LC-ESI-MS/MS 快速测定人血浆中奥氮平的浓度及临床应用

 目的 建立快速测定人血浆中奥氮平浓度的高效液相色谱串联质谱电喷雾检测法 (LC-ESI-MS/MS) 。 方法 以 Dikma diamonsil^TM C₁₈ 反相柱（ 4.6 mm × 150 mm ， 5 μm ）为色谱柱，流动相为甲醇 -5 mmol·L^-1 甲酸铵（ 90 ∶ 10 ），流速为 1 mL·min^-1 ，柱温： 25 ℃ ，以乙酸乙酯 - 二氯甲烷（ 4 ∶ 1 ）为提取剂。样品经电喷雾离子源正离子化后，通过三重四级杆串联质谱仪，采用选择反应监测（ SRM ）对奥氮平（ <> m/z 313 → 256 ）和内标替米沙坦（ <> m/z 515.3 → 497.3 ）进行测定，并用此法测定 36 例患者稳态血药浓度。 结果 奥氮平的高（ 50 μg · L^-1 ）、中（ 25 μg · L^-1 ）、低（ 1 μg·L^-1 ） 3 个浓度的平均回收率分别为 100.14% 、 100.33% 和 100.21% ，日内（ <> n =5 ）、日间（ <> n =3 ） RSD 均小于 15% ；分析方法的最低定量限为 0.5 μg · L^-1 。线性范围为： 0.5~100 μg · L^-1 ，回归方程为 <> F =1.529 5 <> ρ - 0.014 3 ， <> r =0.999 （ <> n =8 ），权重系数为 1/ <> ρ 。 结论 该方法灵敏、准确、简单、快速，可用于临床血浓监测和药动学研究。     

HPLC 测定复方地巴唑氢氯噻嗪胶囊中 8 种组分的含量

  目的 建立高效液相色谱法同时测定复方地巴唑氢氯噻嗪胶囊中氢氯噻嗪、维生素 B₆ 、维生素 B₁ 、硫酸胍生、地巴唑、氯氮、磷酸氯喹和盐酸异丙嗪等 8 种组分含量的方法。 方法 提取溶剂为甲醇 - 水 (50 ∶ 50) ，色谱柱为 Ultimate XB-C₁₈(4.6 mm × 150 mm ， 5 μm) ，流动相为甲醇 -5 mmol·L^-1 庚烷磺酸钠溶液 - 冰醋酸 (55 ∶ 45 ∶ 0.25), 检测波长为 284 nm 。 结果 线性范围分别为氢氯噻嗪 30.2~151.0 mg·L^-1 (<>r=0.999 8) ；维生素 B₆10.2 ～ 51.0 mg·L^-1 (<>r=1.000 0) ；维生素 B₁ 10.1~50.5 mg·L^-1 (<>r=0.999 9) ；硫酸胍生 12.1~60.5 mg·L^-1 (<>r=1.000 0) ；地巴唑 99.8~499.0 mg·L^-1 (<>r=0.999 2) ；氯氮 20.1~100.5 mg·L^-1 (<>r= 1.000 0) ；磷酸氯喹 24.88~124.4 mg·L^-1 (<>r=1.000 0) ；盐酸异丙嗪 30.3~151.5 mg·L^-1 (<>r=1.000 0) 。平均回收率 (<>n=9) 分别为氢氯噻嗪 101.2%(RSD=1.4%) ，维生素 B₆102.2%(RSD=0.9%) ，维生素 B₁100.5% (RSD=1.5%) ，硫酸胍生 101.6%(RSD=1.5%) ，地巴唑 101.8% (RSD=1.1%) ，氯氮 99.3% (RSD= 1.3%) ，磷酸氯喹 101.5%(RSD=1.6%) ，盐酸异丙嗪 101.7 % (RSD=1.7%) 。 结论 本法简便快速，准确可靠，适于该复方制剂中 8 种组分的同时测定。     

