曲古抑菌素A通过调控蛋白激酶C促进食管鳞癌细胞迁移

目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对人食管鳞癌细胞(ESCC)迁移能力的影响及其可能的作用机制。方法培养食管鳞癌细胞KYSE-150和EC9706;Transwell法检测TSA、蛋白激酶C(PKC)抑制剂AEB071对食管鳞癌细胞迁移的影响;观察TSA、PKC抑制剂AEB071对人食管鳞癌细胞形态学的影响;Western blotting检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、β-连环蛋白(β-catenin)、Slug、ac H3和H3蛋白的表达水平。结果TSA促进食管鳞癌细胞的迁移,PKC抑制剂AEB071部分抑制TSA促进食管鳞癌细胞的迁移作用;TSA促使细胞由类椭圆形的上皮样细胞形态向类似梭形的成纤维细胞样形态的上皮-间质转化(EMT),AEB071抑制TSA诱导的细胞形态学变化;TSA处理后E-cadherin蛋白表达水平降低,vimentin、β-catenin、Slug、ac H3表达水平升高,联合应用TSA与AEB071,TSA诱导的上述EMT相关蛋白水平的变化得到部分抑制,使E-cadherin蛋白表达水平增加,vimentin、β-catenin、Slug表达水平降低。结论TSA通过促进食管鳞癌细胞EMT增加其迁移能力,其机制可能由PKC相关信号通路介导。     

X线电离辐射诱导人鼻咽癌CNE-2细胞发生上皮-间充质转化及其潜在机制

目的:探讨X线电离辐射诱导鼻咽癌CNE-2细胞发生上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)及其可能的信号通路。方法:分别采用0 Gy、2 Gy、4 Gy和8 Gy的X线照射鼻咽癌CNE-2细胞,通过倒置显微镜观察照射24 h后细胞形态的改变;应用细胞划痕实验和Transwell实验观察细胞迁移和侵袭能力的变化;分别采用real-time PCR和Western blot法检测EMT相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(vimentin)mRNA及蛋白水平的变化,并采用Western blot法检测Akt和p-Akt蛋白水平的变化。结果:经X线照射后鼻咽癌CNE-2细胞呈典型的"鹅卵石"样或纺锤形,且伸出伪足,细胞间隙增大,细胞的侵袭和迁移能力增强(P0.01);real-time PCR和Western blot法检测结果显示,与未照射组相比,各照射组细胞中E-cadherin mRNA和蛋白的表达水平均显著下调(P0.01),而N-cadherin和vimentin mRNA和蛋白的表达水平明显上调(P0.05);PI3K/Akt信号通路中p-Akt蛋白的水平显著升高(P0.01),而Akt的表达无明显变化。结论:X线电离辐射能够诱导鼻咽癌CNE-2细胞发生EMT,其机制可能与PI3K/Akt信号通路的激活有关。     

基于HepG2细胞胰岛素抵抗模型探讨miR-7-5p对Itch基因的靶向作用

目的:通过体外建立Hep G2细胞胰岛素抵抗模型,检测胰岛素抵抗状态下微小RNA-7-5p(miR-7-5p)及其预测靶基因Itch的差异表达,初步探讨miR-7-5p对Itch基因的靶向作用及其与胰岛素抵抗的关系。方法:采用适宜浓度的软脂酸诱导Hep G2细胞,建立体外胰岛素抵抗模型;基于生物信息学分析预测miR-7-5p可能作用的靶基因及其富集的相关信号通路;运用RT-q PCR和Western blot技术检测在胰岛素抵抗状态下miR-7-5p和Itch的表达变化。结果:0.25 mmol/L的软脂酸作用于Hep G2细胞24 h可诱导细胞产生胰岛素抵抗,RT-q PCR检测表明,与阴性对照组相比,胰岛素抵抗组的miR-7-5p表达下调(P0.01)。生物信息学分析结果表明,miR-7-5p有相当数量的靶基因富集于泛素-蛋白酶体系统,其中E3泛素连接酶Itch基因是与胰岛素抵抗最为相关的靶基因;Western blot结果揭示,在胰岛素抵抗状态下,Hep G2细胞中Itch蛋白表达上调(P0.01)。结论:miR-7-5p可能参与了胰岛素抵抗的病理生理过程,其机制可能通过靶向调控Itch基因的表达,进而直接或间接影响胰岛素信号通路的正常转导。     

