唾液中HIV抗体快速检测诊断胶体金免疫层析试纸条的研制

制备一种适于早期HIV的大范围筛查使用的检测人唾液中抗HIV-1抗体的胶体金免疫层析试纸条.采用柠檬酸三钠还原法制备直径为19nm的胶体金颗粒,标记HIV-1gp41抗原,制备胶体金免疫复合物,按常规组装成免疫层析检测试纸条.结果表明:阳性HIV患者唾液中的抗HIV抗体与测试条上金标记物结合后沿着硝酸纤维素膜移动,与膜上的固相抗原结合形成肉眼可见的红色圆点.胶体金颗粒粒径均一,胶体金免疫复合物性能稳定,特异性强,试纸条检测时间只需10～20min.制备的胶体金免疫层析试纸条检测唾液中HIV抗体,使用安全,简便快速,结果准确,适用于基层医疗单位使用和对大量人群的规模筛查等.     

烟草花叶病毒快速检测方法的建立及应用

应用单克隆抗体技术获得抗烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)单克隆抗体,并通过胶体金标记技术,免疫层析快速检测技术和SQUID磁学定量测定技术建立起烟草花叶病毒的快速检测方法,并开发出用于定性检测的TMV胶体金快速检测试纸及用于定量检测的TMV纳米磁珠快速检测试纸,其检测灵敏度分别为1 ng/mL和0.1 ng/mL.所建立的方法操作简单,快速,灵敏度高,特异性好,是作为烟草育苗中各种TMV无症和有症烟株现场筛查的有效手段.     

金黄色葡萄球菌肠毒素B的原核表达、纯化及鉴定

为高效获取金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)用于SEB的快速检测,通过原核表达方法表达SEB,对其纯化方法进行研究,并通过Western-blot和制备的SEB纳米磁性免疫层析快速检测试纸条检测其抗原性。研究表明:SEB成功克隆入原核表达载体pET22b(+),并在E.coil BL21(DE3)中得到有效表达,表达量达65.8%;采用Ni柱亲和层析和DEAE阴离子层析两步纯化得到纯度为95.2%的SEB,Western-blot和SEB免疫层析快速检测试纸条检测显示所纯化的重组SEB具有SEB的抗原性,可用于SEB快速检测试纸的应用研究。     

大肠杆菌核酸适配体筛选的研究

由于传统微生物检测存在步骤繁琐、耗费时间、成本较高等缺点,因此研发快速有效检测微生物的新技术新方法显得尤为必要.本文利用whole-cell SELEX技术,进行了大肠杆菌活细胞核酸适配体的筛选,对单链DNA的制备鉴定、每轮筛选核酸文库的检测、核酸适配体的扩增克隆等内容进行了研究,在筛选过程中成功制备了单链DNA,并对整个筛选过程的核酸适配体库进行监测,保证了筛选的顺利进行,并对核酸适配体库进行了扩增和克隆,最终获得靶向大肠杆菌的核酸适配体序列,这将有助于基于核酸适配体的微生物检测新方法的建立.     

鸡传染性支气管炎病毒抗体胶体金免疫层析试纸条的研制

[目的]建立一种快速、灵敏的胶体金免疫层析法(Colloidal-gold immunochromatography assay),用以检测禽类早期感染鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)和监测IBV疫苗接种免疫水平.[方法]将重组IBV核衣壳(Nucleocapsid,N)蛋白包被在在试纸条检测线,羊抗兔IgG包被在试纸条控制线,用胶体金-兔抗鸡IgG偶联物作为示踪剂,检测血清中IBV抗体.[结果]制备所得的胶体金免疫层析试纸条与IBV抗体阳性血清反应呈阳性,与鸡新城疫病毒抗体阳性血清、鸡传染性法氏囊病毒抗体阳性血清、鸡毒霉形体抗体阳性血清和SPF标准鸡血清未发生交叉反应;当IBV抗体阳性血清以1:35比例稀释后,依然可以用该试纸条检出;该试纸条在60 d的保存期内重复性良好;以从不同养殖场采集到的鸡血清样本作为测试对象,比较该试纸条和进口 ELISA试剂盒的检测结果,两者符合率为97.44％.[结论]成功制备了检测耗时短、检测限低、特异性强、稳定性好的IBV抗体检测胶体金免疫层析试纸条,为鸡传染性支气管炎的早期诊断以及免疫监测提供了简便高效的技术方法.     

