高地芽孢杆菌碱性蛋白酶酶学性质研究

对高地芽孢杆菌(Bacillus altitudinis)PY41所产碱性蛋白酶的酶学性质进行了研究.研究得出该蛋白酶的最适反应pH值为9.5,最适反应温度为50℃,米氏常数Km值为15.5 mg/mL,最大反应速度vmax为24.57μg/(min·mL).金属离子Ag+和Hg2+对该蛋白酶的抑制作用非常显著,使蛋白酶酶活降低了约90%,Mn2+对蛋白酶酶活具有明显的激活作用,使蛋白酶酶活力提高了18%.     

ATCC碱性纤维素酶产生菌产酶特性的重新确定

研究美国典型培养物保藏中心(ATCC)提供的菌株ATCC21833(HorikoshiK定名为芽孢杆菌Bacillussp.N4)的纤维素酶合成基因后,发现该基因与HorikoshiK定名的N4基因并不具有同源性.为此重新研究了该菌株的产酶特征和所产生碱性纤维素酶的部分酶学特性.结果表明,羧甲基纤维素为最适宜的碳源,在以羧甲基纤维素、蛋白胨和酵母抽提物为主要组分的培养基中进行培养,碱性纤维素酶的活性可以达到0.64U/mL,所产生的碱性纤维素的最适pH值为10.0,最适反应温度为40℃.其产酶特性和酶学性质和N4菌株有较大差异.     

产胞外耐高温纤维素酶细菌的获得和酶的纯化及性质研究

对从高温堆肥中分离得到的一株产胞外耐高温纤维素酶的细菌进行了生理生化鉴定,结果显示其属于嗜热脂肪芽孢杆菌。对其所产纤维素酶进行了分离纯化,该酶反应的最适温度约为66℃,最适pH值为7.0,至少有8个亚基。     

纤维素酶EGA基因在枯草芽孢杆菌中的表达及其产物性质研究

枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis是一种高效的外源蛋白表达菌株,能将目的蛋白分泌到细胞外的培养基中.从福寿螺胃液共生菌株Bacillus sp.Strain AC-1基因组中克隆纤维素酶EGA的基因序列,利用基因工程技术构建纤维素酶EGA的重组枯草芽孢杆菌表达载体pAUsp-ega.该载体含有一个强启动子和一段信号肽,经淀粉诱导能表达外源蛋白.以枯草芽孢杆菌蛋白酶缺失型菌株WB700为宿主菌,表达得到的重组纤维素酶EGA以羧甲基纤维素钠(CMC-Na)为底物得到的培养基上清酶活力达到1 120 U/L.该纤维素酶在pH 6.0表现最大水解活力,最适反应温度为60℃,在酸性条件下稳定性良好,具有较好的应用前景.     

一株芽孢杆菌BLYS-1蛋白酶性质的研究

提取了一株芽孢杆菌BLYS-1蛋白酶,探讨了pH值、温度、有机溶剂、金属离子、氧化剂和EDTA等对其的影响.研究发现,该芽孢杆菌蛋白酶具有一定酸碱耐受性和抗氧化性,在pH值5~8时活性较高,最适宜pH值为7,最佳反应温度为50℃,70%饱和度的硫酸铵可使其完全沉淀.吐温-20和异丙醇、变性剂SDS、金属离子Sn2+、Ca2+、N i+对蛋白酶抑制作用较大,Mg2+、Zn2+等对其有促进作用.以干酪素为底物,测得该酶动力学参数Km为2.53 g/L,Vmax为6.67μg/s.     

静电纺PA6/PVA纳米纤维及其纤维素酶的固定研究

利用静电纺丝技术制备PA6/PVA纳米纤维.通过环氧氯丙烷法活化羟基,将纤维素酶固定于PA6/PVA纳米纤维上.考察固定化纤维素酶和自由纤维素酶的酶活,研究固定化纤维素酶的酶学性质.结果表明：自由酶的最适反应温度为55℃,而固定化酶的最适反应温度为65℃,比自由酶的提高了10℃;与自由酶相比,固定化酶的活性随pH值的变化曲线明显变宽,热稳定性显著增强;固定化纤维素酶在4℃下能长时间保持较高的活力.     

