含益髓灵兔血清诱导HL-60细胞凋亡与对Bcl-2抑制研究

目的：探讨中药复方益髓灵治疗白血病作用机理：方法：在已知益髓灵具有诱导HL-60细胞凋亡的基础上,通过血清药理学方法,选择含不同浓度益髓灵初提物的兔药血清,与人急性早幼粒白血病HL-60细胞共同孵育不同时间后,观察兔药血清对HL-60细胞凋亡的影响,并对其发生凋亡机制进行初步探讨。结果：益髓灵兔药血清有较强的诱导HL-60细胞凋亡作用,以10％兔药血清作用48h效果最好,并发现其诱导凋亡机制与抑制Bcl-2基因表达相关。结论：益髓灵进入动物体内也有诱导白血病细胞凋亡作用,其诱导白血病细胞凋亡是治疗白血病的关键机制之一。     

益髓灵氯仿提取物诱导HL—60细胞凋亡的初步研究

本项研究重点进行了益髓灵氯仿提取物、含氯仿提取物的兔血清、含氯仿提取物的兔肝匀浆、足叶乙甙、正常兔血清五组诱导HL—60细胞凋亡效应的实验研究。结果显示,短期液体培养后,取培养的HL—60细胞,经光学显微镜观察与流式细胞仪分析,前四组均见明显的HL—60细胞凋亡现象。其中,含益髓灵氯仿提取物的兔肝匀浆作用最强,与阳性对照药足叶乙甙相似,兔血清作用次之,益髓灵氯仿提取物作用较弱,正常兔血清无明显的诱导HL—60细胞凋亡作用。对于其诱导凋亡机理尚正在研究之中。     

含益髓灵氯仿提取物的兔血清/肝匀浆诱导HL60细胞凋亡研究

利用体外培养的ＨＬ６０为靶细胞,通过含益髓灵氯仿提取物的兔血清与肝匀浆诱导ＨＬ６０细胞凋亡研究,分析益髓灵氯仿提取物是否在动物体内存在着诱导肿瘤凋亡的生物活性。结果显示,含益髓灵氯仿提取物的兔血清与肝匀浆均具有诱导ＨＬ６０细胞凋亡的作用。其作用程度与用药浓度成正相关性。从而进一步证实了益髓灵复方或氯仿提取物中含有诱导肿瘤细胞凋亡的活性物质。     

六神丸诱导HL-60细胞凋亡的实验研究

目的:从细胞凋亡角度探讨六神丸治疗白血病的机理,为临床应用提供依据。方法:分别制备六神丸乙醇提取剂和六神丸含药血清,用MTT法检测六神丸对HL-60细胞增殖的抑制作用,吉姆萨染色观察细胞凋亡的形态学变化,原位末端标记(POD)法检测细胞凋亡现象。结果:六神丸乙醇提取剂对HL-60细胞的增殖有明显的抑制作用,且呈现浓度依赖关系;中剂量组所得六神丸含药血清对HL-60细胞增殖的抑制作用优于低剂量组和高剂量组。吉姆萨染色显示六神丸乙醇提取剂和六神丸含药血清处理过的HL-60细胞均出现典型的凋亡形态。原位末端标记表明,六神丸乙醇提取剂诱导HL-60细胞凋亡在一定范围内呈现时间-浓度依赖关系;六神丸含药血清诱导HL-60细胞凋亡作用优于As_2O_3血清组和空白血清组(P<0.01)。结论:六神丸体外诱导HL-60细胞凋亡可能是六神丸治疗白血病的作用机制之一。     

