整装培养细胞内质网的透射电镜观察

采用以高锰酸钾为固定剂的整装培养细胞制样技术:观察了几种细胞系细胞(Hela,LA₇₉₅,2BS)内质网(endoplasmic reticulum,简称ER)的超微结构.由ER小管构成的连续的网络系统存在于整个细胞的细胞质中.此法同样适于观察线粒体的超微结构及线粒体的三维空间关系,在Hela细胞中,仅用高锰酸钾固定剂固定7min就能清晰地看到线粒体的嵴.结果表明,本方法适于观察细胞中膜细胞器的分布和超微结构.     

表皮生长固子对人子宫颈癌细胞形态及噻唑蓝还原的影响

表皮生长固子（ＥＧＦ）１０μｇ／Ｌ作用于人子宫颈癌（Ｈｅｌａ）细胞，２４ｈ、４８ｈ未见细胞数量改变，表５ｄ可观察到细胞由原来的呈椭圆形克隆样生长变为有树突样胞质突出的长梭状较均匀地分布生长：ＥＧＦ作用下，Ｈｅｌａ细胞噻唑蓝还原呈剂量依赖性增加。提示ＥＧＦ不能促进Ｈｅｌａ细胞增殖，但可引起细胞形态及线粒体脱氢酶活性增高，这可能与ＥＧＦ促分化作用有关。     

人宫颈癌细胞对丝裂霉素耐药及逆转的实验研究

目的：探讨ＳＤＺＰＳＣ８３３和维拉帕米（Ｖｅｒａｐａｍｉｌ，ＶＥＲ）对ＭＭＣ体外增敏作用。方法：以人宫颈癌Ｈｅｌａ细胞和耐药亚系Ｈｅｌａ／ＭＭＣ细胞为材料，观察了ＰＳＣ８３３和ＶＥＲ对ＭＭＣ体外增敏作用。结果：无毒剂量的ＰＳＣ８３３和ＶＥＲ（１～３μｇ／ｍｌ）可显著增加ＭＭＣ的细胞毒作用且可基本克服Ｈｅｌａ／ＭＭＣ细胞对ＭＭＣ５倍的耐药，＾３Ｈ－ＴｄＲ实验表明，ＶＥＲ或ＰＳＣ８３３与ＭＭＣ联用可增     

乳腺癌雌激素受体含量与超微结构形态计量的关系

应用ＭＣＣ法测定女性乳腺癌患者癌组织的雌激素受体（Ｅｓｔｒｏｇｅｎｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＥＲ）含量，对肿瘤细胞质中的线粒体和粗而内质网进行了形态计量学观察。结果：ＥＲ（一）组线粒体体密度大于ＥＲ（＋）组，比表面小于ＥＲ（＋）组；粗而内质网而数密度小于ＥＲ（＋）组。两组之间线粒体面数密度、而密度和粗而内质网而密度无显著差异。     

腺病毒介导的CD基因在有胰腺癌细胞中的靶向性表达

目的：探讨腺病毒介导的大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（Ｅ．ｃｏｌｉ ＣＤ）基因在胰腺癌细胞中靶向性表达的可能性及其作用。方法：将含癌胚抗原（ｃａｒｃｉｎｏｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ ＣＥＡ）启动子的重组腺病毒感梁人胰腺癌ＳＷ１９９０细胞（ＣＥＡ＾＋）、Ｃａｐａｎ－２细胞（ＣＥＡ＾－）和入宫颈癌Ｈｅｌａ细胞，观察ＣＤ基因在３种细胞中的表达及细胞对５－ＦＣ的敏感性差异。结果：腺病毒介导ＣＤ基因仅在ＳＷ１     

乳膜培养人内皮细胞及其整装电镜标本制作技术的研究

用Falcon塑料培养器皿的原料，自制一种支持膜（PF），经明胶处理后，首次用于浮膜培养人内皮细胞。细胞片长至亚融合时，以高锰酸钾混合固定液固定、消化细胞以保存细胞的膜系统。将固定后的细胞连同PF贴附于铜网上，干燥后在TEM80Kv条件下，细胞的内质网及线粒体等超微及立体超微结构可被清楚地观察到。还讨论了本方法的优点并与文献中的其它整体细胞方法做了比较。     