HPLC同时测定赤芝中4种三萜酸的含量

目的：建立HPLC同时测定赤芝药材中灵芝酸C₂、灵芝烯酸A、灵芝酸A和灵芝酸D含量的方法。方法：采用Kromasil C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相为乙腈-0.03%磷酸水溶液采用梯度洗脱，流速1.0 mL·min^-1，检测波长252 nm，柱温35 ℃。结果：灵芝酸C₂、灵芝烯酸A、灵芝酸A和灵芝酸D的线性范围分别为：5.0～50.0 mg·L^-1(r=0.999 9)，7.2～72 mg·L^-1(r=0.999 9)，11.67～116.7 mg·L^-1(r=0.999 9)和5.32～53.2 mg·L^-1(r=0.999 8)；平均回收率(n=3)分别为98.8%(RSD1.5%)，99.1%(RSD1.9%)，99.5%(RSD1.4%)和98.5%(RSD1.9%)。结论：该方法简便、准确，重复性好，为赤芝药材的质量控制提供了实验依据。     

HPLC同时测定赤芝中4种三萜酸的含量

目的：建立HPLC同时测定赤芝药材中灵芝酸C₂、灵芝烯酸A、灵芝酸A和灵芝酸D含量的方法。方法：采用Kromasil C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相为乙腈-0.03%磷酸水溶液采用梯度洗脱，流速1.0 mL·min^-1，检测波长252 nm，柱温35 ℃。结果：灵芝酸C₂、灵芝烯酸A、灵芝酸A和灵芝酸D的线性范围分别为：5.0～50.0 mg·L^-1(r=0.999 9)，7.2～72 mg·L^-1(r=0.999 9)，11.67～116.7 mg·L^-1(r=0.999 9)和5.32～53.2 mg·L^-1(r=0.999 8)；平均回收率(n=3)分别为98.8%(RSD1.5%)，99.1%(RSD1.9%)，99.5%(RSD1.4%)和98.5%(RSD1.9%)。结论：该方法简便、准确，重复性好，为赤芝药材的质量控制提供了实验依据。     

基于UHPLC-QqQ-MS和网络药理学的二冬汤潜在活性成分含量测定及作用机制分析

目的 建立二冬汤中活性成分含量测定的超高效液相色谱-串联三重四级杆质谱法（UHPLC-QqQ-MS），并对该方进行抗胰岛素抵抗作用靶点和通路的预测。方法 采用ACQUITY UPLC BEH C₁₈色谱柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm），流动相0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）梯度洗脱（0~3 min，90%~87%A；3~6 min，87%~86%A；6~9 min，86%~83%A；9~11 min，83%~75%A；11~18 min，75%~70%A；18~19 min，70%~52%A；19~22 min，52%A；22~25 min，52%~5%A；25~27 min，5%~90%A；27~30 min，90%A）；利用电喷雾离子源（ESI），多反应监测（MRM）模式，正、负离子模式检测其含量。在此基础上，运用网络药理学方法预测二冬汤发挥抗胰岛素抵抗作用的靶点和通路。结果 二冬汤中20个活性成分在一定质量浓度范围内线性关系良好，精密度、稳定性、重复性及加样回收率良好。含量测定结果显示，15批样品中高质量浓度的成分为黄芩素（1 259.39~1 635.78 mg·L^-1）、黄芩苷（1 078.37~1 411.52 mg·L^-1）；中质量浓度的成分为知母皂苷BⅡ（245.10~604.89 mg·L^-1）、芒果苷（148.59~217.04 mg·L^-1）、槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷（89.30~423.26 mg·L^-1）、芦丁（46.91~1 553.61 mg·L^-1）、甘草酸（55.97~391.47 mg·L^-1）、新芒果苷（37.45~127.03 mg·L^-1）、荷叶碱（0.89~63.48 mg·L^-1）、金丝桃苷（6.96~136.78 mg·L^-1）、甘草苷（30.89~122.78 mg·L^-1）、甘草素（26.64~110.67 mg·L^-1）、原薯蓣皂苷（58.57~284.26 mg·L^-1）；低质量浓度的成分为伪原薯蓣皂苷（5.49~22.96 mg·L^-1）、汉黄芩素（7.16~20.74 mg·L^-1）、人参皂苷Rb₁（7.31~23.87 mg·L^-1）、人参皂苷Rg₁（10.78~28.33 mg·L^-1）、甲基麦冬黄烷酮A（0.74~1.67 mg·L^-1）、人参皂苷Re（7.78~24.76 mg·L^-1）、麦冬皂苷D（2.08~4.29 mg·L^-1）。网络药理学结果表明，二冬汤发挥抗胰岛素抵抗作用机制可能与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路有关。结论 建立的UHPLC-QqQ-MS可为二冬汤复方制剂的开发奠定基础。网络药理学研究结果可为二冬汤治疗2型糖尿病的作用机制研究提供参考。     

