新近发现的细小病毒与多瘤病毒感染

2005年以来,研究人员又相继发现了新的与人类疾病相关的DNA病毒,包括属于细小病毒科的人博卡病毒（humanbocavirus,HBoV,2005年）、人细小病毒4（humanparvovirus4,PARV4,2005年）与人细小病毒5（humanparvovirus5,PARV5,2006年[33）;属于多瘤病毒科的KI多瘤病毒（KIpolyomavirus,KIPyV,2007年）、wu多瘤病毒（wupolyomavirus,WUPyV,2007年）及MC多瘤病毒（MCPolyomavirus,MCPyV,2008年）等。     

兰州地区呼吸道感染患儿中人类博卡病毒1～3型检测与临床研究

目的了解兰州地区急性呼吸道感染患儿中人博卡病毒1—3型（HBoV1～3）感染的临床及分子流行病学特征。方法收集兰州大学第一医院2009年12月至2010年11月急性呼吸道感染患儿鼻咽分泌物及咽拭子标本524份,用：巢氏PCR扩增人博卡病毒（HBoV）NS1片段,检测HBoV1～3;同时PCR检测常见呼吸道病毒。结果524份标本中检出HBoV43例,检出率为8．2％,仅次于鼻病毒、呼吸道合胞病毒、副流感病毒3型;混合感染率为69．8％。其中人博卡病毒1型（HBoV1）在下呼吸道感染中检出率显著高于上呼吸道感染的检出率;2例人博卡病毒2型（HBoV2）患儿都出现胃肠道症状,与标准株GU048662．1的核苷酸同源性分别为99％和100％;1例人博卡病毒3型（HBoV3）与标准株HM132056．1的核苷酸同源性为99％。结论本地区儿童急性呼吸道感染中博卡病毒感染以HBoV1为主,首次检出HBoV3;人博卡病毒与其他病毒有较高的合并感染。人博卡病毒是本地区儿童急性呼吸道感染的重要病原之一。     

儿童博卡病毒感染的临床特点

目的了解儿童博卡病毒(Human bocavirus,HBoV)感染的临床特征,探讨博卡病毒感染的疾病相关性。方法收集从2005年10月至2006年2月因急性呼吸道感染住院儿童鼻咽抽吸物(nasopharyngeal aspirates,NPA)148份,并采集了2份博卡病毒呼吸道样本阳性患者的血清。采用聚合酶链式反应(PCR)扩增的方法,对鼻咽抽吸物及血清标本进行了检测,并进行序列测定。结果从148份急性呼吸道鼻咽抽吸物中检出11份博卡病毒感染阳性,阳性检出率为7.4%,所获得的2例博卡感染血清核酸扩增也呈阳性。该11例博卡病毒阳性患者临床主要表现为支气管炎,支气管肺炎或肺炎症状,部分患者伴随有腹泻症状。结论博卡病毒感染患者均有下呼吸道感染表现,博卡病毒可能是引起下呼吸道感染的一个重要病原;博卡病毒血清阳性提示,博卡病毒有可能引起病毒血症;博卡病毒感染除表现下呼吸道症状外,有可能引起肠道等其他相关症状。     

重症急性呼吸道感染儿童中人博卡病毒的分型检测与基因进化分析

目的 了解重症急性呼吸道感染住院儿童中人博卡病毒（HBoV）的感染状况,流行病学特征及其进化特征.方法 采用巢式PCR的方法,对来自北京儿童医院重症急性呼吸道感染住院儿童的259份鼻咽抽吸物,进行人博卡病毒（HBoV）分型检测与测序,同时进行了合并感染检测、流行病学、临床特点及基因多态性分析.结果 共检出56份人博卡病毒感染阳性标本,阳性率为21.6％,[95％ CI（16.0％～27.3％）,P＜0.0001],其中2岁以下儿童感染率较高.与其他呼吸道常见病毒的合并感染率为94.6％.HBoV阳性产物测序分析发现,人博卡病毒1型占96.4％ （54/56）,2、3型各1份.HBoV阳性株分型区（VP1/VP2）序列变异不明显.结论 人博卡病毒是儿童急性呼吸道感染常见的病原体,以I型最为常见,分型区（VP1/VP2）序列较保守.HBoV在重症急性呼吸道感染儿童中是否起到真正的致病作用还需进一步的研究.     

用巢式PCR检测育龄妇女人群人细小病毒B19感染的研究

目的 调查人类细小病毒B19在武汉地区普通人群,尤其是育龄妇女中的感染状况.方法 采集武汉地区2家医院的血液样本1 700份,分为两组.以血清中提取的DNA为模板,进行巢式PCR扩增.结果 第Ⅰ组(普通组,包括男性和女性)阳性检测率为4.50%,第Ⅱ组(妇女组)阳性检测率为8.33%.结论 武汉地区育龄妇女的B19感染率高于普通人群,很有必要对孕妇进行诊断从而预防新生儿感染B19病毒.另外,由于巢式PCR具有灵敏、特异、简便等优点,适合于用来检测血液样本中的人细小病毒B19.     

