脓毒症小鼠肝损伤时的粘附分子基因表达

目的 探讨脓毒症小鼠肝损伤时肝窦内皮细胞粘附分子基因表达变化。方法 用盲肠结扎穿孔（ＰＬＰ）法制造小鼠脓毒症模型,假手术组（ｓｈａｍ）接受同样的手术操作但不行ＣＬＰ。分别在致伤后３、１２ｈ分离肝窦内皮细胞,用ＲＴ－ＰＣＲ的方法定量检测Ｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ、ＩＣＡＭ－１的基因表达,同时还测定了肝组织中ＭＰＯ活性及微血管通透性的改变。结果 ＣＬＰ后３ｈ肝窦内皮细胞Ｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ基因的表达明显增高     

内皮细胞凋亡在脓毒症小鼠肺微血管通透性改变中的作用

目的 探讨肺微血管内皮细胞凋亡在脓毒症小鼠肺微血管通透性改变中的作用。方法 ２４只雄性昆明小鼠随机分为２组,盲肠结扎穿孔组（ＣＬＰ组）和假手术组（ＳＯ组）;每组再分３ｈ和１２ｈ２个时间点。以流式细胞仪和原位凋亡检测试剂盒检测肺微血管内皮细胞的凋亡。用ＲＴ－ ＰＣＲ的方法检测肺微血管内皮细胞中ｂｃｌ－２基因的表达善况。同时还用尾静脉注射伊文蓝的方法检测了肺微血管通透性的改变。结果 在ＣＬＰ组１２ｈ点     

烧伤大鼠早期切痂对内皮细胞间粘附分子—1及E—选择素mRNA表？…

目的 研究烧伤血清对体外培养的内皮细胞的细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）及Ｅ－选择素（Ｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ）ｍＲＮＡ表达的影响,探讨实施休克期切痂上述指标的变化。方法 Ｗｉｓｔａｒ大鼠１７６只,３０％Ⅲ度烫伤,收集不同时间点血清,采用逆转录ＰＣＲ方法分别观察伤后不同时相点血清刺激内皮细胞ＩＣＡＭ－Ⅰ、Ｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｎ ｍＲＮＡ的表达的规律。结果 烫伤后血清可刺激内皮细胞ＩＣＡＭ－１、Ｓ－ｓｅ     

血小板活化因子及其受体对颈髓损伤后血脊髓屏障损害的分子机制研究

目的：探讨血小板活化因子（ＰＡＦ）及其受体对颈髓损伤后血脊髓屏障损害的分子机制。方法：采用蛛网膜下腔注射ＰＡＦ及静脉注射ＰＡＦ受体拮抗剂ＢＮ５２０２１，应用地高辛标记ｃＤＮＡ探针原位杂交技术检测颈髓损伤后颈髓血管内皮细胞细胞间粘附分子－１ｍＲＮＡ（ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ）和内皮细胞白细胞粘附分子－１ｍＲＮＡ（ＥＬＡＭ－１ｍＲＮＡ）表达。观察ＰＡＦ及其受体拮抗剂对颈髓损伤后血脊髓屏障、ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ、ＥＬＡＭ－１ｍＲＮＡ表达的影响。结果：伤后颈髓血管内皮细胞ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ、ＥＬＡＭ－１ｍＲＮＡ表达、伊文思蓝含量、水含量呈不同程度的增加；ＰＡＦ可使伤后血管内皮细胞ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ、ＥＬＡＭ－１ｍＲＮＡ表达、伊文思蓝含量、水含量增加更为显著，ＰＡＦ受体拮抗剂可抑制ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ、ＥＬＡＭ－１ｍＲＮＡ表达，降低颈髓组织伊文思蓝含量及水含量。结论：ＰＡＦ通过增加伤后颈髓血管内皮细胞粘附分子的表达是导致血脊髓屏障损害的重要分子基础。ＰＡＦ受体对伤后血管内皮细胞细胞粘附分子的表达具有调控作用。     

