乙型肝炎病毒C基因启动子和前C基因变异对HBeAg含量和HBVDNA定量及肝炎病情的影响

目的　研究乙型肝炎病毒 (HBV)C基因启动子 (CP)和前C基因变异对HBeAg含量和HBVDNA定量及肝炎病情的影响。方法　通过DNA扩增、基因序列分析检测 75例慢性乙肝、 14例慢性重型乙肝和 34例肝硬化患者的血清HBVCP和前C基因序列 ,通过微粒子发光法定量检测血清中HBeAg的含量 ,通过荧光定量PCR技术检测血清HBVDNA含量。结果　 (1)中度和重度慢性乙型肝炎 (CH)患者CP双变异 (nt176 2A→T和 176 4G→A)的发生率同轻度CH组比较显著升高 (分别为 6 1 3%和 6 1 1%VS 2 3 1% ) ;肝硬化组患者CP双变异发生率同CH组比较显著升高(76 5 %VS 4 8 0 % )。前C基因终止变异 (nt1896G→A)在重型乙型肝炎患者中的发生率显著升高 (71 4 % )。 (2 )双变异组和终止变异组患者HBeAg含量均显著下降 ,但后者下降更明显。双变异组的HBeAb阳性率和对照组比较无明显差异 ,但终止变异组的HBeAb阳性率同双变异组和对照组比较差异显著。终止变异联合双变异组的HBeAg含量及HBeAb阳性率同终止变异组相似。 (3)双变异组和对照组患者HBVDNA含量间无明显差异。结论　CP双变异和前C基因终止变异均影响HBeAg表达 ,但后者影响更大 ;在对病情影响上 ,前者与肝硬化发病有关 ,后者则与重型乙肝发病有关。     

乙型肝炎肝硬化病人的乙型肝炎病毒C基因启动子和前C基因变异及其对e抗原系统的影响

目的研究乙型肝炎肝硬化病人血清的乙型肝炎病毒（HBV）C基因启动子（CP）和前C基因变异。方法通过DNA扩增、基因序列分析检测34例活动性肝硬化和75例慢性乙肝病人血清的HBV CP和前C基因序列，通过微粒子发光法定量检测血清中HBeAg的含量，及通过荧光定量PCR技术定量检测血清中的HBV DNA。结果（1）CP双变异（nt 1762A→T和1764G→A）在肝硬化（LC）组的发生率显著高于慢性乙型肝炎（CH）组（76．5％vs48．0％）；前C终止变异（nt1896G→A）则在LC组和CH组的发生率无显著差异（35.3％vs26．7％）。（2）CP双变异虽使HBeAg表达显著下降，但幅度较小；与对照组相比，CP双变异组的HBeAb阳性率也无明显升高；前C终止变异则大幅度影响HBeAg表达，显著增高HBeAg／HBeAb转换率；终止变异联合双变异组的HBeAg含量及HBeAb阳性率同终止变异组相似。（3）HBeAb阳性LC组的前C终止变异的发生率显著高于HBeAb阴性LC组（75．0％vs5．6％）；而CP双变异则在两组LC中无明显差异（75．0％vs77．8％）。结论CP双变异可能与乙型肝炎肝硬化发病机制有关；前C终止变异则与肝硬化病人的HBeAg／HBeAb转换有关。     

