genebank中LMP-1(基因号:AF095585)一致性BLAST比较,并观察重组腺病毒载体pAd-LMP-1的表达.结果与结论:总RNA后电泳结果显示所提RNA完整,RNA纯度符合要求.成功获取大鼠LMP-1基因,入门质粒与病毒表达质粒经过酶切鉴定以及测序证明,目的基因Genebank中LMP-1(基因号:AF095585)作BLAST比较,发现系列一致,没有突变.构建出来的腺病毒载体载体能在293A细胞中包装成功.提示利用Gateway技术构建LMP-1重组腺病毒载体相对简单、快捷地获得pAd-LMP-1.     

缺氧诱导因子-1α和葡萄糖转运蛋白1在胃癌中的表达及其意义

目的探讨缺氧诱导因子-1α（hypoxiainduciblefactor-1alpha,HIF-1α）和葡萄糖转运蛋白1（glucosetransporterl,GLUTl）的基因产物在胃癌组织中的表达及其意义。方法应用免疫组织化学EnvisionTM二步法检测172例胃癌和30例癌旁正常胃组织（距癌灶5cm以上）中HIF-1α和GLUT1蛋白的表达。结果HIF-1α在172例胃癌和30例癌旁组织中的阳性表达率分别为55．8％（96／172）和0,差异有统计学意义（x^2=11．16,P〈0．01）。胃癌组织中,HIF-1α表达与胃癌的临床分期呈正相关（x^2=25．53,P〈0．01）、与组织学分级呈正相关（x^2=24．99,P〈0．01）、与淋巴结转移呈正相关（x^2=1．20,P〈O．01）、与肿瘤坏死呈正相关（x^2=30．35,P〈0．01）。GLUT1蛋白在172例胃癌和30例癌旁组织中的阳性表达率分别为61．6％（106／172）和0,差异有统计学意义（X。=13．76,P〈0．01）。胃癌组织中,GLUT1表达与胃癌的临床分期呈正相关（x。=25．43,P〈0．01）、与组织学分级呈正相关（x^2=13．13,P〈0．05）、与淋巴结转移呈正相关（x^2=11．31,P〈0．05）、与肿瘤坏死呈正相关（x2．-23．29,P〈0．01）。HIF—Id和GLUTI蛋白的表达与患者年龄和术后5年生存率均无相关性。经Spearman相关分析,显示FIIF-1α与GLUT1表达程度呈正相关（r=0．636,P〈0．01）。结论HIF-1α、Glutl的阳性表达可以作为胃癌侵袭转移潜能的生物学指标,且这些指标的表达对于临床早期干预治疗具有重要的指导意义。     

子宫内膜异位症中Bax与Bcl-2的表达及其意义研究

目的探讨凋亡调节基因Bcl-2和Bax在子宫内膜异位症发生发展中的作用。方法SP法检测子宫内膜异位症61例异位内膜、51例在位内膜和58例正常子宫内膜组织中Bcl-2和Bax的表达。结果Bcl-2蛋白表达强于在异位内膜和对照组，分泌期差异有统计学意义（P〈0．05，P〈0．01）；异住内膜组Bax蛋白表达低于在位内膜组和对照组，增生期和分泌期，异位内膜组染色强度均低于在位内膜组和对照组，分泌期差异有统计学意义（P〈0．05）；Bcl-2和Bax在对照组及在位内膜组均呈周期性变化，Bcl-2增生期强于分泌期，Bax分泌期强于增生期，异位内膜组失去周期性变化；增生期3组Bcl-2表达均强于Bax，在位内膜组、异位内膜组差异有统计学意义（P〈0．05，P〈0．01）；而分泌期对照组和在位内膜组Bax强于Bcl-2，异位内膜组Bax表达较Bcl-2弱，差异均有统计学意义（P〈0．05，P〈0．01）。结论Bcl-2和Bax在子宫内膜异位症发生发展中发挥重要作用。     

