含T细胞表位和B细胞表位的抗O型FMDV基因工程疫苗诱导豚鼠产生免疫反应

用FMDV疫苗免疫接种是预防口蹄疫的主要手段之一 .研制既含B细胞表位又含T细胞表位的基因工程疫苗对口蹄疫的防治具有更强的保护能力 .用化学方法合成O型口蹄疫病毒 (FMDV)外壳蛋白VP1中 2 1～ 40位肽段的T细胞表位基因 ,与 1 41～ 1 60肽段的B细胞表位基因串联后 ,与 β 半乳糖苷酶基因相连 ,构建成一重组质粒 ,并在大肠杆菌中表达出融合蛋白疫苗 .动物实验表明 ,该疫苗不仅能诱导豚鼠产生滴度很高的中和抗体 ,而且产生大量对病毒专一性T细胞 ,与不含 2 1～ 40肽段的疫苗相比 ,用该疫苗免疫的豚鼠血单个核细胞对FMDV的反应性提高 7倍以上 ,并能抵抗病毒攻击 .说明该疫苗可同时激活体液免疫及细胞免疫反应 ,有较强的保护作用 .     

A型口蹄病毒VP1免疫活性肽基因串联片段的化学合成及克隆…

Ａ型口蹄疫病毒（ＦＭＤＶ）ＶＰＩ蛋白的１４１－１６０位和２００－２１３位氨基酸序列是决定ＦＭＤＶ免疫原性的抗原决定簇片断，人工合成一个免疫活性肽基因的串连片段（２０ＡＡ－１４ＡＡ－２０ＡＡ），全部选用２大肠杆菌偏爱密码子，在５端带有有ＥｃｏＲ１位点和一个起始密码子ＡＴＧ，在３端带有ＢａｍＨＩ位点和一个终止密码子ＴＧＡ，利用这两个酶切位点把该基因连接到ＰＷＲ５９０质粒上，并筛选高表达的菌株，结果表明     

人ZP3B-细胞表位嵌合肽DNA的设计和合成

目的：设计和合成适合在昆虫细胞中表达的一个人ＺＰ３ Ｂ细胞表位的ＤＮＡ序列。方法：根据国外的研究基础，设计由人ＺＰ３的Ｂ细胞表位肽段和外源Ｔｈ细胞表位肽段串联而成的４５肽嵌合肽序列，并根据昆虫细胞对密码子的偏爱性设计出该嵌合肽的ＤＮＡ序列。然后人工合成该嵌合肽的ＤＮＡ链，并克隆到ＰＵＣ１８载体上。结果：通过酶切分析和测序证明，合成的ＤＮＡ与所设计的嵌合肽ＤＮＡ序列一致。结论：按设计合成了人ＺＰ３的     

MPEG-2 DCT系数码表的优化

给出了一种优化ＭＰＥＧ－２ 的ＤＣＴ系数码表＿ ０／１ 的方法．其基本思路是：在ＥＯＢ码字后添加一个附加比特引入一个附加的ＦＬＣ码表,用此ＦＬＣ码表取代现有ＭＰＥＧ－２ 的ＤＣＴ 系数码表＿ ０／１ 中较长的ＶＬＣ码字．结果表明,此方法可在压缩性能及运算量两方面对ＤＣＴ系数码表＿ ０（ＰＳＮＲ＝ ２７～４０ ｄＢ）及ＤＣＴ系数码表－ １（ＰＳＮＲ＝ ３０～４０ ｄＢ）实现优化,ＰＳＮＲ值越高,优化效果越显著．     

