miR-181a-5p调控LIF的表达调节胰腺腺泡细胞凋亡的分子机制

背景急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)发病迅速,并发全身感染,因此早期的高效治疗对控制病情起到关键作用.微小RNA(microRNA, miRNA)在AP中的作用机制及临床应用的研究成为近几年的热点.其在AP发生发展及转归中的作用有助于为AP的诊断和治疗提供新思路.目的探讨miR-181a-5p对雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞AR42J凋亡的影响及机制.方法运用ELISA法检测雨蛙素诱导的大鼠胰腺腺泡细胞中AMY、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)的表达;将Cerulein+anti-miR-con组(转染anti-miR-con)、Cerulein+anti-miR-181a-5p组(转染anti-miR-181a-5p)、Cerulein+si-con组(转染si-con)、Cerulein+si-白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor, LIF)组(转染si-LIF),均用脂质体法转染至AR42J细胞,再用15 nmol/L的雨蛙素处理8h;流式细胞术法检测各组细胞的凋亡; qRT-PCR检测各组细胞中miR-181a-5p mRNA和LIF mRNA的表达; Western blot检测各组细胞中LIF、caspase-3的蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性.结果与对照组相比,雨蛙素处理8 h是AMY、TNF-α和IL-6的含量均升高的时间点,且细胞凋亡率显著降低(P 0.05);与Control组相比,Cerulein组AR42J细胞中miR-181a-5p mRNA表达显著下调, LIF mRNA和蛋白表达显著上调(P0.05);过表达miR-181a-5p、敲减LIF均可抑制雨蛙素诱导的AR42J细胞凋亡的促进作用; miR-181a-5p可抑制野生型LIF细胞的荧光活性,且可负向调控LIF的蛋白表达.结论 miR-181a-5p可抑制雨蛙素诱导的AR42J细胞的凋亡,其机制可能与靶向LIF有关,将可为AP的治疗提供新方向.     

miR-216a-5p调控XIAP对急性胰腺炎腺泡细胞增殖、凋亡的影响

背景重症急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)是消化系统常见的危重急症,临床救治难度大,病死率高,严重危及患者生命.近几年来多种miRNA在AP中的差异表达,与其发生发展及诊断和预后密切相关,进一步探索其在AP发生发展、并发症等各环节的作用有助于为AP的诊断和治疗提供新的思路和方法.研究发现miR-216a-5p通过下调MMP16可抑制肺癌细胞的侵袭; miR-216a-5p通过靶向抑制PAK2基因可抑制膀胱癌细胞的增殖能力,促进细胞凋亡. miR-216a-5p可抑制小细胞肺癌的恶性进展,影响前列腺癌细胞的增殖、迁移和宫颈癌细胞的肿瘤发生.仅发现miR-216a在AP患者外周血中高表达,但miR-216a-5p在AP的增殖凋亡中的影响及作用机制尚不清楚.目的研究miR-216a-5p对AP腺泡细胞增殖、凋亡的影响及潜在的作用机制.方法用雨蛙素(caerulein, CAE)处理大鼠胰腺腺泡AR42J构建AP模型,设置miR-NC组(转染miR-NC)、miR-216a-5p组(miR-216a-5pmimics)、anti-miR-NC组(转染antimiR-NC)、anti-miR-216a-5p组(转染anti-miR-216a-5p)、pcDNA3.1组(转染pc DNA3.1)、pcDNA3.1-XIAP组(转染pcDNA3.1-XIAP)、anti-miR-216a-5p+si-NC组(共转染anti-miR-216a-5p和si-NC)、anti-miR-216a-5p+si-XIAP(共转染anti-miR-216a-5p和si-XIAP)组,均用脂质体法转染. qRT-PCR检测AR42J细胞中miR-216a-5p的表达水平; Western Blot检测蛋白表达; MTT法检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性.结果CAE处理AR42J细胞后,miR-216a-5p的表达水平显著升高(P0.05).抑制表达miR-216a-5p和过表达XIAP细胞活性显著升高,细胞凋亡率显著降低, Cyclin D1、Bcl-2蛋白的表达水平显著升高,P21、Bax蛋白的表达水平显著下降(P0.05). miR-216a-5p靶向负调控XIAP;抑制XIAP表达逆转了抑制miR-216a-5p对CAE处理的AR42J细胞增殖促进、凋亡抑制的作用.结论抑制miR-216a-5p表达可以抑制胰腺炎腺泡细胞凋亡,促进细胞增殖,其机制可能与靶向调控XIAP有关.可为AP诊断和治疗提供新靶点和新思路.     