烧伤大鼠早期切痂对内皮细胞间粘附分子-1及E-选择素 mRNA表达影响

目的　研究烧伤血清对体外培养的内皮细胞的细胞间粘附分子１（ＩＣＡＭ１）及Ｅ选择素（Ｅｓｅｌｅｃｔｉｎ）ｍＲＮＡ表达的影响,探讨实施休克期切痂上述指标的变化。　方法　Ｗｉｓｔａｒ 大鼠１７６ 只,３０％ Ⅲ度烫伤,收集不同时间点血清,采用逆转录ＰＣＲ 方法分别观察伤后不同时相点血清刺激内皮细胞ＩＣＡＭ１、Ｅｓｅｌｅｃｔｉｎ ｍＲＮＡ表达的规律。　结果　烫伤后血清可刺激内皮细胞ＩＣＡＭ１ 、ＥｓｅｌｅｃｔｉｎｍＲＮＡ表达上调,而且表达量与伤后时间呈正相关。伤后８ 及２４ 小时切痂动物血清不引起内皮细胞的上述变化,９６ 小时切痂（１－６０±０－１７）、（１－２０ ±０－０９） 效果不及休克期切痂组（０－９３ ±０－１４） 、（０－９３ ±０－２２）。　结论　及早切痂去除了坏死组织,避免了内皮细胞大量合成ＩＣＡＭ１、Ｅｓｅｌｅｃｔｉｎ 等粘附分子,减轻了由粘附分子介导的中性粒细胞对内皮细胞的进一步损害。     

抗内毒素单抗对脓毒症小鼠胸腺细胞凋亡及白介素1β—转移酶 …

目的 探讨胸腺细胞凋亡在小鼠脓毒症机制中的作用，观察抗内毒素单抗对胸腺细胞内胸腺细胞凋亡相关基因白介素１β－转移酶（ＩＣＥ）表达的影响。方法 盲肠结扎穿孔（ＣＬＰ）造成小鼠脓毒症，假手术组接受同样的手术操作但不行ＣＬＰ，治疗组在术前２小时腹腔内注射抗内毒素单抗４ｍｇ／ｋｇ，致伤后１、３、６小时取胸腺组织，采用ＲＴ－ＰＣＲ定量检测ＩＣＥ基因表达。结果 抗内毒素单抗明显减少了胸腺细胞凋亡的数量并且下调     

细胞间粘附分子-l在机械通气致肺损伤中的作用

目的 探讨细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）在机械通气致肺损伤中的作用。方法 ２４只普通健康小猪随机等分为对照组、低潮气量组（Ａ组）、正常潮气量组（Ｂ组）及大潮气量组（Ｃ组）。采用持续给予小猪不同潮气量通气模型,利用免疫组织化学技术、酶联免疫法和髓过氧化物酶（ＭＰＯ）测定法,分别检测不同潮气量组通气１ｄ、３ｄ、７ｄ后肺血管内皮细胞表面ＩＣＡＭ－１的表达量,血清和肺组织匀浆中肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ－     

