胆固醇氧化酶发酵研究

对从土壤中筛选到的菌株ＤＧＣ－００７进行ＵＶ诱变,选育到菌株ＤＧＣ－０４８．对影响突变株产酶的条件进行了优化,初步确定了ＤＧＣ－０４８合适的产酶摇瓶培养基组成．在发酵温度为３０℃,培养基起始ｐＨ７．５～８．０的条件下,接种量１０％,发酵４８ｈ,产酶可达３５０μｍｏｌ／（ｍｉｎ·Ｌ）     

比色法测定胆固醇氧化酶酶活

根据实验结果和理论计算确定检测体系中胆固醇的质量浓度为 0 .3 87mg/mL ,表面活性剂的质量浓度为 0 .2 g/dL ,确定过氧化氢浓度与反应液吸光度之间的定量关系 .在此基础上 ,建立了比色法测定胆固醇氧化酶酶活的方法 .     

胆固醇氧化酶转化蛋黄胆固醇工艺的优化

研究了用响应面分析法(RSM)优化酶法转化蛋黄胆固醇的工艺,发现胆固醇氧化酶(COD)添加量及蛋黄粉的稀释率是影响蛋黄胆固醇转化率最重要的因素.在模拟优化的条件下反应时间为14.15h,蛋黄粉稀释率为3.54,COD为5.39U/g时,胆固醇转化率达85.61%.对氧化产物进行分析发现仅有单一产物胆甾烯酮,该产物具有降血脂、减肥等功效.     

从乳化体系中分离纯化短杆菌产胆固醇氧化酶

添加剂W对酶的分离纯化造成很大困难,用异丙醇沉淀发酵液的同时加入(NH4)2SO4能够有效地破除乳化体系,去除添加剂W,酶收率达到90%.在pH值为8.0的条件下用SepharoseDEAEFastFlow离子交换透析酶液,比酶活从3.21U/mg提高到29.21U/mg,酶收率达70.1%.     

产胆固醇氧化酶重组大肠杆菌的发酵培养基和诱导条件的优化

在摇瓶中对产胆固醇氧化酶重组大肠杆菌的发酵培养基和诱导条件进行了优化,优化培养基为甘油10 g/L,胰蛋白胨10 g/L,酵母粉5 g/L,KH2PO4 2 g/L,K2HPO4 4 g/L,Na2HPO4·12H2O 7 g/L,(NH4)2SO4 1.2 g/L,NH4Cl 0.2 g/L,MgSO4·7H2O 1 g/L;优化的诱导条件为:对数生长中期诱导,IPTG浓度为0.3 mmol/L.在优化的培养基和优化的诱导条件下,单位菌体产酶量达745.86 U/g,菌体产酶水平达1 625.97 U/L,为优化前的700 U/L的2.3倍.     

利用胆固醇氧化酶转化胆固醇制备胆甾-4-烯-3-酮

用酶法催化氧化胆固醇制备胆甾-4-烯-3-酮相对于化学法合成具有反应简单、成本较低等优点.作者探讨了在正辛烷作为有机相的两相反应体系中,以胆固醇氧化酶催化氧化胆固醇制备胆甾-4-烯-3-酮的方法.在胆固醇质量浓度为40g/L,反应时间40min、反应温度40℃、磷酸缓冲液-正辛烷体积比32、通氧40L/h及搅拌转速300r/min下,胆固醇转化率达到92%,经薄板层析及紫外扫描,发现转化产物为单一的胆甾-4-烯-3-酮.     