siRNA对腺样囊性癌细胞survivin基因蛋白表达与细胞增殖的影响

目的应用RNA干扰技术靶向阻断survivin基因表达，探讨其蛋白表达水平及对细胞增殖抑制作用。方法将siRNA真核表达载体Pgenesil-sur通过脂质体介导转染腺样囊性癌细胞，采用免疫组化法检测survivin基因蛋白表达；并用图象分析仪分析蛋白表达强度及表达抑制率。MTT法检测对腺样囊性癌细胞增殖的抑制作用。结果空白对照组、空质粒载体组、RNA干扰组survivin蛋白表达强度分别为：2．52±0．10，2．48±0．11，0．53±0．10。经统计学分析表明转染Pgenesil—sur真核表达载体后。survivin基因蛋白表达水平明显减低（P〈0.05），其抑制率达到79％；转染空质粒载体与空白对照组差异无统计学意义（P〉0．05）；MTT法结果表明转染Pgenesil—sur真核表达载体后细胞增殖受到显著抑制，抑制率为38．80％（P〈0．05）；转染空质粒载体细胞增殖未受到抑制（P〉0．05）。结论靶向survivin siRNA能抑制体外培养的腺样囊性癌细胞survivin基因蛋白表达与细胞增殖作用。     

一氧化碳中毒大鼠脑红蛋白表达变化及对半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的影响

目的：观察急性一氧化碳中毒后脑红蛋白和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的变化及氯化血红素对上述两者表达变化的影响。方法：实验于2005-10／08在华北煤炭医学院解剖学实验室完成。150只雄性SD大鼠随机分成3组，每组50只。①一氧化碳中毒组：大鼠放入染毒罐，静式吸入一氧化碳与空气的混合气60min。造模后分别于1，3，5，7和14d处死，每个时间点10只大鼠。②氯化血红素治疗组：除给予一氧化碳中毒组同样的处理外，于造模后立即注射氯化血红素（30mol／kg，3次／d）直至相应时间点处死，每个时间点10只大鼠。③对照组：不作任何处理，在相应时间点处死。各组大鼠分别行免疫组化染色和免疫蛋白印迹法，观察大鼠脑内的脑红蛋白和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的变化。结果：150只大鼠均进入结果分析。①免疫组化阳性神经细胞数目：一氧化碳中毒组大鼠海马脑红蛋白阳性神经元数目持续下降，至中毒后14d最低，与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．01）；同时半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性细胞逐渐增多，至中毒后5d达高峰，与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．01）。经氯化血红素治疗后，与中毒组相比脑红蛋白的表达明显增多，与中毒组相比差异有统计学意义（P〈0．01）；同时半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的阳性细胞数明显下降，与中毒组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。②免疫蛋白印迹灰度分析：一氧化碳中毒组脑红蛋白的表达持续下降，半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达上升，与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．01）；氯化血红素治疗组与中毒组相比，脑红蛋白表达量上升（P〈0．01）；半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达下降，治疗5d最显著（P〈0．01）。结论：一氧化碳中毒后大鼠脑红蛋白表达呈持续下降；刺激脑红蛋白表达可抑制急性一氧化碳中毒后大鼠脑半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达。     

白细胞介素-6基因-572G/C多态性对急性冠状动脉综合征患者血浆高敏C反应蛋白的影响

目的研究白细胞介素-6（IL-6）基因-572G／C多态性对急性冠状动脉综合征患者血浆高敏C反应蛋白（hs-CRP）浓度的影响。方法采用聚合酶链反应结合限制性内切酶片段长度多态分析方法（PCR-RFLP）检测228例急性冠状动脉综合征患者的IL-6基因-572G／C多态性，用免疫比浊法测定hs-CRP浓度。结果①ST段抬高急性心肌梗死（STEMI）组hs—CRP水平明显高于非ST段抬高急性冠脉综合征（NSTEACS）组，差异有统计学意义（P〈0．05）。②IL-6基因-572G／C多态性的基因型频率：CC42．54％、GC46．92％、GG10．52％；等住基因频率：C66．01％、T33．99％。③在STEMI组中，基因型CC组hs-CRP浓度较基因型GG＋GC组高，差异有统计学意义（P〈0．05）。多因素线性回归分析结果仍显示基因型CC携带者的血浆hs-CRP水平较携带G等住基因者高（P〈0．05）。在NSTEACS组及总人群中，不同基因型组hs—CRP比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论IL-6基因-572G／C多态性对急性冠状动脉综合征患者血浆hs-CRP水平无影响。在STEMI患者中，基因型CC携带者的血浆hs-CRP水平较携带G等住基因者高，提示IL-6基因-572G／C多态性在较高的炎症反应状态下，会对hs-CRP的表达产生影响。     

