鸟结核分枝杆菌MAV-5183蛋白的生物信息学分析北大核心CSCD

目的预测鸟结核分枝杆菌致病基因MAV-5183编码蛋白的结构和功能。方法从NCBI数据库下载MAV-5183基因编码蛋白的基因序列和氨基酸序列;采用Protparam tool分析蛋白的氨基酸数量、等电点、相对分子质量,以及氨基酸的组成比例、分子式、分子组成、脂肪指数;利用Phyr、SWISS-MODEL在线预测软件进行二级结构和三级结构模型预测;使用TMHMM Server2.0进行跨膜区预测;使用PortScale进行疏水性预测分析;采用SignlP5.0进行信号肽预测分析;采用IEDB在线软件进行B细胞表位以及CD4免疫原性预测分析;采用NetPHos3.1Server进行磷酸化位点分析;运用String在线软件进行蛋白质相互作用分析。结果 MAV-5183基因编码355个氨基酸,编码蛋白为Antigen 85-C,相对分子质量为38.052 79×10^(3),等电点6.74,分子式为C_(1705)H_(2570)N_(462)_O_(504)S_(14),为不稳定的疏水性蛋白;含有跨膜区与信号肽、25个磷酸化位点(其中丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸分别有14、6、5个),三级结构较为稳定,有多种蛋白与之相互作用。结论 MAV-5183含有多个磷酸化位点和B细胞优势表位,可为MAC临床血清学诊断和疫苗研发提供理论基础。     

结核分枝杆菌PPE32蛋白的生物信息学分析北大核心CSCD

目的应用生物学软件预测结核分枝杆菌PPE32基因编码蛋白的结构和功能。方法从NCBI中获得PPE32基因及其编码序列,通过ORF Finder、ProtParam、ProtScaleon Expasy、TMHMM Server v.2.0、SignalP 4.1 Server、TargetP 1.1 Server、NetPhos 3.1 Server、BLAST、SOPMA、SWISS-MODEL、ABCpred、SYFPEITHI、STRING等工具预测分析PPE32蛋白的相关生物学信息。结果 Rv1808基因全长为1 230 bp,有8个开放阅读框架,其编码蛋白为PPE32,由409个氨基酸组成,等电点4.35,为亲水性蛋白,无跨膜区域及信号肽;有31个磷酸化位点,1个保守域;蛋白二级结构中α-螺旋占52.81%,β-折叠占8.31%,β-转角占5.62%,无规则卷曲占33.25%;有38个(得分>0.5)B细胞抗原表位和12个(得分>15)T细胞抗原表位。讨论 PPE32蛋白为亲水性蛋白,具有潜在的T、B细胞抗原表位,可作为研发结核病疫苗的候选蛋白。     

结核分枝杆菌潜伏相关蛋白Rv2204c的生物信息学分析

目的 应用生物信息学方法分析结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)潜伏相关蛋白Rv2204c的结构及功能。方法 从NCBI数据库中搜索Rv2204c蛋白的氨基酸序列,运用ProtParam, Signal 6.0 Server, ProtScale, TMHMM Server v.2.0,ProtCompB,NetNGlyc-1.0及NetPhos-3.1预测蛋白的理化性质、疏水性、信号肽、跨膜螺旋区、亚细胞定位及糖基化和磷酸化位点;运用SOPMA、SWISS-MODEL预测蛋白的二、三级结构;运用IEDB预测蛋白的B细胞抗原表位;采用SYFPEITHI,RANKPEP,NetMHC和NetCTL预测其细胞毒性T淋巴细胞(CTL)抗原表位;采用SYFPEITHI、RANKPEP预测其辅助性T(Th)淋巴细胞表位;利用MEGA构建Rv2204c蛋白进化树;运用STRING蛋白相互作用数据库预测Rv2204c相互作用蛋白。结果 Rv2204c蛋白氨基酸总数为118,为亲水性稳定蛋白;该蛋白无信号肽,无跨膜螺旋区;亚细胞定位主要为细胞质;无糖基化位点,含...     