促炎症和抗炎症细胞因子基因表达与脓毒症小鼠肝损伤的关系

目的 探索促炎症及抗炎症细胞因子在脓毒症小鼠肝损伤中的作用。方法 盲肠结扎穿孔（ＣＬＰ）造成小鼠脓毒症模型,假手术（sham）组接受同样手术操作且不行ＣＬＰ。用ＲＴ－ＰＣＲ的方法检测了脓毒症小鼠肝组织中多种细胞因子（促炎症细胞因子ＴＮＦα、ＩＬ－１β、ＩＬ－６,抗炎症细胞因子ＩＬ－４）mＲＮＡ的表达,同时还测定了肝组织含水量及微血管通透性的改变。结果 与sham组相比,ＣＬＰ小鼠在３h后ＴＮＦα、ＩＬ－１β基因表达即明显增高（Ｐ＜０.０１）,至１２h仍然高于sham组（Ｐ＜０.０１）,但较３h有所降低;ＩＬ－６基因在ＣＬＰ后３h也明显增高（Ｐ＜０.０１）,并且在ＣＬＰ后１２h仍继续增高（Ｐ＜０.０１）;与之不同的是ＩＬ－４基因,在ＣＬＰ后３h ＩＬ－４基因表达与sham组差异无显著意义,至ＣＬＰ后１２h才明显高于sham组（Ｐ＜０.０１）。ＣＬＰ后３h肝组织含水量与肝微血管通透性即开始有所升高但与sham组比较差异无显著意义,至ＣＬＰ后１２h进一步增高与sham组比较差异均有显著意义（含水量Ｐ＜０.０５,微血管通透性Ｐ＜０.０１）。结论 促炎症细胞因子与抗炎症细胞因子之间力量对比的失衡可能是脓毒症并发肝损伤的重要原因。     

细胞间粘附分子-1和血管细胞粘附分子-1在慢性排斥反应中的表达

为了探讨移植肾慢性排斥反应的发病机制，应用免疫组化技术（ＡＢＣ法）对１６例肾移植术后发生慢性排斥反应患者的移植肾组织及５例正常肾组织行细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）、血管细胞粘附分子－１（ＶＣＡＭ－１）染色及ＨＥ染色。结果表明ＩＣＡＭ－１、ＶＣＡＭ－１在正常肾脏和慢性排斥反应移植肾脏上的表达分布不同；结果提示，它们在移植肾慢性排斥反应的发生、发展过程中起重要作用     

急性胆管炎时肝微循环的变化及其细胞间粘附分子-1和E-选择素的作用

为探讨细胞间粘附分子１ （ Ｉ Ｃ Ａ Ｍ１） 和 Ｅ选择素 （ Ｅｓｅｌｅｃｔｉｎ） 在急性胆管炎肝微循环变化中的作用, 对急性胆管炎时肝脏组织学、肝脏血流量及肝组织伊文思蓝 （ Ｅ Ｂ） 含量的变化, 以及 Ｉ Ｃ Ａ Ｍ１ 和 Ｅ选择素单抗预处理对以上变化的影响进行了观察。结果： 急性胆管炎时肝窦内皮细胞及肝细胞出现变性和结构破坏, 肝窦及肝细胞周围多形核粒细胞 （ Ｐ Ｍ Ｎ） 数量显著增多, 肝微血管血流量明显减少, 肝组织 Ｅ Ｂ含量显著增高, 肝窦通透性增高; 而抗 Ｉ Ｃ Ａ Ｍ１ 及 Ｅ选择素单抗预处理使以上损害均明显减轻。由此表明, Ｉ Ｃ Ａ Ｍ １ 及 Ｅ选择素在肝脏微循环障碍的发生发展中起重要作用。     

依达拉奉对大鼠急性肺损伤的干预作用

目的 探讨依达拉奉(EDA)和地塞米松(DXM)对脓毒症大鼠肺损伤的干预作用.方法 50只SD大鼠随机分为假手术组(sham组)、手术对照组(CLP组)、依达拉奉治疗组(EDA组)、地塞米松治疗组(DXM组)和依达拉奉联合地塞米松治疗组(E+D组).采用盲肠结扎穿刺法造脓毒血症大鼠肺损伤模型,药物治疗组造模后立即经阴茎背静脉注射EDA(5mg/kg),DXM(5mg/kg)或EDA(5mg/kg)+DXM(5mg/kg);另两组均以等量生理盐水代替.结果 与 sham组相比,CLP组大鼠病理评分,肺干湿重比(W/D),肺泡通透指数(LPI),肺组织中MPO,MDA,IL-6,TNF-α,肺组织中凋亡细胞数量明显增加,而肺组织中T-AOC活性明显减轻.应用地塞米松,依达拉奉药物干预后,上述指标均有不同程度的改善.两种药物联合应用与单个药物应用相比,这些指标有更明显的改善.结论 依达拉奉预处理对脓毒症诱导的肺损伤有明显的防治效果,减轻急性肺损伤的机制可能是通过减少氧自由基产物,减少炎性细胞因子浓度.依达拉奉和地塞米松联合应用对肺损伤有更好的治疗效果.     