宁夏地区乙型肝炎病毒基因BCP区A1762T/G1764A突变与肝细胞癌的相关性

目的 通过分析宁夏地区HBV基因核心启动子A1762T/G1764A双基因突变的特征,探讨其与乙型肝炎相关原发性肝癌的相关性.方法 收集宁夏地区104例慢性乙肝患者和88例乙肝相关肝细胞癌患者的一般病例资料及血清,采用荧光定量PCR法检测两组患者HBV DNA定量值;采用巢式PCR扩增及测序方法检测HBV C启动子A1762T/G1764A（ntA1762A→T和nt1764G→A）双突变情况;采用多因素Logistic回归分析肝细胞癌发生的危险因素.结果 104例慢性乙肝组和88例肝细胞癌组对比发现年龄、e抗原阴性、HBVDNA水平、乙肝肝硬化、HBV A1762/G1764A双位点突变均可能与肝细胞癌的发生有关,多因素Logistic回归分析结果提示年龄＞50岁、e抗原阴性、乙肝肝硬化、HBV A1762T/G1764A双突变与肝细胞癌发生呈正相关,而与HBV DNA＞10^5拷贝/mL呈负相关（P=0.000,OR=0.257）.结论 宁夏地区乙肝病毒基因BCP区A1762T/G1764A基因双突变是肝细胞癌发生的危险因素.     

乙型肝炎病毒前C区/BCP区突变及其临床意义

目的探讨利用基因芯片技术检测乙型肝炎病毒(HBV)前C区/BCP区基因突变方法的临床价值及前C区/BCP区基因突变的临床意义。方法应用基因芯片技术检测95例慢性乙型肝炎患者的HBV前C区G1896A(nt1896G→A)、A1814C(nt1814A→C)及HBV C基因启动子(BCP)T1762A、G1764A(nt1762A→T、nt1764G→A)四位点突变,同时检测血清HBV DNA含量及ALT、AST水平。结果95份血清标本中,有91份分别检测到了HBV前C区/BCP区基因突变,阳性率95.8%,其中61896A突变33例(36.3%),A1762T G1764A联合突变64例(70.3%),G1896A A1762T G1764A联合突变22例(24.2%),未检测到A1814C突变毒株。抗-HBe阳性的慢性乙肝患者HBV前C区/BCP区突变率较HBeAg阳性的患者明显增高。G1896A突变后血清ALT水平与未变异组比较有显著性差异(P<0.05),而其他各组的肝功能无显著变化。G1896A A1762T G1764A联合突变后,血清HBV DNA水平较未变异组降低(P<0.05),其他各组间则无显著变化。结论应用基因芯片法测定HBV特定变异位点,可一次同时检测多个突变位点,具有一定的临床应用价值。HBV前C区/BCP区突变对血清HBVDNA水平和肝功能有一定的影响。     

HBV C基因启动子变异及基因型与肝硬化及原发性肝癌的相关性研究

目的 探讨乙型肝炎病毒C基因启动子(CP)和前C区基因变异及HBV基因型与肝硬化及原发性肝癌(HCC)的关系.方法 通过DNA扩增、基因序列分析检测44例慢性乙型肝炎(CH),39例活动性肝硬化(LC),34例HCC患者血清HBV S基因序列,确定其基因型,测定HBV CP和前C区序列,确定其变异状况.结果 HCC、LC患者CP双变异(nt 1762A→T和1764G→A)发生率(82.4%、71.8%)显著高于CH患者(45.5%)(P＜0.01、P＜0.01);HCC、LC患者C基因型检出率(70.6%、69.2%)显著高于CH患者(43.2%)(P值均＜0.05).结论 乙型肝炎病毒CP双变异、C基因型与HCC、LC密切相关.     

乙型肝炎病毒C基因启动子区域T1762 A1764变异的临床及干扰素应答

目的研究乙型肝炎病毒(HBV)C基因启动子(CP)区域T1762A1764变异与慢性乙型肝炎病情严重性及干扰素应答的关系.方法通过聚合酶链反应(PCR)及其产物直接测序,检测4例无症状慢性HBV携带者(AsC)、27例慢性乙肝病人血清的HBVCP序列,并定量检测病人血清的HBVDNA水平.结果CPT1762A1764变异在慢性乙肝病人的发生率为51.9%(14/27),更多的是在病情较重(肝损害中度以上)的病例中出现(P＜0.05),且该变异株具有生存优势.干扰素治疗3个月后,感染该优势变异株的慢性乙肝病人血清HBVDNA拷贝数下降36.6±25.1倍,显著高于非变异株病人(2.5±2.1倍);HBeAg阴转率(75%)及HBVDNA(斑点法)阴转率(77.8%)也显著高于对照组(16.7%,16.7%);对4例变异干扰素组病人3个月后再次测序,有3例其变异株的生存优势被野生株(WT)替代.结论HBVCPT1762A1764变异株可能对干扰素较为敏感.     