结核分枝杆菌PPE32蛋白的生物信息学分析

目的应用生物学软件预测结核分枝杆菌PPE32基因编码蛋白的结构和功能。方法从NCBI中获得PPE32基因及其编码序列,通过ORF Finder、ProtParam、ProtScaleon Expasy、TMHMM Server v.2.0、SignalP 4.1 Server、TargetP 1.1 Server、NetPhos 3.1 Server、BLAST、SOPMA、SWISS-MODEL、ABCpred、SYFPEITHI、STRING等工具预测分析PPE32蛋白的相关生物学信息。结果 Rv1808基因全长为1 230 bp,有8个开放阅读框架,其编码蛋白为PPE32,由409个氨基酸组成,等电点4.35,为亲水性蛋白,无跨膜区域及信号肽;有31个磷酸化位点,1个保守域;蛋白二级结构中α-螺旋占52.81%,β-折叠占8.31%,β-转角占5.62%,无规则卷曲占33.25%;有38个(得分0.5)B细胞抗原表位和12个(得分15)T细胞抗原表位。讨论 PPE32蛋白为亲水性蛋白,具有潜在的T、B细胞抗原表位,可作为研发结核病疫苗的候选蛋白。     

结核分枝杆菌Rv3048c基因及编码蛋白生物信息学分析与制备

目的 探究结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)Rv3048c基因编码蛋白成为结核病临床检测标志物及蛋白疫苗的可能性,为结核病防控提供新的实验数据。方法 通过生物信息学方法分析、预测该基因及其编码蛋白的基本生物学性质;在NCBI数据库检索Rv3048c基因及编码蛋白序列,设计并合成Rv3048c基因的引物,以热灭活Mtb基因组DNA为模板,经聚合酶链式反应获得该基因并将其构建到pET28a表达载体,构建pET28a-Rv3048c重组质粒;应用热激法将其转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞,构建pET28a-Rv3048c-BL21(DE3)表达菌株;以IPTG为诱导剂获得Rv3048c基因编码的重组蛋白;最后,用镍金属螯合层析纯化获得高纯度重组蛋白,并用SDS-PAGE和Western blot验证该重组蛋白。结果 Rv3048c基因编码蛋白NrdF2由324个氨基酸组成,含两个α亚基和两个β亚基。该蛋白是亲水性、无跨膜结构域、无信号肽的细胞内蛋白;该蛋白理论分子质量为36.991 53 ku,等电点为4.57,有36个磷酸化位点。基于ABC...     

鸟分枝杆菌MAV-2052蛋白的生物信息学分析

目的应用生物信息学分析软件预测鸟分枝杆菌MAV-2052蛋白的结构和功能。方法利用在线uniprot蛋白数据库、ProtParam蛋白分析网站、在线Protcale、TMHMM(TMHMM Server V 2.0)和SignalP 5.0、Softberry和PSORTⅡServer,以及SOPMA和SWISS-MODEL等生物信息学预测软件对MAV-2052蛋白的理化性质、疏水性分析、信号肽、跨膜区、亚细胞定位及二级结构进行分析预测并对其三级结构进行模型构建;登录网站http://www.cbs.dtu.dk/services/netrhos/对蛋白磷酸化位点进行预测,运用uniprot蛋白数据库的Blast工具对氨基酸进行比对,采用MEGA-X软件构建进化树。结果 MAV-2052基因全长933 bp,编码310个氨基酸的蛋白质。该蛋白与鸟分枝杆菌亚型起源于同一物种,与结核分枝杆菌的半胱氨酸合酶k_1同源性较高。MAV-2052为稳定的疏水性蛋白,无跨膜区、无信号肽;预测该蛋白亚细胞定位在细胞质中,蛋白序列中存在13个丝氨酸磷酸化位点,二级结构以α-螺旋为主且有两个结构域;三级结构模型显示该蛋白可形成同源二聚体,但无其他配体结合空间位置。MAV-2052蛋白为半胱氨酸合酶,属于半胱氨酸合酶/半胱氨酸β合成酶家族,是调控鸟分枝杆菌生长中的重要蛋白之一。结论生物信息学预测鸟分枝杆菌MAV-2052为半胱氨酸合成酶,是调控细菌生长的重要蛋白,可为鸟分枝杆菌的靶向治疗提供新思路。     