腹腔感染脓毒症时肺内主要模式识别受体表达变化及其与肺损伤的关系

目的观察腹腔感染脓毒症时肺组织内病原菌相关模式分子(内毒素、脂蛋白、DNA)的主要模式识别受体的表达变化及其意义。方法采用盲肠结扎穿孔(CLP)术建立30只昆明种小鼠腹腔感染脓毒症模型,将模型小鼠随机分为CLP组和假手术组,每组各15只鼠,分别于术后8,12和24h取5只鼠处死取右肺组织,采用逆转录聚合酶链反应(RT PCR)法检测肺组织内毒素受体[清道夫受体(SR)、白细胞分化抗原14(CD14)、TLR4]及细菌脂蛋白受体(TLR2)、细菌DNA受体(TLR9)mRNA的表达,酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测肺组织内肿瘤坏死因子α(TNFα)含量,采用分光光度计法测定肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性。结果与假手术组比较,术后8hCLP组肺组织内CD14mRNA(1.143±0.139,t=0.022,P<0.05),TLR2mRNA(0.418±0.102,t=0.021,P<0.05),TLR4mRNA(0.595±0.052,t=0.0001,P<0.01)和TLR9mRNA(0.743±0.178,t=0.0023,P<0.01)表达上调,其中TLR9mRNA呈持续上调变化,SRmRNA(0.659±0.159,t=0.029,P<0.05)呈持续下调改变;肺组织CD14、TLR4、SR、TLR2和TLR9mRNA的表达变化分别与MPO和TNFα变化呈明显的相关关系(P<0.05或P<0.01)。结论脓毒症发病过程中,肺组织内主要模式识别受体表达变化与肺损伤相关,除LPS外,其他细菌成分也可能参与了肺损伤过程。     

急性胆管炎时肝组织ICAM-1和E-selectin mRNA的表达变化

目的　观察胆道感染大鼠肝组织细胞粘附分子１（ＩＣＡＭ１） 和Ｅｓｅｌｅｃｔｉｎ 的表达变化,探讨这些粘附分子在胆道感染肝脏损害病生机理中的作用。方法　应用原位分子杂交和斑点杂交技术观察大鼠胆道感染时ＩＣＡＭ１ 和Ｅｓｅｌｅｃｔｉｎ ｍＲＮＡ在肝组织的定位及转录表达强度。结果　急性胆管炎３ 小时后ＩＣＡＭ１ 和Ｅｓｅｌｅｃｔｉｎ ｍＲＮＡ表达开始增强,ＩＣＡＭ１ １２ 小时表达最强,Ｅｓｅｌｅｃｔｉｎ ６ 小时表达最强。ＩＣＡＭ１ 的阳性反应细胞主要为肝窦内皮细胞、枯否细胞和肝小叶中央静脉,Ｅｓｅｌｅｃｔｉｎ 的阳性反应细胞主要为肝窦内皮细胞和肝小叶中央静脉。胆道感染后３ 小时肝脏ＩＣＡＭ１ 和Ｅｓｅｌｅｃｔｉｎ ｍＲＮＡ含量开始进行性增高,ＩＣＡＭ１ １２ 小时达高峰,Ｅｓｅｌｅｃｔｉｎ ６ 小时达高峰。结论　胆道感染初期ＩＣＡＭ１和Ｅｓｅｌｅｃｔｉｎ 表达均明显增强,为ＰＭＮ 与肝窦内皮细胞粘附和迁移提供了分子基础,可能在胆道感染肝脏损害的病生机理中具有重要意义。     