莪芪抗瘤方剂（含药血清）诱导白血病HL-60细胞凋亡的实验研究

目的探讨中药复方莪芪抗瘤方剂（舍药血清）在体外对白血病HL-60细胞凋亡影响。方法运用中药血清药理学方法制备莪芪抗瘤方剂血清，四氮唑蓝比色法（MTT法）观察对莪芪抗瘤方剂（含药血清）对HL-60细胞的抑制率；应用形态学，流式细胞术，DNA凝胶电泳等方法检测细胞凋亡的发生。 结果莪芪抗瘤方荆（含药血清）对HL-60细胞生长有抑制作用，这种作用呈时间依赖性，诱导人类早幼粒白血病细胞株HL-60凋亡。结论中药复方莪芪抗瘤方剂可诱导白血病HL-60细胞发生凋亡。     

六神丸含药血清诱导HL-60细胞凋亡实验研究

目的:观察六神丸含药血清诱导白血病细胞凋亡,探讨六神丸治疗急性白血病的部分机制。方法:制备含药血清,用MTT法、胎盘蓝染色法观察六神丸对HL-60细胞的增殖抑制作用。用吉姆萨染色法观察细胞凋亡的形态学变化,流式细胞仪、原位末端标记法(TUNEL)定量检测细胞凋亡程度。结果:六神丸含药血清对白血病细胞有明显的抑制,且随药物血清浓度和培养时间的延长而增加,吉姆萨染色、流式细胞仪检测、原位末端标记检测均证明六神丸含药血清能诱导HL-60白血病细胞凋亡。结论:六神丸含药血清能诱导细胞凋亡,这可能是六神丸治疗白血病的机制之一。     

解毒化瘀含药血清抗白血病细胞及白血病多药耐药细胞的体外实验研究

目的:以解毒化瘀法立意,选取解毒化瘀中药复方,拟通过体外细胞培养证实其是否存在抗白血病细胞及多药耐药白血病细胞的作用。方法:采用MTT比色法,选择白血病细胞K562、HL-60及阿霉素诱导的白血病多药耐药细胞株K562/A、HL-60/A为靶细胞,观察不同浓度解毒化瘀含药兔血清对其细胞毒作用。结果:解毒化瘀含药兔血清对K562、HL-60及K562/A、HL-60/A均有明显的抑制作用,且对其细胞毒作用呈剂量依赖性。结论:解毒化瘀中药在抑制白血病细胞生长及白血病多药耐药细胞生长方面具有深入研究的价值。     

莪芪抗瘤方剂对白血病HL-60细胞的凋亡作用及对细胞内Ca2+水平的影响

目的:研究中药复方莪芪抗瘤方剂在体外对白血病HL-60细胞凋亡作用,并探讨凋亡发生与细胞内Ca2 浓度变化的关系。方法:通过血清药理学方法,选择10%浓度的含药血清与白血病HL-60细胞共同培育24,48,72,96 h后,应用荧光显微镜观察细胞形态,流式细胞仪检测凋亡峰(亚二倍体峰),用Fura-2/AM荧光负载方法测定细胞内Ca2 浓度的变化。结果:10%浓度的含药血清处理组,细胞体积缩小,细胞核固缩,膜起泡,核断裂及形成凋亡小体等,以72 h最为明显;可见DNA含量低于G1期的凋亡细胞群,其凋亡百分率随时间的递增而增加;10%浓度的含药血清处理组的细胞内Ca2 浓度也明显高于对照组(P<0.01)。结论:莪芪抗瘤方剂含药血清诱导白血病HL-60细胞发生凋亡的作用可能与细胞内Ca2 水平上调有关。     

莪芪抗瘤方剂(含药血清)对白血病细胞凋亡相关基因Caspase-3活性的影响

大量的研究表明,细胞内凋亡相关基因Caspase-3活性变化对凋亡的诱导起重要作用[1]。我们在以往的研究发现,中药复方莪芪抗瘤方剂(含药血清)有抑制白血病HL-60细胞增殖和诱导其凋亡的作用[2],这种作用机理何在?本实验在观察莪芪抗瘤方剂(含药血清)诱导白皿病HL-60细胞凋亡作用的     

