真核细胞DNA聚合酶

近年来,其核细胞DNA体外复制模型的建立及蛋白纯化技术的提高,DNA聚合酶基因的克隆,真核细胞DNA聚合酶研究取得了很大进展。迄今为止,已发现α、β、γ、δ、ε、ζ等6类真核细胞DNA聚合酶,分别在DNA复制和修复等事件中起到重要作用。     

三种测序DNA模板制备方法的比较○

背景：DNA模板质量对DNA序列测定起着至关重要的作用。 目的：为基因组DNA或甲基化DNA测序寻找一种经济,简便的方法。 方法：分别采用96管集合板及96孔板提取质粒,并且针对质粒设计一对包含目的片段的引物,扩增后纯化PCR产物,通过以上3种方法制备DNA测序模板进行测序。 结果与结论：实验所采用的3种方法对于基因组DNA测序效果无差异(P > 0.05)。对于甲基化DNA测序效果,96管集合板法优于其他2种方法(P < 0.05)。说明3种方法均适用于基因组DNA的测序,而96管集合板法更适用于甲基化DNA的测序。      

孕妇血浆中的游离胎儿DNA及其意义

孕妇血浆中已证实存在着胎儿来源的游离DNA。作为一种胎儿新的检测材料,游离胎儿DNA的发现为非侵入性产前基因诊断提供了可能。有关游离胎儿DNA的临床应用以及其生物学包括来源、动力学和性质等,近年来引起人们很大关注。实时定量PCR技术是目前检测孕妇血浆中游离胎儿DNA的主要方法。实验室的一些技术因素会影响游离胎儿DNA的检测。尽管有些问题还不很清楚,但母体血浆中游离胎儿DNA的检测对于胎儿遗传病和妊娠相关性疾病的非侵入性产前诊断仍具有重要临床意义。讨论孕妇血浆中游离胎儿DNA的最新研究状况。     

DNA文库及其在人类遗传学中的应用

DNA文库技术最初是由构建基因组文库而发展的,现为了满足不同研究需要,已经发展了各种特异的DNA文库,如染色体文库、pERT文库、跳跃文库、YAC文库等。这些DNA文库可用于以下几方面的人类遗传学研究:第一、用于人体一般基因的克隆及结构分析;第二、用于RFLP探针的筛选;第三、用于人类基因组的限制性酶谱的绘制;第四、用于各种人类遗传病的致病基因的分离。     

小环DNA

在细胞中广泛存在长度在０．１～２μ的多分散共价闭环ＤＮＡ分子，称为小环ＤＮＡ或ｐｌａｓｍｉｄ－ｌｉｋｅ ＤＮＡ，可能是核ＤＮＡ或线粒体ＤＮＡ的产物，它可以通过膜系统进行基因漂移，在细胞各部之间信息交流，特别是在核遗传系统与线粒体遗传系统的相互调解、细胞突变、衰老和其它分子病过程中可能起到非常重要的作用。     

DNA解密使研究人员更加理解基因

据美国BIOCOMPARE科技新闻网(2004／7／14)报道，得克萨斯大学西南医疗中心的研究人员研发出一种斯的DNA检测技术，将可以让科学家更加了解基因活化的倾向，这套新工具将可以用来研究基因功能和作为诊断疾病之用。     

检索人线粒体DNA的计算机程序

检索人线粒体ＤＮＡ的计算机程序南京铁道医学院生物教研室（２１０００９）李方园，黄鹰，王世俊线粒体ＤＮＡ是目前唯一已知的存在于人和动物细胞质中的ＤＮＡ分子（植物和一些原始生物中尚有叶绿体ＤＮＡ分子），为一双链ＤＮＡ分子，因其碱基组成的不同而分为轻链（Ｌ...     

377型DNA测序仪常见问题解析

美国应用生物系统公司生产的377型DNA测序仪是目前应用最广泛的DNA测序仪之一。本文根据作者长期的实践经验，在介绍该仪器的工作原理与特点的基础上，重点对该仪器在应用实践中容易出现的问题进行了详细的分析与总结，同时提出了切实可行的解决办法，从而有利于深入了解该仪器的性能，进一步提高DNA测序结果的成功率及其准确性。     

双链DNA直接测序

从本期起,本刊开辟新栏目《新枝术》。这个栏目以实用性、先进性和指导性为主旨,将约请国内有实践经验的同道陆续介绍基础医学与临床方面的新枝术和新方法。每种技术、方法都包括基本原理、操作(实验)步骤及注意事项与说明等三部分内容,力求行文简明扼要,突出重点,以使读者按照新介绍的方法去做都能获得成功。我们热切希望读者提出意见、建议和要求,共同办好这个栏目。     

