炭疽杆菌菌落标本的制备

目的：制备炭疽杆菌菌落标本，进一步对炭疽杆菌菌落进行形态学的观察。方法：漂浮法固定炭疽杆菌单个菌落，用稀释复红等染料染色，封片后镜下观察。结果：低倍镜下可见染色清晰，形态完整的炭疽杆菌菌落，边缘不整齐，呈卷发状，有小尾突起。结论：用甲醛固定后，采用漂浮法制备炭疽杆菌菌落标本具有安全、方便、可靠、无污染等特点。     

两种快速检查炭疽杆菌荚膜的方法

有荚膜的炭疽菌标志该菌具有一定的感染侵袭力,这在流行病学上具有重要的意义。现常用于检查炭疽杆菌荚膜的染色方法有:印度墨汁压片(最好用暗视野观察)、番红荚膜染色法(需要加热)、结晶紫荚膜染色法(其中所用硫酸铜液需新配制)、吕氏美兰荚膜染色法(染色液为多色性,染色时间不易掌握)等;上述方法不仅有其各自的特殊要求,而且方法均较繁锁。为了有利于基层推广应用,我们建立了两种简便快速检查炭疽杆菌荚膜的方法。方法之一:用人工感染小白鼠的新鲜脏器组织标本,用无菌操     

炭疽杆菌芽胞染色法的改进

芽胞是某些细菌在一定条件下形成的特殊结构 ,不同种类的细菌其芽胞的形态、染色和位置等有较大差异 ,因此直接观察细菌的芽胞可作为鉴定细菌的方法之一。常用的芽胞染色方法很多 ,但这些常规方法用于炭疽杆菌芽胞染色 ,效果总是不很满意。我们通过用微波多次加热菌液 ,对炭疽杆菌芽胞常规染色方法进行了改进 ,取得了较好的效果。1　材料和方法1 .1　材料　 1石碳酸复红染液 :取碱性复红酒精饱和溶液 1 0ml,加 5 %石碳酸水溶液 90 ml。 2 95 %酒精 ;3美兰染液 :取2 %美兰酒精饱和溶液 3 0 ml,加 0 .0 1 %KONa水溶液 1 0 0 ml。4炭疽杆菌…     

聚羟基丙烯酸组织固定在抗酸杆菌和Her2蛋白检测中的应用

目的探讨环保固定液聚羟基丙烯酸在特殊染色法检测抗酸杆菌和免疫组化法检测乳腺癌Her2蛋白的应用价值。方法收集病理证实的结核标本72例、麻风标本6例、乳腺浸润性导管癌标本116例,每例标本同一病变部位取材2块,分为A、B组。A、B组分别采用4%中性缓冲甲醛、聚羟基丙烯酸固定,各制作结核标本切片72张、麻风标本切片6张、乳腺癌标本切片116张。采用特殊染色法检测结核、麻风切片中抗酸杆菌,免疫组化法检测乳腺癌Her2蛋白,同时分析比较A、B组切片中抗酸杆菌阳性率、乳腺癌Her2蛋白阳性率的差异。结果生物显微镜下,A、B组切片抗酸杆菌染色:背景洁净,细胞轮廓清晰,胞核完整呈蓝色,背景着色为淡蓝色,抗酸杆菌呈鲜红色,对比度好,阴性、阳性对照染色结果可靠。(2)生物显微镜下,A、B组切片Her2免疫组化染色:背景清晰,阳性着色定位准确(胞膜),阳性强度可靠、染色鲜明,无非特异性染色产生,阴性、阳性对照染色结果可靠。(3)A、B组切片抗酸杆菌阳性率分别为57.7%、59%,两组间阳性率差异不显著(P0.05),且抗酸杆菌检测结果符合率为98.7%。(4)A、B组切片Her2蛋白阳性率分别为24.1%、25.9%,两组间阳性率差异不显著(P0.05),且Her2蛋白检测结果符合率为98.3%。结论在特殊染色法检测抗酸杆菌和免疫组化法检测乳腺癌Her2蛋白中,环保固定液聚羟基丙烯酸有潜能替代传统试剂4%中性缓冲甲醛,有望在临床推广应用。     