RP-HPLC 测定复方盐酸替利定口服液含量及有关物质

 目的 建立一种适用于复方盐酸替利定口服液有关物质及含量测定的高效液相色谱法。 方法 采用 Phenomenex Luna C₈ 柱（ 4.6 mm × 250 mm ， 5 μm ）；流动相：甲醇 -0.2% 碳酸氢铵水溶液（ 70 ∶ 30 ）；流速： 1 mL · min^-1 ；检测波长： 229 nm ；柱温： 35 ℃ 。 结果 盐酸替利定和盐酸纳洛酮浓度分别在 0.02 ～ 2 .00 g · L^-1 （ <> r =1.000 0 ， <> n= 6 ）和在 0.001 6~ 0.16 g · L^-1 （ <> r= 0.999 8 ， <> n= 6 ）内，浓度与峰面积呈良好的线性关系；盐酸替利定和盐酸纳洛酮测定的平均回收率分别为 99.02% 和 98.98% ；盐酸替利定和盐酸纳洛酮的检测限 (S/N<>=3) 分别为 1.0 和 0.4 ng 。 结论 该法简单、快速准确、适用，可同时用于本品中盐酸替利定和盐酸纳洛酮的含量测定及有关物质检查。     

HPLC-PDA测定小半夏汤中的核苷类成分

 目的建立同时对小半夏汤中的5种核苷类成分进行含量测定的方法。方法采用Lichrospher C₁₈柱(4.6 mm×250mm,5μm),以乙腈-水(1∶99)为流动相,体积流量1.0 mL·min^-1,λ220～300 nm,柱温30℃。结果小半夏汤中的尿嘧啶、黄嘌呤、尿嘧啶核苷、次黄嘌呤核苷、鸟嘌呤核苷等的线性范围和相关系数分别为6.88～110.08 mg·L^-1(r=0.999 6),2.82～45.04 mg·L^-1(r=0.999 8),22.40～358.48 mg·L^-1(r=0.999 9),1.96～31.32 mg·L^-1(r=0.999 9),16.54～264.72 mg·L^-1(r=0.999 8);加样回收率分别为100.31%(RSD=1.36%),100.21%(RSD=1.22%),99.98%(RSD=1.30%),100.44%(RSD=1.62%)和100.27%(RSD=1.36%);方法精密度、重复性良好,RSD均小于2.0%。结论本法操作简便、结果可靠、重现性好、检测快速、定量准确,可作为小半夏汤中核苷类成分的含量测定方法。     

高效液相色谱法测定盐酸二甲双胍肠溶片在正常人体的药动学及生物利用度

 目的：研究盐酸二甲双胍肠溶片与普通片的药动学和生物利用度。方法：受试者交叉口服单剂量（1000 mg）肠溶片与普通片，用反相高效液相色谱法测定血药浓度。结果：两种片剂的主要药动学参数分别为C_max（2.9±0.7）mg·L^-1和（2.6±0.6）mg·L^-1，T_max为（2.6±0.4）和（2.3±0.5）h ，T_1/2Ka为（0.87±0.26）h和（0.81±0.23）h，T_1/2Ke为（1.6±0.4）h和（1.9±0.6）h，AUC为（12.2±1.1）mg·L^-1·h^-1和（11.9±1.2）mg·L^-1·h^-1。肠溶片相对于普通片的生物利用度F为(103.0±12.0)%。结论：两种剂型的各药动学参数之间差异均无显著性(P>0.05)，经双向单侧t检验，两制剂具有生物等效性。     