Efficient bone formation by gene transfer of human LIM mineralization protein-3

LIM mineralization protein (LMP) is a novel positive regulator of the osteoblast differentiation program. In humans, three different LMP splice variants have been identified: LMP-1, LMP-2, and LMP-3. Gene transfer of human LMP-1 (hLMP-1) induces expression of genes involved in bone formation, including certain bone morphogenetic proteins (BMPs), promotes bone nodule formation in vitro, ectopic bone formation in vivo, and is therapeutic in animal models of posterior thoracic and lumbar spine fusion. To examine the osteoinductive properties of the LMP-3 in vitro and in vivo, we have generated plasmid and adenoviral vectors expressing codon-optimized hLMP-3. Here we demonstrate that gene transfer of hLMP-3 induces expression of the bone-specific genes osteocalcin, osteopontin, and bone sialoprotein and induced bone mineralization in preosteoblastic and fibroblastic cells. We also demonstrate that hLMP-3 is able to induce bone mineralization and the expression of the bone-specific genes, BMP-2, OSX, RunX2, and alkaline phosphatase in human mesenchymal stem cells in a dose-dependent manner. Finally, we demonstrate that direct gene transfer of hLMP-3 into murine skeletal muscle results in ectopic bone formation more efficiently than BMP-2. These results demonstrate that hLMP-3 gene transfer can be used to promote bone formation in cell culture and in vivo as or more efficiently than BMP-2, thus establishing feasibility and efficacy of direct gene delivery of hLMP-3 to produce bone in vivo. These results suggest that gene transfer of hLMP-3 could be developed as a bone-inductive therapeutic agent for clinical applications.     

人LIM矿化蛋白1基因腺病毒重组表达载体构建及在犬骨髓间充质干细胞中的表达

背景:研究表明LIM矿化蛋白1在体内和体外都可促使骨发生.目的:应用Adeasy-1腺病毒系统构建含人LIM矿化蛋白1基因的腺病毒重组体,并感染犬骨髓间充质干细胞,检测其体外表达及诱导成骨作用.方法:构建重组腺病毒质粒pAd-LMP-1,经人胚胎肾293细胞包装、扩增后得到复制缺陷重组腺病毒Ad-LMP-1,以最佳感染复数值体外感染犬骨髓间充质干细胞,行RT-PCR及 Western Blot检测LIM矿化蛋白1、骨形态发生蛋白7基因的表达.重组Ad-LMP-1和(或)外源性重组人骨形态发生蛋白7处理犬骨髓间充质干细胞,21 d后行矿化(钙)结节茜素红染色分析LIM矿化蛋白1基因的诱导成骨作用.结果与结论:①将Ad-LMP-1以感染复数值100感染犬骨髓间充质干细胞可获得最佳感染效率,感染后骨髓间充质干细胞能在基因和蛋白水平表达LIM矿化蛋白1,未引起骨形态发生蛋白7基因的表达.②Ad-LMP-1或重组人骨形态发生蛋白7均不能单独促使骨髓间充质干细胞向成骨细胞转化,两者联合可促使骨髓间充质干细胞向成骨细胞转化.③实验成功构建重组腺病毒载体Ad-LMP-1,并实现其在犬骨髓间充质干细胞中表达,证实了LIM矿化蛋白1在诱导成骨作用中表现为与外源性重组人骨形态发生蛋白7的协同效应.     

人LIM矿化蛋白1基因腺病毒重组表达载体构建及在犬骨髓间充质干细胞中的表达

背景：研究表明LIM矿化蛋白1在体内和体外都可促使骨发生。目的：应用Adeasy-1腺病毒系统构建含人LIM矿化蛋白1基因的腺病毒重组体,并感染犬骨髓间充质干细胞,检测其体外表达及诱导成骨作用。方法：构建重组腺病毒质粒pAd-LMP-1,经人胚胎肾293细胞包装、扩增后得到复制缺陷重组腺病毒Ad-LMP-1,以最佳感染复数值体外感染犬骨髓间充质干细胞,行RT-PCR及Western Blot检测LIM矿化蛋白1、骨形态发生蛋白7基因的表达。重组Ad-LMP-1和（或）外源性重组人骨形态发生蛋白7处理犬骨髓间充质干细胞,21d后行矿化（钙）结节茜素红染色分析LIM矿化蛋白1基因的诱导成骨作用。结果与结论：①将Ad-LMP-1以感染复数值100感染犬骨髓间充质干细胞可获得最佳感染效率,感染后骨髓间充质干细胞能在基因和蛋白水平表达LIM矿化蛋白1,未引起骨形态发生蛋白7基因的表达。②Ad-LMP-1或重组人骨形态发生蛋白7均不能单独促使骨髓间充质干细胞向成骨细胞转化,两者联合可促使骨髓间充质干细胞向成骨细胞转化。③实验成功构建重组腺病毒载体Ad-LMP-1,并实现其在犬骨髓间充质干细胞中表达,证实了LIM矿化蛋白1在诱导成骨作用中表现为与外源性重组人骨形态发生蛋白7的协同效应。     