Ha—ras和Ki—ras癌基因转染和细胞对小鼠细小病毒杀伤敏感…

为研究Ｈａ－ｒａｓ和Ｋｉ－ｒａｓ癌基因转染和细胞对小鼠细小病毒（ＭＶＭ）杀伤敏感性间的关系，两个细胞株，即Ｋｉ－ｒａｓ癌基因转株ＤＴ和Ｈａ－ｒａｓ癌基因转化细胞株ＲＥＦ４－３，被用来作为研究材料，体外细胞集落形成率和细胞在裸小鼠体内的成瘤能力测定显示，和对照细胞ＮＩＨ／３Ｔ３相比之这ＲＥＦ４－３和ＤＴ对ＭＶＭ的杀伤作用更敏感，同时，ＤＮＡ杂交和蛋白免疫沉淀实验结果也显示，在ＲＥＦ４－３和ＤＴ细胞中     

O型口蹄疫病毒VP4蛋白一个保守性表位的精细鉴定

口蹄疫病毒(FMDV)的结构蛋白VP4在7个血清型之间是非常保守的,对其抗原表位最小基序的测定有助于开发广谱性多肽疫苗.本研究采用生物合成肽法,利用豚鼠抗FMDV O型标准血清,对最新流行的FMDV O型毒株O/BY/CHA/2010的VP4蛋白进行了线性表位扫描作图研究.结果表明:在覆盖VP4蛋白全长序列的10个18聚肽中,发现1个能与豚鼠抗FMDV O型标准血清发生免疫印迹反应的抗原性肽VP4-3;B细胞表位鉴定确定了抗体识别VP4-3的最小基序是INNYYM;该表位位于VP4蛋白的三维结构表面;对7个FMDV血清型的122个毒株同源蛋白质进行序列比对,发现这一表位在7个FMDV血清型的120个毒株中是100%保守.     

MOCVD制备Mo2C膜成膜机理

对ＭＯＣＶＤ制备Ｍｏ２Ｃ膜的物理化学机理进行理论探讨。根据实验结果论证了ＭＯＣＶＤ制备Ｍｏ２Ｃ膜过程中,Ｍｏ（ＣＯ）６遵从先被基底吸附、发生相变再进行分解的两步机制;Ｍｏ（ＣＯ）６的分解过程是级联式分解,最后由Ｍｏ碳化为Ｍｏ２Ｃ膜;利用Ｇｉｂｂｓ函数最小的原理,对ＭＯＣＶＤ沉积Ｍｏ２以ＩＰ ＲＣ ＹＩＤ Ｒ ＦＫＦ ＤＭＨ ＡＤＷＲＢＩＢ ＯＶＴ ＦＪＴＦＹＦＴＨ,ＲＰＷＳＶＦ Ｂ ＤＮ ＥＡＪＤ     

猪圆环病毒2型Cap蛋白B细胞表位的预测及鉴定

利用生物信息学技术和原核表达系统,筛选猪圆环病毒2型(PCV2)核衣壳蛋白(Cap)的B细胞表位,为进一步揭示PCV2的免疫调控机制提供研究依据.运用生物信息学软件预测PCV2 Cap蛋白的亲水性、表面可及性、蛋白柔韧性、抗原性和B细胞线性表位;根据预测结果,初步确定Cap蛋白潜在的B细胞线性表位主要位于58~66、79~91、151~162、174~189、204~213和221~233位氨基酸.设计特异性引物,扩增Cap蛋白潜在表位区域基因,并克隆到p ET32a(+)原核表达载体上,转化至表达菌BL21(DE3)plys S中,在IPTG诱导下表达目的蛋白;利用PCV2阳性血清鉴定Cap蛋白的B细胞线性表位,筛选出3个能与血清结合的肽段,即Cap77-95、Cap174-189和Cap221-233;对获得的肽段进行在线同源比对,发现3个片段均为PCV2 Cap蛋白的特有序列,有可能成为PCV2的特异性表位.     