大肠杆菌O157∶H7胶体金免疫层析快速检测法的建立

建立一种大肠杆菌O157∶H7的胶体金免疫层析快速筛查方法.利用胶体金免疫层析技术,采用双抗体夹心法检测大肠杆菌O157∶H7,对该法进行敏感性、特异性和食品样品的适用性分析.该法能在10 min内完成检测;该试纸条仅与O157∶H7阳性样品发生特异性反应;大肠杆菌O157∶H7的最低检出浓度为1×105 cfu/mL.新建立的大肠杆菌O157∶H7胶体金免疫层析试验简便、快速,特异性和灵敏度较好,适用于现场样品的快速筛查.     

上转换荧光-适配体免疫层析试纸条的构建及其在黄曲霉毒素B1检测上的应用

食品及农产品中,因真菌而产生的黄曲霉毒素B1是人们健康的一大威胁.因此,探寻一种简便快速检测黄曲霉毒素B1的方法对食品安全、农产品质量等方面具有重要意义.该文通过配体交换的方法,使用磷酸化的黄曲霉毒素B1适配体将油酸分子包裹的油溶性上转换纳米颗粒改性为水溶性纳米颗粒.在构建水溶性纳米荧光探针的同时,保留了适配体识别黄曲霉毒素B1的能力,结合免疫层析试纸条,采用小分子竞争法快速定量检测黄曲霉毒素B1.该检测方法的线性范围为5～100ng/mL,检测限为2.4ng/mL.将该方法用于花生中黄曲霉毒素B1的检测,其加标回收率为93.8%～111.6%.     

盐酸克伦特罗快速检测试纸条的应用探讨

采用免疫层析快速检测试纸条,检测盐酸克伦特罗标准品及各种猪尿样本,并与酶联免疫检测方法(ELISA)进行比对,结果表明,试纸条检测结果与ELISA符合性较好,适用于盐酸克伦特罗的现场快速检测.     

牛奶中三聚氰胺残留胶体金免疫层析快速检测方法研究

为建立牛奶中三聚氰胺免疫层析快速检测方法,采用胶体金偶联特异性三聚氰胺抗体,优化试纸条T线抗原包被量、金标抗体用量、二抗稀释倍数等条件,构建三聚氰胺免疫层析试纸条.结果表明,T线抗原包被量为0. 25μg/mL,金标抗体用量为9. 0μL/条,二抗稀释倍数为1:100时效果最佳;最优条件下该试纸条的最低检出限为0. 25μg/mL,结果可在5 min内进行判读,且牛奶样品不需任何处理可直接进行测定.本研究建立的免疫检测方法适用于牛奶中三聚氰胺的检测.     

睡眠类特膳食品中非法添加地西泮的快速检测

为快速检测特膳食品中非法添加的地西泮,文章基于经典的免疫层析侧流试纸(lateral flow strips, LFS)结合金纳米粒子(gold nanoparticles, GNPs)标记,建立一种快速、简单、方便的胶体金试纸条检测方法。结果表明：制备的试纸条能够在不到10 min的时间内完成检测,且无需复杂的预处理过程,特异性好,灵敏度高,视觉检测限可低至10.0μg/L。该方法操作简单、安全便捷,可以有效地实现睡眠类特殊膳食食品中非法添加地西泮的快速检测。     

胶体金测试条快速定量测定呕吐毒素技术在粮食中的应用

采用胶体金测试条法对根食中呕吐毒素进行快速定量检测,结果表明,呕吐毒素的检测限为118μg/kg,定量限为316μg/kg,500-5 000 μg/kg质量浓度范围内,相关系数：为0. 9987.采用有证实物参考物质进行比较,正确度为90. 3%一116.6%,变异系数为4. 7%一19.6%.采用配对t-检验,与高效液相色谱法的测定结果相比较,二者无显著差异.     

