出血热纯化疫苗免疫安全性与免疫学效果评价

20 0 2年 12月 ,我站与江苏省疾病预防控制中心合作 ,进行了双价肾综合征出血热纯化疫苗 (Vero细胞 )的免疫安全性与免疫学效果临床观察。现将结果报告如下。材料和方法　 (1)疫苗 :双价肾综合征出血热纯化疫苗(Vero细胞 )由长春百龙生物技术有限公司提供 ,所用毒株为SD 980 5株和HB 990 8株 ,经浓缩、灭活、纯化制成。观察疫苗批号为 2 0 0 10 50 2 ,有效期内使用。 (2 )观察对象 :本市常住人口 ,15～ 60岁健康男女志愿者 ,无出血热病史、出血热疫苗接种史及疫苗禁忌症。签订知情同意书。 (3 )免疫程序及接种要求 :按 0 ,14d 2针免疫程…     

双价肾综合征出血热沙鼠肾细胞灭活疫苗接种效果观察

现已知我国半数地区间时存在着姬鼠和家鼠二种型别的肾综合征出血热(HFRS)的混合流行,因此,有必要研制能同时预防这二种型别的疫苗。目前我国用于生产疫苗的三株HFRS病毒,对同型各毒株均表现较好的中和作用,但对异型病毒的交叉中和作用较差。经人体免疫三针后,对同型病毒的中和抗体阳转率可达90%,而对异型病毒的阳转率仅30%左右。因而,在我国,研制双价HFRS疫苗的工作早已被提出来了。本文报道我们研制的双价HFRS沙鼠肾灭活疫苗免疫人体的结果。材料与方法一、疫苗:由杭州天元生物药业公司生产的双价肾综合征出血热沙鼠肾细胞灭活疫苗(批号双-4),制造疫苗的毒种为Z10(Ⅰ型)和Z37(Ⅱ型),病毒在沙鼠肾原代细胞培养后,经β-丙内脂灭活,内含0.1%人血白蛋白和0.5mg/ml氢氧化铝佐剂,先分别制成Ⅰ型和Ⅱ型的单价疫苗,再按不同比例混合而成双价疫苗。     

肾综合征出血热疫苗的纯化与人体观察

肾综合征出血热(HFRS)足由汉滩病毒引起的急性传染病,世界各地均有发生.用长爪沙鼠肾原代细胞培养HFRS病毒,经β-丙内脂灭活病毒,研制成功汉坦型、汉城型及汉坦型加汉城型三种疫苗,已取得很好的预防效果[1,2].为使产品的质量进一步提高,进行了疫苗纯化的研究.     

肾综合征出血热Vero传代细胞疫苗的研究

目的研究肾综合征出血热(HFRS)Vero传代细胞疫苗。方法将HFRS双价沙鼠肾细胞灭活疫苗的生产疫苗株Z10(Ⅰ型)、Z37(Ⅱ型)适应到Vero细胞上进行连续传代，并用不同代次的Vero细胞适应株制备Vero传代细胞疫苗。结果Z10、Z37，株感染Vero细胞后第1代即可达到较高病毒滴度，并且在Vero细胞中持续传代适应，病毒滴度分别维持在6．25～6．75和6．50～7．00logTCID50／ml之间，较为稳定。用不同代次的Vero细胞适应株制备而成的HFRS Vero细胞灭活疫苗抗原效价和疫苗的病毒滴度有较大提高，反向间接血凝效价从Z10 Cp1 Vero细胞疫苗的阴性上升到Z10 Cp10 Vero细胞疫苗的1：64，从Z37 Cp1 Vero细胞疫苗的1：2上升到Z37 Cp10 Vero细胞疫苗的1：64；疫苗病毒滴度(logTCID50／ml)从Z10 Cp1 Vero细胞疫苗的4．25上升到Z10 Cp10 Vero细胞疫苗的6．50，从Z37 Cp1 Vero细胞疫苗的6．25上升到Z37 Cp10 Vero细胞疫苗的7．50。疫苗在抗原量和病毒滴度上基本符合中国生物制品的要求。结论HFRS Vero传代细胞疫苗的生产，疫苗株在Vero细胞中的连续传代适应起关键性作用。     

狂犬疫苗灭活后β-丙内酯水解的最佳pH值的选择

我国狂犬疫苗灭活剂是甲醛溶液。甲醛为致癌物,残留的游离甲醛随疫苗注入人体后产生刺激性反应。而β－丙内酯（ＢＰＬ）在国外已广泛用于各种疫苗的灭活,它是一种杂环类化合物（Ｃ３Ｈ４Ｏ２）,沸点１５５℃,常温下呈无色粘稠状液体,对病毒有很强的灭活作用。ＢＰＬ虽是致癌物,但极易水解,形成人体脂肪代谢产生β－羟基丙酸〔１〕,对人体无害。在不同ｐＨ值下,ＢＰＬ水解情况是不同的。我们将ＢＰＬ分别加到ｐＨ值为７－２、７－４、７－６、７－８、８－０疫苗中,并在３７℃水浴中水解２小时,用毛细管气相色谱法检测其含量变化…     