莪芪抗瘤方剂诱导白血病HL-60细胞凋亡的血清药理学研究

目的研究中药复方莪芪抗瘤方剂在体外对白血病HL-60细胞凋亡的作用,并探讨凋亡发生与细胞内Ca2 、Caspase-3、Bcl-2的关系。方法通过血清药理学方法,选择10%浓度的含药血清与白血病HL-60细胞共同培育24、48、72、96h后,应用荧光显微镜观察细胞形态,流式细胞仪检测凋亡峰(亚二倍体峰),用Fura-2荧光负载方法测定细胞内Ca2 浓度的变化。比色法检测凋亡相关基因Caspase-3活性变化。亲和免疫组化LSAB法检测HL-60细胞Bcl-2基因表达。结果10%浓度的含药血清处理组细胞体积缩小,细胞核固缩,膜起泡,核断裂及形成凋亡小体等,以72h最为明显;可见DNA含量低于G1期的凋亡细胞群,这群细胞的凋亡百分率随时间的递增而增加。10%浓度的含药血清处理组的细胞内Ca2 浓度也明显高于对照组(P<0.01),Caspase-3浓度明显高于对照组(P<0.01),Bcl-2基因表达明显低于对照组(P<0.05)。结论莪芪抗瘤方剂含药血清诱导白血病HL-60细胞发生凋亡,这种变化可能与细胞内Ca2 、Caspase-3水平上调及Bcl-2表达下调有关。     

清毒扶正中药联合细胞因子对树突细胞诱导作用的实验研究

目的:用清毒饮、养正片含药血清配合细胞因子作为培养基对急性髓系白血病完全缓解期(AML-CR)患者骨髓单个核细胞(BMNC)进行体外培养诱导树突细胞(DC),研究诱导转化的DC形态、免疫表型及分泌的细胞因子。方法:首先用清毒饮、养正片灌胃动物(新西兰兔)制备中药含药血清备用。取ALM-CR患者的骨髓,经抗凝后,应用绵羊红细胞玫瑰花结程序从骨髓中分离出T细胞的骨髓单个核细胞(TD-BMNC),以清毒饮、养正片含药血清与细胞因子联合培养,诱导含药血清促使TD-BMNC来源的DC分化成熟,观察DC的形态、免疫表型及细胞因子。结果:清毒饮+养正片组的低剂量组联合细胞因子可促进DC高表达CD1a、HLA-DR、CD80、CD86,并能促使DC高分泌细胞因子IL-2、IL-6,与对照组(细胞因子组)比较,表达均明显升高(P0.05)。结论:清毒扶正中药可促进树突细胞的增殖和表达,提高树突细胞的抗原提呈能力。     

侯美辰1,张英杰2,李旭3,姜爽2,樊磊2,史丹2,王晓波2

目的:临床上复方黄黛片对急性早幼粒细胞白血病具有良好疗效。中药组方未经体内代谢直接用于体外实验不具备说服性。依照血清药理学方法制备复方黄黛片含药血清观察对HL-60细胞的影响,证实复方黄黛片血清用药诱导急性早幼粒细胞凋亡的可信性,提供中药组方作用于体外实验的新途径。方法:制备复方黄黛片混悬液,大鼠灌胃后以腹主动脉取血方式提取含药血清,电感耦合等离子体发射光谱仪测定血清中砷的浓度。不同浓度含药血清,测定对HL-60细胞凋亡的影响。结果:含药血清砷浓度为10μg·L-1。光镜下含药血清增加细胞生长趋势越来越松散,边缘模糊甚至破碎。CCK-8法细胞抑制率、流式细胞仪测总凋亡率都随着含药浓度升高而增大。荧光显微镜观察到含药血清浓度越高细胞存活越少。血清浓度增加凋亡蛋白Bcl-2、Caspase-3和Caspase-8表达下调,Bax、Cleaved Caspase-3和Cleaved Caspase-8表达上调。结论:HL-60细胞对含药血清浓度有一定的依赖作用,复方黄黛片含药血清添加量增多,浓度升高,抑制HL-60细胞增殖作用增强,诱导细胞凋亡程度越显著。     