内皮素—1及其抗体对肿瘤细胞Hela和PG增殖的影响

观察内皮素－１（ＥＴ－１）及其抗体对宫颈癌细胞Ｈｅｌａ和肺巨细胞癌ＰＧ细胞增殖的影响。结果表明ＥＴ－１可以促进ＰＧ和Ｈｅｌａ细胞的ＤＮＡ合成，ＥＴ－１合成，ＥＴ－１最低起效浓度对ＰＧ和Ｈｅｌａ分别为１０＾－１３和１０＾－１９ｍｏｌ／Ｌ。ＦＴ－１抗体可明显抑制Ｈｅｌａ细胞的增殖。而对ＰＧ影响不大。     

内皮素A型受体（ET＿A－R）基因在大鼠心血管系统细胞中的表达

应用改良的Ｍａｒｔｉｎ（１９９３）定量反转录－聚合酶链式反应（ｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ－ｐｏｌｙ－ｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＲＴ－ＰＣＲ）方法，测定了大鼠ＥＴＡ型受体（（Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ－Ａｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＥＴＡ－Ｒ）ｍＲＮＡ在心血管系统细胞中的分布。结果证明，ＥＴＡ－ＲｍＲＮＡ广泛地分布在心血管系统细胞中．其中以平滑肌细胞中含量最高。内皮素及其受体的配基可以促进血管平滑肌细胞（ｖａｓｃｕｌａｒｓｍｏｏｔｈＭｕｓｃｌｅｃｅｌｌ，ＶＳＭＣ）中ＥＴＡ－ＲｍＲＮＡ的表达。此外，还发现在自发性高血压动物的血管平滑肌细胞中ＥＴＡ－Ｒ基因的高表达可能是高血压血管高反应性的一个重要机制。     

人工虫草对庆大霉素所致大鼠急性肾损伤的保护作用

用庆大霉素ｉｐ造成大鼠急性肾损伤模型，观察到人工虫草可使尿素氮（ＢＵＮ）、血清肌酐（Ｓｃｒ）、尿蛋白（Ｕｐｒ）和肾指数（ＫＩ）较病模组显著性下降，光镜检查显示人工虫草可使肾小管上皮细胞的肿胀、坏死等组织病理改变明显减轻，透射电镜（ＴＥＭ）和扫描电镜（ＳＥＭ）下可见细胞中溶酶体的改变和线粒体的损伤等超微结构变化亦显著减轻，上述结果提示人工虫草可改善肾功能，减轻肾水肿，保护庆大霉素对肾小管上皮细胞的损伤。     

放射性视神经损伤超微结构改变的实验研究

目的：观察放射性视神经损伤病变（ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｏｐｔｉｃ ｎｅｕｒａｐａｔｈｙ,ＲＯＮ）超微结构的改变。方法：应用自选设计制作的兔固定架,固定新西兰大耳白兔头部,然后用＾６０Ｃｏ－γ射线以视交叉为中心包括视神经在内的范围进行照射,每天３Ｇｙ,共８ｄ,总剂量为２４Ｇｙ,对视神经进行定量损伤。照射后１ｄ、１０ｄ、３０ｄ、６０ｄ天应用透射电镜（ＴＥＭ）技术,观察视神经超微结构的改变。结果：电镜观察,动物满２４Ｇｙ照射后１ｄ,大部分轴突颗粒变性,线粒体肿胀、髓鞘松解,１０ｄ时上述现象还加重,３０ｄ、６０ｄ时超微结构未见明显好转。结论：放射性视神经损伤是一种慢性持续过程,其超微结构的改变是ＲＯＮ的病理基础。     

培养的不同分化程度的人大肠癌细胞内质网结构特点

目的：探索培养的人大肠癌细胞内质网膜系统超微结构与其分化程度间的关系。方法：采用透射电镜技术和扫描电镜技术分别了培养的高分化和低分化大肠癌细胞系ＣＣＬ２２９和ＣＣＬ２２７内质网膜微细结构和分布。结果：透射电同分化细胞ＣＣＬ２２９内质网较丰富,呈小泡汰和扁平囊状分布于核周及质膜下胞质中,其伪足中亦见丰富的内质网。低分化的ＣＣ名内质网较少,上泡状、短管状分布于胞质中,扫描电上细胞系内质网立体结构显示,     

