肾癌特异相关基因GYLZ-RCC18的表达及对肾癌细胞生长及增殖活性的影响

目的 通过检测肾癌相关新基因GYLZ－RCC18（基因号：BE825133）在肾癌中的表达特点及其对肾癌细胞生长、增殖的影响，探讨GYLZ－RCC18基因的功能及其在肾癌发生发展中的作用。方法 应用逆转录－聚合酶链式反应（RT－PCR）的方法检测肾癌相关基因GYLZ－RCC18在31例肾癌标本中的表达特点；观察GYLZ－RCC18反义寡核苷酸对肾癌细胞生长、增殖活性、形态学的影响。结果 GYLZ－RCC18基因在肾癌组织特异表达，正常肾组织较肾癌组织低表达或不表达，两者表达量差异为1－9倍。GYLZ－RCC18基因的表达在高分级、高分期肾癌明显高于低分级、低分期肾癌；导入GYLZ－RCC18反义寡核苷酸后，可明显抑制癌细胞的生长和增殖活性，并减少分期肾癌，导入GYLZ－RCC18反义寡核苷酸后，可明显抑制癌细胞的生长和增殖活性，并减少GRC－1细胞的核分裂。结论 GYLZ－RCC18是肾癌组织相对较特异表达的新基因，它的高表达与肾癌发生发展以及生长、增殖密切相关，它的成功克隆为阐明肾癌发生发展的分子生物学机制开辟了新的途径，为今后肾癌的特异诊断，基因治疗提供了新的理论依据。     

肾癌相关新基因GYLZ-RCC18反义寡核苷酸转染对肾癌细胞系GRC-1的作用

目的：探讨肾癌相关新基因GYLZ－RCC18在肾癌发生发展中的作用机制。方法：采用逆转录PCR方法检测GYLZ－RCC18在肾癌和正常肾细胞系中的表达,将第一编码区起始处的20个碱基的反义和正义寡核苷酸导入肾癌细胞系GRC－1,连续观察对肾癌细胞生长、增殖凋亡、死亡率、形态学的影响。结果：GYLZ－RCC18在肾癌细胞系中表达明显高于正常肾细胞系;导入GYLZ－RCC18反义寡核苷酸后,GRC－1细胞的核分裂可明显减少,导致GRC－1细胞死亡,抑制癌细胞的生长和增殖活性,并可特异诱导GRC－1连续凋亡。结论：GYLZ－RCC18是肾癌发生发展密切相关的癌基因,其表达可促进肾癌细胞的生长和增殖,并通过抗癌细胞死亡和凋亡机制对癌细胞起保护作用。     

肾癌相关基因GYLZ-RCC18对肾癌细胞系GRC-1抗死亡作用机制的研究

目的：应用反义基因转染技术探讨肾癌相关新基因GYLZ－RCC18与肾癌细胞死亡（包括坏死及凋亡）之间的关系,并探讨肾癌基因疗法的新途径。方法：用脂质体包裹的新基因GYLZ－RCC18第一编码区起始处的20个碱基的反义和正义寡核苷酸导入肾癌细胞系GRC－1,应用流式细胞技术和伊红排斥实验连续检测GYLZ－RCC18反义寡核苷酸对肾癌细胞凋亡、坏死的影响。结果：导入GYLZ－RCC18反义寡核苷酸后,可大量杀伤GRC－1细胞并明显促进GRC－1细胞坏死,于第4天达到杀伤高峰约60％;同时可连续8d诱导凋亡峰,最高于第2天达约约22．5％,两种作用 曲线形状和峰值不完全一致。结论GYLZ－RCC18是肾癌相关的重要的新的癌基因,GYLZ－RCC18的表达可通过两种不同的机制即抗癌细胞坏死机制和抗凋亡机制发挥对肾癌细胞的保护作用,GYLZ－RCC18可能对肾癌细胞生存和耐药至关重要,通过导入反义基因的方法阻断肾癌细胞中GYLZ－RCC18的表达,可有效地杀伤肾癌细胞,对此新基因的研究将有助于为肾癌的基因的基础研究和临床治疗提供新的思路和途径。     