电击法转移含人凝血因子IX基因重组质粒的影响因素

反转录病毒载体在基因治疗中可能会产生野生型病毒颗粒而引起安全性问题，本文研究含ＦＩＸｃＤＮＡ重组质粒基因治疗血友病Ｂ的可能，构建了不具反转录病毒载体结构的两重组质粒ｐＳＣＩＸＴＮ和ｐＣＩＸＴＮ，前者合ＳＶ４０早期启动子和ｈＣＭＶ启动子共同控制的ＦＩＸｃＤＮＡ，后者仅含ｈＣＭＶ启动于控制的ＦＩＸｃＤＮＡ，它们都含有ＴＫ启动于驱动的ｎｅｏ基因，通过电击法将基因转移到ＰＡ３１７和ＨＴ１０８０细胞，在ＨＴ１０８０细胞中的ＦＩＸ表达量分别为２２０、２１２ｎｇ／（１０６细胞·２４ｈ）通过与ｐＣＭＶＩＸ共转染靶细胞，可以增加人ＩＸ因子表达１．５～３．５倍，显示了用质粒载体转染靶细胞在血友病Ｂ基因治疗中是一条潜在可行的途径．本项研究用自制的电击仪转移ＰＡ３１７和ＨＴ１０８０等细胞，最高的转移效率达１０－３，并探讨了细胞种类，ＤＮＡ量，ＤＮＡ结构，电压，脉冲时间与转移效率及表达量的关系．     

电击法转移含人凝血因子Ⅸ基因重组质粒的影响因素

反转录病毒载体在基因治疗中可能会产生野生型病毒而引起安全性问题，本文研究含ＦＩＸｃＤＮＡ重组质粒基因治疗血友病Ｂ的可能，构建了不具反转录病毒载体结构的两重组质粒ｐＳＣＩＸＴＮ和ｐＣＩＸＴＮ，前者含ＳＶ４０早期启动子和ｈＣＭＶ启动子共同控制的ＦＩＸ ｃＤＮＡ，后者仅含ｈＣＭＶ启动子控制的ＦＩＸｃＤＮＡ，它们都含有ＴＫ启动子驱动的ｎｅｏ基因，通过电击法将基因转移到ＰＡ３１７和ＨＴ１０８０细胞，在ＨＴ１     

JD病毒基因组片段的克隆和序列分析

扩增并克隆了ＪＤ病毒的ｇａｇ 基因片段（位于３００ｎｔ～５６４ｎｔ,编码基质蛋白ＭＡ）和ｐｏｌ基因片段（位于３４６７ｎｔ～３６９１ｎｔ,编码反转录酶ＲＴ）,测定其序列并同ＢＩＶ、ＢＦＶ 和ＢＬＶ 的相应基因进行比较．所建立的方法能够特异性扩增ＪＤＶ序列,适用于ＪＤＶ的检测     

小鼠金属硫蛋白基因—I在CHO细胞中稳定表达及其在医疗…

将小鼠的ＭＴ－Ｉ基因插入ｐＳＶ２－ｄｈｆｒ质粒的ＥｃｏＲＩ位点，构建了具有ＳＶ４０和ＭＴ双启动子并正向插入ＭＴ－Ｉ基因的表达载体。用改良的磷酸钙／ＤＮＡ沉淀法将表达载体导入ＣＨＯ－ｄｈｆｒ＾－细胞内，用不含次黄嘌呤（Ｈ）和胸腺嘧啶（Ｔ）的选择培养基筛选出稳定表达ＭＴ阳性克隆Ｄ－２２，经检测１０＾６细胞的ＭＴ表达量约为１．８μｇ，Ｄ－２２细胞对Ｃｄ＾２＋浓度抗性较之ＣＨＯ－ｄｈｆｒ＾－细胞高１４倍。     