Stable silver nanoparticles–aptamer bioconjugates for cellular prion protein imaging

Combining the unique optical properties of metal nanoparticles and the specific recognition of aptamer,aptamer–nanoparticle conjugates have been extensively used in a wide range of applications,particularly multifunctional nanoparticles for cell detection and molecular imaging.Conventional conjugates prepared by chemisorption of monothiol-modified oligonucleotides onto nanoparticle surfaces suffer from a lack of stability when exposed to a variety of small molecules.If silver is used in place of gold,then this lack of stability is even more pronounced.In this study,we reported here the effective and facile strategy of preparing stable silver nanoparticle–aptamer conjugates by in situ generation of strong metal affinity capping ligands,dithiocarbamates modified anti-prion protein aptamer.The conjugates produced are stable and can withstand NaCl concentration at0.25 mol/L.Meanwhile,they could be applied in the cellular prion protein imaging successfully.     

辣椒、花椒中罗丹明B免疫层析分析

为建立以胶体金标记抗体为基础的罗丹明B(RB)快速检测技术,利用戊二醛法将RB的衍生物罗丹明123(R123)与牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)分别合成完全抗原(R123-BSA)和包被抗原(R123-OVA),对雌性大耳白兔皮下注射R123-BSA获得多克隆抗体.胶体金作为示踪标记物标记到硝酸纤维素膜(NC膜)上,涂覆R123-OVA作为检测线,用羊抗兔IgG作为质控线,通过优化实验条件,开发了渗滤式胶体金免疫快速检测试纸条,研制出RB标准品浓度比色卡.以比色卡作为判定依据,以辣椒、花椒为研究对象,消除基质影响,进行试纸条检测.结果表明:RB线性为0.01~20 ng/mL,其最低检出限为0.5 ng/mL,试纸条显色结果明显.该试纸条实验成功,无需特殊设备即可实现现场快速检测,适用于快速定性检测香料中RB.     

Simultaneous ultrastructural demonstration of multiple peptides in endocrine cells by a novel immunocytochemical method.

Current immunocytochemical techniques detect all antibodies that react with tissue. Unfortunately, some of these antibodies may react with antigens other than those intended. Such problems are minimised by using sets of antibodies detecting different regions of the desired antigen. However, as immunocytochemical methods can now detect very low antibody concentrations, the purity of antisera is critical. Furthermore, although antisers may be purified by affinity chromatography, difficulties in recovering high-avidity antibodies cause most affinity-purified antisera to be enriched in low-avidity antibodies, which may be dislodged during staining. We have therefore developed, and describe here, a new ultrastructural post-embedding staining technique, based on the divalency of IgG molecules and using antigen-coated colloidal gold granules. Previously, colloidal gold-labelled antibodies have been used for post-embedding staining. Unlike our gold-labelled antigen detection (GLAD) technique, however, these methods do not differentiate between specific and nonspecific antibodies. The GLAD method detects only specific antibodies and does not select against high-avidity antibodies, and in this it resembles the radioimmunocytochemical method. However, the GLAD method differs from the latter in that it is useful for ultrastructural studies, does not require autoradiography and allows simultaneous detection of multiple antigens. Moreover, specific activity compared with background may be quantitated.     

胶体金免疫层析技术定量检测人绒毛膜促性腺激素

采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,用胶体金标记和双抗体夹心免疫层析方法,建立对人绒毛膜促性腺激素的快速定量检测方法．该检测方法可以在15min内完成对HCG的定量检测,灵敏度可达25mIU／mL,线性范围25～10000mIU／mL．与人促黄体生成素（hLH）、人促甲状腺激素（hTSH）、人卵泡刺激素均无交叉反应,所建立的检测人绒毛膜促性腺激素的胶体金免疫层析方法,能快速、灵敏、特异、准确地检测样品中的人绒毛膜促性腺激素,在异位妊娠的早期诊断及过程监控中具有较为广阔的应用前景．     