猪主动脉脱细胞血管基质制备及保存

目的探讨脱细胞血管基质的制备和保存方法。方法采用酶、低渗溶液、化学除垢剂联合法处理猪胸主动脉制备脱细胞血管基质,标本行苏木精-伊红染色,大体、光镜及扫描电镜、透射电镜观察。并将标本放入液氮中保存,于保存1、2、3月分别取标本用20g/L戊二醛固定,扫描电镜观察。结果经该法处理的猪血管细胞全部脱除,胶原纤维、弹性纤维无断裂,细胞外基质保持完好。液氮保存后1、2、3月扫描电镜观察与新鲜标本无明显差别。结论酶、低渗溶液、化学除垢剂联合法是制备脱细胞血管基质的较好方法,制得的脱细胞血管基质可放入液氮中保存。     

应用噬菌体进行炭疽疫苗纯菌检查方法的建立

目的 建立应用噬菌体进行炭疽活疫苗纯菌检查的方法,并与现用纯菌检查方法进行比较.方法 使用噬菌体对与炭疽芽孢杆菌分类学上接近以及常见污染细菌进行裂解观察,确定噬菌体特异性.选取具有代表性的可能污染菌定量掺入炭疽疫苗中,制备模拟污染疫苗,进行噬菌体裂解纯菌检查方法的灵敏度研究,同时与现用的直接接种纯菌检查方法进行比较.结果 炭疽噬菌体能特异地裂解炭疽芽孢杆菌,对与炭疽芽孢杆菌分类学上接近以及常见污染细菌无裂解作用.噬菌体裂解法对掺入炭疽疫苗中蜡样芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌及大肠埃希菌的检出限均为1 CFU/人份,而现用纯菌检查方法的检出限分别为5、5及50 CFU/人份.结论 噬菌体裂解法检测炭疽活疫苗中污染菌有较好的特异性和灵敏度,该方法的应用对疫苗质量控制具有重要意义.     

尿放线杆菌引起呼吸道感染一例

患者岳××男38岁,因咳嗽次数增加,黄色脓性痰,轻微头晕,两肺闻及水泡音。于2000年12月中旬来我院门诊求治。 痰涂片革兰染色镜检：见大量脓细胞及革兰阴兰阴性杆菌,并见脓细胞吞噬革兰阴性杆菌。 培养特性：将痰标本接种于血平板及巧克力平板放烛缸内培养,35℃24小时后生长0．5mm大小,灰色、湿润、不溶血、稍凸起、光滑边缘整齐的菌落,5天后菌落增至3mm,稍混浊表面有皱纹。标本同时接种的中国兰平板5天后仍未生长细菌。 生化鉴定：菌落涂片革兰染色为阴性杆菌,氧化酶阴性,双糖铁高层产酸,用VIETK－GNI卡鉴定为尿放线杆…     

129例新生儿脐分泌物细菌培养的结果

检查对象为出生后3～15天的新生儿,不分性别,共129例。用无菌棉拭子在脐部沾取分泌物,置于无菌试管(或瓶)送检.送检标本划线于血平板,置37℃恒温箱孵育18～24小时,观察菌落形态并排取菌落涂片作革兰氏染色。根据菌落特点及涂片染色检查结果,作生化反应     

提高异常细胞检出率的涂片制备新方法

我们介绍一种能提高异常细胞检出率的血涂片制备新方法:取待检的抗凝血(或其他标本)以2500 r/min离心3～5 min,用玻棒轻轻搅拌血浆层下的灰白层,使灰白层的细胞漂浮于血浆中,吸取所有血浆于另一试管中,低速离心后除去多余血浆,使试管中血浆与细胞层的高度为1∶1,混匀,制备涂片,染色后镜检.     