佛波醇酯和三羟基异黄醇对雌激素受体阳性细胞中三苯氧胺作用的影响

探讨三苯氧胺作用的组织学特异性及乳腺癌内分泌治疗抵抗的可能机制。向MCF7及Hela细胞中转染入含周期素D1基因调控序列的报告基因，用佛波醇酯（TPA）、5，7，4-三羟基异黄醇（Genistein）处理细胞后，检测三苯氧胺对报告基因表达的调控作用。结果发现：MCF7细胞中，TPA可使三苯氧胺产生促进报告基因表达作用。Hela细胞中，Genistein预先作用12h后，三苯氧胺表现出抑制报告基因表达作用。提示雌激素信号传导途径以外的蛋白激酶活性改变可明显影响三苯氧胺的作用，这可能是三苯氧胺作用的组织学特异性及乳腺癌内分泌治疗抵抗的机制之一。     

人乳腺癌雌激素受体状态与肿瘤超微结构关系

本文应用17-荧光雌酮亲和细胞化学法检测24例人乳腺癌雌激素受体(Estrogen receptor简ER),同时做透射电镜观察。结果,ER阳性和阴性各12例。ER阳性12例中,属超微结构分化好的肿瘤9例,而ER阴性12例中,仅3例超微结构分化较好(p=0.01)。上述结果提示乳腺癌ER状态与其肿瘤的超微结构分化程度有一定相关性。已知乳腺癌病人的ER状态与内分泌治疗效果和预后密切相关,本文作者间接推测,乳腺癌超微结构的分析有助于提高内分泌治疗选择及预后判断的准确率。     

慢性间断性缺氧及异烟肼、利福平对小鼠肝脏超微结构的影响

目的 探索慢性间断性缺氧（chronic intermittent hypoxia, CIH）及异烟肼（isoniazid,INH,H）、利福平(rifampicin,RIF,R)对小鼠肝脏超微结构的影响。方法 采用两因素两水平的析因分析,检测小鼠肝脏细胞超微结构并对肝脏细胞线粒体形态进行定量分析。结果 慢性间断性缺氧（chronic intermittent hypoxia, CIH）无导致肝脏细胞超微结构损害明显加重,其主效应无导致肝脏细胞线粒体平均截面积、平均周径增加及面数密度减少（P>0.05）;异烟肼（isoniazid,INH,H）、利福平(rifampicin,RIF,R)导致肝脏细胞超微结构损害明显加重,其主效应导致肝脏细胞线粒体平均截面积、平均周径增加及面数密度减少（P<0.05）;两因素两水平的析因分析发现慢性间断性缺氧对异烟肼、利福平引起的肝脏细胞超微结构的损害存在交互作用（P<0.05）。结论CIH协同加重异烟肼、利福平引起的肝脏细胞超微结构的损害。     

Rictor对小鼠胚胎干细胞来源心肌细胞线粒体钙信号的调控

目的: 探索Rictor在小鼠胚胎干细胞来源心肌细胞（ESC-CM）中的表达、定位及其对线粒体钙信号的调控作用。方法: 通过经典"悬滴-悬浮-贴壁"三步法建立ESC-CM模型。利用免疫荧光法及蛋白质印迹法观察Rictor在ESC-CM中的定位。慢病毒技术干扰小鼠胚胎干细胞Rictor表达后,采用免疫荧光法考察ESC-CM内质网与线粒体的叠加情况;通过透射电镜观察ESC-CM的超微结构;活细胞工作站测定分化后心肌细胞线粒体钙瞬变;免疫共沉淀法检测ESC-CM中1,4,5-三磷酸肌醇受体（IP3R）、葡萄糖调节蛋白75（Grp75）、线粒体外膜的电压依赖性阴离子通道1（VDAC1）间的相互作用;蛋白质印迹法检测线粒体融合蛋白2（Mfn2）的表达情况。结果: Rictor在ESC-CM中主要定位于内质网及线粒体-内质网结构偶联（MAM）域,且其表达定位与线粒体及内质网有很好的叠加。干扰Rictor后,心肌细胞线粒体部分呈散点状,线粒体与内质网的叠加率降低（P < 0.01）;ESC-CM超微MAM形成减少;ATP刺激引起的ESC-CM线粒体钙瞬变幅度下降,其中钙瞬变斜率和上升峰值均降低（均P < 0.01）;MAM中IP3R、Grp75、VDAC1相互作用明显减弱,且Mfn2蛋白表达降低（P < 0.01）。结论: 干扰小鼠胚胎干细胞中Rictor表达可降低ESC-CM中钙从内质网到线粒体的释放,这可能是通过影响IP3R、Grp75、VDAC1间相互作用,减少Mfn2表达,进而破坏MAM来实现的。     