PinX1基因在肾癌组织的表达及临床意义

目的分析抑癌基因PinX1在肾癌中的表达,探讨PinX1在肾癌发生、发展和预后中的作用及临床意义。方法应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测56例肾癌组织中内源性端粒酶抑制基因PinX1及端粒酶催化亚基(hTERT)的mRNA表达水平,同时应用免疫组化方法检测PinX1蛋白表达水平,分析PinX1表达与肾癌分期、分级及临床特征之间的关系。结果 PinX1表达与肾癌组织分化、临床分期和淋巴转移之间有显著相关性(P0.05),与hTERT表达呈负相关。PinX1在肾癌和癌旁表达具有显著性差异(P0.05)。肾癌分期分级越高,PinX1表达越低,有淋巴结转移的PinX1表达要低于无淋巴结转移(P0.05)。结论 PinX1的下调可能与肾癌形成、转移过程中端粒酶激活及维持机制有关。检测PinX1的表达水平对评价肾癌恶性程度、转移潜能和预后评估均有重要的临床价值。     

Caveolin-1和HDAC1蛋白在肾细胞癌中的表达及意义

目的探讨Caveolin-1和HDAC1蛋白在肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)及正常肾组织中的表达及临床意义,并探讨其与肿瘤生物学行为之间的关系。方法采用免疫组织化学方法检测51例RCC、15例正常肾组织及26例癌旁组织中Caveolin-1和HDAC1蛋白的表达,并分析其与患者临床病理特征的关系。51例RCC中组织学分级:高分化13例,中分化24例,低分化14例;临床分期:Ⅰ期16例,Ⅱ期20例,Ⅲ期10例,Ⅳ期5例。结果 Caveolin-1在正常肾组织、癌旁组织和RCC中的阳性表达率分别为33%(5/15)、42%(11/26)、65%(33/51),逐渐升高(P<0.05)。在51例RCC中,Caveolin-1的阳性表达率临床分期Ⅲ期和Ⅳ期高于Ⅰ期和Ⅱ期,低分化高于中、高分化,有淋巴结转移组高于无淋巴结转移组。Caveolin-1表达与病理学分期、分级和淋巴结转移均相关(P值分别为0.001、0.038和0.006,P均<0.05),随着肿瘤分期、分级的升高,Caveolin-1表达增强。RCC中Caveolin-1表达与年龄、性别、肿瘤所在部位均无关(P>0.05)。HDAC1在正常肾组织、癌旁组织和RCC中的阳性表达率分别为13%(2/15)、19%(5/26)、75%(38/51),呈现显著升高的趋势(P<0.05)。在51例RCC中,HDAC1的阳性表达率临床分期Ⅲ期和Ⅳ期高于Ⅰ期和Ⅱ期,低分化高于中、高分化,有淋巴结转移组高于无淋巴结转移组,肾癌组织中HDAC1表达率随肾癌TNM分期的增高和病理分级的增加而升高。RCC中HDAC1表达与年龄、性别、肿瘤所在部位均无关(P>0.05)。RCC中Caveolin-1的表达与HDAC1表达呈正相关。结论 Caveolin-1和HDAC1在RCC中高表达,可能是RCC发生、发展及浸润转移的重要因素之一,联合检测对判断RCC预后有指导意义。     

肾癌组织中C—myc癌基因的扩增与其蛋白产物表达评价

目的：研究肾癌中Ｃ－ｍｙｃ基因的扩增和表达情况及探讨Ｃ－ｍｙｃ基因与肾癌恶性表型及预后的关系。方法：应用核酸杂交技术对４５例肾癌和５例正常肾赃组织的Ｃ－ｍｙｃ基因的扩增进行检测，同时用免疫组化方法检测Ｃ－ｍｙｃ蛋白产物的表达水平。结果，１５例肾癌中有基因扩增，扩增率３３．３％，但与临床分期与病理分级无关；２７例肾癌组织有Ｃ－ｍｙｃ蛋白产物的阳性表达，阳性率为６０％，正常组织和癌旁组织Ｃ－ｍｙｃ蛋白为阴性，并且Ｃ－ｍｙｃ蛋白表达与肿瘤的临床分朝和病理分级有关。结论：Ｃ－ｍｙｃ基因可能是肾癌发生的相关基因之一，Ｃ－ｍｙｃ蛋白表达与肾癌临床行为关系密切，有可能成为肾癌诊断和预后的一个重要分子生物学检测指标。     

