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1.
目的:观察益气活血中药人参、三七、川芎提取物延缓高糖高脂诱导的血管内皮细胞衰老的分子生物学机制。方法:采用40 mmol·L~(-1)葡萄糖和100μmol·L~(-1)棕榈酸钠造模,实验分为空白组、模型组和中药低、中、高剂量组(50,100,200 mg·L~(-1)),干预48 h。采用细胞增殖与活性检测(CCK-8)检测细胞增殖能力;细胞衰老β-半乳糖苷酸(SA-gal)染色检测细胞衰老程度;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞p16,p21蛋白表达水平的变化;免疫荧光检测p-H2A.X(Ser139)表达,线粒体ROS(mtROS)产生和线粒体膜电位(MMP)改变。结果:与空白组比较,模型组细胞增殖能力及MMP水平降低(P 0. 01),SA-β-gal蓝染细胞数量,mtROS生成和p16,p21,p-H2A.X(Ser139)表达增加(P 0. 05,P 0. 01);而与模型组比较,人参-三七-川芎提取物可提高细胞增殖能力和MMP水平(P 0. 01),减少SA-β-gal蓝染细胞数量和mtROS生成(P 0. 01),并能够降低p16,p21和p-H2A.X(Ser139)的表达水平(P 0. 05,P 0. 01)。结论:益气活血中药人参-三七-川芎提取物能够延缓高糖高脂引起的血管内皮细胞衰老,其机制可能与升高线粒体膜电位,减少ROS生成引起的DNA损伤累积有关。 相似文献
2.
目的探讨三七粉对慢性硬膜下血肿(chronic subdural hematoma,CSDH)模型家兔病理特征的影响及相关机制。方法硬膜下少量多次注血法制备家兔CSDH模型,造模成功后随机分成模型组、三七低剂量(0.125g/kg)组、三七高剂量(0.250g/kg)组,每组6只;模型组给予生理盐水,三七组给予三七粉,连续灌胃6天。HE染色观察血肿外膜病理组织学特征;化学比色法测定外膜SOD活力和MDA含量;免疫组织化学法观察外膜CD31、CD34及VEGF表达;ELISA法检测外周血和硬膜下血肿液VEGF表达;Western blot检测血肿外膜VEGFR-1和VEGFR-2蛋白表达。结果与模型组比较,三七低、高剂量组血肿外膜炎症反应较轻而纤维组织增生相对成熟;高剂量组外膜SOD活性增高(P〈0.05),外膜CD31、CD34表达降低(P〈0.01),硬膜下残液VEGF表达降低(P〈0.05);三七低、高剂量组外膜VEGF、VEGFR-2表达降低(P〈0.05,P〈0.01)。与三七低剂量组比较,高剂量组CD31、CD34表达量降低(P〈0.01),高剂量组VEGFR-2表达减少(P〈0.05)。结论三七能加快CSDH血肿局部纤维性修复和病程演变;减轻外膜炎症和氧化损伤、降低VEGF表达并通过影响VEGFR-2受体途径减少病理性血管形成可能是其重要机制。 相似文献
3.
人参三七组方对大鼠缺血心肌Ras信号通路的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
目的探讨人参三七组方对急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)大鼠缺血心肌Ras、细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase1/2,ERK1/2)和C-Raf-1蛋白及mRNA表达的影响。方法采用Wistar大鼠冠状动脉左前降支结扎的心肌缺血模型,并设空白组、假手术组、模型组、倍他乐克组和人参三七组方大、小剂量组。通过Western blot法检测缺血心肌的Ras、ERK1/2、磷酸化ERK1/2(phosphor-ERK1/2,p-ERK1/2)及C-Raf-1的蛋白含量,Real-time PCR法检测缺血心肌Ras、ERK1、ERK2及C-Raf-1mRNA表达情况。结果模型组Ras、C-Raf-1、p-ERK1/2蛋白及其mRNA表达较空白组、假手术组增加(P<0.05);人参三七组方大、小剂量组及倍他乐克组Ras、C-Raf-1、p-ERK1/2蛋白及其mRNA表达均显著高于模型组(P<0.05);人参三七组方大剂量组较小剂量组Ras、C-Raf-1、p-ERK1/2蛋白及其mRNA表达增高更明显(P<0.05)。各组ERK1/2蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论人参三七组方能够促进缺血心肌Ras信号通路上的关键靶点Ras、C-Raf-1及ERK1/2表达,提示人参三七组方可能通过Ras信号通路来促进血管新生,具有一定剂量依赖性。 相似文献
4.