Livin通过Akt信号途径促进胃癌SGC7901细胞的上皮细胞间质转换

目的探讨胃癌SGC7901细胞中Livin基因的表达对细胞上皮细胞间质转换(EMT)的影响。方法用Livin基因的shRNA慢病毒感染胃癌SGC7901细胞,筛选稳定沉默的细胞株,Transwell检测细胞的侵袭能力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Western blot检测E-cadherin和vimentin表达,同时检测Akt信号通路的激活状态。结果沉默Livin基因后,胃癌SGC7901细胞侵袭迁移能力明显降低(P0.05),E-cadherin明显上调,vimentin则明显下调(P0.05),同时明显抑制Akt信号通路信号的激活(P0.05)。结论 Livin能够通过激活Akt信号通路从而诱导SGC7901细胞发生EMT,从而促进肿瘤细胞体外侵袭及迁移能力。     

小檗碱激活p38MAPK/FOXO3a信号通路抑制三阴性乳腺癌细胞增殖、侵袭和EMT

目的 探讨小檗碱(Berberine)对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、侵袭及上皮-间质转化(EMT)的影响及可能机制.方法 以不同浓度小檗碱处理MDA-MB-231细胞,采用CCK8方法观察细胞增殖能力变化,Transwell实验检测细胞侵袭能力变化.裸鼠移植瘤实验观察小檗碱对肿瘤的增殖影响.Western blot方法检测小檗碱处理后MDA-MB-231细胞p38MAPK、p-p38MAPK、FOXO3a、p-ERK、p-JNK及EMT相关标志物(E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、Snail)的表达.结果 小檗碱抑制MDA-MB-231细胞的增殖,降低侵袭迁移能力,并抑制荷瘤小鼠肿瘤生长,上调MDA-MB-231细胞E-cadherin蛋白的表达,下调Snail、vimentin和N-cadherin蛋白表达;小檗碱能够上调p38MAPK磷酸化水平并促进转录因子FOXO3a的表达.结论 小檗碱抑制三阴性乳腺癌细胞增殖与侵袭,与p38MAPK/FOXO3a信号通路有关.     

Notch信号通路调控上皮-间质转化影响膀胱癌侵袭性和耐药性

目的体外探讨Notch信号通路对膀胱癌细胞侵袭性与耐药性的影响及分子机制。方法采用Notch信号通路受体完全阻断剂(γ分泌酶抑制剂)处理膀胱癌T24、5637和J82细胞48 h后,倒置显微镜观察膀胱癌细胞增生及形态;用RT-PCR和Western blot在mRNA和蛋白水平检测上皮-间质转化(EMT)分子标志物E-cadherin、N-cadherin、vimentin和Alpha-smooth muscle actin的表达;MTT、Transwell检测膀胱癌细胞耐药性及侵袭能力。结果完全阻断Notch信号通路后,镜下显示膀胱癌细胞形态变小,细胞分散;EMT分子标志物E-cadherin mRNA和蛋白水平表达上调(P0.05),N-cadherin、vimentin、Alpha-smooth muscle actin mRNA和蛋白水平表达下调(P0.05);膀胱癌细胞T24、5637和J82增殖明显被抑制(P0.05);膀胱癌细胞T24、5637和J82穿过微孔膜的细胞数明显减少(P0.05)。结论 Notch信号通路可通过调控EMT的变化而改变膀胱癌的侵袭性与耐药性。     

SphK1和FAK对人结肠癌HCT116细胞上皮间质转化的影响

 目的: 研究鞘氨醇激酶1(sphingosine kinase l,SphK1)和黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)对人结肠癌HCT116细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响。方法: 将人结肠癌HCT116细胞分成3组:采用SphK1抑制剂N,N-二甲基鞘胺醇(N,N-dimethylsphingosine,DMS)、FAK抑制剂PF573228和相同体积的培养基分别处理细胞。MTT法检测细胞活力,Western blot方法检测SphK1、FAK、E-cadherin、N-cadherin、vimentin和基质金属蛋白酶2(MMP2)蛋白的表达,real-time PCR检测SphK1、鞘氨醇1-磷酸(S1P)、FAK、E-cadherin和vimentin mRNA的表达,并应用细胞划痕实验检测肿瘤细胞的迁移能力。结果: PF573228和DMS均明显抑制人结肠癌HCT116细胞的活力,并呈时间剂量依赖性。DMS抑制SphK1的表达,同时下调FAK、N-cadherin、vimentin和MMP2蛋白的表达,而上调E-cadherin蛋白表达上调。PF573228明显抑制FAK的表达,同时抑制SphK1、N-cadherin、vimentin和MMP2的表达,上调E-cadherin蛋白的表达(P<0.01)。划痕实验显示PF573228和DMS显著抑制HCT116细胞的迁移能力(P<0.01)。与对照组比较,PF573228组和DMS组FAK、SphK1、S1P以及vimentin mRNA的表达明显下调,而E-cadherin mRNA的表达则明显上调(P<0.05)。结论: SphK1和FAK信号通路可能在结肠癌HTC116细胞上皮间质转化过程中发挥重要作用。     