结核分枝杆菌蛋白PE13的生物信息学分析

目的应用生物信息学软件预测结核分枝杆菌Rv1195基因编码蛋白PE13的结构和功能。方法利用在线分析软件ProtParam,ProtScale,SOSUI,TMHMM Server v.2.0,SignalP 4.1,Motif Scan,TargetP 1.1Server,WoLF PSORT,SOPMA,SWISS-MODEL,BepiPred 1.0Server,SYFPEITHI和STRING数据库分析预测结核分枝杆菌Rv1195基因编码蛋白PE13的理化性质、亲疏水性、可溶性、跨膜区、信号肽、翻译后修饰位点、亚细胞定位、二级结构、三级结构、B细胞、T细胞抗原表位以及蛋白质的相互作用。结果 PE13蛋白由99个氨基酸组成,分子式为C418H655N113O139S4,相对分子质量(Mr)为9.615 71×103,理论等电点为4.56,280 m波长处消光系数为4 470,吸光度(Abs)为0.465,不稳定性系数为41.93,脂溶性系数为82.42,总平均亲水性系数为0.593,预测该蛋白为不稳定疏水性蛋白;该蛋白无跨膜区和信号肽,亚细胞定位预测其可能为分泌蛋白;二级结构中以α-螺旋为主,占86.87%,β-折叠和无规则卷曲分别占2.02%和11.11%,无β-转角,有1个蛋白激酶C磷酸化位点,3个B细胞抗原表位,5个限制性CTL细胞抗原表位,2个限制性Th细胞抗原表位;预测PE13蛋白与PPE18及esxK有相互作用。结论生物信息学预测PE13蛋白含有多个潜在的抗原表位,可作为研发新的结核病疫苗靶标。     

乙肝病毒核心蛋白序列特征的生物信息学分析北大核心CSCD

目的乙型肝炎病毒C基因编码的核心(HBc)蛋白抗原性强,也与持续性病毒感染有关。采用生物信息学方法分析HBc蛋白的结构和序列特征,有助于HBc蛋白的优化表达和纯化,并为乙肝患者的治疗以及疫苗的研制提供参考。方法乙肝病毒HBc序列的获取来源于NCBI网站GenBank数据库。运用Prot-Param和ProtScale工具在线预测乙肝病毒HBc的理化性质及其亲疏水性;通过在线软件SignalP 4.0Server和TMHMM分别分析该序列的信号肽特征,跨膜区域及磷酸化位点;利用SOPMA和SWISS-MODEL全自动在线软件预测其二级结构和三级结构模型;利用IEDB Analysis Resource,ABCpred和SYFPEITHI HLA-A;02:01预测该蛋白抗原表位,利用Venny2.1.0工具筛选该蛋白最佳表位形成位置等。结果HBc蛋白由212个氨基酸组成,分子式为C_(1086)H_(1710)N_(314)O_(300)S_(12),分子质量单位为24.35017ku,理论等电点为9.49。为不稳定亲水性蛋白质。该蛋白质具有信号肽,没有跨膜区域,具有40个潜在的磷酸化位点。预测其主要二级结构为α螺旋和无规卷曲,含量分别36.32%和41.04%。结合HBc蛋白序列的T、B细胞表面抗原、表面可及性、β转角、线性表位的预测结果,发现HBc蛋白具有T、B细胞抗原表位,并且存在4个潜在的优势抗原决定簇区域,分别为37-38、110、158-164、180-208位氨基酸。结论生物信息学方法预测HBc蛋白存在潜在的抗原表位区域,具有多个磷酸化位点。这有利于疫苗的研发与制备。     