目的 探讨人参、三七组方对HUVEC VEGFR-2表达的影响.方法 采用免疫组织化学的方法,观察人参、三七组方干预后,HUVEC VEGFR-2的表达.结果 人参、三七组方大剂量组促进了HUVEC VEGFR-2的表达,其作用和bFGF 相当,和空白组相比有明显增加,且组间差异显著.结论 人参、三七组方可能通过促进V... 相似文献
5.
目的: 探讨瓜蒌-薤白对心肌缺血损伤的保护作用机制。 方法: SD大鼠分为6组:正常组,模型组,瓜蒌25 g·kg-1组,薤白12.5 g·kg-1组,瓜蒌-薤白37.5 g·kg-1组,阳性对照(普萘洛尔)0.02 g·kg-1组,每组9只,连续给药14 d。心肌缺血模型完成后,开始给药,采用连续6 d腹腔注射异丙肾上腺素0.04 mg·kg-1制造大鼠心肌缺血模型,给药14 d后,分离血清检测超氧化物歧化酶(SOD) 活性、丙二醛(MDA) 以及血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)含量。采用Western blotting 法观测瓜蒌-薤白对有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPKs)家族3个主要信号分子C-Jun氨基端激酶(JNK)、细胞外信号调节激酶(ERK)、p38磷酸化水平的影响。 结果: 与正常组相比,模型组大鼠血清中LDH,CK和MDA水平明显升高,SOD活性显著下降(P<0.05, P<0.01),与正常组相比,模型组P-p38 P-JNK P-ERK明显上调(P<0.05, P<0.01)。 与模型组比较瓜蒌,薤白,瓜蒌-薤白能显著降低血清中MDA,CK,LDH含量,瓜蒌-薤白降幅最大,与瓜蒌,薤白组比较有显著性差异(P<0.01)。瓜蒌-薤白组P-p38, P-JNK,P-ERK水平显著降低。 结论: 瓜蒌-薤白对心肌缺血损伤有保护作用,其机制可能是通过清除氧自由基、减轻氧化反应而抑制p38,JNK,ERK蛋白磷酸化以减轻缺血损伤,对心肌具保护作用。 相似文献
6.
目的:观察人参三七川芎提取物对复制性衰老人心脏微血管内皮细胞(HCMEC)的影响和血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)的作用。方法:以HCMEC为研究对象,第8代HCMEC建立复制性衰老HCMEC模型,实验分为衰老模型组(衰老组)、白藜芦醇组(10μmol·L-1)、人参三七川芎低、中、高剂量组(50,100,200 mg·L-1),相应药物作用24 h后,采用β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)衰老染色鉴定,CCK-8检测细胞增殖能力,流式细胞仪分析细胞周期,采用激光免疫共聚焦显微镜观察VEcadherin的形态学改变,Western blot检测VE-cadherin蛋白的表达情况。结果:与衰老组比较,人参三七川芎提取物各剂量组减少SA-β-gal衰老染色比例,促进细胞的增殖,减少G0/G1期细胞比例,增加G2/M期细胞比例,保持VE-cadherin形态的完整性,升高VE-cadherin蛋白的表达,均具有明显的统计学差异(P0.05,P0.01)。结论:人参三七川芎提取物能够延缓衰老,促进增殖和有丝分裂,保持复制性衰老HCMEC VE-cadherin的完整性和蛋白的表达,这可能是益气活血中药延缓内皮衰老的重要机制所在。 相似文献
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目的探讨益气活血中药人参和三七提取物在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)血管生成信号通路(VEGFR-2-Ras-MAPK)上的作用靶点。方法通过逐级信号阻断的方法,首先加入半数抑制量(IC50)的血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)抑制剂SU5416,采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测其下游信号蛋白Ras、MAPK的表达,其次再加入IC50的Ras抑制剂FPP,采用Western blot检测下游蛋白MAPK的表达。结果与空白对照组比较,加入SU5416后Ras、MAPK的表达均显著下降,差异有统计学意义(P0.05,P0.01);加入FPP后MAPK的表达也显著下降,差异有统计学意义(P0.01)。与SU5416组比较,SU5416加中药组下游信号蛋白Ras、MAPK的表达均显著增加,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01);与FPP组比较,FPP加中药组下游信号蛋白MAPK的表达显著增加,差异有统计学意义(P0.05)。结论益气活血中药人参和三七提取物对HUVEC血管生成的作用机制可能是分别促进VEGFR-2、Ras、MAPK这三个关键信号蛋白的表达而实现的。 相似文献