端粒酶活性表达与老年肾癌生物学特性的关系

目的 研究端粒梅活性表达与老年肾癌(RCC)生物学行为的关系。方法 应用改良的端粒重复片段扩增法(TRAP法)检测24例老年RCC组织、癌旁组织及正常肾组织中端粒酶活性,并探讨端粒酶活性表达与RCC生物学特征的关系。结果 RCC组织中端粒酶表达阳性率为87.5％,显著高于癌旁组织(20％)及正常肾组织(5％),差异显著(P<0.01),端粒酶活性表达与RCC细胞类型、分级、分期无关,与肿瘤大小、DNA含量相关。结论 RCC组织中端粒酶激活与肾癌的发生有关,端粒酶活性检测有可能成为RCC早期诊断、治疗及预后判断的重要指标。     

p16蛋白及PCNA在肾癌中的表达及意义

目的探讨肾癌中p16蛋白与PCNA的表达与肾癌组织学类型、临床分期、病理分级及预后的关系。方法采用免疫组织化学SP法检测41例肾癌及18例癌旁正常肾组织中p16蛋白及PC－NA的表达。结果p16蛋白在肾癌及癌旁正常肾组织中的阳性表达率间具有显著性差异（P＜0.05）,p16蛋白表达在肾透明细胞癌及颗粒细胞癌间无显著性差异,随肾癌分级、分期升高而明显降低,p16阳性表达组术后5年生存率明显高于阴性表达组;肾癌及癌旁肾组织中PCNA的阳性表达率增高,与预后有关,与肾癌的组织类型及分期无关。结论p16基因及蛋白的检测可作为肾癌的辅助诊断及预后判断的参考指标;PCNA可作为肿瘤恶性程度的判断及预后的参考指标。     

Twist、E-钙粘蛋白在肾癌转移进展中的意义

目的探讨Twist蛋白和E-钙粘蛋白在人肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)组织中的表达及其相关性。方法应用免疫组织化学SABC染色方法检测40例RCC及癌旁正常组织中Twist蛋白、E-钙粘蛋白的表达情况,分析二者相关性。结果 RCC组织中Twist蛋白的阳性表达率(87.5%)明显高于癌旁肾组织中Twist蛋白的阳性表达率(32.5%);RCC组织中E-钙粘蛋白的阳性表达率(12.5%)明显低于其在癌旁肾组织中的阳性表达率(95.0%),Twist蛋白和E-钙粘蛋白表达在肾癌组织和癌旁组织中的差异均有统计学意义(P<0.01)。其中Twist的异常表达与RCC病理分级、临床分期、淋巴结转移呈正相关(P<0.05),E-钙粘蛋白的异常表达与RCC病理分级、临床分期、淋巴结转移呈负相关(P<0.05),而两者与患者的性别、肿瘤直径、年龄无相关性(P>0.05)。结论 Twist蛋白可能是RCC发生、发展及浸润转移的重要因素之一。     

肾细胞癌组织中Mina53的表达及意义

目的：探讨Mina53（Myc—induced nuclear antigen53）在肾细胞癌中的表达及意义。方法：利用免疫组化SP法测定96例经HE病理确诊RCC组织和20例癌旁组织中Mina53的表达,并分析其结果与病理分级及临床分期之间的关系。结果：Mina53在癌旁组织和I期、Ⅱ期RCC组织中不表达或低表达,在Ⅲ期、Ⅳ期RCC组织中高表达,在Ⅳ期与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期间的表达差异有统计学意义（P〈0．01）;在不同的病理分级G3与G2,G3与G1中表达差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：Mina53在RCC组织中的表达与临床病理分期、分级有关,随着病理分级和临床分期的升高而增强,MinaS3的高表达与肾细胞癌的临床进展有关。     