miR-130b在肝细胞癌中的表达及临床病理意义

目的探讨miR-130b在人肝细胞癌(HCC)中的表达、与临床病理特征的关系及可能机制。方法用实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-130b在86例HCC及癌旁组织、不同肝癌细胞系的表达;免疫组织化学染色检测miR-130b不同表达水平的HCC组织中上皮钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的表达情况;qRT-PCR检测miR-130b在LO2人正常永生化肝细胞及Hep G2、Hep3B、SMMC-7721、Hu7肝癌细胞系的表达水平;应用人工合成的miR-130b抑制物转染SMMC-7721细胞,TranswellTM实验检测SMMC-7721细胞侵袭能力变化;应用人工合成的miR-130b抑制物及PPARγ小干扰RNA(siRNA)转染SMMC-7721人肝癌细胞,qRT-PCR检测癌细胞中miR-130b、PPARγ、E-cadherin、vimentin的mRNA水平,Western blot法检测癌细胞中PPARγ、E-cadherin、vimentin的蛋白水平。结果 miR-130b在HCC组织中表达水平显著高于对应癌旁组织;肝癌组织中miR-130b异常表达与门静脉侵犯、原发肿瘤分级、肿瘤TNM分期显著相关;miR-130b在不同肝癌细胞系中表达均高于LO2细胞;miR-130b高表达组PPARγ及E-cadherin蛋白水平显著低于miR-130低表达组,而vimentin水平显著高于miR-130b低表达组,相关性分析结果显示肝癌组织中miR-130b与PPARγ蛋白、E-cadherin蛋白水平呈显著负相关,与vimentin蛋白水平呈显著正相关;抑制miR-130b水平,可上调PPARγ蛋白的水平,E-cadherin蛋白的表达显著增加,而vimentin蛋白表达显著降低,SMMC-7721细胞的侵袭能力降低。PPARγsiRNA可部分逆转miR-130b抑制物对SMMC-7721细胞的作用。结论 miR-130b在HCC组织中表达上调并与HCC恶性临床病理特征有关,miR-130b可能通过抑制PPARγ表达及诱导上皮间质转化促进肝癌细胞侵袭。     

miR-125a-5p通过GSK-3β/Snail信号通路抑制乳腺癌细胞的上皮-间充质转化

目的:探讨微小RNA-125a-5p(miR-125a-5p)通过GSK-3β/Snail信号通路对乳腺癌细胞上皮-间充质转化(EMT)的影响。方法:RT-qPCR检测人正常乳腺上皮细胞与乳腺癌细胞中miR-125a-5p的表达量,同时检测miR-125a-5p质粒在人乳腺癌MDA-MB-231细胞中的转染效率;趋化运动实验与Transwell侵袭实验检测趋化运动能力和侵袭能力;Western blot检测EMT相关标志物的变化,同时检测磷酸化糖原合成酶激酶3β(p-GSK-3β)的蛋白水平及Snail的转核情况。结果:乳腺癌细胞中miR-125a-5p的表达量明显低于人正常乳腺上皮细胞(P0.05);miR-125a-5p在转染miR-125a-5p质粒的MDA-MB-231细胞中表达水平明显增高;MDA-MB-231细胞的趋化运动能力在表皮生长因子(EGF)浓度为10μg/L时最强;在EGF刺激下,与MDA-MB-231/NC细胞组相比,MDAMB-231/miR-125a-5p细胞组的侵袭能力明显降低,上皮钙黏着蛋白(E-cadherin)表达量升高,波形蛋白(vimentin)和p-GSK-3β的蛋白水平明显降低,同时Snail转核受到明显抑制;与MDA-MB-231/miR-125a-5p+Con细胞组相比,MDA-MB-231/miR-125a-5p+GAB2细胞组的侵袭能力明显增强,E-cadherin表达量降低,vimentin和p-GSK-3β的蛋白水平明显升高,同时促进Snail转核。结论:miR-125a-5p可通过GSK-3β/Snail信号通路抑制乳腺癌细胞的EMT,进而抑制乳腺癌细胞的侵袭能力。     