汉坦病毒Vero细胞灭活疫苗候选毒种筛选

目的将肾综合征出血热疫苗后备筛选毒株适应于Vero细胞，并对其抗原性和免疫原性进行研究。方法将新分离的4株汉坦病毒接种敏感动物，在乳沙鼠脑内连续传代。比较脑内病毒抗原的含量以及乳鼠的发病情况；在Vero细胞中传代，比较培养液中的病毒滴度和抗原滴度以及细胞的病变情况；利用筛选出的毒株研制Veto细胞灭活疫苗。研究疫苗的免疫原性。结果4株病毒经乳沙鼠脑内传代，鼠脑悬液的病毒滴度和抗原滴度分别达7．00～7．75LgCCID50／ml和1：3201：1280；4株毒株经Vero细胞连续传5代，培养液病毒滴度和抗原滴度分别达6．50～7．50LgCID50／ml和1：160～1：768；疫苗免疫家兔2针后，其中出血热病毒株Z34与ZJ5株疫苗免疫血清对同型毒株的中和效价达到1：10。结论ZJ4与ZJ5两毒株已适应于Vero细胞，且具有病毒滴度高和免疫原性良好的特性，适合用作Vero细胞肾综合征出血热疫苗理想的候选毒株。     

双价肾综合征出血热纯化疫苗人群接种安全性与免疫学效果评价

1996年对浙江天元生物药业股份有限公司 (天元公司 )研制的肾综合征出血热 (ＨＦＲＳ)双价灭活疫苗进行观察 ,安全性及免疫学效果均较好 ,但Ｉ型中和抗体阳转率稍低[1 ] 。2 0 0 1年 8～ 9月 ,在江苏省金坛市进行了天元公司生产的ＨＦＲＳ双价纯化疫苗临床研究 ,观察人群接种反应与免疫效果 ,并为其确定基础免疫程序及向人群大规模推广应用提供科学依据。一、材料与方法1.疫苗 :双价ＨＦＲＳ纯化疫苗由天元公司生产 ,以沙鼠肾细胞为培养基质 ,所用毒株为Ｚ1 0 (Ⅰ型 )和Ｚ37(Ⅱ型 ) ,经浓缩、灭活、纯化制成。观察疫苗批号为 2 0 0 0 0 5 0 …     

人用SARS病毒灭活疫苗的研究

[目的]研制出安全、有效、质量可控的人用SARS病毒灭活疫苗。[方法]建立了生产疫苗用的Vero细胞库并进行了检定，分离培养可稳定传代的SARS病毒，对其生物学特性进行了研究；建立了适用于SARS疫苗生产的细胞库和可用于疫苗生产的病毒种子批；优化确定SARS疫苗的灭活工艺和纯化工艺；通过动物实验，对其安全性、有效性进行了研究。[结果]建立了符合SARS病毒灭活疫苗生产使用的细胞库；分离获得了可稳定传代的用于疫苗生产的SARS病毒株；建立了适用于产业化的SARS病毒的灭活工艺和纯化工艺；制备的人用SARS灭活疫苗经小鼠、豚鼠、家兔、恒河猴不同种动物试验，免疫后动物可产生较高SARS病毒中和抗体，可以有效防护SARS病毒对动物的攻击。安全性实验表明，该疫苗未见毒副反应。[结论]试验研制的人用SARS病毒灭活疫苗具有较强的免疫原性，设计的灭活疫苗的生产工艺是可行的，并获得了国家食品药品监督管理局颁发的临床研究批文，待进一步研究后，可望进行规模化生产。     

肾综合征出血热双价纯化疫苗的稳定性试验

将检定合格的连续三批肾综合征出血热双价纯化疫苗(Vero细胞) 2～8℃放置3、6、1 2、1 8、2 4、30月和37℃放置7、1 4、2 1、2 8天,对其稳定性进行系统试验。从疫苗的外观、pH值变化及疫苗免疫家兔后的中和抗体水平检验疫苗的稳定性。结果表明三批疫苗具有良好的稳定性。     

安徽省肾综合征出血热沙鼠肾细胞Ⅰ型灭活疫苗现场实施及防病效果观察

安徽省肾综合征出血热沙鼠肾细胞Ⅰ型灭活疫苗现场实施及防病效果观察宋明宇，魏强，陈家新，陈孝英，丁广修，孙仁品，许中安，花昌华，李含，周本良肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）沙鼠肾细胞灭活Ⅰ型疫苗是新近研制的生物制品，经小范围人群接种试验证明是安全的。根据中国...     