肾癌差异表达基因GYLZ-RCC18的全长克隆及意义

目的 克隆并鉴定肾癌与下沉肾组织之间差异表达的基因。为研究肾癌发生发展机制提供新的突破口。方法 应用抑制性消减杂交技术,构建人肾癌组织与正常肾组织差异表达的ｃＤＮＡ消减文库,并从中克隆鉴定出肾癌特异表达的基因。结果：构建成功高消减效率的人肾癌组织ｃＤＮＡ消减文库,对其中１０个克隆的插入ｃＤＮＡ片段进行测序后,经基因库检索表明１０个片段均为未知新序列,其中ＧＹＬＺ－ＲＣＣ１８基因为５个拷贝,这提示以上１０个ｃＤＮＡ片段可能来自６个新基因。差异分析显示ＧＹＬＺ－ＲＣＣ１８的肾癌组织中有明显表达,而在正常肾组织中无表达,应用ＳＭＡＲＴ ＲＡＣＥ技术获得ＧＹＬＺ－ＲＣＣ１８基因的全长,并证明ＧＹＬＺ－ＲＣＣ１８是一个５′端有Ｄ３种不同剪切方式亚型的基因家族。结论 ＧＹＬＺ－ＲＣＣ１８基因是肾癌特异表达的新基因。人肾癌ｃ     

MTS_1基因产物P_(16)蛋白在肾癌中的表达及意义

采用免疫组化法对42例肾癌、20例癌旁正常肾组织MTS_1基因产物P_(16)蛋白进行检测。结果显示肾癌P_(15)蛋白表达阳性率明显高于癌旁正常肾组织(P<0.01),P_(16)表达相关于肾癌病理分级、临床分级及预后。结果提示:MTS_1基因与肾癌的发生发展有关,P_(16)蛋白表达缺失是肾癌恶性度高及晚期表现。P_(16)蛋白表达可作为判断肾癌预后的指标。     

肾细胞癌VHL基因改变与VEGF表达的关系及意义

目的：探讨肾细胞癌VHL基因异常与血管内皮生长因子（VEGF）表达的关系及意义。方法：应用聚合酶链反应（PCR）加单链构象多态性分析（SSCP）、多聚合酶链反应（Multiplex-PCR)及免疫组织化学方法检测42例肾细胞癌、18例远离肿瘤的正常肾脏及10例正常肾脏组织中VHL基因突变、异常甲基化及VEGF的表达。结果：肾癌组织中VHL基因改变（61．9％）与正常肾脏组织（3．6％）比较差别有显著性意义（P＜0．005）,VHL基因失活与肾癌组织类型及临床分期相关,与病理分级无关。VEGF在肾癌组织（64．3％）与正常肾组织（21．4％）中的表达差别有显著性意义（P＜0．005）,肾癌组织中VEGF表达与组织类型无关,与病理分级及临床分期相关,随病理分级及临床分期的升高而增高。VHL基因改变与VEGF表达间存在显著的相关性（P＜0．05）。结论：VHL基因在肾细胞癌中具有高频突变率,可负向调节VEGF的表达。     

Prognostic impact of carbonic anhydrase IX expression in human renal cell carcinoma

OBJECTIVE: To evaluate the prognostic information of carbonic anhydrase (CA) IX expression in patients with renal cell carcinoma (RCC), as increased expression of CA IX is correlated with a worse prognosis in several malignancies. PATIENTS AND METHODS: CA IX expression was assessed in RCC tumours from 228 patients, using a tissue microarray technique on archival material. The expression was related to RCC cell type, Tumour-Node-Metastasis (TNM) stage, nuclear grade and survival. RESULTS: CA IX expression was significantly higher (P < 0.001) in 183 conventional than in 31 papillary RCC and 14 chromophobe RCC. For conventional RCC there was no correlation of CA IX expression with TNM stage or nuclear grade. To evaluate the prognostic information conventional RCC tumours were subdivided arbitrarily into three groups according to the CA IX expression, of 0-10%, 11-90% and 91-100% expression, respectively. Patients with tumours with 0-10% expression had a less favourable prognosis than those with 11-90% and 91-100% expression (P = 0.012, and 0.001), respectively. A multivariate analysis of prognostic factors for patients with conventional RCC showed that TNM stage, nuclear grade and CA IX were independent predictors of prognosis. CONCLUSION: These results show that CA IX expression is higher in conventional than other RCC cell types; furthermore, patients with conventional RCC with low CA IX expression had a less favourable prognosis.     