人侵袭性结肠癌细胞内质网的超微结构

目的：观察在细胞中占在中心地位的内质网在人侵袭性结肠癌细胞中的超微结构特点。方法：收集外科手术切除的结肠癌标本,应用透射电镜技术观察高分化和低分化人侵袭性结肠癌细胞内质网结构。结果：高分化癌细胞呈柱状,排列较整齐。细胞质中的内质网呈多种形状,并常出现不规则扩张。细胞壁底侧的舌状伪足中可见内质网呈囊泡样;分化癌细胞排列拉散,有的几乎与其他细胞脱离,细胞中的内质网减少;有的内质网与质膜融合,但有向外分泌内含物的趋势。结论：观察到的不同分化程度的人侵袭性结肠癌细胞内质网结构特点将可能成为诊断结肠癌的形态学依据。     

线粒体雌激素受体β通过与Bad相互作用抑制非小细胞肺癌细胞的凋亡

目的探究线粒体雌激素受体β（ERβ）抑制凋亡刺激诱导非小细胞肺癌细胞死亡的分子机制。方法免疫荧光及western
blotting分析细胞内源ERβ的线粒体定位;检测顺铂与十字孢碱（staurosporine,STS）处理过表达或沉默线粒体ERβ后细胞凋亡
的变化;免疫共沉淀和western blotting分析线粒体ERβ与促凋亡蛋白Bad的相互作用。结果ERβ存在于A549及201T细胞的
线粒体中;过表达或沉默ERβ可以显著减少或增加顺铂与STS诱导的Bax激活及细胞凋亡;线粒体ERβ与促凋亡蛋白Bad相互
作用可能阻抑Bax的活化及线粒体转位。结论线粒体雌激素受体β可以通过与Bad相互作用抑制顺铂或STS诱导非小细胞肺
癌细胞的凋亡,提示线粒体ERβ可能是治疗非小细胞肺癌的一个新靶点。
     

Hela/MMC细胞亚系的建立及其耐药机制的探讨

目的 建立宫颈癌Ｈｅｌａ／ＭＭＣ耐药细胞亚系,并探讨其耐药机制。方法 以人宫颈癌Ｈｅｌａ细胞为亲本,采用丝裂霉素连续性药物作用,间隙性增加药量,逐步提高药物浓度的方法,分离出ＭＭＣ耐药亚系（Ｈｅｌａ／ＭＭＣ）,并比较两种细胞生物学特性差异。结果 Ｈｅｌａ／ＭＭＣ细胞对ＭＭＣ有５．０２倍耐药,对ＤＤＰ有２．０３倍交叉耐药,对ＶＣＲ、ＡＤＭ和５－Ｆｕ保持敏感;耐药细胞核分裂指数增加;耐药细胞内丝裂霉素     

乳腺癌雌激素受体与超微结构的关系

应用免疫金银染色技术对23例乳腺癌组织进行雌激素受体(ER)检测,探讨ER与乳腺癌超微结构的关系.ER阳性率为16/23.ER阳性组乳腺癌细胞较多见有核内小体.癌细胞微绒毛在ER阳性组较阴性组既长且宽(P<0.05);ER染色强度与微绒毛长度呈正比(P=0.0004).ER阳性、阴性组间及不同阳性程度间微绒毛长/横径比无差别(P>0.05).ER染色程度强者粗面内质网、线粒体体密度及粗面内质网面密度较大(P<0.05).ER阳性组较阴性组粗面内质网体密度大(P=0.0145).