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观察人参三七川芎提取物对复制性衰老血管平滑肌细胞骨架蛋白微丝F-actin和G-actin的影响。以人主动脉平滑肌细胞(HASMC)作为研究对象,复制性衰老9代细胞作为衰老模型,实验分为青年组(5代细胞)、模型组(9代细胞)、中药低剂量组(100 mg·L-1)、中药中剂量组(200 mg·L-1)、中药高剂量组(400 mg·L-1)及白藜芦醇组(10μmol·L-1),药物干预时间为48 h。应用β-半乳糖苷酶特异染色法计算蓝染细胞比率,CCK-8检测细胞增殖能力,流式细胞技术分析细胞周期,免疫荧光染色观察细胞F-actin和G-actin形态的改变,Western blot检测F-actin蛋白的表达情况。与模型组相比,中药各给药组及白藜芦醇组可以有效的降低β-半乳糖苷酶染色蓝染细胞数量,提高细胞的增殖能力,减少G0/G1期的细胞数量,同时增加S期的细胞数量,减少F-actin蛋白的表达量及应力纤维的形成,且药物干预效果明显,具有统计学意义。复制性衰老的血管平滑肌细胞可以作为衰老研究的模型,细胞骨架微丝蛋白G-actin和F-actin形态及蛋白表达在细胞衰老过程中改变明显,人参三七川芎提取物对细胞G-actin和F-actin有明显干预作用,其可能间接通过此作用延缓了血管老化的进程。 相似文献
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目的:从单磷酸腺苷活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(AMPK/mTOR)通路探讨人参-三七-川芎提取物对高糖诱导的小鼠血管衰老的保护作用。方法:130只雄性C57BL/6小鼠先随机分为空白组和高糖组,高糖组腹腔注射链脲佐菌素(STZ),并用高脂饮食连续性喂养7个月后再次随机分组,分为模型组、人参-三七-川芎提取物低剂量组(0.819 g·kg~(-1))、人参-三七-川芎提取物高剂量组(1.638 g·kg~(-1))及二甲双胍组(150 mg·kg~(-1)),灌胃给药,每天1次,连续9周,期间检测小鼠体质量和血糖变化。给药结束后,苏木素-伊红(HE)染色检测小鼠胸主动脉形态,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠胸主动脉周期蛋白依赖激酶抑制因子2A(p16),周期依赖性蛋白激酶抑制因子1A(p21),AMPK,p-AMPK,mTOR,pmTOR,肝激酶B1(LKB1),p-LKB1,核糖体蛋白s6激酶(p70s6k),p-p70s6k蛋白表达情况。结果:与空白组相比,模型组小鼠体质量显著降低、血糖显著升高(P0.01),在药物干预9周后,各给药组小鼠体质量无明显差异,血糖值较模型组明显下降(P0.05,P0.01)。与空白组相比,模型组内膜损伤严重且有增生,中膜明显增生且排列不整齐,给药各组内膜损伤不明显,中膜少量增生,p16,p21,mTOR,p-mTOR,p70s6k,p-p70s6k蛋白表达明显升高(P0.05,P0.01),AMPK,p-AMPK,LKB1,p-LKB1蛋白表达明显下降(P0.05,P0.01)。药物干预后,各给药组p16,p21,mTOR,p-mTOR,p70s6k,p-p70s6k蛋白表达明显下降(P0.05,P0.01),AMPK,p-AMPK,LKB1,p-LKB1蛋白表达明显升高(P0.05,P0.01)。结论:高糖能够诱导小鼠主动脉衰老,人参-三七-川芎提取物可能通过AMPK/mTOR通路改善由高糖诱导的小鼠主动脉衰老。 相似文献
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目的 观察和比较增龄与高血压对大鼠主动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)的影响及人参、三七、川芎提取物的干预作用。方法 采用原代细胞培养的方法建立大鼠主动脉VSMCs模型,其中增龄实验分5组:青年对照组(Yon组)、老龄组(Old组)、老龄+普罗布考组(Old+Pro组)、老龄+中药低剂量组(Old+Low组)和老龄+中药高剂量组(Old+High组);高血压实验分5组:Wistar-Kyoto对照组(WKY组)、自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat,SHR)组、SHR+缬沙坦组(SHR+Val组)、SHR+中药低剂量组(SHR+Low组)和SHR+中药高剂量组(SHR +High组)。采用MTT法检测细胞增殖,免疫细胞化学法检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达,RT-PCR和Western blot分别检测过氧化物酶增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator activated receptor-γ,PPAR-γ)mRNA和蛋白表达。