变异念珠菌常见菌落和菌体形态

目的 研究白色念珠菌变异后菌落及菌体形态的变化特征.方法 用唑类抗真菌药物对白色念珠菌标准菌进行实验室诱导得到不同的变异株;不同培养环境下获得白色念珠菌自发变异株.从抗真菌药物治疗效果不佳的临床念珠菌感染患者标本中分离培养的念珠菌变异株.将以上变异株进行培养,革兰染色,镜下观察菌体形态.结果 氟康唑诱导变异株菌落呈黏液状,革兰染色为阳性长杆状;伊曲康唑诱导的变异株菌落呈水滴状,革兰染色为阴性球杆状;酮康唑诱导的变异株菌落呈灰白色,革兰染色为阳性葡萄状;白色念珠菌自发变异株和临床分离念珠菌变异株菌落多产红色、黄色等色素形态为革兰阳性球菌状、革兰阴性杆状,也可呈白色毛绒状、淡粉色粉末样菌落,革兰染色为阳性念珠菌.结论 常用抗真菌药物、生长微环境改变、体内某些因素极易诱发念珠菌发生变异,变异后念珠菌无论菌落和菌体可发生类细菌样改变,因此,容易造成实验室在诊断念珠菌感染时的误诊和漏诊.     

伪膜性肠炎16例的内镜与临床特征

目的:探讨伪膜性肠炎的内镜特征、临床表现及治疗。方法:对我院7年来诊治的16例伪膜性肠炎患者的临床资料进行回顾性分析。结果:全部患者在使用抗生素过程中或使用之后出现以腹泻为主的临床表现,全部病例进行了内镜检查和活检标本革兰染色后的显微镜下观察以及粪便细菌培养和活检标本的厌氧菌培养,内镜检查轻度2例、中度12例、重度2例;显微镜下全部病例均发现大量革兰阳性杆菌,粪便细菌培养显示球菌/杆菌比例失调,活检标本的厌氧菌培养结果是12例难辨梭状芽孢杆菌阳性,阳性率75%。结论:在临床实践中,要合理使用抗生素,特别是老年人、免疫功能低下者、大手术后病人以及恶性肿瘤病人。在使用抗生素过程中或使用之后出现以腹泻、腹痛、发热、白细胞升高等现象,要高度怀疑伪膜性肠炎的发生,及时进行结肠镜检查和活检标本革兰染色后的显微镜下观察以及粪便细菌培养和活检标本的厌氧菌培养,以便早诊断、早治疗。     

2种集菌涂片法检测抗酸菌的比较

目的比较沉淀集菌法及漂浮集菌法2种集菌方法涂片检测抗酸菌的阳性检测率.方法对同一个病例在入院时同时用沉淀集菌法及漂浮集菌法涂片找抗酸菌.沉淀集菌法取晨痰用NALC-NaOH法将痰液化后,加入磷酸盐缓冲液,离心取沉淀,灭菌后涂片,染色,镜检.漂浮集菌法取24 h痰加入0.1% NaOH水蒸汽浴灭菌后,加入汽油振荡,漂浮集菌,染色,镜检.结果检测93例患者的186份痰标本,漂浮法的阳性检出率为36.6%,沉淀集菌法的阳性检出率为76.4%.结论沉淀集菌法的阳性检出率显著高于漂浮法.     

2种集菌涂片法检测抗酸菌的比较

目的 比较沉淀集菌法及漂浮集菌法2种集菌方法涂片检测抗酸菌的阳性检测率。方法 对同一个病例在入院时同时用沉淀集菌法及漂浮集菌法涂片找抗酸菌。沉淀集菌法：取晨痰用NALC－NaOH法将痰液化后，加入磷酸盐缓冲液，离心取沉淀，灭菌后涂片，染色，镜检。漂浮集菌法：取24h痰加入0.1%NaOH水蒸汽浴灭菌后，加入汽油振荡，漂浮集菌，染色，镜检。结果 检测93例患者的186份痰标本，漂浮法的阳性检出率为36．6％，沉淀集菌法的阳性检出率为76．4％。结论 沉淀集菌法的阳性检出率显著高于漂浮法。     

炭疽高发地区土壤样本中常见芽胞杆菌的分离及鉴定

目的 通过分离鉴定炭疽可疑污染土壤样本的芽胞杆菌,评价消毒效果和了解监测地区土壤中的芽胞杆菌分布情况。 方法 采集炭疽监测点土壤样本60份,对炭疽芽胞杆菌和其他芽胞杆菌进行分离培养和聚合酶链反应扩增鉴定。 结果 在可疑污染土壤样本中未分离到炭疽芽胞杆菌;从分离到的48个单克隆菌落中扩增到33个目的片段,经测序和blast比对,确定得到地衣芽胞杆菌13株,枯草芽胞杆菌8株,短小芽胞杆菌扩增11株,蜡样芽胞杆菌扩增到1株,巨大芽胞杆菌引物和环状芽胞杆菌引物特异性不好。 结论 本研究提示该监测点炭疽疫情消毒效果可信,但需要进一步研究验证;几种芽胞杆菌在土壤中广泛存在,在炭疽监测工作中进行病原体分离时需要加以鉴别,可通过特异基因扩增来辅助检验。     