鸟分枝杆菌MAV-4563蛋白的生物信息学分析北大核心CSCD

目的应用生物信息学方法预测分析鸟结核分枝杆菌MAV-dalidaxue4563基因编码蛋白的结构功能和生物学特性。方法采用Protparam、ProtScaleon Expasy,TMHMM Server v 2.0,SignalP4.1,PSORT,NetPhos 3.1,BLAST,SOPMA,Phyre2,ABCpred,SYFPEITHI等生物信息学软件分析MAV4563蛋白的理化性质、亲疏水性、跨膜区、信号肽、亚细胞定位、磷酸化位点、保守域、二结构及三级结构同源建模、B细胞和T细胞表位等生物学特征。结果MAV4563基因全长756 bp,编码251个氨基酸的蛋白。该蛋白分子质量为28 ku,等电点为9.23,分子式(formula)为C_(1264)H_(2013)N_(385)O_(353)S_(7),为不稳定的疏水性蛋白。该蛋白无跨膜区,无信号肽,预测亚细胞定位于细胞质中,有13个磷酸化位点;蛋白二级结构中无规则卷曲占41.83%;预测该蛋白含多个B细胞和T细胞表位,其中MHC-I型和MHC-II型表位集中在蛋白C端的后90个氨基酸区域。结论预测MAV-4563蛋白含多个B细胞和T细胞表位,其中B细胞表位和MHC-I型表位集中在C端的后90个氨基酸区域,该区域可激活NTM特异性CTL和Th免疫应答,可作为非结核病的靶向疫苗抗原,为进一步研究该蛋白的治疗性T细胞疫苗奠定了基础。     

结核分枝杆菌GLCB蛋白的生物信息学分析

目的对结核分枝杆菌Rv1837c基因编码蛋白GLCB的结构和功能进行生物信息学分析和预测。方法自GenBank数据库中获取Rv1837c全部基因信息,运用ProtParam及ProtScale分别预测其编码的glcB蛋白理化性质和亲疏水性;使用SignalP,NetPhos和TMHMM分析glcB的信号肽、磷酸化位点、跨膜螺旋;分别利用SOPMA,SWISSMODEL分析glcB蛋白的二级结构并建立三级结构模型;利用Vaxijen v2.0进行抗原性分析并用ABCpred预测glcB蛋白的B细胞抗原表位。结果 Rv1837c基因全长2 226bp,其编码的glcB蛋白含有741个氨基酸残基,疏水系数-0.1545,为亲水性蛋白,不稳定指数为33.81,定义其为稳定蛋白。glcB蛋白无信号肽和跨膜蛋白,含有大量磷酸化位点及B细胞抗原表位。结论生物信息学分析glcB蛋白为亲水性蛋白,具有潜在多个抗原表位,可作为结核病疫苗研发的候选蛋白。     

结核分枝杆菌pepA蛋白的生物信息学分析

目的通过生物信息学方法分析结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis, Mtb) pepA蛋白的结构和功能。方法采用Protparam、ProtScaleon Expasy、TMHMM、SingalP5.0、PSORT、NetPHOS3.1、BLAST、SOPMA、SWISS-MODEL、ABCpred、SYFPEITHI等生物信息学软件分析Mtb H37Rv菌株pepA蛋白的生物学特性。结果 pepA蛋白的编码基因Rv0125全长1 068 bp,该蛋白由355个氨基酸组成,等电点5.04,为疏水性蛋白,有1个的信号肽和1个丝氨酸蛋白酶结构域,含有19个磷酸丝氨酸位点;蛋白二级结构中无规则卷曲占44.79%,为稳定蛋白;该蛋白预测含多个B细胞和T细胞表位,其中MHC-I型和MHC-II型表位集中在蛋白N端的前60个氨基酸区域。结论该蛋白预测含多个B细胞和T细胞表位,其中MHC-I型和MHC-II型表位集中在蛋白N端的前60个氨基酸区域,该区域可激活Mtb特异性CTL和Th免疫应答,可作为抗结核肽疫苗的候选。     