颗粒蛋白前体(PGRN)促进小鼠乳腺癌4T1细胞上皮间质转化与侵袭和迁移

目的探讨颗粒蛋白前体(PGRN)对小鼠乳腺癌4T1细胞侵袭和迁移的影响及其机制。方法采用1μg/mL PGRN处理乳腺癌4T1细胞24 h,通过Transwell~(TM)侵袭实验检测4T1细胞的侵袭能力、划痕实验检测细胞的迁移能力,实时荧光定量PCR检测4T1细胞上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)的mRNA水平,Western blot法检测4T1细胞E-cadherin、 vimentin、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、磷酸化的ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白水平。采用1μg/mL PGRN与ERK1/2信号通路抑制剂U0126(10μmol/L)同时处理4T1细胞后,前述方法检测4T1细胞侵袭及迁移能力及E-cadherin、 vimentin与p-ERK蛋白表达的变化。结果乳腺癌4T1细胞经PGRN处理后,其侵袭及迁移能力明显增强;E-cadherin表达下降,vimentin表达升高,p-ERK1/2的表达增强;抑制ERK1/2信号通路后,PGRN促进乳腺癌4T1细胞侵袭、迁移及上皮间质转化(EMT)的能力被明显抑制。结论 PGRN可通过促进EMT及激活ERK1/2通路促进乳腺癌4T1细胞的侵袭及迁移。     

MicroRNA-200a inhibits epithelial-mesenchymal transition in human hepatocellular carcinoma cell line

Objective: Our study investigated the role of microRNA (miR)-200a and its molecular targets in hepatocellular carcinoma (HCC) cells. Methods: An inhibitor of miR-200a was transiently transfected into the hepatocellular carcinoma cell line, MHCC-97L. The effect of this transfection on mRNA levels of epithelial-mesenchymal transition (EMT)-related genes was measured by fluorescence-based quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR). Further, protein levels of EMT-related genes, cell proliferation and apoptosis-related markers were assessed by Western blot analysis in these transfected cells. MTT and wound-healing assay were used to evaluate the proliferation and migration of MHCC-97L cells in presence and in absence of miR-200a inhibitor. Results: Compared with miR-NC control group, qRT-PCR results in anti-miR-200a group revealed a significant reduction in the mRNA levels of E-cadherin, with a concomitant increasing in vimentin mRNA level (all P < 0.05). Western blot results showed higher E-cadherin and Caspase-3 protein expressions in anti-miR-200a group compared to miR-NC group (P < 0.05). In addition, vimentin and Ki-67 protein expression was found sharply decreased in anti-miR-200a group compared to miR-NC group (P < 0.05). Consistent with this, wound-healing and MTT assay showed that migration and proliferation capacity of MHCC-97L cells in anti-miR-200a group is significantly increased compared with miR-NC group (both P < 0.05). Conclusion: Our study reveals an important role of miR-200a in inhibiting EMT, proliferation and migration in HCC cells, suggesting the possibility of miR-200a-based therapeutics in HCC.     

川楝素对人卵巢癌细胞侵袭和迁移的影响

目的:探讨川楝素(toosendanin,TSN)对人卵巢癌细胞迁移和侵袭能力的影响及相关机制。方法:用不同浓度川楝素处理人卵巢癌CAVO-3和SKVO-3细胞,采用CCK-8法检测TSN处理12、24、48、72和96 h后的细胞存活率;通过细胞划痕实验和Transwell小室侵袭实验检测TSN对人卵巢癌细胞的迁移和侵袭能力的影响;采用Western blot法检测核因子κB(NF-κB)p65、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)和Snail蛋白的表达情况。结果:TSN抑制CAVO-3和SKVO-3细胞活力(P0.05)。与对照组相比,TSN组CAVO-3细胞的迁移和侵袭能力明显降低,且NF-κB p65和E-cadherin表达升高,N-cadherin、vimentin和Snail表达下降(P0.05);而加入NF-κB抑制剂BAY11-7082至TSN处理的细胞后明显逆转了以上效应,与TSN组相比,TSN+BAY11-7082组CAVO-3细胞的迁移和侵袭能力显著升高,且E-cadherin表达下降,N-cadherin、vimentin和Snail表达升高(P0.05)。结论:川楝素能抑制人卵巢癌细胞的迁移和侵袭能力,其机制可能与抑制由NF-κB/Snail信号通路所介导的上皮-间充质转化过程有关。     