乙型肝炎病毒C基因启动子变异与基因型和肝硬化的关系

目的 研究HBV C基因启动子(CP)和前C基因变异与HBV基因型和病情的关系。方法 通过DNA扩增、基因序列分析检测44例慢性乙型肝炎(CH)，29例肝硬化(LC)患者的血清HBV S基因序列以确定其基因型，测定HBVCP和前C区序列以确定其变异状况。结果 (1)CP双变异(nt 1762A→T和1764G→A)的发生率肝硬化组为75．9％，慢性乙型肝炎组为45.5%，两组间差别有显著性意义(P＜0.05)。(2)LC患者的C基因型检出率为69．0%，CH患者的C基因型检出率为43.2％，二者间差别有显著性意义(P＜0.05)。(3)C基因型HBV感染者CP双变异发生率为69.2％，B基因型HBV感染者CP双变异发生率为44．1％，二者间差别有显著性意义(P＜0.05)。结论 CP双变异与C基因型密切相关，并且导致病情向肝硬化发展。     

IFN-γ基因多态性与HBV感染不同结局之间的关系

目的：探讨IFN-γ基因多态性与HBV感染不同临床转归之间的相关性。方法：应用聚合酶链反应-序列特异性引物法（PCR-SSP）检测60例自限性HBV感染者（SR组）和118例慢性持续性HBV感染者[包括无症状HBV携带者（AsC组）36例和进展性肝病者82例（慢性乙型肝炎50例、乙肝后肝硬化32例）]的IFN-γ基因＋874 T→A、＋2109 A→G两个位点的多态性，比较各组间基因型和等位基因频率。结果：①＋874 T→A位点多态性中，慢性持续性感染者总从基因型频率比SR组显著升高（P〈0．05），差异有显著性。等位基因A的频率，进展性肝病组均显著高于SR组（P〈0．05）。②＋2109 A→G位点多态性中，进展性肝病组总GG基因型显著高于SR组（P〈0．05），而肝硬化和慢乙肝组之间，SR和AsC组之间差别无显著性。结论：IFN-γ基因＋874 T→A、＋2109 A→G两个位点的多态性，与HBV感染不同结局之间有关，携带＋874 T→A从基因型和A等位基因的HBV感染者容易发展为慢性，A等位基因更趋向于进展性肝病，而携带＋2109 A→GGG基因型患者则容易进展为慢性乙型肝炎甚至肝硬化。     

乙型肝炎病毒C基因启动子变异、HBV DNA及细胞因子与原发性肝癌的关系

目的：探讨乙型肝炎病毒C基因启动子（HBVBCP）变异、HBVDNA及细胞因子与原发性肝癌（HCC）的关系。方法：将176例HBV慢性感染者分为慢性肝病组（156例）和HCC组（20例）。采用PCR微板核酸杂交结合ELISA检测显示技术检测HBVBCP区核苷酸（nt）1762碱基A→T和1764碱基G→A联合突变。并检测两组患者的血清HBVDNA含量及细胞因子白细胞介素-10（IL-10）、IL-12、肿瘤坏死因子α（TNF—α）、γ干扰素（IFN-γ）水平。结果：HBVBCP变异在HCC组的阳性率（70．0％）显著高于慢性肝病组（37．8％，P〈0．01）。HCC组的血清HBVDNA含量、TNF—α水平均显著高于慢性肝病组（P〈0．05，P〈0．01），而血清IL-10、IL-12和IFN-γ水平与慢性肝病组无显著性差异（均P〉0．05）。结论：HBV BCP变异与原发性肝癌关系密切．且血清TNF—α及HBV DNA复制水平在原发性肝癌的发生中可能也起到主要的作用．     