生殖支原体P110蛋白的生物信息学分析北大核心CSCD

目的运用生物信息学软件预测生殖支原体P110蛋白的结构和功能。方法从NCBI数据库中下载P110的氨基酸序列,通过ProtParam和ProtScale在线工具对蛋白的理化性质、亲疏水性质进行分析;利用SignalP-5.0和TMpred及Phobius分析该蛋白的信号肽和跨膜蛋白结构域;利用NetNGlyc 1.0 Server和NetPhos 3.1 Server软件预测蛋白质糖基化位点和磷酸化位点;采用在线软件SOPMA分析蛋白的二级结构,利用SWISS-MODEL软件建立蛋白的三级结构模型;利用ABCpred和SYF-PEITHI Hla-a*0201预测蛋白的B细胞抗原表位和T细胞抗原表位;使用STRING在线软件及NCBI中的BLAST工具对相互作用蛋白进行分析。结果P110蛋白的相对分子质量为114.44782×10_(3),由1053个氨基酸组成,理论等电点为7.6,分子式为C_(5095)H_(7952)N_(1354)O_(1624)S_(9),为稳定的亲水性蛋白。该蛋白含有跨膜结构域且有信号肽,可能属于分泌蛋白。该蛋白含有12个糖基化位点和153个磷酸化位点,二级结构预测主要由α-螺旋和无规则卷曲组成,分别占24.41%和45.77%。P110蛋白含有94个B细胞抗原表位和23个T细胞抗原表位,该蛋白P110可能与MGPA、HMW2和P32等10个蛋白存在相互作用关系。结论生殖支原体P110蛋白为亲水性分泌蛋白,具有潜在的B/T细胞抗原表位,可作为研发新型靶向药物的候选蛋白。     

生殖支原体P110蛋白的生物信息学分析

目的运用生物信息学软件预测生殖支原体P110蛋白的结构和功能。方法从NCBI数据库中下载P110的氨基酸序列,通过ProtParam和ProtScale在线工具对蛋白的理化性质、亲疏水性质进行分析;利用SignalP-5.0和TMpred及Phobius分析该蛋白的信号肽和跨膜蛋白结构域;利用NetNGlyc 1.0 Server和NetPhos 3.1 Server软件预测蛋白质糖基化位点和磷酸化位点;采用在线软件SOPMA分析蛋白的二级结构,利用SWISS-MODEL软件建立蛋白的三级结构模型;利用ABCpred和SYF-PEITHI Hla-a*0201预测蛋白的B细胞抗原表位和T细胞抗原表位;使用STRING在线软件及NCBI中的BLAST工具对相互作用蛋白进行分析。结果 P110蛋白的相对分子质量为114.447 82×10~3,由1 053个氨基酸组成,理论等电点为7.6,分子式为C_(5095)H_(7952)N_(1354)O_(1624)S_9,为稳定的亲水性蛋白。该蛋白含有跨膜结构域且有信号肽,可能属于分泌蛋白。该蛋白含有12个糖基化位点和153个磷酸化位点,二级结构预测主要由α-螺旋和无规则卷曲组成,分别占24.41%和45.77%。P110蛋白含有94个B细胞抗原表位和23个T细胞抗原表位,该蛋白P110可能与MGPA、HMW2和P32等10个蛋白存在相互作用关系。结论生殖支原体P110蛋白为亲水性分泌蛋白,具有潜在的B/T细胞抗原表位,可作为研发新型靶向药物的候选蛋白。     

结核分枝杆菌mpt53蛋白的生物信息学分析

目的应用生物学软件预测结核分枝杆菌Rv2878c基因编码蛋白mpt53的结构和功能。方法从NCBI中获得Rv2878c基因及其编码序列,通过ORF Finder、ProtParam、ProtScaleon Expasy、TMHMM Server v.2.0、SignalP 4.1 Server、TargetP 1.1 Server、NetPhos 3.1 Server、BLAST、SOPMA、SWISS-MODEL、ABCpred、SYFPEITHI、STRING等工具预测分析mpt53蛋白的相关生物学信息。结果 Rv2878c基因全长为922 bp,有8个开放阅读框架,其编码蛋白mpt53由172个氨基酸组成,等电点5.19,为含有信号肽的非跨膜蛋白;该蛋白含有21个磷酸化位点,1个保守域,18个(得分≥0.80)B细胞抗原表位和8个(得分≥15)T细胞抗原表位;二级结构预测mpt53中α-螺旋占32.56%,β-折叠占23.84%,β-转角占7.56%,无规则卷曲占36.05%。富集分析显示该蛋白与氧化还原反应有关。讨论生物学信息分析mpt53蛋白为分泌蛋白,可用于研发结核病血清学诊断试剂。蛋白的二级结构助于氧化折叠,是抗结核药物的潜在靶点;该蛋白含有有大量潜在的T、B细胞抗原表位,是结核病疫苗的候选蛋白。     