胡桃醌通过调节Wnt/β-catenin/Snail通路抑制前列腺癌细胞上皮-间充质转化

目的:探讨胡桃醌对人前列腺癌细胞上皮-间充质转化的抑制作用及其机制。方法:培养人前列腺癌LNCaP细胞,实验设置对照组(无胡桃醌)、12. 5μmol/L胡桃醌组和25μmol/L胡桃醌组,后2组用胡桃醌作用LNCaP细胞24 h。采用Transwell实验检测细胞侵袭能力; Western blot实验检测上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、β-连环蛋白(β-catenin)和Snail的蛋白表达水平;使用LiC l和胡桃醌联合作用LNCaP细胞后,Western blot实验检测Snail和E-cadherin的蛋白表达。结果:Transwell实验结果表明,与对照组相比,胡桃醌作用LNCaP细胞后侵袭能力下降(P 0. 01)。Western blot的结果表明,胡桃醌作用LNCaP细胞后E-cadherin的蛋白表达升高,vimentin和Snail及细胞核中β-catenin蛋白的表达降低(P 0. 01)。与胡桃醌组比较,胡桃醌与LiC l联合作用LNCaP细胞后Snail蛋白表达升高,E-cadherin蛋白表达降低(P 0. 01)。结论:胡桃醌可能通过抑制Wnt/β-catenin/Snail信号通路而抑制LNCaP细胞上皮-间充质转化。     

蛋白激酶CβⅡ诱导上皮-间质转化及血管新生促进肝癌发展

目的 探讨蛋白激酶CβⅡ（PKCβⅡ）在肝细胞癌(HCC)发展中的作用机制。方法 免疫印迹法观察PKCβⅡ在肝细胞系L02和肝癌细胞系SK-hep1、HepG2、BEL-7404、7721、Hep3B和huh7中的表达，构建稳定高表达PKCβⅡ的细胞系，倒置相差显微镜下观察细胞形态变化，免疫荧光观察E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）表达的变化；通过免疫印迹法、实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和放线菌酮（CHX）追踪实验，观察PKCβⅡ调控E-cadherin、N-cadherin和Snail表达的分子机制；小室迁移和侵袭实验(transwell assay)以及裸鼠尾静脉注射观察PKCβⅡ对肝癌细胞转移的影响；成管实验观察PKCβⅡ对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）血管形成能力的影响，酶联免疫吸附法（ELISA）观察PKCβⅡ对肝癌细胞上清中血管内皮生长因子A（VEGFA）含量的影响。结果 PKCβⅡ在肝癌细胞系中的表达高于肝细胞系L02，PKCβⅡ促进肝癌细胞形态从鹅卵石样上皮细胞向梭行间质样细胞的转变，通过mRNA水平下调E-cadherin（P<0.05）和上调N-cadherin（P<0.01）的蛋白表达，通过翻译水平上调Snail蛋白表达，PKCβⅡ还促进了肝癌细胞的迁移、侵袭（P<0.01）以及VEGFA的分泌（P<0.01）和血管新生（P<0.01）。结论 蛋白激酶CβⅡ诱导上皮-间质转化及血管新生在肝癌的发展中有重要作用。     

低氧通过上调乙酰辅酶A羧化酶1促进肺腺癌A549细胞迁移

目的 探讨低氧通过乙酰辅酶A羧化酶1（ACC1）促进人肺腺癌A549细胞迁移的机制。 方法 低氧（5％ O2）处理肺腺癌A549细胞,应用Transwell迁移实验检测细胞迁移能力,Western blotting检测ACC1表达及上皮-间质转化（EMT）相关蛋白的表达水平。 结果 与常氧（对照组）相比,低氧处理促进了A549细胞的迁移（P＜0.01）,低氧处理后ACC1表达上调（P＜0.01）,同时波形蛋白（vimentin）表达增加（P＜0.05）,E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达下降（P＜0.01）;敲除ACC1后与对照组相比,A549细胞的迁移能力减弱（P＜0.05）,vimentin表达下降（P＜0.05）,E-cadherin表达增加（P＜0.01）;敲除ACC1后A549细胞在常氧和5％ O2条件下迁移数目及vimentin、E-cadherin表达变化无统计学意义（P＞0.05）;补充亚油酸（LA）恢复低氧对A549细胞的促迁移作用（P＜005）。 结论 低氧通过上调ACC1的表达促进肺腺癌A549细胞迁移及EMT转化。     