miR-375调控PIAS1对急性胰腺炎腺泡细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨微小RNA-375(miR-375)对急性胰腺炎(AP)腺泡细胞增殖及凋亡的影响及其对信号转导和转录激活子1的活化抑制蛋白(PIAS1)的调控作用。方法用雨蛙素(CAE)处理胰腺腺泡细胞株(AR42J细胞)构建AP模型,实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)与Western印迹分别检测miR-375与PIAS1的表达。利用脂质体转染技术分别将anti-miR-NC、anti-miR-375、si-NC、si-PIAS1转染至AR42J细胞,同时将anti-miR-375与si-NC、si-PIAS1分别共转染至AR42J细胞后加入CAE处理细胞。噻唑蓝(MTT)实验与流式细胞仪分别检测AR42J细胞增殖及凋亡。双荧光素酶报告基因实验检测miR-375对PIAS1的靶向作用。Western印迹检测CyclinD1、P21、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白的表达。结果 CAE处理后AR42J细胞中miR-375的表达升高,而PIAS1的表达降低;双荧光素酶报告基因实验证实PIAS1是miR-375的直接靶点;转染anti-miR-375后,由CAE诱导的AR42J细胞凋亡明显受到抑制,而细胞增殖能力明显增强,CyclinD1、Bcl-2蛋白表达上调,P21、Bax蛋白表达下调(均P<0.05);共转染si-PIAS1后,明显促进CAE诱导的AR42J细胞凋亡,而抑制细胞增殖,CyclinD1、Bcl-2蛋白表达下调,P21、Bax蛋白表达上调(均P<0.05)。结论 miR-375在AP腺泡细胞中高表达,而PIAS1低表达,沉默miR-375可通过上调PIAS1表达而抑制腺泡细胞凋亡并促进细胞增殖进而减缓AP发展进程。     

miR-7靶向Sp3对急性胰腺炎腺泡细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

背景重症急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)是一种发病急、进展快、死亡率高的严重疾病,其病因复杂,近年来研究发现, miRNA在AP的发生和发展中发挥重要作用,研究miRNA在AP中的机制对于AP的治疗、预防等有一定的帮助.而miR-7与胃癌、肺癌、乳腺癌、胶质瘤等多种肿瘤的进展相关,但在AP中研究鲜有报道.目的研究miR-7对AP腺泡细胞增殖、凋亡的影响及潜在的作用机制.方法用雨蛙素处理大鼠胰腺腺泡AR42J构建AP模型,设置NC组、Cerulein组、miR-con组(转染miR-con)、miR-7组(转染miR-7mimics)、anti-miR-con组(转染anti-miR-con)、anti-miR-7组(转染anti-miR-7)、Cerulein+anti-miR-con组(Cerulein处理后转染antimiR-con)、Cerulein+anti-miR-7组(Cerulein处理后转染anti-miR-7)、Cerulein+pc DNA组(Cerulein处理后转染pcDNA)、Cerulein+pcDNA-特异性蛋白3(specific protein3,Sp3)组(Cerulein处理后转染pcDNA-Sp3)、Cerulein+anti-miR-7+si-con组(Cerulein处理后共转染anti-miR-7和si-con)、Cerulein+anti-miR-7+si-Sp3组(Cerulein处理后共转染anti-miR-7和si-Sp3),用脂质体法转染至AR42J细胞. ELISA法检测雨蛙素处理AR42J细胞的淀粉酶(Amylase, AMY)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α, TNF-α)和白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)的表达;qRT-PCR检测雨蛙素处理AR42J细胞中miR-7、Sp3 mRNA的表达水平;WesternBlot检测Sp3蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性.结果雨蛙素处理AR42J细胞后, AMY、TNF-α、IL-6的表达均呈现先升高后下降的趋势,且均在8h时达到最大,建模成功.相较于NC组, Cerulein组miR-7的表达水平显著升高; Sp3 mRNA和蛋白的表达水平显著降低(P0.01).相较于Cerulein+anti-miR-con组,Cerulein+anti-miR-7组miR-7的表达水平显著下降,细胞凋亡率显著降低(P0.01).相较于Cerulein+pcDNA组, Cerulein+pcDNA-Sp3组Sp3蛋白的表达水平显著升高,细胞凋亡率显著降低(P0.01). miR-7靶向负调控Sp3;抑制Sp3表达逆转了敲减miR-7对雨蛙素处理AR42J细胞的凋亡抑制作用.结论敲减miR-7表达可以抑制AP腺泡细胞凋亡,其机制可能与靶向调控SP3有关.可为AP诊断和治疗提供新靶点和新思路.     