赖氨酸摇瓶发酵条件的优化

针对赖氨酸发酵的工业化要求,以黄色短杆菌（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍｆｌａｖｕｍ）ＷＳＨＬ１为产生菌进行了摇瓶条件下的赖氨酸发酵条件研究．通过正交实验得到了较佳氮源配比;经在发酵过程中添加几种氮源的试验,发现发酵中后期添加适量有机氮源有利于发酵;考察不同初始硫酸铵和葡萄糖浓度对发酵的影响,确定了适合工业生产的浓度范围;采用分批补料培养方式,最终赖氨酸盐酸盐质量浓度为８５．５ｇ／Ｌ     

L-异亮氨酸的发酵条件

从黄色短杆菌（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍｆｌａｖｕｍ）ＡＴＣＣ１４０６７出发，选育获得一株Ｌ－异亮氨酸高产菌ＺＱ－４．试验结果证明，生物素是ＺＱ－４菌株唯一必需生长因子，生物素或玉米浆用量分别为５０μｇ／Ｌ和２０ｍＬ／Ｌ时可得到较高的产酸率。为了获得较高的Ｌ－异亮氨酸积累量，培养基中葡萄糖质量浓度为１４０ｇ／Ｌ，硫酸铵用量为４０ｇ／Ｌ时较为适宜；以适当的摇瓶装液量改善通风状况可明显提高产酸率。在适宜的发酵条件下，ＺＱ－４经摇瓶发酵培养３ｄ，Ｌ－异亮氨酸积累量可达２８～３０ｇ／Ｌ．     

乳酸发酵短杆菌中碳架流向赖氨酸的导向与分析

对乳酸发酵短杆菌生物合成赖氨酸的代谢途径及其代谢流量从理论上进行了分析，计算了乳糖发酵短杆菌合成赖氨酸的最大理论转化率。对代谢途径及其遗传调控进行了分析，通过NTG诱变育成了一株带有FP^S、AEG^r、Ma^r和Leu^-4种遗传标记的赖氨酸高产菌株，使赖氨酸的产量提高到54.6g/L，并分析了这些标记对代谢流量改变的影响。     

固态发酵生产复合纳豆芽孢杆菌制剂

为了探索复合益生菌剂多菌种混合发酵条件,作者以活菌数为指标,采用固态发酵技术,研究了接种比例、接种量、培养基初始pH值、含水量、发酵温度和时间对固态发酵的影响,并通过L9(34)正交试验确定了纳豆芽孢杆菌和啤酒酵母混合固态发酵最佳条件.结果表明:培养基初始含水量70 %、pH 6.5、纳豆芽孢杆菌和啤酒酵母接种比例为1∶1、接种体积分数10%、发酵温度34 ℃、发酵5 d的效果最好.在此条件下发酵后,纳豆芽孢杆菌数为1.96×1010 cfu/g,啤酒酵母数为1.68×109 cfu/g.     

超声波处理对红曲色素产量的影响

采用低强度的超声波 ,选取作用时间为变化参数 ,对红曲细胞进行处理 ,其频率为 2 0kHz ,功率为 2 0 0W .结果表明 ,每间隔 8h照射 2min效果最明显     

鼠李糖脂分批式发酵动力学模型

根据3.7 L瑞士Bioengineer KLF2000型发酵罐分批发酵的实验数据,利用GraphPad Prism软件对假单胞菌BS-03产鼠李糖脂生物表面活性剂的发酵动力学模型进行非线性拟合,说明Logistic模型和L-P模型能较好的描述假单胞菌BS-03发酵过程中的菌体生长、鼠李糖脂合成和限制性基质的消耗动力学。     

圆弧青霉产碱性脂肪酶的中试发酵

圆弧青霉PG3 7是碱性脂肪酶的高产菌 ,在摇瓶和 2 5L发酵罐小试的基础上进行 3M3发酵罐中试 .适合的发酵条件为 :发酵培养基 (% )　豆饼粉 3 .0 ,玉米浆 3 .0 ,磷酸氢二钾 1 .0 ,硫酸镁0 .1 ,大豆磷脂 0 .5,柠檬酸钠 0 .0 5,花生油 0 .2 ;发酵起始 pH值为 8.0 ,发酵温度 2 9± 1℃ ,接种量8%～ 1 0 % ,通风量 0 .8L/ (L·min) ,搅拌转速 2 4 0r/min ,发酵周期 72h ,期间于 3 0、4 2、54h分别各流加 0 .4 %花生油 .在上述条件下 ,圆弧青霉PG3 7发酵酶活达 2 0 0 0 μmol/ (min·mL)