M3R激动剂通过激活PI3K/AKT信号途径促进肺癌细胞A549的上皮间质转化

目的:探讨毒蕈碱胆碱受体3(muscarinic receptor 3,M3R)激动剂卡巴胆碱促进人肺癌A549细胞上皮间质转化的可能信号通路。方法:用400μmol/L卡巴胆碱刺激人肺癌A549细胞,在倒置相差显微镜下观察细胞形态的变化,应用划痕愈合实验和Transwell实验观察细胞迁移和侵袭能力;应用q PCR技术检测上皮间质转化相关蛋白波形蛋白(vimentin)和E钙黏蛋白(E-cadherin)m RNA水平的变化;应用Western blot技术检测p-AKT、vimentin和E-cadherin蛋白水平的变化。结果:卡巴胆碱刺激人肺癌A549细胞后,细胞形态发生明显改变,由不规则多边形逐渐向梭形转化、细胞间紧密结合逐渐变得松散,细胞迁移和侵袭能力增强;vimentin的m RNA和蛋白表达量明显增加,E-cadherin的m RNA和蛋白水平降低,磷酸化的AKT蛋白水平增加,且这些变化均可被M3R特异性抑制剂4-DAMP所抑制(P0.05)。结论:卡巴胆碱可通过激活PI3K/AKT信号途径促进人肺癌A549细胞发生上皮间质转化。     

5-氟尿嘧啶抑制TGF-β1诱导人肝内胆管上皮细胞间质化

目的探讨5-氟尿嘧啶对TGF-β1诱导人肝内胆管上皮细胞间质化的抑制作用,并探讨其作用机制。方法原代培养人肝内胆管上皮细胞,角蛋白19荧光染色鉴定;细胞分为:对照(normal)组,TGF-β1(TGF-β1)组,5-氟尿嘧啶(TGF-β1+5-FU)组;免疫荧光染色观察CK-19、E-cadherin、vimentin和α-SMA标记蛋白;Western blot检测细胞标记蛋白及TGF-β1表达量;Real-time PCR检测细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1 mRNA含量。结果原代培养的人肝内胆管上皮细胞呈多边形或者锥形,CK-19荧光染色为胞质着色;TGF-β1诱导72 h后,胆管上皮出现间质化表现,与正常组比较,vimentin、α-SMA和TGF-β1表达明显增强(P0.05),CK-19和E-cadherin表达显著减弱(P0.05),Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1 mRNA含量显著升高(P0.05);5-FU抑制胆管上皮间质化,与TGF-β1组比较,CK-19和E-cadherin表达增强(P0.05),vimentin、α-SMA和TGF-β1表达明显减弱(P0.05),TGF-β1 mRNA和Ⅲ型胶原mRNA含量明显降低(P0.05)。结论 5-FU通过下调TGF-β1的表达抑制胆管上皮细胞间质化。     

地高辛对缺氧诱导的乳腺癌细胞上皮间质转化和侵袭的影响

 目的:本研究旨在探究地高辛对缺氧诱导乳腺癌细胞上皮间质转化、迁移和侵袭能力的影响,并探讨其分子机制。方法:选取人乳腺癌MCF-7细胞作为研究对象,采用CoCl₂模拟化学缺氧条件,采用细胞划痕实验测量细胞迁移率,采用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭力,采用Western blot方法检测人乳腺癌MCF-7细胞缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、Snail、E-cadherin和vimentin蛋白表达的变化。结果:缺氧使MCF-7细胞从多角形上皮形态转变成梭形间质细胞形态,细胞间隙增大,而在地高辛作用下缺氧的MCF-7细胞未发生明显的上皮间质转化。细胞划痕实验和Transwell侵袭实验结果显示,经CoCl₂处理的MCF-7细胞的迁移和侵袭能力均显著增强(P<0.01),地高辛可抑制CoCl₂诱导的细胞迁移和侵袭(P<0.01)。与control组相比,CoCl₂组细胞的HIF-1α、Snail和vimentin蛋白表达水平显著升高(P<0.01),E-cadherin的蛋白表达水平显著降低(P<0.01);CoCl₂+digoxin组细胞的HIF-1α、E-cadherin和vimentin蛋白表达水平与control组相比差异均无统计学显著性,Snail蛋白表达水平虽略高于control组(P<0.05),但与CoCl₂组细胞相比显著降低(P<0.01)。结论:地高辛可通过下调HIF-1α和Snail蛋白表达抑制缺氧诱导的MCF-7细胞上皮间质转化和侵袭。