两种齐墩果酸纳米粒的体外细胞摄取研究

目的:研究人肝癌细胞株HepG2对同时包载齐墩果酸(OA)和香豆素6的乳酸羟基乙酸共聚物纳米粒(OCPN)和乳酸羟基乙酸共聚物-水溶性维生素E纳米粒(OCPTN)的体外摄取情况。方法:以超声乳化-溶剂挥发法制备OCPTN和OCPN,其中香豆素6为荧光标记物;采用高效液相色谱法测定两种纳米粒中香豆素6的载药量,体外测定HepG2细胞对分别含100、200、400μg/ml(低、中、高质量浓度)香豆素6的OCPTN、OCPN混悬液的摄取率,显微镜观察HepG2细胞对OCPTN的摄取情况。结果:OCPTN和OPTN中香豆素6的载药量分别为7.6%、6.3%;低、中、高质量浓度OCPTN的细胞摄取率为(62.1±1.2)%、(53.6±1.3)%、(40.9±1.5)%,分别是相同质量浓度OCPN的细胞摄取率[(36.8±1.5)%、(31.2±1.9)%、(22.4±1.3)%]的1.69、1.72、1.83倍;镜下观察OCPTN被HepG2细胞摄取,处于细胞核周围。结论:OCPN和OCPTN均能被HepG2细胞摄取,且OCPTN的被摄取性更强。     

齐墩果酸PCL-PLA-TPGS纳米粒的工艺优化及体外细胞抑制试验研究

目的:优化制备齐墩果酸(OA)聚己内酯-聚乳酸-水溶性维生素E纳米粒(OA-PCL-PLA-TPGS-NPs,简称OPPTN)的工艺条件,并研究其对小鼠腹水型肝癌高淋巴道转移细胞株(HCa-F)的体外细胞生长抑制率(IR)。方法:用自制的PCL-PLA-TPGS为载体材料,采用超声乳化-溶剂挥发法制备OPPTN,以平均粒径、载药量和包封率为评价指标,通过单因素考察优化制备OPPTN时OA与载体的质量比、TPGS浓度、超声功率、搅拌时间;采用MTT法测定OA浓度为2.5、10、20μg·mL-1时OPPTN对HCa-F细胞作用24、48、72h的IR。结果:较佳工艺为OA与载体质量比为4∶10、TPGS浓度为0.03%、超声功率为400W、搅拌时间为12h;按此条件制备的OPPTN的平均粒径、Zeta电位、载药量和包封率分别为(214.2±1.6)nm、(-23.7±1.1)mV、(26.97±2.13)%和(89.36±2.06)%;OA浓度为2.5μg·mL-1时OPPTN在24、48、72h时对HCa-F的IR分别为30.6%、44.8%、51.2%,OA浓度为20μg·mL-1时IR分别为66.1%、79.6%、89.7%。结论:OPPTN的制备工艺合理可行,体外细胞试验显示其具有良好的缓释作用、生物可降解性及较强的抗肝癌活性。     

齐墩果酸/PLGA-TPGS纳米粒在小鼠体内的分布及肝靶向性研究

目的:研究齐墩果酸(OA)/乳酸羟基乙酸共聚物-水溶性维生素E(PLGA-TPGS)纳米粒(OPTN)在小鼠体内的分布及肝靶向性。方法:取小鼠随机分为12组,每组10只,前6组为OPTN组,后6组为OA溶液剂(OS)组,剂量均为20μg.g-1(以OA计)。采用高效液相色谱法测定480min内各组小鼠血清、肝、心、脾、肺、肾中的OA浓度,采用靶向指数(TI)、选择性指数(SI)、相对靶向效率(Re)和靶向效率(Te)全面评价OPTN对肝的靶向性。结果:OPTN组在小鼠血清、肝、心、脾、肺、肾中AUC0～480min值分别为(2820.83±1.57)、(5897.98±1.34)、(601.03±1.83)、(1189.50±1.46)、(1363.78±1.58)、(670.30±1.79)μg.min·mL-1,且肝脏的Te值均>2;OS组各组织的AUC0～480min值均1;与其他组织比较,肝脏Re值最大。结论:OPTN能提高药物在肝中的分布,具有肝主动靶向性,可提高药物疗效。     