硫化氢在脓毒症大鼠结肠黏膜损伤中的作用

目的：探讨硫化氢（H2S）在脓毒症大鼠结肠黏膜损伤中的作用.方法：雄性SD大鼠随机分为5组：对照组、脓毒症组、脓毒症＋Naris组、脓毒症＋DL-炔丙基甘氨酸（PAG）组和脓毒症＋氨基-羟乙酸（AOAA）组.除对照组行假手术外,其余各组采用盲肠结扎穿孔（CLP）法制作大鼠脓毒症模型,术前30 min分别腹腔注射等量生理盐水、NariS（10 mg/kg）、PAG（50 mg/kg）、AOAA（20 mg/kg）.20 h后处死大鼠,取结肠组织,测定其H2S、肿瘤坏死因子-а（TNF-а）、白细胞介素-1β（IL-1β）含量,髓过氧化物酶（MPO）活性和胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）mRNA、胱硫醚-β-合成酶（CBS）mRNA表达水平,光学显微镜下观察结肠组织病理学变化.结果：①与对照组相比,脓毒症组结肠组织中H2S、TNF-а、IL-1β浓度增加,MPO活性明显增强（P〈0.01）,CBS mRNA、CSE mRNA表达水平提高（P〈0.01）,其组织结构遭到破坏,炎性细胞浸润增多.②与脓毒症组相比,脓毒症＋NariS组结肠组织中H：S、TNF-а、IL-1β浓度增加,MPO活性增强（P〈0.05）,CBS mRNA、CSE mRNA表达水平降低（P〈0.01）,结肠组织结构破坏加剧,更多炎性细胞浸润.与脓毒症组相比,脓毒症＋PAG组和脓毒症＋AOAA组结肠组织中H2S,TNF-а、IL-1β浓度降低,MPO活性减弱.但脓毒症＋PAG组各指标变化的差异无统计学意义,而脓毒症＋AOAA组各指标的变化差异有显著性（P〈0.01）;两组结肠组织结构破坏减轻.炎性细胞浸润减少.结论：脓毒症时,结肠组织内主要由CBS催化产生H2S,增多的H2S通过增强炎症反应加重结肠黏膜损伤.     

戊乙奎醚预处理对脓毒症小鼠肺损伤时MAPK信号转导通路的影响

目的 探讨戊乙奎醚(PHC)预处理对脓毒症小鼠肺损伤时丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路的影响.方法 健康雌性昆明小鼠105只,体重20～25 g,随机分为3组(n=35):假手术组(S组)、脓毒症(CLP)组和戊乙奎醚(PHC)组.采用盲肠结扎并穿孔法制备脓毒症模型.PHC组于造模前1 h腹腔注射戊乙奎醚0.45 mg/kg,s组和CLP组于造模前1 h注射等容量生理盐水.于造模后即刻测定肺微血管通透性;造模后12 h时进行动脉血气分析,观察肺组织病理结果,测定肺组织丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性和磷酸化的p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、细胞外信号调节激酶(ERK1/ERK2)和c-jun氨基末端蛋白激酶(JNK)表达.结果 与S组比较,CLP组PaO2、PaO2/FiO2和pH值降低,肺微血管通透性和肺组织MDA含量升高,SOD活性降低,磷酸化的p38MAPK、ERK1/ERK2和JNK表达上调(P<0.05或0.01);与CLP组比较,PHC组PaO2、PaO2/FiO2和pH值升高,肺微血管通透性和肺组织MDA含量降低,SOD活性升高,磷酸化的p38MAPK和ERK1/ERK2表达下调(P<0.05或0.01).结论 戊乙奎醚预处理可通过抑制MAPK信号转导通路(p38MAPK和ERK1/ERK2)的激活,从而减轻脓毒症小鼠肺损伤.     