痰结核菌噬菌体生物扩增法与抗酸染色法的相关性分析

目的 探讨痰标本结核菌抗酸染色法与噬菌体裂解法检测的相关性.方法 用噬菌体裂解法检测抗酸染色阴性标本50份及抗酸染色不同阳性程度标本202份进行对比分析.结果 50份抗酸染色阴性标本中检出16份,检出率32%;202份抗酸染色阳性标本用噬菌体裂解法检测,阳性175份,1～8条/300视野～4 检出分别是63.6%,84.8%,86.5%,90.4%,94.7%,总阳性率86.6%.结论 噬菌体裂解法检测抗酸染色阴性标本,敏感性显著高于涂片染色法;检测抗酸染色阳性标本与涂片染色法一致性较高,并且随着涂片中抗酸杆菌菌量的增多呈现正相关.     

分枝杆菌非抗酸染色显微镜检查研究的进展

分枝杆菌标本显微镜检查沿用抗酸染色法。一般认为分枝杆菌有抗酸性,为革兰氏阴性细长的杆菌。但近年来在检查艾滋病、肺结核病、Hodgkin 氏病等病人的骨髓、血、淋巴结、肾等标本时,用抗酸染色法以外的方法,例如瑞氏法、姬氏法、革兰氏法、Diff-Quik 氏法染色,发现细胞内复合分枝杆菌(MAC)、结核分枝杆菌、堪萨斯分枝     

用HiCN试剂处理血性标本用于抗酸杆菌涂片检查

涂片抗酸染色镜检是结核病诊断的经典方法。在实际工作中,我们发现血性标本(如血痰,血性胸腹腔积液,血尿和血性脑脊液等)在抗酸染色检查时染色背景与抗酸杆菌对比不鲜明,查找辨认抗酸杆菌较困难。试用3%HCl、4%NaOH及HiCN3种溶血剂来破坏标本中的红细胞,离心后取沉淀物涂片观察抗酸染色效果,报道如下。     

地高辛标记炭疽杆菌DNA探针的研究

本文介绍了试用地高辛标记，将炭疽芽孢杆菌的ＰＸＤ１和ＰＸＤ２两质粒上分别扩增到２９０ｂｐ和２８８ｂｐ基因片断制成非放射性标记探针，利用菌落原位杂交方法进行检测，表明两探针的敏感性、特异性均良好，提示该两探针将能为基层工作提供更准确、快速的炭疽杆菌检验技术。     

特殊类型的金黄色葡萄球菌L型三例报道

临床分离金葡菌L 型菌落多为G 型呈颗粒样或L 型呈“油煎蛋”样。作者从三例败血症患者血标本中,分离出一种特殊类型的F 型丝状L 型菌落,肉眼观察似霉菌菌落。但形态具多形性、革兰氏染色多变性;细胞壁染色及透射电镜检查有细胞壁缺损;能通过0.45μm 微孔滤膜;返祖试验证实为金葡菌L 型。光镜下菌落呈丝状或有核心,电镜扫描菌落表面为相互缠绕的长丝体。故认为临床分离的菌落有G 型、L 型及F型。对F 型菌落的识别有助于提高检出率。     

体液标本用细胞离心仪制备涂片检测细菌与高速离心法的比较

体液标本通过革兰染色检查细菌是临床微生物室的主要任务 ,尤其在重症感染病人如脑膜炎、腹膜炎。我们比较了细胞离心法和高速离心法制备革兰染色涂片的敏感性 ,结果如下。1　材料和方法1 1　标本　 175份标本如下法处理 :对清亮或非粘稠的脑脊液 (ＣＳＦ)或穿刺液用 5～ 10滴