自身抗体在乙型病毒性肝炎和自身免疫性肝炎中的特点分析

目的 分析自身抗体在乙型病毒性肝炎及自身免疫性肝炎中的特点.方法 将血清样本分为3组:乙型病毒性肝炎组(HBV) 306例、自身免疫性肝炎组(AIH)235例和健康对照组150例,采用间接免疫荧光法和欧蒙印迹法检测血清中抗核抗体(ANA)、抗平滑肌抗体(ASMA)、抗线粒体抗体(AMA)、抗肝肾微粒体Ⅰ型(LKM-1)抗体和抗可溶性肝抗原/肝胰抗原(SLA/LP)抗体等肝病相关自身抗体.结果 (1) HBV组和AIH组ANA检出率分别为9.1％、80.42％,明显高于健康对照组;AIH组ANA阳性率显著高于HBV组(P＜0.05).(2)HBV组ANA滴度1:100、1:320、1:1 000阳性率分别为6.2％、2.6％、0.3％,以低滴度(1:100)为主,AIH组1:100、1:320、1:1 000滴度阳性率分别为22.98％、41.28％、14.47％,以高滴度(≥1:320)为主.(3)HBV组AMA、ASMA、抗LKM-1及抗SLA/LP抗体的阳性率分别是0.3％、0.9％、0.3％和0％,AIH组的阳性率分别为36.6％、25.1％、23％和2.55％,明显高于HBV组.(4)AIH组荧光模型以核均质型和核仁型为主;HBV患者以颗粒型为主.(5)采用1999年诊断积分系统评估,28例自身抗体阳性乙肝患者中有1例评分超过16分,达到自身免疫性肝炎确诊标准(≥16分).结论 自身免疫性肝炎患者具有高滴度的自身抗体;乙型病毒性肝炎患者血清中低滴度的自身抗体不构成自身免疫性肝炎,高滴度的自身抗体要结合临床资料排除自身免疫性肝炎.     

Multiplication of hepatitis B virus in fulminant hepatitis B

The presence in serum of hepatitis B e antigen (HBeAg) and hepatitis B virus DNA, which are each regarded as reflecting multiplication of hepatitis B virus, were looked for one to five days after the onset of hepatic encephalopathy in 64 patients with fulminant hepatitis B. HBeAg and hepatitis B virus DNA were found in the serum of only 24 (37%) and six (9%) patients, respectively. Hepatitis B virus DNA was absent from the serum in all 13 patients positive for anti-HBs. These findings indicate that replication of hepatitis B virus stopped after the onset of hepatic encephalopathy in most of the patients and support the view that an enhanced immune response stops the replication. Agents that inhibit viral multiplication would probably not have any effect at this stage of the disease.     

自身抗体在丙型肝炎和自身免疫性肝炎中的特点分析

目的分析自身抗体在丙型肝炎和自身免疫性肝炎中的特点。方法采用间接免疫荧光法和/或欧蒙印迹法检测97例丙型肝炎患者、31例临床确诊的自身免疫性肝炎患者和100例健康人血清中的ANA、SLA/LP、SAMA、AMA、AMA-M2、LC-l、APCA、LKM-1等自身抗体。结果 HCV组中,抗ANA、LKM-1、LC-1、SAMA、AMA-M2、APCA体阳性率分别是38.14%、2.06%、1.03%、2.06%、1.03%和3.09%,而且阳性滴度都比较低,大部分处于1：100。AIH组中,抗ANA、SLA/LP、抗LKM-l、LC-1、SAMA、AMA-M2、APCA抗体阳性率分别是80.65%、16.13%、12.90%、22.58%、58.06%、12.90%、3.22%,AIH组阳性率还是明显高于HCV组（P〈O.05）,以高滴度为主,大多数大于等于1：320。丙型肝炎RNA阳性组自身抗体阳性率高于RNA阴性组。结论丙型肝炎患者血清中存在多种自身抗体,但滴度较低;自身免疫性肝炎具有高滴度的自身抗体水平;HCV引起的自身免疫紊乱尤其是病毒处于复制状态是造成机体免疫损伤,加重丙肝病毒血症的极其重要的因素。     