p38 MAPK抑制剂对急性胰腺炎肺损伤肺内细胞间黏附分子-1表达和肺微血管通透性的影响

目的 观察p38蛋白激酶(p38 MAPK)抑制剂对大鼠急性胰腺炎肺损伤(LI)肺内细胞间黏附分子(ICAM)-1表达和肺微血管通透性的影响.方法 SD大鼠36只,假手术组12只;5%的牛黄胆酸(0.1 ml/100 g)逆行注射到SD大鼠的胰胆管内,造成重症急性胰腺炎(SAP);分为SAP组12只和p38 MAPK抑制剂组(SB203580,0.5 mg/kg,静脉注射)12只.各组在3、6、12 h分别剖杀大鼠,检测肺组织的含水量、肺组织髓过氧化物酶(MPO);免疫组织化学检测肺组织p38 MAPK的表达;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺组织ICAM-1 mRNA表达水平;检测肺微血管通透性Balf/Serum FITC比率;光镜F检测肺组织组织损害.结果 假手术组肺组织含水量、MPO、肺组织病理评分、ICAM-1 mRNA分别为3.41±0.05、1.48±0.10、0和0.48±0.03;SAP组在3、6、12 h肺组织含水量分别为为3.77±0.12、3.87±0.11和4.03±0.05,SB治疗组分别为3.53±0.07、3.57±0.05和3.69±0.09,SAP组MPO分别为2.17±0.42、4.65±0.26和7.70±0.01,SB治疗组分别为1.72±0.14、2.46±0.29和5.63±0.15;SAP组肺组织病理评分分别为3.16±0.03、5.33±0.05和7.18±0.02,SB治疗组分别为3.12±0.02、5.26±0.03和7.13±0.02;;SAP组ICAM-1 mRNA在6、12 h表达为1.45±0.04和1.65±0.06,SB治疗组分别为1.19±0.06和0.96±0.05.SAP组和SB治疗组上述指标较假手术组升高(P<0.05),但SB治疗组较SAP组下降(P<0.05);而且肺组织p38 MAPK表达和ICAM-1 mRNA表达一致,在12 h达高峰.结论 急性胰腺炎肺损伤可能与肺组织中p38 MAPK和ICAM-1 mRNA过度表达有关;p38 MAPK抑制剂可抑制肺内ICAM-1表达,降低肺微血管通透性,减轻急性胰腺炎肺损伤.     

The effects of methylene blue on lung injury in septic rats

PURPOSE: We aimed to investigate the effects of methylene blue (MB) on NO production, myeloperoxidase (MPO) activity, antioxidant status and lipid peroxidation in lung injury during different stages of sepsis in rats. MATERIAL AND METHODS: Rats were randomly divided into 4 groups (n = 20): group C, sham operated; group CMB, sham operated and receiving MB (25 mg/kg, i.p.); group S, sepsis; group SMB, sepsis and receiving MB (25 mg/kg, i.p.). Sepsis was induced by cecal ligation and puncture (CLP). The MB dose was administered after CLP. Each group was subdivided into two subgroups (n = 10) which were sacrificed at 9 or 18 h after the surgical procedure. The levels of superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), glutathione peroxidase (GSH-PX) and MPO activity, total nitrite/nitrate and malondialdehyde (MDA) in the lung tissue were measured. Lung injury was graded from 1 (injury to 25% of the field) to 4 (diffuse injury) by the pathologist. RESULTS: In group SMB, while SOD and CAT increased in both early and late sepsis periods, GSH-PX increased significantly only in the early sepsis period when compared with group S. Increase in lung MPO activity after CLP-induced sepsis was prevented by MB administration. MB significantly decreased to nitrite/nitrate and MDA levels both in early and late sepsis periods when compared with group S (p < 0.05). Group S showed a marked increase in neutrophil infiltration into the interstitial space and thickening of the alveolar septa, whereas the alveolar damage score was lower in the SMB group (p < 0.05). CONCLUSION: MB reduced the MPO activity and lipid peroxidation by both decreasing oxidative stress and NO overproduction in the lungs, which resulted in the attenuation of lung injury after CLP-induced sepsis in rats.