全国主要产区生姜中 6 - 姜酚、 6 - 姜醇含量的测定

 目的 建立同时对全国主要产区生姜中 6- 姜酚、 6- 姜醇进行含量测定的方法。 方法 采用 Lichrospher C₁₈ 柱 （ 4.6 mm × 250 mm ， 5 μm ），以甲醇 - 水（ 65 ∶ 35 ）为流动相，体积流量 0.8 mL·min^-1 ，λ＝ 280 nm ，柱温 30 ℃ 。 结果 生姜中的 6- 姜酚与 6- 姜醇的线性范围和相关系数分别为 13.92~125.32 mg·L^-1 （ r = 0.999 9 ）， 4.04~36.40 mg·L^-1 （ r = 0.999 9 ）；加样回收率分别为 100.85% （ RSD=1.44% ）， 100.79% （ RSD=1.35% ）；方法精密度、重复性良好， RSD 均小于 2.0% 。 结论 本法操作简便、结果可靠、重现性好、检测快速、定量准确，可作为控制生姜质量的方法。     

反相高效液相色谱法测定血清中来氟米特活性代谢物A771726的浓度

 目的：建立反相高效液相测定人血清中来氟米特（leflunomide,Lef）活性代谢物A₇₇₁₇₂₆浓度的方法。方法：采用VP-ODS C₁₈柱,0.01 mmol·L^-1醋酸盐缓冲液(pH4.6)-乙腈(67∶33)为流动相,紫外检测波长为288 nm,流速1.0 mL·min^-1,血清样品用乙酸乙酯提取。结果：A₇₇₁₇₂₆在血清中得到很好的分离,没有明显的干扰峰,出峰时间为6.4 min。线性范围0.39～50 mg·L^-1（r=0.9996）,最低检测限为0.098 mg·L^-1,血清中日内和日间RSD均小于7%,回收率为89.4%～95.3%。结论：本法简便灵敏,符合生物制品分析要求。     

HPLC-MS/MS 和 FPIA 法测定全血中环孢素浓度的比较方法学

 目的 建立液质联用 (HPLC-MS/MS) 法同时测定人血中环孢素 (CsA) ，并与荧光偏振免疫法 (FPIA) 进行比较。 方法 液质联用法： Waters Quattro Premier 串联质谱检测器 , 采用 Symmetry C₁₈ 色谱柱 (2.1 mm × 150 mm ， 5 μm) ，以含有 10 mmol·L^-1 乙酸铵 - 0.1% 甲酸溶液 0.1 % 甲酸甲醇溶液为 10 ∶ 90 ，流速 0.25 mL·min^-1, 采用多反应监测进行定量 , 血样处理：采用乙腈沉淀蛋白，分析时间为 5 min 。并收集 162 人份临床使用 CsA 的 重症肌无力患者 的血样分别用 HPLC-MS/MS 及 FPIA 法测定并进行评价。 结果 HPLC-MS/MS ： CsA 在人血中 50~ 1 000 μ g·L^-1 内线性良好，相对回收率在 98.67% ～ 103.56% 之间 , 日内及日间精密度 ( RSD%) 均小于 10% 。 2 种方法测定患者血样， HPLC-MS/MS 结果大多数低于 FPIA 法。 结论 2 种测定方法的相关性较差，串联质谱法方法用于监测 CsA 血药浓度特异性好，灵敏度高，经济，可适性强。与 FPIA 法相比，对 CsA 的母药有高度的选择性，并能够提高分析的灵敏度。     