miR-324-5p靶向调控CARD9对急性胰腺炎腺泡细胞增殖、凋亡的影响及机制

目的探讨微小RNA-324-5p(miR-324-5p)靶向调控胱天蛋白酶募集域蛋白(CARD)9对急性胰腺炎(AP)腺泡细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法采用雨蛙肽处理大鼠胰腺腺泡细胞株AR42J构建急性胰腺炎模型。实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)与Western印迹技术分别检测miR-324-5p、CARD9 mRNA及蛋白表达。应用脂质体转染技术分别将miR-NC、miR-324-5p mimic、si-NC、si-CARD9转染入AP腺泡AR42J细胞,噻唑蓝(MTT)与流式细胞仪分别检测AR42J细胞增殖及凋亡。双荧光素酶报告实验验证CARD9与miR-324-5p的作用关系。Western印迹检测细胞周期蛋白(Cyclin)D1、p21、p27、Bcl-2、Bax、酶切含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)-3蛋白表达。结果雨蛙肽素处理后AR42J细胞中miR-324-5p表达水平显著低于对照组,而CARD9 mRNA及蛋白表达水平显著高于对照组(P<0.05);分别转染miR-324-5p mimic、si-CARD9后,由雨蛙肽素诱导的AR42J细胞凋亡明显受到抑制,而细胞增殖能力明显增强,CyclinD1、Bcl-2蛋白表达上调,p21、p27、Bax、酶切caspase-3蛋白表达下调(均P<0.05);CARD9是miR-324-5p的靶基因;CARD9过表达逆转了miR-324-5p过表达对雨蛙肽诱导的胰腺炎腺泡细胞AR42J增殖和凋亡的作用。结论miR-324-5p可通过抑制CARD9表达进而促进AR42J细胞增殖,抑制细胞凋亡。     

miR-92a-3p靶向GPR124调控糖尿病肾病足细胞损伤的机制

目的研究miR-92a-3p对糖尿病肾病足细胞损伤的影响及其机制。方法构建高糖(30 mmol/L)诱导的小鼠足细胞损伤模型;将高糖+anti-miR-92a-3p组(转染anti-miR-92a-3p)、高糖+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、高糖+pcDNA组(转染pcDNA)、高糖+pcDNA-GPR124组(转染pcDNA-GPR124)、高糖+anti-miR-92a-3p+si-con组(共转染pcDNA-GPR124和si-con)、高糖+anti-miR-92a-3p+si-GPR124组(共转染pcDNA-GPR124和si-GPR124)至小鼠足细胞,用30 mmol/L高糖处理48 h。Western印迹检测各组细胞中结蛋白(Desmin)、G蛋白耦联受体(GPR)124的蛋白表达;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;qRT-PCR检测各组细胞中miR-92a-3p、GPR124的表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞荧光活性。结果与对照组相比,高糖处理组小鼠足细胞中Desmin蛋白表达和细胞凋亡率均显著升高,miR-92a-3p表达明显升高,GPR124表达明显降低(P<0.05);抑制miR-92a-3p、过表达GPR124均可下调Desmin蛋白表达和细胞凋亡率;miR-92a-3p可抑制WT-GPR124足细胞的荧光活性,且负调控GPR124的蛋白表达;敲减GPR124可逆转抑制miR-92a-3p对高糖诱导的小鼠足细胞的保护作用。结论抑制miR-92a-3p可保护高糖诱导的小鼠足细胞损伤,其机制可能与靶向GPR124有关,将可为糖尿病肾病的治疗提供新方向。     