芒果苷对白血病HL-60细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究芒果苷对人髓系白血病HL-60细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制.方法 用MTT法观察芒果苷对HL-60 细胞增殖的影响;应用细胞形态学、DNA 凝胶电泳和流式细胞术等观察芒果苷对HL-60细胞的诱导凋亡作用;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR) 检测芒果苷作用前后Bcl-2、survivin基因mRNA 表达水平的变化.结果 芒果苷能明显抑制HL-60细胞的增殖,并能有效诱导HL-60细胞凋亡,随着药物浓度增加和作用时间延长,其抑制作用增强、凋亡率也逐渐上升,呈剂量和时间依赖性;芒果苷作用HL-60细胞后Bcl-2、survivin基因mRNA表达随着药物浓度增加和作用时间的延长而逐渐减弱.结论 芒果苷能有效抑制HL-60细胞增殖,诱导其凋亡;Bcl-2、survivin可能参与了芒果苷抑制HL-60细胞增殖、诱导凋亡的过程.     

益气养阴解毒方含药血清对白血病K562/A02细胞凋亡干预作用的初步研究

目的:探讨益气养阴解毒方含药血清对白血病K562/A02细胞凋亡作用的影响。方法:采用血清药理学方法制备益气养阴解毒方含药血清,以不同浓度的含药血清处理体外培养的K562/A02白血病细胞,采用MTT比色法观察益气养阴解毒方含药血清对K562/A02细胞增殖的影响。应用流式细胞术检测益气养阴解毒含药血清诱导K562/A02细胞凋亡的影响。结果:不同浓度益气养阴解毒方含药血清对K562/A02细胞增殖具有抑制作用,并呈剂量依赖关系。高、中、低剂量的益气养阴解毒方含药血清可诱导K562/A02细胞的凋亡,其凋亡作用以中、高剂量中药血清组最强。结论:益气养阴解毒方含药血清具有抑制K562/A02白血病细胞增殖作用,可诱导K562/A02白血病细胞明显凋亡,其作用机理可能与其直接细胞毒作用有关。     

益气养阴方对急性白血病细胞HL-60增殖和细胞形态的影响

目的:观察益气养阴方对急性白血病细胞HL-60增殖和细胞形态的影响。方法:制备益气养阴方含药血清,并设立对照组、低、中、高剂量含药血清,对急性白血病细胞HL-60进行培养。利用MTT比色检验法、Wright-Gimsa染色检测法分别检测细胞增殖和细胞形态变化。结果:与对照组比较,益气养阴方对HL-60细胞有一定抑制作用(P0.01);低剂量组HL-60细胞形态变化不明显,中剂量组少数细胞出现变化,高剂量组变化最明显。结论:益气养阴方能够抑制急性白血病细胞HL-60增殖和诱导白血病细胞分化。     

紫草素对白血病细胞HL-60增殖及凋亡作用的影响

目的研究紫草素诱导人早幼粒白血病HL-60细胞凋亡的作用机制。方法 MTT比色法检测紫草素对HL-60细胞增殖的影响;Annexin V/PI分析凋亡率;半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测bcl-2基因水平,分析白血病HL-60细胞凋亡作用与bcl-2表达水平关系。结果紫草素在1～8μg/mL浓度范围内能抑制HL-60细胞的增殖,具有时间和浓度的依赖性。2μg/mL紫草素能够诱导HL-60细胞凋亡,凋亡呈时间依赖性。在2μg/mL紫草素作用下,HL-60细胞bcl-2表达明显下调。结论紫草素能够诱导HL-60细胞凋亡,其作用机制与下调bcl-2表达有关。     