单链可变区片段与趋化因子融合的独特型淋巴瘤疫苗原核表达质粒的构建及表达

本研究目的在于克隆小鼠B细胞淋巴瘤细胞膜免疫球蛋白（Ig）的单链可变区片段（scFv），与单核细胞趋化因子（MCP-3）的基因融合，构建融合基因scFv-MCP-3的表达载体，在大肠杆菌中表达融合蛋白，制备作为治疗B细胞淋巴瘤的独特型融合蛋白疫苗。采用RT-PCR法扩增BALB／c小鼠源B细胞淋巴瘤A20细胞株的Ig VH和Ig VL基因，重组PCR法用一段编码（Gly4Ser），连接肽的基因序列连接两基因，制备scFv片段。用相同PCR方法，选用一段编码NDAQAPKS连接肽的基因序列，连接scFv与MCP-3基因，获得scFv-MCP-3融合基因片段。定向克隆到原核表达质粒pGLo中，并在大肠杆菌中表达融合蛋白。测序结果表明：分别成功克隆A20细胞的Ig VH和Ig VL基因，并成功制备了scFv片段和scFv-MCP-3融合基因片段；限制性酶切方法证实，重组pGLo／scFv-MCP-3原核表达质粒中融合基因准确插入。SDS-PAGE电泳分析显示，融合蛋白分子量约65kD，与预期蛋白分子量一致，并且目的蛋白占菌体蛋白的30％。结论：本研究成功构建鼠源scFv片段与趋化因子MCP-3融合的独特型B细胞淋巴瘤疫苗表达质粒pGLo／scFv-MCP-3，并实现融合蛋白的初步表达。     

MMP-9、LMP-1在鼻NK/T细胞淋巴瘤组织中的表达及意义

目的 通过检测鼻NK/T细胞淋巴瘤组织中的基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、潜伏膜蛋白-1(LMP-1)蛋白的表达及分布情况,探讨两者间的相互关系,为临床治疗和预后判断提供依据.方法 采用免疫组化S-P法检测20例鼻NK/T细胞淋巴瘤组织中MMP-9、LMP-1的表达情况,同时与组织芯片中其他类型淋巴瘤及10例淋巴组织反应性增生进行比较.结果 鼻NK/T细胞淋巴瘤组中MMP-9、LMP-1阳性表达率分别为90.0%(18/20)和45.0%(9/20);组织芯片包含的B细胞淋巴瘤组及外周T细胞淋巴瘤组MMP-9的阳性表达率分别为61.1%(11/18)、50.0%(6/12),LMP-1的阳性表达率分别为11.1%(2/18)、25.0%(3/12).淋巴组织反应性增生组未见LMP-1的阳性表达, MMP-9的阳性表达率为30.0% (3/10).鼻NK/T细胞淋巴瘤组MMP-9、LMP-1 阳性表达率与淋巴组织反应性增生组比较差异有统计学意义(P＜0.05),MMP-9与LMP-1表达呈正相关(r=0.327,P＜0.05).结论 MMP-9在鼻NK/T细胞淋巴瘤组织中存在高表达,与EB病毒感染关系密切,LMP-1能上调MMP-9表达,可能与鼻NK/T细胞淋巴瘤的高度侵袭性有关.     