PIAS1基因沉默对雨蛙肽诱导胰腺腺泡细胞凋亡的影响

活化STAT蛋白抑制物(PIAS)1基因沉默可增强雨蛙肽诱导的胰腺腺泡细胞炎症反应。目的:探讨PIAS1基因沉默对雨蛙肽刺激胰腺腺泡细胞凋亡的影响。方法:AR42J胰腺腺泡细胞在Lipofectamine~(TM)2000介导下转染PIAS1-siRNA和阴性siRNA。将细胞分为PIAS1-siRNA+雨蛙肽组、阴性siRNA+雨蛙肽组、脂质体+雨蛙肽组、PBS+雨蛙肽组和对照组。以DNA Ladder、Hoechst 33258染色检测细胞凋亡情况,流式细胞术测定细胞周期和细胞凋亡率,RT-PCR和蛋白质印迹法检测1353、Bax、Bcl-2、caspase-3 mRNA和蛋白表达。结果:与其余各组相比,PIAS1-siRNA+雨蛙肽组DNA梯度裂解条带明显增加,荧光着色阳性细胞数增多;G1期细胞数增多,S期细胞数减少,细胞凋亡率增加;p53、Bax、caspase-3 mRNA和蛋白表达明显上调,Bcl-2 mRNA和蛋白表达下调(P均0.05)。结论:PIAS1基因沉默可增强雨蛙肽活化的caspase-3凋亡途径诱导的胰腺腺泡细胞凋亡,为通过调控PIAS1表达治疗急性胰腺炎提供新的理论依据。     

miR-21对急性胰腺炎腺泡细胞凋亡的影响及机制

目的探讨miR-21对急性胰腺炎(AP)腺泡细胞凋亡的影响及其机制。方法以雨蛙素处理大鼠胰腺腺泡AR42J细胞,构建AP模型;酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞中淀粉酶(AMY)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6检测造模情况。采用RT-PCR检测miR-21的表达;以脂质体转染miRNA-21 inhibitor后,流式细胞仪检测AR42J细胞凋亡,Western印迹检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(酶切caspase)-3与第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源基因(PTEN)蛋白的表达。结果雨蛙素处理后,AR42J细胞中AMY、TNF-α和IL-6的表达均升高,建模成功。miR-21在AP环境下低表达,转染miRNA-21 inhibitor后,由雨蛙素诱导的细胞凋亡明显受到抑制,PTEN蛋白表达上调,酶切caspase-3蛋白表达下调。结论 miR-21在AP腺泡细胞中低表达,可能通过上调PTEN和下调酶切caspase-3蛋白表达抑制胰腺腺泡细胞凋亡,进而加重胰腺炎的发展。     

miR-200c-3p靶向XIAP调控缺氧复氧诱导的心肌细胞凋亡

目的探讨miR-200c-3p对缺氧复氧心肌细胞凋亡的影响及作用机制。方法构建缺氧复氧(H/R)H9c2细胞。运用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测细胞中miR-200c-3p、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)信使核糖核酸(mRNA)的表达。将H9c2细胞分为H/R+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、H/R+anti-miR-200c-3p组(转染anti-miR-200c-3p)、H/R+pcDNA组(转染pcDNA)、H/R+pcDNA-XIAP组(转染pcDNA-XIAP)、H/R+anti-miR-200c-3p+si-NC组(共转染anti-miR-200c-3p和si-NC)、H/R+anti-miR-200c-3p+si-XIAP组(共转染anti-miR-200c-3p和si-XIAP),用脂质体法转染至H9c2细胞,再进行缺氧复氧处理。免疫印迹(Western blot)、噻唑蓝(MTT)、流式细胞术检测细胞中XIAP、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase-3)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(cleaved Caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病2 X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病2(Bcl-2)的表达、细胞增殖、细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞中miR-200c-3p与XIAP的结合力。结果成功构建缺氧复氧H9c2细胞;与正常培养的H9c2细胞比较,H/R组H9c2细胞中miR-200c-3p表达明显上调,XIAP表达明显下调;抑制miR-200c-3p、过表达XIAP均可抑制H/R H9c2细胞的凋亡,下调cleaved Caspase-3、Bax,上调Bcl-2;miR-200c-3p可显著抑制XIAP 3′UTR野生型报告基因活性,并负向调控XIAP的表达;敲减XIAP可逆转抑制miR-200c-3p对H/R H9c2细胞的凋亡抑制作用。结论 miR-200c-3p可诱导缺氧复氧心肌细胞的凋亡,其机制与靶向XIAP有关,可为心血管疾病的治疗提供新靶点。     