结果 与Yon组比较,Old组VSMCs增殖水平和MMP-9表达升高,PPAR-γ mRNA和蛋白表达减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。与Old组比较,Old+Pro组、Old+High组和 Old+Low组VSMCs增殖水平和MMP-9表达明显降低,PPAR-γ mRNA表达明显增加(均P<0.05),Old+Pro组和Old+Low组PPAR-γ蛋白表达明显增加(均P<0.05)。与WKY组比较,SHR组VSMCs增殖水平和MMP-9表达明显升高,PPAR-γ mRNA和蛋白表达明显减少(均P<0.05);与SHR组比较,SHR+Val组、SHR +High组和SHR+Low组VSMCs增殖水平和MMP-9表达明显降低,PPAR-γ mRNA和蛋白表达增加(均P<0.05)。结论 增龄和高血压均可造成大鼠主动脉VSMCs过度增殖及相关细胞活性因子的表达改变,中药人参、三七、川芎提取物能够降低其增殖水平,减少负性细胞因子的表达以降低增龄和高血压对VSMCs的损害,延缓血管细胞的老化。 相似文献
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目的研究华蟾毒配基联合索拉非尼对肝癌Huh7细胞增殖与凋亡的影响及作用机制。方法 MTT法检测Huh7细胞增殖;Hoechst33342/PI荧光双染法检测Huh7细胞凋亡形态变化;流式细胞仪检测细胞周期;免疫细胞化学法检测Ki67蛋白表达;Western blotting法检测Bax、Bcl-2、Caspase-8、极光激酶A(AURKA)、Ras、Raf、细胞外调节蛋白激酶(ERK)和p-ERK蛋白的表达变化。结果华蟾毒配基、索拉非尼及联合用药对Huh7细胞的增殖均有抑制作用,联合用药组的增殖抑制作用更明显,具有协同效应;荧光染色可见细胞凋亡形态变化;索拉非尼引起Huh7细胞周期S期阻滞,华蟾毒配基和联合用药引起Huh7细胞周期G2/M期阻滞,联合用药组G2/M期阻滞较单药组更明显;华蟾毒配基和索拉非尼均能减弱Ki67表达,联合用药组的作用更为显著;华蟾毒配基、索拉非尼及联合用药上调Bax和Caspase-8蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax/Bcl-2比例,对ERK蛋白表达无明显影响,显著下调AURKA、Ras、Raf和p-ERK蛋白表达,联合用药组的作用更为显著(P0.05)。结论华蟾毒配基联合索拉非尼通过AURKA/Ras/Raf/ERK信号通路抑制肝癌Huh7细胞增殖,诱导其凋亡。 相似文献
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目的研究硒化壳聚糖(Sc)对急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞株NB4增殖的影响,探讨这种影响与PML-RARα融合蛋白及其激活的Ras信号途径的关系。方法 NB4为表达PML-RARα融合蛋白阳性的细胞株,K562为表达PML-RARα融合蛋白阴性的细胞株,应用MTT法检测Sc对两种细胞株增殖的影响,应用流式细胞术和Western blot的方法检测两种细胞株相关蛋白含量的变化。结果 Sc对两种细胞株均可产生剂量和时间依赖性的抑制作用,相比之下,对K562细胞的抑制作用明显较弱(P<0.05)。Sc处理后,NB4细胞内PML-RARα融合蛋白和c-Jun信号蛋白含量明显减少,而K562细胞内c-Jun信号蛋白含量则轻微减少。结论 Sc可特异性地减少PML-RARα融合蛋白的含量从而下调其激活的Ras信号途径,最终抑制NB4细胞增殖。 相似文献
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Extracts of Aesculus hippocastanum L. (horse chestnut) seed have been used in the treatment of chronic venous insufficiency, edema and hemorrhoids. Most of the beneficial effects of horse chestnut are attributed to its principal component β‐escin or escin. We have evaluated the cytotoxic and apoptotic effects of escin in the H‐Ras 5RP7 cell line by analyzing cell growth inhibition, apoptosis and caspase‐3 dependent activity. We have also shown structural and ultrastructural changes in these cell using confocal and transmission electron microscopy. The results indicated that escin has significant inhibitory effects on cell growth and the percentage of apoptotic cells increased after treatment with escin, and the micrographs confirmed that escin damaged these cells and induced apoptosis. Copyright © 2012 John Wiley & Sons, Ltd. 相似文献