数据库中的批量数据录入技术

不论数据库开发应用平台是何种版本,在关系型数据库的程序设计中,一般都需要有原始数据录入或者叫做基础数据采集等功能模块。在以往传统的编程模式中,基本上可以说都是采用逐条数据录入,对应ＦＯＸ系统而言往往不是用ＡＰ－ＰＥＮＤ（如 ＡＰＰＥＮＤ ＢＬＡＮＫ与ＳＣＡＴ ＭＥＭＯＭＥＭＶ、 ＧＡＴＨ ＭＥＭＯ ＭＥＭＶ配合或者ＡＰＰＥＦＲＯＭ ＡＲＲＡ等等）就是用ＩＮＳＥＲＴ（如ＩＮＳＥＲＴＢＬＡＮＫ与ＳＣＡＴ ＭＥＭＯ ＭＥＭＶ、ＧＡＴＨ ＭＥＭＯＭＥＭＶ配合或者ＩＮＳＥＲＴ ＩＮＴＯ－ＳＱＬ）相关的命令来实现原始…     

重构猪SLA-I单链复合体及其口蹄疫病毒VP1蛋白限制性表位的筛选

目前,没有研究猪SLA-I类复合体限制性表位的系统.为了构建猪的SLA-I类复合体,研究其相应重要病毒的限制性表位,亚克隆猪主要组织相容性复合体重链基因SLA-2胞外区和轻链基因β2m成熟肽区,利用一富含甘氨酸和丝氨酸的Linker(G4S)3连接两个基因,通过SOEPCR体外构建了猪可溶性的单链复合体SC-SLA-I[SLA-2-(G4S)3-β2m],计算机方法设计3类口蹄疫病毒VP1蛋白的T细胞表位,经化学合成,分别命名为PepⅠ(FMDV/VP126—34)、PepⅡ(FMDV/VP1157—165)和PepⅢ(FMDV/VP145—53),用以结合单链复合体蛋白SC-SLA-I.酸洗脱结合质谱法测定SC-SLA-I结合表位,同时设定非相关蛋白和多肽的对照试验.结果显示,Pep Ⅰ和Pep Ⅱ均能和SC-SLA-I结合,而Pep Ⅲ及非相关多肽不能结合,对照蛋白MBP的肽结合试验显示阴性.结果表明,多肽Pep Ⅰ和Pep Ⅱ属于SLA-I类限制性表位.     

DBF文件转换成ORACLE基表的实现

提出了一种将微机ＦＯＸＢＡＳＥ（或ＤＢＡＳＥ）关系数据库管理系统的数据库文件（ＤＢＦ文件），用ＰＲＯ＊Ｃ在ＶＡＸ机上直接转换成ＯＲＡＣＬＥ基表的设计思想和方法，它与ＶＡＸ ＯＲＡＣＬＥ提供的ＯＤＬ加载工具相比，具有功能强、使用方便、灵活且易扩展的特点。     

DBF文件转换成ORACLE基表的实现

提出了一种将微机ＦＯＸＢＡＳＥ（或ＤＢＡＳＥ）关系数据库管理系统的数据库文件（ＤＢＦ文件），用ＰＲＯ＊Ｃ在ＶＡＸ机上直接转换成ＯＲＡＣＬＥ基表的设计思想和方法，它与ＶＡＸＯＲＡＣＬＥ提供的ＯＤＬ加载工具相比，具有功能强、使用方便、灵活且易扩展的特点     

人粒细胞集落刺激因子在昆虫细胞中的表达

利用苜蓿尺核型多角 体病带β－Ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ基因标志的非融合蛋白基因转移载体ｐＢＢ成功地构了重组杆状病毒ＡｃＮＰＶ－Ｇ－ＣＳＦ．在感染重组病毒的草地夜蛾细胞中ｈＧ－ＣＳＦ得到了高效表达。表达产物由ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ检出，其分子量约为１９ＫＤａ。     

B细胞表位预测研究进展

B细胞表位的鉴定是研制疫苗、疾病诊断的关键步骤,表位预测是研究蛋白质表位一种筛选技术,能降低传统方法的大量投入,大幅降低研制时间、研发经费投入、研究人员精力花费等。表位预测的计算工具和方法不断推出,但预测性能却难言理想。回顾B细胞表位预测的最新进展,梳理B细胞的研究趋势及有希望的方向。     