LncRNA LUCAT1通过靶向miR-199a-5p调控宫颈癌细胞活性、侵袭迁移及其分子机制

目的研究长链非编码RNA肺癌相关转录产物(LUCAT)1对宫颈癌细胞的活性、迁移和侵袭的影响,并探讨其机制。方法运用qRT-PCR法检测宫颈癌细胞Hela、正常宫颈细胞Ect1/E6E7中LUCAT1、miR-199a-5p的表达;将si-con组(转染si-con)、si-LUCAT1组(转染si-LUCAT1)、miR-199a-5p组(转染miR-199a-5p模拟物)、miR-NC组(转染miR-NC)、si-con+anti-miR-199a-5p组(共转染si-con和anti-miR-199a-5p)、si-LUCAT1+anti-miR-199a-5p组(共转染si-LUCAT1和anti-miR-199a-5p),均用脂质体法转染至Hela细胞;噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞的活性;Transwell法检测各组细胞的迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果与正常宫颈细胞Ect1/E6E7相比,宫颈癌细胞Hela中LUCAT1表达显著升高,miR-199a-5p表达显著降低;敲减LUCAT1、过表达miR-199a-5p均可明显抑制Hela细胞的活性、迁移和侵袭;miR-199a-5p可抑制野生型LUCAT1细胞的荧光活性,且LUCAT1可负向调控miR-199a-5p的表达;抑制miR-199a-5p可逆转敲减LUCAT1对Hela细胞的活性、迁移、侵袭的抑制作用。结论 LUCAT1可促进宫颈癌细胞的活性、迁移、侵袭,其机制可能与靶向miR-199a-5p有关,将可为宫颈癌的治疗提供靶点。     

沙利度胺通过miR-29c-3p/TGIF2途径调控血管内皮细胞增殖凋亡的分子机制

目的研究沙利度胺对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖、凋亡的影响及其机制。方法运用qRT-PCR检测沙利度胺处理的HUVECs细胞中miR-29c-3p、同源异型结构域蛋白转化生长影响因子(TGIF)2的表达;miR-29c-3p组(转染miR-29c-3p mimics)、miR-NC组(转染miR-NC)、沙利度胺+anti-miR-29c-3p组(转染anti-miR-29c-3p再用沙利度胺处理)、沙利度胺+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC再用沙利度胺处理)、si-con组(转染si-con)、si-TGIF2组(转染si-TGIF2)、沙利度胺+pcDNA组(转染pcDNA再用沙利度胺处理)、沙利度胺+pcDNA-TGIF2组(转染pcDNA-TGIF2再用沙利度胺处理)均用脂质体转染至HUVECs,再用20μg/ml沙利度胺处理48 h;噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖;流式细胞术检测各组细胞凋亡;Western印迹检测各组细胞中TGIF2的蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞荧光活性。结果与对照组HUVECs细胞相比,沙利度胺处理的HUVECs增殖显著下降,细胞凋亡率和miR-29c-3p的表达明显上升(P0.05);过表达miR-29c-3p、敲减TGIF2均可抑制HUVECs增殖,促进凋亡;抑制miR-29c-3p、过表达TGIF2均可逆转沙利度胺对HUVECs的增殖抑制和凋亡促进作用。miR-29c-3p靶向TGIF2。结论沙利度胺可抑制血管内皮细胞增殖,促进凋亡,其机制可能与调控miR-29c-3p/TGIF2信号通路有关,为沙利度胺用于疾病治疗提供依据。     

MiR497HG靶向miR-588调控肺癌细胞增殖、迁移侵袭和凋亡的机制研究

目的研究MiR497HG对肺癌细胞增殖、迁移侵袭及凋亡的影响,并探讨其机制。方法运用RT-PCR法检测永生化正常肺上皮细胞BEAS-2 B、肺癌细胞NCI-H1975、NCI-H460、A549中MiR497HG、miR-588的表达;将blank组(不做任何处理)、si-NC组(转染si-NC)、si-MiR497HG组(转染si-MiR497HG)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-588组(转染anti-miR-588)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-588组(转染miR-588 mimics)、si-MiR497HG+anti-miR-NC组(共转染si-MiR497HG和anti-miR-NC)、si-MiR497HG+anti-miR-588组(共转染si-MiR497HG和anti-miR-588),均用脂质体法转染至NCI-H1975细胞;MTT法检测细胞增殖;Transwell小室检测细胞的迁移侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞中MiR497HG与miR-588的结合力。结果与永生化正常肺上皮细胞BEAS-2 B相比,肺癌细胞NCI-H1975、NCI-H460、A549中MiR497HG表达显著升高,miR-588表达显著降低(P0.05);抑制MiR497HG或过表达miR-588均可抑制NCI-H1975细胞的增殖、迁移侵袭,促进凋亡;miR-588可抑制野生型MiR497HG细胞的荧光活性,且可负向调控MiR497HG的表达;过表达MiR497HG可逆转miR-588对肺癌细胞的增殖、迁移侵袭抑制和凋亡促进作用。结论长链非编码RNA MiR497HG可促进肺癌细胞增殖、迁移侵袭,抑制凋亡,其机制可能与靶向抑制miR-588有关,将可为肺癌的治疗提供新靶点。     