草菇纤维素酶系统的诱导、分布及初步定性

以蔗糖、果胶、羧甲基纤维素、木聚糖或稻草为碳源培养草菇（Volvariella volvacea），并对它所产生的纤维素酶进行初步研究，发现纤维素酶系主要是由纤维素诱导产生，纤维素酶中的β－葡萄糖苷酶和纤维二糖酶分布在胞内，内切葡聚糖酶分布在胞外。β－葡萄糖苷酶的最适反应温度为60℃,最适pH为6.6，在pH6.6-7.8时比较稳定，保温1h酶活的半衰温度是45℃，纤维二糖酶的最适反应温度为50℃、最适pH为5.8，在pH6.2最稳定，保温1h酶活的半衰温度是44℃，内切葡聚糖酶的最适反应温度为60℃，最适pH为5.4，在pH6.6-7.0时比较稳定，保温1h酶活的半衰温度是58℃。     

异槲皮苷-β-葡萄糖苷酶的分离纯化及其酶性质

采用分子筛及离子交换法对微生物Absidia sp.R42g所产异槲皮苷-β-葡萄糖苷酶进行分离纯化,并研究其酶学性质。结果表明,异槲皮苷-β-葡萄糖苷酶的分子质量为62ku,最适温度为40℃,最适pH为5.0。在50℃以下,pH 4.0~6.0,相对酶活力较稳定,Na~+、K~+、Ca~(2+) 3种金属离子对相对酶活力无影响;而在Fe~(3+)、Cu~(2+)两种金属离子存在的情况下,相对酶活力为零;酶反应结果显示该酶的最大反应速度和米氏常数分别为6.711mmol/(L·h)和18.89mmol/L。     

交联纤维素酶聚集体制备及其催化特性研究

用90%饱和度的硫酸铵盐析沉淀纤维素酶蛋白,将蛋白沉淀用3%戊二醛交联固定制得交联酶聚集体;研究交联酶聚集体的最适反应温度、最适反应pH、酸碱稳定性、热稳定性、批次稳定性。交联酶纤维素酶聚集体的最高比活性为559.2 U/g湿载体,最适反应温度为60℃,最适pH为9.0。交联酶聚集体的热稳定性和pH稳定性均优于游离酶,重复使用10批活性基本稳定。交联纤维素酶聚集体稳定性较好,具有一定的工业应用前景。     

纸张纤维老化的生物检测方法

探讨了检测纸张纤维老化的纤维素酶酶解生物分析方法。纤维素酶酶解法采用条件实验,分别考察了反应温度、pH值、酶解时间及加酶量对纤维素酶活力的影响趋势,确定了纤维素酶酶解纸张的最佳条件。实验结果表明,在最适pH值为4.8、最适反应温度50℃、纤维素酶解时间60 min、加酶量为10 kU/mL的条件下,不同老化程度的纸张经纤维素酶分解后,利用3,5-二硝基水杨酸法测得的还原糖量呈现上升的趋势,可以此来初步判定纸张纤维的老化程度,确定纸张的相对形成时间,从而建立了用生物方法检测纸张纤维老化程度的方法。该方法与其他检验方法相比,能够区分出纸张相对形成时间较小的样品,达到鉴别的目的。     

产碱性蛋白酶海洋细菌的筛选及其发酵条件优化

从大连海域的海参肠道中筛选得到一株产碱性蛋白酶较高的海洋细菌HS-A156,经形态学和16SrDNA序列分析初步鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)(GenBank检索号KC166863)。对菌株HS-A156的酶学性质进行初步研究,结果表明该菌株所产蛋白酶最适作用pH为9.0,在pH 8.0~11.0性能稳定;最适作用温度为40℃,在25~45℃具有良好的热稳定性。同时对该菌株产酶发酵培养基和发酵条件进行优化,确定了最适产酶培养基组成为葡萄糖1.5%、牛肉膏1.0%、酵母粉2.0%、CaCl20.05%;最佳发酵条件培养基初始pH 8.0、发酵温度30℃、接种量3%。经过优化后菌株HS-A156产碱性蛋白酶的酶活力达到538U/mL,比优化前的产酶量提高了3.7倍。     

固定化地衣芽孢杆菌胞外脂肪酶的制备

脂肪酶是一类重要的水解酶,广泛应用于食品、医药、化工等领域。脂肪酶通过固定化可以提高酶的使用效率。文章采用戊二醛共价连接法将来源于地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)的胞外脂肪酶固定于氨基型载体ZH-HA之上,将1g载体置入10mL酶液中反应3h后固定化酶活力达到最高为60U/g湿载体。经固定化后该酶的温度稳定性得到显著提升,当反应温度为45℃时最高酶活力达到220U/g湿载体。同时,固定化使酶在碱性条件下的稳定性得到提高,最适反应pH值为10。通过自制柱式反应器考察该酶工作稳定性,经过15批连续水解反应,固定化脂肪酶仍保持90%的活力,展现出良好的稳定性。     

Bacillus subtilis木聚糖酶的纯化及其对小麦麸皮的作用

采用活性聚丙烯酰胺凝胶电泳和均质提取法相结合，从枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)固体培养基发酵产物中分离得到了两种木聚糖酶．薄层色谱和高压液相色谱分析结果进一步表明它们具有内切木聚糖酶的活力，分别定义为xyl Ⅰ和xyl Ⅱ．两种酶具有相同的最适反应温度(50℃)和最适pH值(7．0)．另外，还研究了内切木聚糖酶xylⅡ对小麦麸皮不溶性膳食纤维的作用．纸色谱分析结果表明，酶解产物中含有阿魏酰低聚糖．     