齐墩果酸/PLGA-TPGS纳米粒的制备及其体外释放行为研究

目的:制备齐墩果酸/乳酸羟基乙酸共聚物-水溶性维生素E衍生物(PLGA-TPGS)纳米粒(OPN)并考察其体外释放情况。方法:用自制的PLGA-TPGS为载体材料,采用超声乳化-溶剂挥发法制备OPN,考察其粒径、Zeta电位、载药量、包封率、体外累积释放率。结果:所制OPN的平均粒径为(202.4±1.2)nm,Zeta电位为(-21.5±2.2)mV,载药量为(27.65±2.27)%,包封率为(92.52±2.15)%,其在含1.0%十二烷基硫酸钠的磷酸盐缓冲液(pH7.4)中呈两相释放,432h时累积释放率为(93.8±2.9)%。结论:所制OPN质量稳定、可控,具有明显的体外缓释作用。     

脂蟾毒配基PLGA-TPGS纳米粒的体外细胞摄取及毒性研究

目的:研究脂蟾毒配基(RBG)乳酸羟基乙酸共聚物-水溶性维生素E(PLGA-TPGS)纳米粒(RPTN)体外被人肝癌Hep G2细胞、小鼠腹水型高淋巴道转移肿瘤HCa-F细胞的摄取情况和对Hep G2细胞的毒性。方法:制备包载RBG和荧光标记物香豆素6的PLGA-TPGS纳米粒(RCPTN),荧光倒置显微镜观察Hep G2、HCa-F细胞对RCPTN的体外摄取情况。将试验分为阴性对照组、空白PLGA-TPGS纳米粒(EPTN)组、5-氟尿嘧啶溶液(FS)组、RBG溶液(RS)组、RBG/PLGA纳米粒(RPN)组、RPTN组,采用水溶性四氮唑(WST-1)法考察不同终质量浓度(1.25、2.5、5、10、20μg/m L)的FS、RS、RPN和RPTN作用24、48、72 h后Hep G2细胞在450 nm波长下的光密度,计算细胞存活率(CV)和半数抑制浓度(IC_(50))。结果:RCPTN分布在Hep G2、HCa-F细胞的细胞核周围。RPN组和RPTN组细胞的CV随RBG浓度增加而减小,随作用时间延长而减小;与FS组比较,RPTN组细胞的CV均减小(P<0.05或P<0.01)。FS、RS、RPN和RPTN作用于Hep G2细胞的IC_(50)随时间的延长而减小,且IC_(50)的大小依次为RS>FS>RPN>RPTN;RPN和RPTN作用48、72 h的IC_(50)明显小于FS与RS(P<0.05或P<0.01)。结论:RPTN可将RBG带入Hep G2、HCa-F细胞内部,其对Hep G2细胞具有抑制作用,且作用强于RPN、RS和FS。     

齐墩果酸纳米粒的制备及质量控制

目的:制备齐墩果酸(OA)纳米粒并建立其质量控制方法。方法:以OA为主药,乳酸羟基乙酸共聚物(PLGA)为载体材料,采用超声乳化-溶剂挥发法制备纳米粒;取投料比、超声强度、超声时间、磁力搅拌时间为因素,包封率、平均粒径、载药量为指标设计正交试验筛选处方;利用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定制剂中主药的含量,同时以磷酸盐缓冲液为介质、采用透析袋法进行体外释放度考察。结果:最佳处方为OA与PLGA投料比2∶5,超声功率400W,超声时间12min,磁力搅拌48h;所制纳米粒呈球形,平均粒径324.6nm,Zeta电位(-4.76±0.373)mV,载药量为(27.26±2.41)%,包封率为(91.82±3.19)%;OA检测浓度的线性范围为5～80μg·mL-1(r=0.9986),平均回收率为100.06%,平均日内RSD为2.43%、日间RSD为2.93%;药物前12d呈快速释放,12d后呈缓慢恒速释放。结论:该制剂制备方法简单,质量稳定可控。     

齐墩果酸固体脂质纳米粒口服给药系统的制备与表征(英文)

采用改良的乳化-溶剂挥发法制备齐墩果酸-固体脂质纳米粒(OA-SLNs)并对其性质进行评价。其粒径,zeta电位,包封率和载药率分别为(104.5±11.7)nm,(-25.5±1.8)mV,(94.2±3.9)%,和(4.71±0.15)%。透射电子显微镜下,可见球形实心纳米粒。X-粉末衍射和差示扫描量热(DSC)图谱证实药物分子均匀分散在脂质骨架中。体外释放实验表明,OA-SLNs以每小时4.88%速率缓慢释放药物,符合零级释放动力学模型。OA-SLNs在人工胃液和肠液中具有良好的稳定性。本文研究为OA-SLNs口服给药系统的应用进一步研究提供了可能。     

蛇莓中齐墩果酸对肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用

目的:探讨蛇莓中齐墩果酸(OA)对人肝癌SMMC-7721细胞增值的抑制作用.方法:建立人肝癌SMMC-7721细胞体外培养模型.MTT法检测不同浓度OA对人肝癌SMMC-7721细胞的影响.结果:与对照组比较,药物组在24h对肝癌细胞具有明显的抑制作用(P<0.05),并在48h内随着浓度的增加,抑制率增加.结论:O...     