miR-192-3 p调控PI3 K/Akt信号通路对小鼠巨噬细胞免疫细胞因子表达的影响

目的研究miR-192-3p对小鼠巨噬细胞免疫细胞因子表达的影响及机制。方法用HSP40诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7;将RAW264.7+HSP40(10μg/mL)组(10μg/mL HSP40处理)、RAW264.7+HSP40(10μg/mL)+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC并用10μg/mL HSP40处理)、RAW264.7+HSP40(10μg/mL)+anti-miR-192-3p组(转染anti-miR-192-3p并用10μg/mL HSP40处理)、RAW264.7+miR-NC组(转染miR-NC)、RAW264.7+miR-192-3p组(转染miR-192-3p mimics)、RAW264.7+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、RAW264.7+anti-miR-192-3p组(转染anti-miR-192-3p)、RAW264.7+HSP40(10μg/mL)+pcDNA3.1组(转染pcDNA3.1并用10μg/mL HSP40处理)、RAW264.7+HSP40(10μg/mL)+pcDNA3.1-AKT1组(转染pcDNA3.1-AKT1并用10μg/mL HSP40处理)、RAW264.7+HSP40(10μg/mL)+anti-miR-192-3p+si-NC组(共转染anti-miR-192-3p和si-NC并用10μg/mL HSP40处理)、RAW264.7+HSP40(10μg/mL)+anti-miR-192-3p+si-AKT1组(共转染anti-miR-192-3p和si-AKT1并用10μg/mL HSP40处理),用脂质体法转染至RAW264.7细胞;qmiR-506法检测细胞中miR-192-3p的表达;ELISA实验检测细胞中IL-16、IL-18的含量;Western blot检测细胞中AKT1的蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性。结果与RAW264.7相比, HSP40处理的RAW264.7细胞中miR-192-3p的表达显著升高,AKT1的蛋白表达、IL-16、IL-18的含量均显著升高(P0.05)。抑制miR-192-3p、过表达AKT1可明显下调HSP40诱导的RAW264.7细胞中IL-16、IL-18含量;miR-192-3p可抑制野生型AKT1细胞的荧光活性,并负向调控AKT1的表达。抑制AKT1可逆转抑制miR-192-3p对RAW264.7细胞的炎性因子IL-16、IL-18的抑制作用。结论 miR-192-3p可促进小鼠巨噬细胞免疫细胞因子的分泌,其机制可能与直接调控PI3K/Akt信号通路相关,将可为肺炎的治疗提供新靶点。     

白山毛桃根提取物联合miR-135a-5p抑制宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭及迁移的机制

目的 探讨白山毛桃根提取物对宫颈癌细胞HeLa增殖、侵袭及迁移的影响及分子机制。方法 不同浓度的白山毛桃根提取物处理HeLa细胞,将miR-NC、miR-135a-5p mimics、anti-miR-NC、anti-miR-135a-5p分别转染至HeLa细胞,将anti-miR-NC、anti-miR-135a-5p分别转染至HeLa细胞后用40 mg/ml白山毛桃根提取物处理细胞;噻唑蓝(MTT)法、克隆形成实验、Transwell实验分别检测细胞增殖、侵袭及迁移;qRT-聚合酶链反应(PCR)法检测miR-135a-5p的表达量;Western印迹法检测基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9、p-磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)和p-蛋白激酶B(Akt)蛋白表达量。结果 白山毛桃根提取物可显著降低细胞活力、克隆数、侵袭和迁移细胞数、miR-135a-5p表达和MMP2、MMP9、p-PI3K、p-Akt蛋白水平(P<0.05);转染anti-miR-135a-5p可降低细胞活力、克隆数、侵袭和迁移细胞数、MMP2、MMP9、p-PI3K、p-Akt蛋白水平(P<0.05...     