肾母细胞瘤过表达基因和WT1基因在肾癌组织中转录水平的定量研究

目的 研究肾癌组织中肾母细胞瘤过表达基因（NOV）及WT1基因mRNA定量表达水平及意义。方法 肾癌组织标本57例。男40例，女17例，平均年龄65岁。T139例、T213例、T3a5例；G114例、G223例、G320例。应用实时RT—PCR方法定量检测癌组织及36例癌旁正常肾组织中NOV和WT1的mRNA表达，并对2种基因表达水平进行相关性分析。结果 肾癌组织NOVmRNA表达水平中位值（1．17）显著低于癌旁正常组织（4．32，P〈0．05），乳头状肾癌组织表达量（2．67）显著高于透明细胞癌（1．06，P〈0．05），G．肿瘤表达量（4．61）显著高于G2～G3肿瘤（1．11，P〈0．05）。NOV表达与肿瘤分期、大小等无显著相关。WT1mRNA在肾癌组织中的表达水平中位值（0．13）显著低于癌旁正常组织（1．93，P〈0．05），WT1表达与肿瘤分期、分级、组织类型等均无关。NOVmRNA与WT1mRNA表达水平无明显相关。结论 NOV基因与肾癌的发生和分化相关。WT1在肾癌组织中表现为低表达。NOV表达是否受WT1的调节尚需进一步研究。     

Cyst-associated renal cell carcinoma: Clinicopathologic characteristics and evaluation of prognosis in 27 cases

BACKGROUND: No consistent clinicopathologic characteristics of cyst-associated renal cell carcinoma (CRCC) have previously been determined. METHODS: In total, 768 patients with renal cell carcinoma (RCC) underwent radical or partial nephrectomy. Renal cell carcinoma was classified as CRCC in 27 of these patients (3.5%, subdivided into RCC originating in a cyst and cystic RCC), clear-cell RCC in 662 patients (86.2%), chromophobe cell renal carcinoma in 36 patients (4.7%) and papillary RCC in 43 patients (5.6%) according to the criteria of the World Health Organization. RESULTS: The pathologic stage and nuclear grade were usually lower in those with CRCC (low stage/low grade; 89%/96%) or chromophobe cell renal carcinoma (low stage/low grade; 89%/80%) than in those with clear-cell RCC (low stage/low grade; 59%/65%) or papillary RCC (low stage/low grade; 53%/69%). Of the 27 CRCC patients, only 19 (70%) could be diagnosed through preoperative imaging studies. Patients with CRCC showed a favorable prognosis (survival rate: 95% at 1 year, 89.7% at 3 years and 84.4% thereafter) and, especially among the patients with RCC originating in a cyst, no cancer-related death was observed. Comparing the survival among four types of RCC, a favorable outcome was observed in cases of CRCC or chromophobe cell renal carcinoma compared with clear-cell RCC or papillary RCC (clear vs chromophobe: P = 0.002; chromophobe vs papillary: P = 0.019; clear vs cyst-associated: P = 0.001; papillary vs cyst-associated: P = 0.00079). CONCLUSIONS: In cases of CRCC, the disease was usually detected at lower stages and grades and therefore the prognosis was better than in cases of other types of RCC. Preoperative diagnosis of this disease was very difficult, especially in cases of RCC originating in a cyst.     

Proliferative activity, angiogenesis and nuclear morphometry in renal cell carcinoma

BACKGROUND: Prognostic parameters other than tumor stage and grade are essential for renal cell carcinoma (RCC) patients. This study was undertaken to determine the usefulness of cellular proliferation, angiogenesis and nuclear morphometry in predicting the biological aggressiveness of RCC. METHODS: Surgical specimens of 70 patients with RCC were investigated by conventional histology, Ki-67 immunostaining and stereological assessment of angiogenesis and mean nuclear volume. RESULTS: There was no difference in disease-specific survival with respect to sex, age and histopathological type (except sarcomatoid and other types). The survival was significantly lower and the chance of metastases was higher in the group with higher proliferative activity (P=0.007). There was no relation between angiogenesis, mean nuclear volume, stage and survival. There was a significant relation between both Fuhrman and WHO grades, tumor stage and survival. Histopathological type, grade, angiogenesis and mean nuclear volume failed to predict recurrences and/or metastases. In multivariate analysis, only TNM stage and proliferative activity were found to be independent prognostic factors. CONCLUSIONS: In addition to tumor grade and stage, proliferative activity of a given RCC may have the potential to identify patients with an impaired prognosis.