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目的:研究补骨脂素减少炎症和抑制Ras/Raf1表达保护类风湿关节炎大鼠的机制。方法:将SD大鼠分成对照组、模型组(类风湿关节炎大鼠模型)、补骨脂素低剂量组(22 mg/kg补骨脂素处理)、补骨脂素中剂量组(44 mg/kg补骨脂素处理)、补骨脂素高剂量组(88 mg/kg补骨脂素处理)、补骨脂素高剂量+NC组(88 mg/kg补骨脂素+阴性对照慢病毒载体处理)、补骨脂素高剂量+Ras组(88 mg/kg补骨脂素+Ras过表达慢病毒载体处理);采用Western Blotting检测大鼠的肾素-血管紧张素系统(RAS)、原癌基因丝苏氨酸蛋白激酶-1(Raf1)、成骨细胞特异性转录因子(Osx)、Ⅰ型胶原蛋白α1链(COL1A1)、骨钙素(OC)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)蛋白表达;检测关节肿胀度,HE染色对关节组织病理评分,ELISA法检测炎症介质白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠关节组织中Ras、Raf1、MMP-3、MMP-13蛋白表达以及关节肿胀度、关节组织病理评分和IL-2、TNF-α、IL-6水平均升高,Osx、COL1A1、OC蛋白表达均降低(均P<0.05);与模型组比较,补骨脂素低、中、高剂量组大鼠关节组织中除Osx、COL1A1、OC蛋白表达均升高外,其他指标均显著降低(均P<0.05);与补骨脂素高剂量+NC组比较,补骨脂素高剂量+Ras组大鼠关节组织中Osx、COL1A1、OC蛋白表达均降低,而其他指标均显著升高(均P<0.05)。结论:补骨脂素通过减少炎症和抑制Ras/Raf1表达减轻类风湿关节炎大鼠关节损伤,促进软骨修复。 相似文献
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不同中医治法对ras/MAPK信号通路相关基因转录调节的实验研究 总被引:14,自引:0,他引:14
目的 :研究中医治疗原发性肝癌的清热解毒、活血化瘀、健脾理气等常用不同方法对实验性肝癌的作用机理。方法 :以二乙基亚硝胺水溶液诱发大鼠肝癌形成 ,采用RT PCR方法分别观察这些不同中医治法对癌基因ras MAPK信号传导通路上相关基因转录的调节作用。结果 :这些不同治法能够针对性地调节癌基因ras MAPK信号通路上一些信号分子的转录水平 ,其中清热解毒法对raf1基因、活血化瘀法对Grb 2和raf 1基因、健脾理气法对sos基因的转录水平有显著的下调作用 ,各治法均能上调GAP基因的转录水平。结论 :不同中医治法能够不同程度地调节肝癌发生发展过程中一些促使细胞过度增殖的信号分子的转录 ,并且这些治法有不同的选择性。 相似文献
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半枝莲提取物诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及其对凋亡相关蛋白表达的影响 总被引:4,自引:0,他引:4
目的探讨半枝莲提取物(Scutellaria barbata D.Don extract,SBE)对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2,Survivin和Caspase-3表达的影响。方法体外培养SMMC-7721细胞,以2.5,5和10 mg.L-1SBE处理48 h,并以2.5 mg.L-1顺铂(DDP)作为阳性对照。用MTT法检测细胞抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,二步法免疫组化检测Bcl-2,Survivin和Caspase-3蛋白表达。结果与正常对照组相比,SBE各浓度组细胞抑制率显著升高(P(0.001),细胞凋亡率明显上升(P(0.01),Caspase-3蛋白表达显著上升(P<0.01或P<0.05),Bcl-2和Survivin蛋白表达明显下降(P<0.01或P<0.05)。结论SBE具有诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡的作用,其分子机制可能与上调Caspase-3蛋白表达以及下调Bcl-2和Survivin蛋白表达有关。 相似文献
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