circNT5E靶向miR-377-3p对ox-LDL诱导的血管平滑肌细胞增殖、迁移侵袭的影响

目的探讨环状RNA NT5E(circNT5E)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管平滑肌细胞增殖、迁移侵袭的影响,并探讨其机制是否与调控miR-377-3p表达有关。方法将人主动脉血管平滑肌细胞(HASMCs)分为对照(Con)组(正常培养的细胞)、ox-LDL组(50 μg/ml ox-LDL)、ox-LDL+si-NC组(转染小干扰RNA阴性对照,50 μg/ml ox-LDL)、ox-LDL+si-circNT5E组(转染si-circNT5E,50 μg/ml ox-LDL)、ox-LDL+miR-NC组(转染miR-NC,50 μg/ml ox-LDL)、ox-LDL+miR-377-3p组(转染miR-377-3p模拟物,50 μg/ml ox-LDL)、ox-LDL+si-circNT5E+anti-miR-NC组(转染si-circNT5E和anti-miR-NC,50 μg/ml ox-LDL)、ox-LDL+si-circNT5E+anti-miR-377-3p组(转染si-circNT5E和anti-miR-377-3p,50 μg/ml ox-LDL)。实时定量PCR(RT-qPCR)检测circNT5E和miR-377-3p表达;细胞计数法、Transwell实验检测细胞活力、迁移和侵袭细胞数。双荧光素酶报告实验和RT-qPCR确定circNT5E对miR-377-3p的靶向作用。结果 ox-LDL处理的HASMCs中circNT5E表达量、细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著升高(P0.05),miR-377-3p表达量显著降低(P0.05)。干扰circNT5E表达或过表达miR-377-3p可减弱ox-LDL对HASMCs增殖、迁移和侵袭的促进作用(P0.05)。circNT5E直接结合miR-377-3p,干扰circNT5E促进miR-377-3p表达,而过表达circNT5E抑制miR-377-3p表达(P0.05)。抑制miR-377-3p表达可逆转干扰circNT5E对ox-LDL诱导的HASMCs增殖、迁移和侵袭的抑制作用(P0.05)。结论干扰circNT5E表达可抑制ox-LDL诱导的血管平滑肌细胞增殖、迁移侵袭,其机制与上调miR-374a-3p表达有关。     

PIAS1基因沉默对胰腺腺泡细胞炎症反应的影响

目的 观察活化信号转导和转录激活因子的蛋白抑制因子-1(PIAS1)基因特异性siRNA干扰大鼠胰腺腺泡细胞株AR42J后对雨蛙素诱导炎症反应的影响,探讨其在胰腺炎发病中的作用.方法 采用脂质体法将靶向PIAS1的siRNA和阴性siRNA转染AR42J细胞,24 h后分别加入雨蛙素继续培养24 h.同时设脂质体+雨蛙素组、雨蛙素组及仅加PBS的对照组.Western blotting检测p38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)及磷酸化p38MAPK(P-p38MAPK)表达;RT-PCR及Western blotting检测各组细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、IL-6、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的mRNA和蛋白表达.结果 siRNA+雨蛙素组、阴性siRNA+雨蛙素组、脂质体+雨蛙素组、雨蛙素组及对照组细胞p38MAPK表达量分别为1.93±0.11、1.22±0.10、1.30±0.17、1.32±0.21、0.12±0.02;P-p38MAPK表达量分别为2.10±0.25、1.36±0.20、1.26±0.15、1.23±0.25、0.58±0.48,siRNA+雨蛙素组较其余各组明显增加(P值均＜0.05).siRNA+雨蛙素组细胞TNF-α、IL-1β、IL-6、MMP-9 mRNA表达量分别为1.66±0.15、1.66±0.15、1.90±0.01、1.56±0.20;蛋白的表达量分别为2.06±0.37、2.20±0.34、1.80±0.10、1.17±0.05,均较其他雨蛙素处理组表达上调(P值均＜0.05).结论 PIAS1参与雨蛙素诱导的胰腺腺泡细胞p38MAPK活性与下游炎症介质的表达调控.     