结核分枝杆菌PKnG蛋白结构与功能的生物信息学分析

目的运用生物信息学的方法分析结核分枝杆菌PKnG蛋白的结构与功能。方法从NCBI数据库获取PKnG的基因信息;使用protParam工具分析PKnG基因编码蛋白的理化性质,运用ProtScale工具分析其疏水性;运用SOPMA工具预测其二级结构,运用SWISS-MODEL工具模拟其三级结构;运用NCBI网站上的BLAST工具对PKnG蛋白的保守域进行预测,运用NetPhos 3.1Server预测其磷酸化位点;运用ABCperd服务器以及SYFPEITHI程序分别预测PKnG蛋白的B细胞和T细胞抗原表位;运用SignalP 4.1Server预测其信号肽,运用TMHMM2.0和TMpred Server对其跨膜螺旋区进行预测;运用STRING 10.5程序对其相互作用蛋白进行预测。结果预测PKnG基因编码蛋白由750个氨基酸构成,理论等电点5.52,为不稳定疏水蛋白,其二级结构以α-螺旋为主,有3个保守区域和多个磷酸化位点,有7个B细胞抗原表位和4个T细胞抗原表位,无信号肽和跨膜螺旋区,并发现数个相关作用蛋白。结论PKnG为不稳定疏水蛋白,含有T、B细胞抗原表位,具有良好的抗原性,可作为结核诊断与治疗的潜在候选因子。     

结核分枝杆菌PKnG蛋白结构与功能的生物信息学分析北大核心CSCD

目的运用生物信息学的方法分析结核分枝杆菌PKnG蛋白的结构与功能。方法从NCBI数据库获取PKnG的基因信息;使用protParam工具分析PKnG基因编码蛋白的理化性质,运用ProtScale工具分析其疏水性;运用SOPMA工具预测其二级结构,运用SWISS-MODEL工具模拟其三级结构;运用NCBI网站上的BLAST工具对PKnG蛋白的保守域进行预测,运用NetPhos 3.1Server预测其磷酸化位点;运用ABCperd服务器以及SYFPEITHI程序分别预测PKnG蛋白的B细胞和T细胞抗原表位;运用SignalP 4.1Server预测其信号肽,运用TMHMM2.0和TMpred Server对其跨膜螺旋区进行预测;运用STRING 10.5程序对其相互作用蛋白进行预测。结果预测PKnG基因编码蛋白由750个氨基酸构成,理论等电点5.52,为不稳定疏水蛋白,其二级结构以α-螺旋为主,有3个保守区域和多个磷酸化位点,有7个B细胞抗原表位和4个T细胞抗原表位,无信号肽和跨膜螺旋区,并发现数个相关作用蛋白。结论PKnG为不稳定疏水蛋白,含有T、B细胞抗原表位,具有良好的抗原性,可作为结核诊断与治疗的潜在候选因子。     

细粒棘球绦虫EGR＿09314蛋白的生物信息学分析

目的 利用生物信息学的方法预测、分析细粒棘球绦虫EGR＿09314蛋白的结构、功能和生物学特性等,为包虫病分子肽疫苗的筛选奠定基础。方法 从NCBI数据库中下载EGR＿09314基因的核苷酸序列及其所编码的氨基酸序列,利用ORF Finder在线工具分析该基因的开放阅读框;利用Prot-Param预测蛋白的理化性质,PotScale预测其亲水性和疏水性,NetPhos 3.1 Server预测其磷酸化位点,NetNGlyc预测其糖基化位点,GPS-SUMO 2.0预测其棕榈酰化修饰位点;利用SOPMA预测蛋白的二级结构,SWISS-MODEL预测蛋白的三级结构;利用Euk-mPLoc 2.0分析其亚细胞定位,SignalP 4.1Server分析其信号肽位置,TMHMM分析跨膜区域,SMART预测其结构域位置;应用ABCpred和IEDB预测EGR＿09314蛋白的B细胞抗原表位,应用SYFPEITHI和IEDB预测其T细胞抗原表位。结果 细粒棘球绦虫EGR＿09314蛋白是由491个氨基酸组成的亲水性蛋白,其分子式为C₂₄₄₆H₃₈₉₅N<...     