肾综合征出血热双价纯化疫苗中残余DNA的去除

为了避免外源DNA与人染色体整合 ,保证生物制品的安全性 ,WHO及欧共体等均制定标准以控制生物制品外源DNA的含量。据 2 0 0 0版《中国生物制品规程》 ,标准为外源DNA含量不大于 1 0ng 剂量。用Vero细胞为基质制备肾综合征出血热 (HFRS)双价纯化疫苗 ,是国家“九五”科技攻关课题。在完成了HFRS病毒株在Vero细胞上适应性的筛选及提高毒力滴度等一系列试验后 ,控制疫苗原液中残余DNA含量成为保证疫苗安全性的重要方面。在小量试验基础上 ,采用硫酸鱼精蛋白沉淀残余DNA获得有效结果。现报告如下。1 .材料与方法 :①Vero细胞CBCC …     

肾综合征出血热灭活疫苗大鼠效力试验模型

目前肾综合征出血热灭活疫苗效力试验采用家兔作为免疫动物 ,对疫苗免疫能产生较好的中和抗体和免疫荧光法(ＩＦＡ)抗体应答 ,但购买和饲养家兔成本较高。实验用大鼠为汉坦病毒的敏感动物 ,我们已经报道汉滩病毒 (ＨＴＮＶ)型(Ⅰ型 )肾综合征出血热灭活疫苗免疫大鼠 ,观察表明大鼠对Ⅰ型疫苗的反应性良好 ,同型中和抗体应答类似于家兔 ,异型中和抗体和ＩＦＡ抗体应答较家兔为好。我们继续研究汉城病毒 (ＳＥＯＶ)型 (Ⅱ型 )和双价肾综合征出血热灭活疫苗在大鼠的免疫反应 ,并观察了疫苗的稳定性。一、材料和方法1.动物 :大鼠 :ＳＤ品种 ,刚…     

β-丙内酯对狂犬病病毒的灭活效果

狂犬病是一种由狂犬病病毒（RV）感染引起的高度致死性脑脊髓炎,一旦发病,病死率几乎高达100％,预防接种狂犬病疫苗是控制狂犬病的最有效方法。目前,人用狂犬病疫苗均为灭活疫苗,其灭活剂主要有β-丙内酯（BPL）和甲醛1。虽然BPL早已应用于狂犬病疫苗生产,但未见其对狂犬病毒的灭活曲线的研究报道。我们对不同浓度BPL灭活RV的效果、灭活曲线等进行研究,现将结果报道如下。     

浙江省肾综合征出血热灭活疫苗的研究

目的　通过对分离到的汉坦病毒 (HV)免疫原性及病毒滴度的选育 ,选择出疫苗毒株及筛选出不破坏病毒血凝抗原的灭活剂和疫苗基质细胞 ,提高疫苗的规模化生产技术 ,生产出副反应轻 ,免疫原性和现场防病效果好的各种剂型的疫苗 ,满足人群免疫预防的需要。方法　分离到的HV株 ,应用多种方法进行免疫原性和动物保护试验选育 ;疫苗灭活剂筛选通过与甲醛灭活效果比较 ,观察对血凝素抗原的影响 ,以此作为判断指标 ;疫苗基质细胞建立主要通过观察病毒在各种细胞上的增殖滴度、基质细胞的贴壁时间及收液次数等方法 ,选择基质细胞。结果　从 45株病毒株中成功选育出Z10 (汉滩型 )和Z3 7(汉城型 )疫苗病毒株 ,两株疫苗免疫原性好、病毒滴度高 ;成功选择出 β 丙内酯作为疫苗灭活剂 ,它不破坏病毒的血凝素抗原 ,接种反应轻 ;建立的长爪沙鼠肾原代细胞作为疫苗基质 ,不仅病毒滴度高 ,而且贴壁效果好 ,可以做到多次收液的目的。结论　我们研制的疫苗无论是单价的Ⅰ型、Ⅱ型疫苗 ,还是双价 (Ⅰ型和Ⅱ型混合 )疫苗 ,接种人体后副反应轻 ,免疫效果好 ,现场防病效果也很理想 ,是目前控制肾综合征出血热流行最有效和经济的手段和措施 ,值得大力推广。     

流行性出血热灭活疫苗人体试验的效果观察

我们研制的流行性出血热(EHF)灭活疫苗,于1988年3月参加全国EHF灭活疫苗的统一考核。经中国药品生物制品检定所检定合格后,获得卫生部批准,进行了小批量的人体试验,现报告10例正常人接种后的反应和抗体产生情况如下。 1.疫苗:以EHF病毒Z10P10为毒种,感染沙鼠肾原代细胞,按流行性乙型脑炎的生物制品规程要求研制成的EHF灭活疫苗,并用β—丙内脂(含量为0.05%)代替甲醛溶液灭活病毒,于1988年1月24日制成。     

肾综合征出血热疫苗大面积人群免疫的中和抗体应答

肾综合征出血热疫苗大面积人群免疫的中和抗体应答刘文雪，杨立宏，俞永新为了解肾综合征出血热（ＮＦＲＳ）３种灭活疫苗（沙鼠肾细胞、地鼠肾细胞和鼠脑纯化疫苗）大面积人群接种后中和抗体应答情况，由各接种点选择部分接种者于免疫前、３针免疫后１４天、约１年后加强...     