经半乳糖苷修饰的齐墩果酸固体脂质纳米粒对急性肝损伤模型小鼠的保护作用研究

目的:探讨半乳糖苷修饰的齐墩果酸(OA)固体脂质纳米粒(OA-G10SLN)对四氯化碳(CCl4)致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法:60只小鼠分为正常对照组、模型组、OA普通溶液组及OA-G10SLN高、中、低剂量(25.0、12.5、2.5mg·kg-1)组,各组每天尾静脉给予相应药物1次,连续7d,各组除正常对照组外于第6天注射CCl4造模。第7天处死小鼠并测定血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)含量,同时作肝组织病理学检测。结果:与模型组比较,OA-G10SLN组血清AST、ALT含量明显降低(P<0.05),肝组织的病理改变明显减轻,且作用优于OA普通溶液组(P<0.05)。结论:OA-G10SLN对CCl4所致的小鼠急性肝损伤具有保护作用。     

丝裂霉素C壳聚糖纳米粒对H22荷瘤小鼠的肿瘤抑制作用

目的研究丝裂霉素C壳聚糖纳米粒（MMC—CS-NPs）对H22荷瘤小鼠的肿瘤抑制作用。方法采用小鼠H22肝癌细胞实体瘤模型进行体内抑瘤实验,观察荷瘤动物的生长情况,并测定肿瘤生长抑制率;肿瘤组织病理学切片行HE染色以进行形态学观察。结果MMC-CS-NPs对小鼠的H22实体瘤生长具有明显的抑制作用,低、中、高剂量组的抑瘤率分别为52．23％、66．93％、80．91％,与对照组相比有统计学意义（P〈0．05）。病理组织学观察显示,各剂量组对肿瘤组织都有不同程度的破坏,肿瘤细胞大量变性坏死。结论MMC-CS-NPs具有较强的体内抗肿瘤作用,与丝裂霉素针剂相比其抑瘤率更高,且与剂量有关,并对肿瘤生长的抑制更为持久。     

宝华玉兰根皮挥发性化学成分的GC-MS分析及对NCI-3T3细胞体外生长抑制作用

分离鉴定宝华玉兰根皮乙醇总提取物(EERMZC)的挥发性成分,并考察其对小鼠成纤维细胞NCI-3T3的体外生长抑制作用。分析EERMZC的挥发性成分,用气-质联用(GC-MS)技术分析,并用峰面积归一化法测定各成分相对含量,采用MTT方法检测75,100,200,300,400μg/mL的EERMZC对NCI-3T3细胞体外生长抑制作用。气相色谱共分离出21个色谱峰,鉴定出其中14种化合物,占该挥发性成分总量的93.61%。EERMZC对NCI-3T3细胞的抑制率呈浓度依赖关系。在EERMZC的挥发性成分中,银胶菊素含量高达54.36%,其它含量较高的成分有非洲桧素(7.49%)、亚油酸乙酯(6.25%)、木香烯内酯(5.43%)等成分。EERMZC能明显抑制NCI-3T3细胞的生长。为进一步开发利用宝华玉兰药用价值提供科学依据。     

山核桃叶提取物体外对HepG2细胞增殖抑制作用研究

目的研究山核桃叶提取物体外对人肝癌细胞株HepG2的抑制作用及其可能机理,为进一步开发利用山核桃奠定基础。方法采用系统溶剂法将山核桃叶70%乙醇浸膏分成五个部位,然后通过MTT法观察其对人肝癌细胞株HepG2的抑制作用,并通过吖啶橙染色法和流式细胞术观察其诱导凋亡作用。结果山核桃叶氯仿层和石油醚层对HepG2细胞均具有较强的增殖抑制作用,氯仿层相对较强,IC50为（49.70±4.42）mg.L-1,并可剂量依赖性诱导HepG2发生细胞凋亡,其中100mg.L-1处理组凋亡率达28.0%。结论山核桃叶氯仿层中和石油醚层含有抗肿瘤活性成分,其中诱导细胞凋亡是氯仿层提取物发挥抗肿瘤活性的作用机理之一,值得进一步深入研究。     