牛结核分枝杆菌BfrB蛋白生物信息学分析及多克隆抗体制备

目的 旨在预测和分析牛结核分枝杆菌(Mycobacterium bovis)BfrB蛋白的结构和潜在功能,并进行克隆表达及多克隆抗体的制备,为新型疫苗、诊断靶点等的开发提供理论基础。方法 利用生物信息学软件预测分析BfrB蛋白的生物信息学特征,克隆其编码基因并与原核表达载体pET32a连接,构建重组表达载体并利用IPTG诱导表达,镍柱亲和层析法纯化重组BfrB蛋白,SDS-PAGE和Western blot验证分析重组BfrB蛋白,以该蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并测定其效价。结果 BfrB蛋白含有181个氨基酸,分子式为C₉₀₃H₁₄₀₅N₂₅₅O₂₇₆S₆,理论分子质量为20.442 ku,无信号肽和跨膜结构域,是一种定位于细胞质的亲水性的储铁蛋白。该蛋白有3个固定无序结构域、15个磷酸化位点、16个甲基化位点和2个乙酰化位点,无糖基化位点。其二级结构中α-螺旋占70.01%,延伸链占4.42%,β-折角占3.87%,无规则卷曲占21.55%,三级结构与二级结构预测...     

结核分枝杆菌LepB蛋白的功能预测及生物信息学分析

目的应用生物信息学方法预测分析结核分枝杆菌Rv2903c基因编码蛋白LepB的结构与功能。方法在GenBank数据库中获取Rv2903c的基因信息;运用ProtParam及ProtScale预测其编码LepB蛋白的理化性质及亲疏水性;应用NetPhos、TMHMM、MotifScan分析LepB的磷酸化位点、跨膜区及翻译后修饰位点;分别利用SOPMA、SWISS MODEL分析LepB蛋白的二级结构并建立三级结构模型;利用Bepired、BCpred及SYFPEITHI、NetMHCIIpan预测LepB蛋白的B细胞与T细胞表位。结果 Rv2903c编码的LepB蛋白含有294个氨基酸残基,亲水系数-0.230,为亲水性蛋白。LepB含有21个磷酸化位点,存在一处跨膜区域,二级结构以无规则卷曲为主(占55.1%),结构较疏松,利用SWISS-MODEL建构建出LepB蛋白的三级结构。LepB蛋白含有9个B细胞抗原表位。结论 LepB蛋白是结核分枝杆菌的信号肽酶,切割完成蛋白质分泌的信号肽。生物信息学预测LepB是跨膜蛋白,含有多个抗原表位,可作为结核治疗的潜在分子靶标。     

结核分枝杆菌Hrp1蛋白的生物信息学分析

目的 应用生物信息学预测分析Hrp1蛋白结构功能和生物学特性。方法 生物信息学软件ORF Finder、SOSUI、Protpapram、ProtScale、Signal IP、Tmpred、TMHMM、NetNGlyc、NetPhos-3.1-Servera、PSORT 、WoLF PSORT、TargetP-2.0-CBS、NLStradamus、SOMPA、SWISS-MODEL、IEDB、SYFPEITHI、RANKPEP、BLAST、DNAStar、STRING对Hrp1蛋白的理化性质、结构功能、生物学特性、抗原表位及蛋白相互作用进行预测分析。结果 Hrp1蛋白原子总数2 166,等电点4.96,不稳定性指数19.62,脂肪族氨基酸指数100.35,平均疏水性0.042,有跨膜区无信号肽,1个糖基化位点6个磷酸化位点,二级结构以α-螺旋为主。其亚细胞定位于细胞质,属于稳定的亲水性蛋白。经预测,Hrp1蛋白含有4个B细胞表位,多个T细胞表位,且其相互作用蛋白分别为Rv2627c、 Rv2628、Rv1738、devR、Rv2624c、TB31.7、rip3、pfkB、guaA、hspX,并参与多种生物学过程。结论 生物信息学分析Hrp1蛋白为稳定亲水性胞浆蛋白,具有良好的抗原表位,为结核病诊断及治疗的潜在候选因子,是探索结核分枝杆菌持久性感染机制的重要研究靶标,可作为抗结核多肽疫苗的候选蛋白。