双价纯化肾综合征出血热疫苗临床观察

用沙鼠肾原代细胞培养肾综合征出血热 (ＨＦＲＳ)Ｚ10(Ⅰ型 )和Ｚ37(Ⅱ型 )病毒 ,经 β丙内脂灭活 ,已研制成Ⅰ型、Ⅱ型和双价 (Ⅰ型加Ⅱ型 ) 3种ＨＦＲＳ疫苗 ,均已取得新药证书和生产文号 ,并形成规模生产 ,经 10 0 0余万现场人群接种 ,取得了很好的预防效果[1 ] 。为使产品的质量进一步提高 ,达到副反应更轻 ,接种针次减少的目的 ,进行了纯化疫苗的研究。材料与方法1　疫苗制造　利用Ｚ10型 (Ⅰ型 )和Ｚ37(Ⅱ型 )毒种 ,分别接种沙鼠肾原代细胞 ,经培养和多次收液 (每次收液病毒滴度ＴＣＩＤ50 达 10 6 0 /ｍｌ以上 )后合并 ,用 10万分子…     

双价肾综合征出血热沙鼠肾细胞灭活疫苗免疫效果观察

目前我国用于生产疫苗的HFRS病毒，对同型各毒株均表现较好的中和作用，但对异型病毒的交叉中和作用较差。为此，我们研制了双价HFRS沙鼠肾细胞灭活疫苗，并进行了免疫效果观察。1材料与方法1．1疫苗由杭州天元生物药业公司生产的权价HFRS沙鼠肾细胞灭活疫苗，批号：双-4，制造疫苗的毒种为210（Ⅰ型）和237（Ⅱ型）。病毒在沙鼠肾原代细胞培养后，经卜丙脂灭活，内含0.1％入血白蛋白和0.5mg／ml氢氧化铝佐剂，充分别制成单价疲劳，再按不同比例混合而成。互．2接种对象为既往未患过HFRS的健康人群，年龄在16～32岁之间，男26入，女3…     

肾综合征出血热Ⅰ型灭活疫苗稳定性观察

我站于1993年研制成功HFRS沙鼠肾细胞1型单价灭活疫苗，经几年来的流行病学效果考核，证明安全有效，机体接种后中和抗体阳转率可达90％以上，无副作用。其稳定性经中国药品生物制品检定所检测，该疫苗经4℃保存18个月后，效力试验结果符合要求。现生产的疫苗有效期被定为1年。为进一步了解疫苗的稳定性，在实验室对几批疫苗进行了观察。1材料和方法1.1疫苗为杭州天元生物药品公司按文献方法生产，即病毒浙10殊感染沙鼠肾细胞，培养后收获议滩病毒，以什丙内脂灭活，加AL.（OH）3佐剂制成疫苗。经中国药品生物制品检定所检定符合要求。1…     

双价肾综合征出血热灭活疫苗免疫反应的动态观察

为动态观察沙鼠肾原代细胞双价肾综合征出血热灭活疫苗免疫动物后的免疫反应 ,采用人用剂量的 1/ 2 0肌内注射免疫小鼠 ,局部麻醉下采集尾血 ,分离血清 ,用间接酶联免疫吸附试验 (ELISA)测定血清抗体水平 ;处死动物时分离腹股沟淋巴结和脾脏淋巴细胞进行分类计数。结果显示 :双价肾综合征出血热疫苗在初次免疫后第 2针血清抗体有较大提高 ,并维持在高水平。流式细胞分类计数 ,疫苗注射组腹股沟淋巴结CD+ 4 细胞的免疫荧光强度显著高于对照组 (P<0 0 5 ) ,但脾脏的B细胞荧光强度却显著低于对照组 (P<0 0 5 ) ,提示接种该疫苗后细胞免疫亢进。表明沙鼠肾原代细胞双价肾综合征出血热灭活疫苗随接种时间的推移 ,产生良好的免疫反应。这种反应在免疫 2针后能够维持较高水平。该疫苗的免疫机理可能是通过局部淋巴结对抗原呈递来实现的。同时提示 ,疫苗可能造成细胞免疫功能亢进