上海地区人博卡病毒在儿童急性呼吸道感染的研究CSCD

目的了解上海地区人博卡病毒（HBoV）在儿童急性呼吸道感染中的流行情况和临床特点。方法上海地区在2012年1月至2012年12月共收集271例急性呼吸道感染患儿的鼻咽抽吸物,采用巢式聚合酶链反应（Nested PCR）方法检测人博卡病毒NS1基因、并经测序确认,对所获得的基因序列进行同源性和进化分析,博卡病毒阳性样本同时检测鼻病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒等8种呼吸道相关病毒。结果271例标本中共检出HBoV阳性31例,检出率11.4%;21例存在混合感染,全年均有检出,阳性患儿中位年龄17个月（4个月-4岁）,诊断包括上呼吸道及下呼吸道感染,临床表现包括发热、阵发性咳嗽、咳痰、腹泻、呕吐、咽充血、湿罗音等,无死亡病例,门诊患者检出率明显高于住院患者;序列分析表明其中29例为HBoV1、2例为HBoV2、与参考株的核苷酸同源性为99%-100%,氨基酸同源性96%-100%。结论HBoV1是上海地区急性呼吸道感染患儿中的重要病原,HBoV2在该地区首次检出,临床症状及诊断无特异性。     

人博卡病毒感染支气管上皮细胞生物学特征的研究

目的 研究人博卡病毒(HBoV)在呼吸道感染中的致病性及机制.方法采用人博卡病毒阳性标本感染健康人支气管上皮细胞,观察HBoV感染支气管上皮细胞后的生物学特征,并进行病毒空蚀斑、红细胞吸附抑制及免疫荧光测定.结果 75%感染细胞变圆并堆积成葡萄状,伴随有坏死、破碎、脱落.病毒蚀斑测定出典型"猫头鹰眼"现象.红细胞吸附实验观察到90%以上红细胞附着感染支气管上皮细胞.荧光检测出在细胞核内具有典型荧光块.结论支气管上皮细胞可用于分离HBoV,HBoV感染支气管上皮细胞后能够在该细胞内增殖,并导致特征性生物学改变.本研究为今后人博卡病毒致病机制研究奠定基础.     

人博卡病毒LAMP检测方法的建立及初步应用

目的 建立环介导等温扩增技术（LAMP）检测人博卡病毒（Human bocavirus,HBoV）基因的方法,并用于检测临床样本.方法 通过在线软件设计工具Ptimer Explorer V4设计HBoV NP-1基因的LAMP引物,建立LAMP检测方法,并评价其灵敏度和特异度.结果 与传统PCR方法相比,LAMP法检测灵敏度更高,可达到10拷贝,特异性较强;在76份呼吸道感染儿童的咽拭子标本中检测到5份阳性.结论 建立HBoV LAMP检测方法灵敏特异,简单快速,有望进行临床检测HBoV.     

人博卡病毒母婴感染的临床前瞻性研究

目的调查本地区人博卡病毒母婴感染情况。方法用ELISA检测母婴血清人博卡病毒IgG抗体及用荧光定量PCR检测母婴血清人博卡病毒DNA。结果316例母婴配对标本中，孕妇血清人博卡病毒I蜘抗体阳性的有127例，阳性率为40．20％（127／316）；新生儿脐带血人博卡病毒IgG抗体阳性有93例，阳性率为29．43％（93／316）。新生儿人博卡病毒IgG抗体阳性占母亲人博卡病毒IgG抗体阳性的百分比为73．23％（93／127）。母婴同时人博卡病毒IgG抗体阳性为93例。316例母婴配对标本人博卡病毒DNA均为阴性。结论人博卡病毒IgG抗体可从孕妇经胎盘传给新生儿，但是否存在人博卡病毒母婴垂直传播尚有待于进一步研究。     

儿童急性呼吸道博卡病毒感染的病毒载量与临床特征相关性研究

目的 研究急性呼吸道感染患儿人博卡病毒（ human bocavirus,H BoY）病毒载量与临床特征的相关性。方法 对2009年l1月至2010年12月间956例呼吸道感染的患儿及251例健康对照组儿童鼻咽部抽吸物、咽拭子采用PCR法进行HBoV检测,进而对阳性样本进行实时荧光定量PCR法测定博卡病毒DNA载量,并结合患儿的临床检查进行综合分析。结果 实验组与对照组HBoV阳性率存在显著差异,下呼吸道感染病例HBoV的病毒载量水平与上呼吸道感染病例及对照组儿童差异均有统计学意义,上呼吸道感染病例与对照组儿童病毒载量无统计学意义,重症下呼吸道感染患儿与普通下呼吸道感染患儿HBoV的病毒载量无统计学差异,HBoV混合感染与独立感染患儿病毒载量亦无统计学差异。结论 博卡病毒常年均可引起发病,是儿童呼吸道感染的重要病原体之一,但可能不是儿童急性呼吸道感染的唯一因素。HBoV病毒载量并不能独立反映临床疾病感染的严重程度。     