柱前衍生化 RP-HPLC 测定 <> L - 去甲麻黄碱盐酸盐光学杂质

 目的 采用柱前手性试剂衍生化反相高效液相色谱法测定 L- 去甲麻黄碱盐酸盐的光学纯度。 方法 采用手性衍生化试剂 2 ， 3 ， 4 ， 6- 四乙酰基 -<>β-<>D- 吡喃葡萄糖基异硫氰酸酯（ GITC ）对样品 L- 去甲麻黄碱盐酸盐进行柱前衍生化。衍生产物以乙腈 -0.01 mol· L ^-1 磷酸二氢钾缓冲液（ pH 3.0 ）（ 40 ∶ 60 ）为流动相，在 Agilent Zorbax C₁₈(4.6 mm × 250 mm ， 5 μm) 色谱柱上进行分离，流速为 1.0 mL·min^-1 ，检测波长为 210 nm ，柱温为 30 ℃。 结果 <>D- 去甲麻黄碱盐酸盐在 0.3 ～ 5.0 mg· L ^-1 内线性关系良好，最低定量下限为 0.3 mg· L ^-1 ，平均回收率为 98.0% ，日内日间精密度考察中 RSD 均小于 5.0% 。 结论 该方法操作简便，衍生化产物稳定，结果准确，重现性好，灵敏度高，可用于 L- 去甲麻黄碱盐酸盐光学纯度的检查控制。     

减肥类保健食品中非法添加酚酞定性定量检测方法的研究

 目的建立减肥类保健食品中非法添加酚酞的液质联用鉴别法及高效液相色谱含量测定法。方法对减肥类保健食品中添加的酚酞以液相色谱分离,采用离子阱质谱进行定性鉴别,流动相为0.5%甲酸-乙腈(70∶30),离子化模式为ESI(+),阱内击碎电压为0.86V;然后采用反相液相色谱对酚酞进行定量,流动相为水-乙腈(70∶30),检测波长为230nm。结果该质谱条件下,酚酞产生[M+H]⁺分子离子峰,二级质谱的特征碎片离子明显。液相色谱定量法的线性范围为1.09～218mg·L^-1,平均回收率为99.57%。结论液质联用法定性准确、可靠;液相色谱含量测定方法简单、快速、重复性好。     

高效液相色谱 - 质谱法测定人血浆中左卡尼汀的浓度

 目的 建立人血浆中左卡尼汀浓度的高效液相色谱 - 质谱（ HPLC-MS ）测定法。 方法 以米屈肼作为内标，血浆样品经蛋白沉淀法处理，用氰基色谱柱 (Ultimate XB-CN ， 4.6 mm × 250 mm ， 5 μm) 进行分离，以乙腈 -30 mmol·L^-1 醋酸铵水溶液 ( 含 0.8% 甲酸 ) (80 ∶ 20) 为流动相，柱温 40 ℃ ，流速 1.0 mL·min^-1 ，柱后分流比为 4 ∶ 1 ， HPLC-MS/ESI⁺ 法选择性监测准分子离子峰 [M+H]⁺ ( 左卡尼汀： <> m/z =162.1 ， IS ： <> m/z =147.1) 。 结果 左卡尼汀及内标米屈肼在氰基柱上保留较好，分离完全，左卡尼汀在 0.4~12.8 mg·L^-1 内线性关系良好， <> r =0.999 4 ，平均萃取回收率大于 80% ，方法回收率大于 92% ，小于 114% ，日内日间 RSD 均小于 12% 。 结论 本方法简便快速、灵敏准确，适用于人血浆中左卡尼汀临床治疗监测和药物研究的需要。     