Plasmid-mediated florfenicol resistance in Pasteurella trehalosi

OBJECTIVES: A florfenicol-resistant Pasteurella trehalosi isolate from a calf was investigated for the presence and the location of the gene floR. METHODS: The P. trehalosi isolate 13698 was investigated for its in vitro susceptibility to antimicrobial agents and its plasmid content. A 14.9 kb plasmid, designated pCCK13698, was identified by transformation into Pasteurella multocida to mediate resistance to florfenicol, chloramphenicol and sulphonamides. The plasmid was sequenced completely and analysed for its structure and organization. RESULTS: Plasmid pCCK13698 exhibited extended similarity to plasmid pHS-Rec from Haemophilus parasuis including the region carrying the parA, repB, rec and int genes. Moreover, it revealed similarities to plasmid RSF1010 in the parts covering the mobC and repA-repC genes and to plasmid pMVSCS1 in the parts covering the sul2-catA3-strA gene cluster. Moreover, the floR gene area corresponded to that of transposon TnfloR. In addition, two complete insertion sequences were detected that were highly similar to IS1593 from Mannheimia haemolytica and IS26 from Enterobacteriaceae. Several potential recombination sites were identified that might explain the development of plasmid pCCK13698 by recombination events. CONCLUSIONS: The results of this study showed that in the bovine pathogen P. trehalosi, floR-mediated resistance to chloramphenicol and florfenicol was associated with a plasmid, which also carried functionally active genes for resistance to sulphonamides (sul2) and chloramphenicol (catA3). This is to the best of our knowledge the first report of resistance genes in P. trehalosi and only the second report of the presence of a florfenicol-resistance gene in target bacteria of the family Pasteurellaceae.     

Ex vivo-transduced autologous skin fibroblasts expressing human Lim mineralization protein-3 efficiently form new bone in animal models

Local gene transfer of the human Lim mineralization protein (LMP), a novel intracellular positive regulator of the osteoblast differentiation program, can induce efficient bone formation in rodents. To develop a clinically relevant gene therapy approach to facilitate bone healing, we have used primary dermal fibroblasts transduced ex vivo with Ad.LMP-3 and seeded on a hydroxyapatite/collagen matrix prior to autologous implantation. Here, we demonstrate that genetically modified autologous dermal fibroblasts expressing Ad.LMP-3 are able to induce ectopic bone formation following implantation of the matrix into mouse triceps and paravertebral muscles. Moreover, implantation of the Ad.LMP-3-modified dermal fibroblasts into a rat mandibular bone critical size defect model results in efficient healing, as determined by X-rays, histology and three-dimensional microcomputed tomography (3DmuCT). These results demonstrate the effectiveness of the non-secreted intracellular osteogenic factor LMP-3 in inducing bone formation in vivo. Moreover, the utilization of autologous dermal fibroblasts implanted on a biomaterial represents a promising approach for possible future clinical applications aimed at inducing new bone formation.     

Plasmid-mediated quinolone resistance conferred by qnrS1 in Salmonella enterica serovar Virchow isolated from Turkish food of avian origin

OBJECTIVES: To study the molecular characteristics of the quinolone and associated ampicillin resistance mechanisms present in Salmonella enterica serovar Virchow isolated from Turkish foods. METHODS: Nine epidemiologically unrelated Salmonella Virchow strains isolated from foods (chicken and minced meat) sold in different markets in Ankara were analysed for their susceptibility to 17 antimicrobials. The strains were typed by PFGE and plasmid profiling and investigated by molecular methods (PCR/sequencing) for the presence of several resistance genes, class 1 integrons and mutations in the quinolone resistance-determining regions. Plasmids conferring quinolone resistance were analysed by restriction fragment length polymorphism (RFLP) analysis, DNA hybridization, sequencing, replicon-typing PCR and mating experiments. RESULTS: All strains showed nalidixic acid resistance (MIC >or= 128 mg/L) together with a decreased susceptibility to ciprofloxacin (three strains with an MIC of 1 mg/L and six with an MIC of 0.25 mg/L), associated with mutations within the gyrA gene (Asp-87 --> Tyr-87). In three strains, qnrS1 genes were detected. Ampicillin resistance encoded by a bla(CTX-M3) gene and/or bla(TEM-1-like) gene was found in four strains. Three of these strains carried an approximately 45 kb conjugative plasmid, designated pRQ2006, harbouring qnrS1 and a Tn3-like transposon. Partial sequencing and RFLP of pRQ2006 indicated its similarity to the qnrS1 plasmid pAH03786 found in a Japanese Shigella flexneri 2b isolate. CONCLUSIONS: This is the first study describing the presence of qnrS1 genes in bacterial isolates from Turkey. The pRQ2006 plasmid seems to be more related to the S. flexneri 2b qnrS1 plasmid pAH0376 than to the Salmonella qnrS1-carrying plasmids pINF5 and TPqnrS-2.