紫草素诱导白血病HL-60细胞凋亡及其机制研究

目的：研究紫草素在体外对人早幼粒白血病细胞株HL-60增殖的抑制和诱导凋亡作用。方法：MTT比色法检测紫草素对HL-60细胞增殖的抑制作用;AnnexinV／PI双标记流式细胞术检测紫草素对HL-60细胞凋亡率。结果：MTT测定显示紫草素能够对HL-60细胞起到明显的增殖抑制作用,且呈现剂量一效应依赖关系。AnnexinV／PI显示紫草素能够诱导HL-60细胞凋亡,凋亡率呈剂量依赖性。结论：紫草素能抑制人白血病HL-60细胞增殖,并诱导其凋亡。     

莪芪抗瘤方剂对白血病HL-60细胞凋亡的作用及机理研究

目的：研究中药复方莪芪抗瘤方剂在体外对白血病HL-60细胞凋亡影响，并探讨凋亡发生的可能机制。方法：通过血清药理学方法，选择10％浓度的含药血清与白血病HL-60细胞共同培育24、48、72、96h后，应用荧光显微镜观察细胞形态，流式细胞仪检测凋亡峰（亚二倍体峰），用Fura-2荧光负载方法测定细胞内Ca^2＋浓度的变化；比色法检测凋亡相关基因Caspase-3活性变化。结果：10％浓度的含药血清处理组细胞体积缩小，细胞核固缩，膜起泡，核断裂及形成凋亡小体等，以72h最为明显；可见DNA含量低于G1期的凋亡细胞群，这群细胞的凋亡百分率随时间的递增而增加。10％浓度的含药血清处理组的细胞内Ca^2＋浓度也明显高于对照组（P〈0．01），Caspase-3基因活性明显高于对照组相（P〈0．01．P〈0．05）。结论：莪芪抗瘤方剂含药血清诱导白血病HL-60细胞发生凋亡，这种变化可能与细胞内Ca^2＋水平上调，Caspase-3活性增强有关。     

益髓解毒方对骨髓增生异常综合征骨髓细胞治疗反应性的体外研究

目的 :探讨益髓解毒方治疗骨髓增生异常综合征 -难治性贫血 ( MDS-RA)的作用机理。方法 :通过体外培养 ,观察 MDS-RA患者骨髓单个核细胞经益髓解毒方不同剂量作用后 ,细胞增殖、凋亡的变化。结果 :MDS-RA骨髓单个核细胞在培养的第 4天细胞凋亡明显增加 ,高凋亡发生在细胞分裂的 S期。益髓解毒方大剂量组对细胞凋亡有直接的抑制作用 ,经其处理过的骨髓单个核细胞体外培养 CFU -GM集落数增加。结论 :益髓解毒方有明显促进造血祖细胞增殖、抑制过度凋亡的作用。     

补骨脂素加长波紫外线光化学疗法诱导HL-60、K562细胞凋亡及对Fas、FasL表达的影响

目的探讨补骨脂素(PSO)加长波紫外线(PUVA)光化学疗法(UVA)诱导人白血病细胞HL-60、K562凋亡及对Fas、FasL表达的影响。方法以HL-60、K562细胞为研究对象,以细胞凋亡率、电镜下细胞超微结构改变以及细胞Fas、FasL在基因、蛋白水平的表达为检测指标,观察PSO加波长为360 nm的UVA对人白血病细胞诱导凋亡的作用以及部分作用途径,并采用多因素方差分析法进行统计学处理。结果PSO、UVA照射及PUVA均可诱导HL-60、K562细胞发生凋亡,PUVA的作用显著强于前两者。电镜下观察经PUVA处理后的HL-60、K562细胞超微结构,可见明显的凋亡形态学改变。PSO、UVA照射及PUVA均可上调HL-60、K562细胞Fas在基因、蛋白水平的表达,下调FasL在基因、蛋白水平的表达,PUVA的作用显著强于前两者。结论PUVA可诱导白血病细胞HL-60、K562发生凋亡,作用强于PSO及UVA照射。PUVA诱导HL-60、K562细胞凋亡的途径之一为上调细胞Fas基因表达水平,下调FasL基因表达水平。