广州地区丙型肝炎患者HCV基因分型研究

目的研究广州地区丙型肝炎患者HCV基因型分布的变化情况。方法收集207例HCV RAN阳性丙型肝炎患者血清,对其HCV Core区(C区)和NS5B区基因序列进行RT-nPCR扩增,两区扩增成功的PCR产物进行基因测序,测序结果分别与相应的参照株序列比对,构建系统进化树,两区基因分型结果一致者确定HCV基因亚型。结果 185例HCV C区和NS5B区都扩增成功,其中179例两区基因分型结果一致。共检出1、2、3、6型4种基因型和8种基因亚型,其中1b型占40.78%(73/179),6a型占27.37%(49/179),3b型占11.73%(21/179),3a型占8.94%(16/179),2a型占6.15%(11/179),1a型占3.91%(7/179),2b型占0.56%(1/179),6n型占0.56%(1/179)。1b株可分为A、B、C三大簇,A簇与中国广泛流行1b株接近、B簇与中国中部及南部地区流行1b株接近,6a株分为Ⅰ、Ⅱ两大簇,与献血人群及静脉吸毒人群中6a型株接近。结论广州地区丙型肝炎患者HCV基因型以1b、6a、3型为主,存在多种亚型;1b型株包含中国大部分地区的1b型株,6a、3型已取代2a型分别成为第二、三主要流行基因型;未发现6型变异株。     

丙型肝炎抗原在肝炎、肝癌组织中的表达

肝细胞癌手术标本３０例及肝炎肝穿刺标本１５例，作丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）免疫组化研究。第一抗体为ＨＣＶ核心抗原单克隆抗体；检测系统为ＡＢＰＡＰ法。结果肝癌组５例（１７％）、肝炎组３例（２０％）阳性；总阳性率１８％。阳性信号为散在性，胞浆型。肝癌组阳性的５例均见癌旁组织阳性，其中３例同时有散在性癌细胞表达。     

探讨慢性乙型肝炎患者的HBeAg血清转换

对于HBV E抗原（HBeAg）阳性的慢性HBV感染者而言,HBeAg的血清转换是抗病毒治疗停药的指标之一。发生HBeAg血清转换的患者有更好的预后,并且HBeAg血清转换发生的时间越早,预后也越好。     

Detection of hepatitis G virus RNA in hepatitis C patients and hepatitis C virus infected hemodialysis patients

AlthoughsensitiveandspecificimmunoassayandmolecularbiologicaltechniquesforthedetectionofthehepatitisA--Evirusesareavailable,theetiologyofasubstantialfractionofpost--transfusionandcommunity--acquiredhepatitiscasesremainsundefined[1],suggestingtheexistenceofadditionalcausativeagents.Anewhumanhepatitisviruswasisolatedbytwoindependentgroups.ThenewvirusisprovisionallydesignatedashepatitisGvirus(HGV)[ZJorGBvirusC(GBV~C)[3'4),whichwasthoughttobetheagentofpartofthenon--A--Ehepatitispatients.Fro…     

不明原因肝炎患者隐匿性乙型肝炎病毒感染检测分析

目的探讨不明原因肝炎患者隐匿性乙型肝炎病毒（HBV）感染情况及隐匿性感染的机制。方法采用巢式聚合酶链反应（PCR）检测103例不明原因肝炎患者血清HBVDNA。用电化学发光免疫技术对检测出的隐匿性HBV感染者血清HBsAg进行定量测定。结果隐匿性乙型肝炎病毒感染率为17．5％。电化学发光免疫技术检测隐匿匿性HBV感染者血清HBsAg,未检出有3例,在0．05～0．1ng／ml有8例,0．1～0．5ng／ml有6例,3．5ng／ml有1例。隐匿性HBV感染者血清HBVDNA水平为10^3～10^6copies／ml。结论隐匿性HBV感染是不明原因肝炎的病因之一。隐匿性HBV感染者血清HBsAg阴性的机制主要是HBV复制和基因表达的严重抑制,以及HBV基因突变。