基于胶体金标记银增强的日本血吸虫免疫传感器

 提出一种高灵敏的、基于银增强放大和免疫胶体金技术压电石英晶体免疫传感器。采用夹心法模式,在电极表面固定日本血吸虫抗原,用以捕获血清中的日本血吸虫兔抗血吸虫抗体,再与胶体金标记的羊抗兔IgG二抗形成免疫复合物,加入银增强溶液,通过胶体金催化银离子还原,使大量银沉积在纳米金周围,提高压电石英晶体免疫传感器的灵敏度。结果表明,基于胶体金标记银增强的日本血吸虫压电石英晶体免疫传感器,对兔抗血吸虫抗体具有较高的识别能力,其操作简单、灵敏度高、线性范围宽、检测下限低。将该方法应用于兔血清中日本血吸虫抗体的测定,取得了满意结果。     

食品中四环素残留快速检测方法的初步建立

为了建立金标记快速检测试纸条检测食品中四环素(TC)残留的新方法,用硝酸纤维素微孔滤膜(NC膜)作为包被材料;实验室自制金标记抗TC单抗,选择原溶胶40%制备金标记抗体溶胶;以TC-BSA包被检测线(T线),包被浓度选择1.5 mg/mL;实验室自制兔抗鼠IgG包被质控线(C线),包被浓度选择2.5 mg/mL.该试纸条灵敏度可达50 ng/mL,与酶联免疫法试剂做对比,100份牛奶样品的灵敏度等各项指标符合率为100%.该试纸条具有质量优良、操作简便、不需仪器设备、保质期长等特点,适用于食用动物养殖场、食品加工企业和食品进出口检验检疫等单位食品中TC的快速检测.     

检测CyPA自身抗体滴金免疫测定法的建立

建立一更快速、简便的检测人血清抗ＣｙＰＡ自身抗体的方法．用重组人ＣｙＰＡ和胶体金标记的蛋白Ａ建立了检测抗ＣｙＰＡ自身抗体的滴金免疫测定法．将ｒｈＣｙＰＡ点样包被于硝酸纤维素膜,抗体在血清渗滤过程中与膜上抗原反应而固定,通过胶体金标记的蛋白Ａ直接显色,阳性结果在膜中央出现一红色斑点．整个测定过程在５ｍｉｎ内完成．与ＥＬＩＳＡ法对比检测了４５份ＳＬＥ病人血清,两法均阳性２０份,均阴性２３份,总符合率为９５．６％．本法简便易行,耗时短,试剂安全、灵敏、特异,便于常规应用     

金胶/碳球复合纳米材料的制备及表征

通过微波水热法,以葡萄糖水溶液为原料,制备了单分散的溶胶碳球,用自组装方法把金胶纳米粒子修饰在碳球表面合成了金胶/碳球纳米复合材料。通过扫描电镜、透射电镜、红外光谱及循环伏安等技术对最终产物的形貌、组成和光学性质进行了表征。由于所得到的金胶/碳球复合材料具有很好的化学稳定性与无毒性,同时金胶纳米粒子具有生物相容性,该复合材料可作为载体材料应用于生物分析。     

Detection of immunoglobulin E using an aptamer based dot-blot assay

A novel aptamer based dot-blot assay for the detection of immunoglobulin E (IgE) was developed. A biotinylated aptamer was employed as the bio-recognition element to specifically interact with the target protein immobilized onto a nitrocellulose membrane substrate. Avidin conjugated horseradish peroxidase was introduced onto the membrane through the biotin-avidin system to catalyze the hydrogen peroxide mediated oxidation of 3,3’,5,5’-tetramethylbenzidine, thereby producing the blue-colored insoluble product. The intensity of the dots increased as the concentration of IgE increased. The spot intensity was quantified using a simple portable instrument. A linear response relationship between the spot intensity and the concentration of IgE over the range of 50 nmol/L to 1 μmol/L was obtained. The detection limit for IgE using the aptamer-based assay was 2.89 nmol/L. This assay was found to discriminate IgE from non-target proteins such as thrombin, bovine serum albumin and immunoglobulin G.