自然侵染白肋烟的黄瓜花叶病毒的鉴定

根据１９９５ ～１９９６ 田间调查表明,ＣＭＶ 是侵染白肋烟的主要病毒之一。采集到一种（ 命名为ＣＭＶ－ ＴＢ） 引起烟株花叶、植株矮化的样品,摩擦接种能侵染７ 科２９ 种植物。ＣＭＶ－ ＴＢ 引起苋色藜局部枯死斑。ＣＭＶ－ ＴＢ 体外稳定性状：体外保毒期２ 天;稀释限点１０ － １ ;致死温度５０ － ５５ ℃。电镜观察ＣＭＶ－ ＴＢ 为球状颗粒,直径３０ｎｍ 。ＳＤＳ聚丙酰胺电泳测其分子量２８ ８００Ｄ。ＣＭＶ－ ＴＢ 和ＣＭＶ－ ＣＡ（ 花生株系） 抗血清起强阳性反应,与同一病毒组的花生矮化病毒（ＰＳＶ） 抗血清起阴性反应。基于以上性质,ＣＭＶ－ ＴＢ 经鉴定属于黄瓜花叶病毒。本研究为侵染白肋烟的ＣＭＶ 国内首次详细报道。通过应用生物学（ 寄主反应和温度敏感性） 实验与ＣＭＶ－ Ｓ、ＣＭＶ－ Ｄ 对比,参试的分离物在３２ ℃下引起昆诺藜（ Ｃ．ｑｉｎｏａ） 、豇豆（Ｖ．ｓｉｅｓｉｓ） 产生局部枯斑并且与ＣＭＶ－ Ｄ 抗血清产生比ＣＭＶ－ Ｓ抗血清更强的特异性血清学反应。以上实验证明,ＣＭＶ－ ＴＢ 中国分离物与ＣＭＶ－ Ｄ 性质相同,属于ＣＭＶ 亚组Ｉ,而与ＣＭＶ 亚组ＩＩ有明显差异。依据在一组寄主植物上的反应,对参试的ＣＭＶ－ ＴＢ 进行了株系划分     

甜菜坏死黄脉病毒新疆分离物外壳蛋白基因的原核表达载体和植物表达载体的构建

将克隆入ｐＧＥＭ７ｚｆ（＋）的甜菜坏死黄脉病毒（ＢＮＹＶＶ）新疆分离物外壳蛋白（ＣＰ）基因的ｃＤＮＡ的ｐＧＥＢ３，用ＸｂａＩ切下，Ｋｌｅｎｏｗ补平，再用ＢａｍＨＩ切下ｃＤＮＡ片段。用ＮｄｅＩ切开原核表达载体ｐＪＷ２，用Ｋｌｅｎｏｗ补平，再用ＢａｍＨＩ切去小片段。将该ｃＤＮＡ与ｐＪＷ２大片段用Ｔ４连接酶连接，构建了ＢＮＹＶＶＣＰ基因的表达载体ｐＪＷＢ４，转化到大肠杆菌ＤＨ５α。经培养和高温诱导，ｐＪＷＢ４成功地表达出了ＢＮＹＶＶ的外壳蛋白。将ｐＧＥＢ３和ｐＢＩ１２１用Ｘｂａｌ和ＢａｍＨＩ酶切Ｔ４连接酶连接，构建了ＢＹＶＶＣＰ基因的植物表达载体，转化到ＤＨ５α，筛选出正向连结的阳性克隆ｐＢＩＢ３，转化入农杆菌ＬＢＡ４４０４（ｐＡＬ４４０４），经用ＰＣＲ扩增和γ３２Ｐ标记的探针杂交约证实为阳性克隆。往甜菜植株中转化工作正在进行中。