Persistence of human parvovirus B19 in human tissues

Human parvovirus B19 infection causes various clinical symptoms, such as rash, arthropathy, anemias and fetal death, but it can also remain asymptomatic. The arthropathies and anemias can become chronic for several years, not infrequently resembling autoimmune syndromes. B19 replicates only in red blood cell precursors of bone marrow or fetal liver, resulting in high-titred short-lived viremia, but viral DNA is detectable also in cells of several other types. Recently B19 DNA has been found, by very sensitive amplification tests, in certain tissues not only of symptomatic but also of healthy individuals for several years or decades after B19 infection. The mere presence of B19 DNA in these tissues of a symptomatic patient (e.g. joints in chronic arthritis or skin in dermatomyositis) thereby does not prove that the present disease is caused by B19. The diagnosis has to be verified by other innovative means. How and why viral DNA persists in the tissues of healthy individuals is under investigation.     

结直肠癌组织中人细小病毒B19的检测

目的探讨人细小病毒B19感染与结直肠癌发生的关系。方法运用原位杂交对50例石蜡包埋结直肠癌患者的肿瘤组织，癌周结直肠组织以及10例正常成人结肠组织中B19病毒进行检测。激光捕获显微切割肿瘤细胞及癌周正常肠上皮细胞，巢式PCR扩增B19DNA。结果50例结直肠癌标本中，原位杂交示B19阳性信号在肿瘤组织为78％（39／50），癌周结直肠组织为40％（20／50），正常结肠组织中5例（n=10），经统计分析肿瘤与癌周组织B19感染差异有显著性（P〈0．01），正常结肠组织与癌周组织间未见统计学差异（P=1．000）。显微切割进一步证实B19病毒DNA存在于肿瘤细胞内。结论结直肠组织中人细小病毒B19感染较常见，主要存在于结直肠癌上皮细胞内，该病毒可能在结直肠癌的发生过程中起一定作用。     

Seroepidemiology of human parvovirus B19 in Taiwan

In order to determine the prevalence and risk factors of human parvovirus B19 (B19) infection in Taiwan, a seroepidemiological study was carried out in 19 townships. Serum samples were collected from 862 healthy residents, who were selected by stratified random sampling from various study areas. They were chosen from four different ethnic groups including aborigines, Fukien Taiwanese, Hakka Taiwanese, and mainland Chinese. Serum samples were screened for B19 IgG antibody by indirect antibody capture enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and B19 IgM by IgM antibody capture (MAC)-ELISA, respectively. The overall prevalence of anti-B19 IgG and anti-B19 IgM was 32.8% and 0.35%, respectively. The anti-B19 seropositive rate in females was significantly higher than that of males (36.4% vs. 29.4%, P < .001). The age-sex-adjusted seropositive rate in urban townships (39.9%) was higher than that in aboriginal townships (30.5%, P < .001). The seropositive rate increased significantly with age showing a dose–response relationship (P = 0.0001 based on a trend test). Blood transfusion was found to be associated with an increased seropositive rate showing a multivariate-adjusted odds ratios of 1.6. J. Med. Virol. 57:169–173, 1999. © 1999 Wiley-Liss, Inc.     

Recombinant human parvovirus B19 vectors

In an attempt to exploit the remarkable tissue-tropism of the human parvovirus B19 to target human hematopoietic cells of the erythroid lineage, recombinant human adeno-associated virus 2 genomes were encapsidated in parvovirus B19 capsids. Although efficient transduction of primary human hematopoietic cells in the erythroid lineage occurred, a low-level of transgene expression in non-erythroid cells was also detected. These studies suggest that cell surface expression of P antigen, the primary receptor for parvovirus B19, is necessary but not sufficient for parvovirus B19 vector-mediated transduction of human hematopoietic cells. These studies also suggest the existence of a putative cell surface co-receptor, which is required for successful infection of human hematopoietic cells by parvovirus B19.     

A new parvovirus genotype persistent in human skin

Parvovirus B19 is the exclusive human pathogen of the Erythrovirus genus. In classical view, the B19 DNA sequence shows little variability, with no disease-specific or tissue type specific associations. We examined skin biopsies from patients with B19-unrelated skin disease or from constitutionally healthy adults by polymerase chain reaction assays for four different genomic regions of the B19 virus. Sequencing showed that the skin-derived viral DNA differed within the protein-coding region from the B19 reference sequences by 10.8% and from the V9 variant by 8.6% and within the noncoding region (covering nucleotides 189-435 of the promoter region) by 26.5 and 17.2%, respectively. Despite this sequence difference, the promoter region was shown by a luciferase gene expression assay to be biologically active. We have detected a new B19 virus genotype, K71, which differs extensively from the known B19-virus genotypes and is persistently carried in human skin.