LC-MS/MS测定人尿液中阿德福韦及其排泄动力学研究

 目的建立测定人尿液中阿德福韦的LC-MS/MS,进行阿德福韦酯po给药排泄动力学研究。方法志愿者尿样经离心、稀释后直接进样,色谱柱为Diamonsil C₁₈柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相为甲醇-水-甲酸(20:80:0.1),流速0.6mL·min^-1,采用电喷雾离子化四极杆串联质谱,多反应监测方式测定样品浓度,监测离子对为m/z274→m/z162。结果在0.05～8.0 mg·L^-1内线性关系良好(r=0.9978,n=5),最低定量限为0.05mg·L^-1。低、中、高浓度质控样品的日内、日间精密度小于10%,方法回收率96.3%～99.3%。志愿者分别服用10,20,40mg阿德福韦酯,尿中阿德福韦排泄率分别为(34±4)%,(36±10)%和(35±14)%,排泄速率常数k_e分别为(0.055±0.028),(0.066±0.016)和(0.06±0.04)h^-1。结论该方法符合生物样品分析要求,可用于阿德福韦尿液浓度的测定,阿德福韦排泄率ke中国人与国外文献报道一致。     

LC-MS/MS测定人血浆中长春西汀体内代谢物阿朴长春胺酸

 目的 建立人血浆中长春西汀体内代谢物阿朴长春胺酸的LC-MS/MS分析测定方法。方法 采用Diamonsil C₁₈ 色谱柱(4.6 mm×200 mm,5 μm);流动相为2 mmol·L-1醋酸铵-甲醇（8∶92）;采用三重四极杆串联质谱以多反应离子检测(MRM)方式进行负离子检测。结果 阿朴长春胺酸的定量下限为10.61 μg·L-1,线性范围为10.61~424.40 μg·L-1(r=0.999 3, n=7),日内、日间精密度均小于6.8%,平均方法回收率为97.48%。结论 所建方法灵敏、精密、准确,可用于阿朴长春胺酸的药动学研究。     

HPLC-MS/MS研究国产磷酸奥司他韦胶囊在健康人体的生物等效性

 目的 建立测定血浆中国产磷酸奥司他韦胶囊（商品名：军科奥韦胶囊）活性代谢产物浓度的LC-MS/MS方法,研究军科奥韦胶囊在中国健康男性志愿者的主要药动学参数以及与参比制剂的生物等效性。方法 采用2制剂双周期交叉试验设计,24名受试者分别单剂量口服受试制剂军科奥韦胶囊和达菲参比制剂,用LC-MS/MS测定其活性代谢产物的含量,所得参数经BAPP2.0软件计算药动学参数并考察生物等效性。结果 口服参比制剂及受试制剂后,其活性代谢产物的ρ_max分别为（625.17±147.76）和（633.57±115.28）μg·L^-1;t_max分别为（4.5±1.0）和（4.5±1.2）h;t_1/2分别为（8.13±1.13）和（7.79±0.89）h;MRT分别为（12.09±1.38）和（11.95±1.03）h; AUC_0-τ分别为（7 247.02±1 720.33）和（7 506.16±1 454.36）μg·h·L^-1;AUC_0-∞分别为（7 428.75±1 793.94）和（7 659.99±1 477.83）μg·h·L^-1;受试制剂对参比制剂的相对生物利用度为（105.8±17.7）%。结论 利用方差分析及双单侧t检验分别对受试和参比制剂进行生物等效性评价,军科奥韦胶囊和已上市的达菲胶囊制剂具有生物等效性。     

HPLC-MS/MS快速同时测定全血中3种免疫抑制剂的浓度

 目的建立液质联用(HPLC-MS/MS)法同时测定人全血中环孢素A、他克莫司、西罗莫司的方法。方法采用Symmetry C₁₈色谱柱(2.1 mm×150 mm,5μm),流动相:10 mmol·L^-1醋酸铵-0.1%甲酸溶液和0.1%甲酸甲醇溶液为90∶10,流速0.25 mL·min^-1,采用多反应监测进行定量。结果环孢素A在人全血中50～1 500μg·L^-1内线性良好,他克莫司、西罗莫司在人全血中1～30μg·L^-1内线性良好,相对回收率在98.67%～103.56%之间,日内及日间精密度(RSD%)均小于10%。结论本方法能满足同时测定人全血中环孢素A、他克莫司、西罗莫司的要求,用于临床血药浓度的监测。