过表达miR-489-3p通过靶向调控MCM2抑制肺癌细胞增殖、促进细胞凋亡的分子机制

目的探讨miR-489-3p对肺癌细胞增殖和凋亡的影响及潜在的作用机制。方法将miR-NC组(转染miR-NC)、miR-489-3p组(转染miR-489-3p mimics)、si-NC组(转染si-NC)、si-微小染色体维持蛋白(MCM)2组(转染si-MCM2)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、anti-miR-489-3p组(转染anti-miR-489-3p)、miR-489-3p+pcDNA组(共转染miR-489-3p和pcDNA)、miR-489-3p+pcDNA-MCM2组(共转染miR-489-3p和pcDNA-MCM2)、miR-NC+WT-MCM2组(共转染miR-NC和WT-MCM2)、miR-NC+MUT-MCM2组(共转染miR-NC和MUT-MCM2)、miR-489-3p+WT-MCM2组(共转染miR-489-3p和WT-MCM2)、miR-489-3p+MUT-MCM2组(共转染miR-489-3p和MUT-MCM2),均用脂质体法转染至肺癌A549细胞;运用qRT-PCR检测miR-489-3p和MCM2 mRNA的表达水平;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western印迹检测蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性。结果相较于正常肺上皮细胞BEAS-2B,肺癌细胞A549、H1299、SPC-A1中miR-489-3p表达水平均显著降低,MCM2 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P0.05)。miR-489-3p过表达、MCM2抑制表达均可抑制A549细胞增殖活力,促进细胞凋亡;抑制细胞周期蛋白(Cyclin)D1、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2蛋白表达水平,促进p21、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(cleaved caspase)-3、Bcl-2相关x蛋白(Bax)蛋白表达。miR-489-3p可靶向调控MCM2表达;MCM2过表达逆转了miR-489-3p过表达对肺癌A549细胞增殖抑制和凋亡促进的作用。结论 miR-489-3p可抑制肺癌A549细胞的增殖、促进其凋亡,其机制可能与靶向MCM2有关,将可为肺癌的预防和治疗提供新靶点。     

山姜素下调微小RNA146a-5p表达减轻血管内皮细胞氧化应激损伤

目的：探讨山姜素调控微小RNA(miR)146a-5p表达对内毒素诱导的血管内皮细胞氧化应激损伤的影响。方法：采用1μg/mL的脂多糖处理人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)构建细胞损伤模型。将HUVEC分为对照组、LPS组、LPS+山姜素低、中、高剂量组、LPS+anti-miR阴性对照组、LPS+anti-miR-146a-5p组、LPS+山姜素+miR-NC阴性对照组、LPS+山姜素+miR-146a-5p组。采用生化法检测超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性以及丙二醛(MDA)水平。采用流式细胞术检测HUVEC的凋亡率。采用实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测miR-146a-5p表达。结果：与Con组比较，LPS组细胞凋亡率、MDA水平、miR-146a-5p表达显著升高，SOD和GSH-Px活性显著降低。与LPS组比较，LPS+山姜素低、中、高剂量组细胞凋亡率、MDA水平、miR-146a-5p表达显著降低，而SOD和GSH-Px活性显著升高(P均<0.05)。与LPS+anti-miR-阴性对照组比较，LPS+anti-miR-14...     

上调miR-181a-5p对宫颈癌细胞增殖、凋亡能力的影响及相关机制

目的 研究上调微小RNA(miR)-181a-5p对宫颈癌细胞增殖、凋亡能力的影响及相关机制。方法 宫颈癌细胞株经过培养、转染后,分为miR-181a-5p上调组、miR-181a-5p下调组、宫颈癌组,miR-181a-5p及细胞增殖相关基因的表达采用荧光定量-聚合酶链反应(PCR)进行检测,观察3组细胞增殖、凋亡能力,凋亡相关蛋白表达及信号通路相关蛋白表达采用Western印迹进行检测。结果 miR-181a-5p上调组miR-181a-5p、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2相关蛋白(Bax)表达明显高于宫颈癌组和miR-181a-5p下调组,增殖细胞核抗原(PCNA)、肿瘤增殖抗原(Ki)67、Bcl-2、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)表达明显低于宫颈癌组和miR-181a-5p下调组(P<0.05);miR-181a-5p下调组miR-181a-5p、Caspase-3、Bax表达明显低于宫颈癌组,PCNA、Ki67、Bcl-2、PI3K、Akt表达明显高于宫颈癌组(P<0.05)。在24、48、72...