细胞核基因组与线粒体基因组的相互调控

细胞核基因组(nuclear DNA,nDNA)与线粒体基因组(mitochondria DNA,mtDNA)之间存在着非常密切的关系。mtDNA转录、复制和翻译需要各种不同的核基因产物[1];而核基因产物表达的紊乱与mtDNA突变、线粒体蛋白质的生物合成等受到抑制均有关系。两者不但在其生物发生、生物合成方面需要相互协调,更重要的是通过相互协调作用,来调节呼吸链亚基的表达,从而介导线粒体呼吸链功能的改变。研究核与线粒体两基因组之间的调控机制、核对线粒体呼吸链功能的调节,一直是近年来学者追踪的热点。在细胞内,线粒体遗传系统与细胞核遗传系统相互协作进…     

DNA甲基化对基因表达的影响及其在衰老过程中的表现

DNA甲基化是真核细胞基因组重要修饰方式之一,参与基因的表达调控。由甲基化结合蛋白参与的复合体在抑制基因表达中发挥着重要作用。DNA甲基化表型的维持需要DNA甲基转移酶以催化“半甲基化”DNA的甲基化。细胞在增龄过程中甲基化水平明显降低,对该过程的基因表达可能具有一定的调控作用。     

不同凋亡水平T细胞来源的ALD-DNA对抗双链DNA抗体产生的影响

研究不同凋亡水平T细胞来源的ALD-DNA(activated lymphocyte-derived DNA)对抗双链DNA抗体产生的影响。用尼龙毛柱法分离小鼠脾脏T细胞,分别提取不同凋亡水平T细胞的DNA定义为未凋亡ALD-DNA、低凋亡水平ALD-DNA、中凋亡水平ALD-DNA和高凋亡水平ALD-DNA,并免疫同系BALB/c小鼠;用ELISA方法检测血清中IgG类抗双链DNA抗体的水平及其亚型;用考马斯亮蓝法检测免疫小鼠尿蛋白的含量。结果显示,ALD-DNA的凋亡水平与其诱导产生的抗双链DNA抗体水平成正相关,二者的相关系数r=0.852;不同凋亡水平的ALD-DNA诱导的抗双链DNA抗体均以IgG1为主,但IgG2a和IgG2b的水平在高凋亡ALD-DNA免疫组有明显增高;低凋亡ALD-DNA、中凋亡ALD-DNA和高凋亡ALD-DNA免疫小鼠均有显著蛋白尿形成,并且高凋亡ALD-DNA免疫组的尿蛋白含量有明显增高。该结果表明,高凋亡水平的ALD-DNA免疫同系小鼠更易诱导高水平的致病性IgG类抗双链DNA抗体产生,凋亡DNA可能在系统性红斑狼疮(SLE)发生发展过程中发挥了重要作用,这为我们能更加深入的理解SLE的发生机制提供了有力的实验依据。     

泉州地区6000例孕妇TORCH感染PCR检测的研究

本文应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）对福建省泉州市６０００例孕妇外周血进行ＴＯＲＣＨ感染地检测。结果检出弓形虫ＤＮＡ１１０１例细胞病毒ＤＮＡ３５６例,单纯疱疹病毒Ⅱ型ＤＮＡ３６８例,风疹病毒ＤＮＡ２４８例,阳性率分别为１８．３５％,５．９３％,６．１３％与４．１３％。此数据为本地区进一步开展优生工作提供了有价值的参考资料。本文就ＴＯＲＣＨ感染的临床作了阐述,以引起人们对ＴＯＲＣＨ感染的重视并指导育龄妇女     

DNA自动测序中几种影响因素的研究

目的探讨恒温ＤＮＡ自动测序中几种因素对测序结果的影响。方法对ＤＮＡ纯度、浓度和测序过程中所用水的质量对ＤＮＡ自动测序结果的影响进行了回顾性研究。结果当ＤＮＡ纯度较低时，核苷酸曲线的信噪比降低，或多个核苷酸峰重叠而判读困难；使用低浓度ＤＮＡ时，所能判读的核苷酸长度明显短于较高浓度时；测序反应过程中和配制测序胶时所用的纯水水质较差时，核苷酸峰可变宽、变平，或出现双峰，影响判读结果。结论ＤＮＡ纯度和浓度以及测序反应中及配制测序胶时所用水的质量对测序结果有明显影响。提示恒温ＤＮＡ自动测序时须使用高纯度的ＤＮＡ和高质量的纯水；若要获得较长ＤＮＡ片段的序列，所用ＤＮＡ浓度不能太低     

DNA甲基化与肿瘤

DNA甲基化参与基因的表达调控。 DNA甲基化异常与肿瘤等疾病有关 ,抑癌基因启动子区的异常甲基化和癌基因的去甲基化均影响肿瘤发生发展过程。肿瘤细胞的总体甲基化水平比正常细胞低 ,但是伴有某些Cp G岛甲基化程度增高