纤维素酶固定化研究

采用交联法制备了聚乙二醇改性壳聚糖(PEG-CS)载体,并将其用于固定纤维素酶.探讨了栽体制备过程中的几种主要影响因素、纤维素酶固定化的影响因素,并对固定化纤维素酶的性质进行了讨论.结果表明,固定化酶最适pH值比原酶降低,最适温度为60℃,比游离酶高10℃.在pH值为5.0,温度40℃时,固定化酶对羧甲基纤维素钠盐的表观米氏常数为7.2 mg/L,而游离酶为3.3 mg/L.与游离酶相比,该固定化纤维素酶热稳定性明显提高,并具有良好的操作和存储稳定性.     

海因酶产生菌的反应条件研究

利用恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)作为酶源,研究海因酶催化DL-对羟基苯海因合成N-氨基甲酰-D-对羟基苯甘氨酸,以制备D-对羟基苯甘氨酸,并就培养基的优化,反应条件的选择及酶活的影响作了探讨.研究表明,碱性条件下可显著增加酶反应速度,温度对提高海因酶活力有重要影响.培养初始pH值为7.0,温度28℃下培养24 h产海因酶达最高;在最适pH9.0和最适温度55℃下,海因酶活力达到0.7 u/mL,比原基础培养条件下提高3.5倍.     

高温厌氧菌产纤维素内切酶和β-葡萄糖苷酶的活性

高温厌氧菌Clostridium thermocoprius sp.nov．JT3-3具有较高的纤维素内切酶和β-葡萄糖苷酶活性。实验研究表明，纤维素内切酶和β-葡萄糖苷酶均为胞外酶，相对分子质量分别为52000和48000。纤维素内切酶的最适反应温度是80℃，β-葡萄糖苷酶的最适反应温度是40℃，两者的最适pH为6．5。低浓度的Ca^2 和Mg^2 对纤维素内切酶和β-葡萄糖苷酶的酶活力没有影响，高浓度的Ca^2 和Mg^2 对纤维素内切酶和β-葡萄糖苷酶的酶活力有较弱的抑制作用，Hg^2 对纤维素内切酶和β-葡萄糖苷酶的酶活力都有很强的抑制作用。     

液体洗涤剂中复合酶稳定性的研究

研究了由碱性蛋白酶、淀粉酶通过微胶囊复配而成的复合酶在不同温度和pH下的特性，以及含水量、保护剂和表面活性剂对酶活力稳定性的影响。结果表明，该复合酶的最适反应温度为50℃，最适pH为9．0，在温度20～50℃，pH6～10，水的体积分数小于40％及各表面活性剂的洗涤浓度范围内均有良好的稳定性。     

白头翁皂苷H3糖苷酶的分离纯化及酶性质

对Absidiasp.P39r所产白头翁皂苷H3糖苷酶进行了分离纯化,得到了电泳纯的酶蛋白,并对其性质做了进一步研究。结果表明,该酶分子质量约为40ku;最适反应温度为40℃,最适反应pH为5.0;在pH 4.0~7.0,温度低于40℃条件下具有相对稳定的酶活力;金属离子Na+、K+、Mg2+对酶反应无显著影响,而Fe3+、Cu2+、Zn2+对其有较强的抑制作用;米氏常数为17.01mmol/L,最大反应速度为0.38mmol/(L·min)。     

微生物发酵法产环氧化物水解酶的研究

从土壤中筛选出一株能将模型底物缩水甘油苯基醚水解为3-苯氧基-1，2-一丙二醇的环氧化物水解酶的芽孢杆菌H-14-1．此茵培养的最佳碳源为1％的葡萄糖，最佳的氮源为1％的NH4Cl和1％牛肉膏，培养基的初始pH为6．5，培养的最佳温度和时问是30℃下培养36h，低浓度底物缩水甘油苯基醚对该酶具有诱导作用，同时培养基中金属Cu外离子对产酶有促进作用．酶学性质的试验表明，该酶的最适反应温度为35℃，最适pH为7．5，40℃以下酶具有较好的热稳定性，pH6．5～8．0范围内酶的稳定性较佳，Mg^2＋和Ca^2＋离子对酶的活性有促进作用．     

一株木霉菌株的改良和产酶条件及酶学性质研究

将自然界筛选得到的产纤维素酶活力较高的野生菌株进行紫外诱变得到诱变菌株 TMa-91 1 8,该菌株的产酶最适条件为 :稻草粉和麸皮的质量比例为 8∶ 2 ,培养基含水量质量分数为 65% ,发酵时间 72 h,发酵温度为 30℃。该酶最适反应 p H为 4 .4 ,最适反应温度为 50℃ ,最佳浸提条件为4 0℃蒸馏水。