罗格列酮对体外培养小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1生长与分化的影响研究

目的:研究罗格列酮对体外培养小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1生长与分化的影响。方法:以小鼠MC3T3-E1作为药物筛选的细胞模型,分别加入1、2、5、10μmo·lL-1罗格列酮干预,MTT法测定细胞活性并计算生长抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡率;免疫组化法分析细胞中促凋亡因子Bax和抗凋亡因子Bcl-2蛋白的表达;测定细胞中分化指标碱性磷酸酶(ALP)的活性。设立只加入培养基处理的空白对照组。结果:与空白对照组比较,罗格列酮各浓度组生长抑制率、细胞凋亡率升高(P均<0.05),Bax表达增强、Bcl-2表达减弱、ALP活性下降(P均<0.05),且呈浓度依赖性。结论:罗格列酮可抑制MC3T3-E1细胞生长及分化,并诱导其凋亡;而Bax/Bcl-2可能参与凋亡的发生,并可能起关键调控作用。     

旱生香茶菜总二萜对人肝癌细胞株增殖、荷人肝癌细胞株裸鼠皮下移植瘤生长的影响

目的:研究旱生香茶菜总二萜(IXD)对人肝癌细胞株(CA)增殖、荷CA裸鼠皮下移植瘤生长的影响。方法:体外试验采用磺酰罗丹明B(SRB)法测试IXD对CA的IC50值,体内试验测定IXD不同剂量对荷CA裸鼠移植瘤增殖的抑制率。结果:IXD对CA的IC50值为6·17μg/ml,其在剂量为100、200(mg·kg)/d应用12d时抑制率分别为33·52%、38·19%,与生理盐水阴性对照组比较具有显著性差异(P<0·05)。结论:IXD对CA有较强的细胞毒活性,对荷CA裸鼠移植瘤生长具有一定的抑制作用。     

SIRT5对高糖环境下结肠癌细胞增殖、凋亡、迁移的影响及机制探讨

目的探讨Sirtuin5(SIRT5)对高糖环境下Lovo细胞增殖、凋亡及迁移的影响及可能机制。方法高糖培养基(葡萄糖含量4 500 mg/L)及普通培养基(葡萄糖含量2 000 mg/L)培养SIRT5高表达的人结肠癌Lovo细胞,进行慢病毒转染实验,高糖培养基及普通培养基各分为空白对照组(MOCK组,无干预)、阴性对照组(NC组,对照RNAi慢病毒转染)和SIRT5-RNAi组(KD组,SIRT5-RNAi慢病毒转染),用MTT法检测各组细胞1～5 d增殖能力变化,AnnexinⅤ检测各组细胞凋亡率,划痕实验法检测各组细胞迁移率;应用实时荧光定量PCR(qPCR)检测各组细胞SIRT5、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、M2型丙酮酸激酶(PKM2)及己糖激酶-2(HK2)mRNA的表达变化,Western blot检测各组上述指标的蛋白表达水平。结果高糖培养基中,KD组与NC组、MOCK组比较,3～5 d时增殖水平降低,凋亡率增加,而24 h迁移率降低(P<0.05),且SIRT5、mTOR、HIF-1α、PKM2及HK2 m RNA及蛋...     

Indocyanine green loaded hyaluronan-derived nanoparticles for fluorescence-enhanced surgical imaging of pancreatic cancer

Pancreatic ductal adenocarcinoma is highly lethal and surgical resection is the only potential curative treatment for the disease. In this study, hyaluronic acid derived nanoparticles with physico-chemically entrapped indocyanine green, termed NanoICG, were utilized for intraoperative near infrared fluorescence detection of pancreatic cancer. NanoICG was not cytotoxic to healthy pancreatic epithelial cells and did not induce chemotaxis or phagocytosis, it accumulated significantly within the pancreas in an orthotopic pancreatic ductal adenocarcinoma model, and demonstrated contrast-enhancement for pancreatic lesions relative to non-diseased portions of the pancreas. Fluorescence microscopy showed higher fluorescence intensity in pancreatic lesions and splenic metastases due to NanoICG compared to ICG alone. The in vivo safety profile of NanoICG, including, biochemical, hematological, and pathological analysis of NanoICG-treated healthy mice, indicates negligible toxicity. These results suggest that NanoICG is a promising contrast agent for intraoperative detection of pancreatic tumors.