表达狂犬病毒糖蛋白的重组痘苗病毒对啮齿动物接种的反应

狂犬病毒糖蛋白重组痘菌病毒（V－RG）与非重组痘菌病毒比较，V－RG对小白鼠爆发性致死量下降10000LD50；对家兔眼粘膜及皮肤感染后，3～5天内呈现轻微的红、肿，3周内全部消退。所有局部损害仅限于表皮，未见其它不良反应。V－RG经口免疫的动物7天即产生抗体，于第14天能抵抗致死量狂犬病毒脑内或肌肉内攻击。     

人呼吸道合胞病毒的稳定性

目的观察人呼吸道合胞病毒(HRSV)在不同温度保存、冻融和超声波处理的稳定性。方法将HRSVA2株接种于KMB17细胞上适应培养后,收获病毒液,分别置于37、22、4和-20℃条件下保存不同时间,或经冻融和超声波处理后,用微量细胞病变法检测HRSV的感染性滴度,观察其稳定性。结果HRSV在37℃保存,病毒感染性滴度下降很快,第4天时,降至约1.50lgCCID50/ml,5d后降至1.00lgCCID50/ml以下,几乎检测不到;在22℃保存,病毒感染性滴度下降相对缓慢,第14天时比原始滴度降低约3.20lgCCID50/ml;在4℃和-20℃下保存较稳定,分别保存5周和3个月后,病毒感染性滴度下降<0.60lgCCID50/ml。冻融1、2、3次,病毒感染性滴度分别下降1.37、2.55和3.61lgCCID50/ml,冻融4次后,病毒几乎无感染性。超声波处理后,病毒感染性滴度下降很快,处理1次病毒滴度即下降至原始滴度的50%左右,处理2次后,病毒几乎无感染性。结论HRSV不宜在37℃和22℃存放,可短暂保存于4℃,在-20℃可保存较长时间;冻融和超声波处理均对病毒感染性滴度有明显影响。     

提高麻疹乙脑二联活疫苗热稳定性的研究

首先对3种保护剂冻干的麻疹乙脑二联苗进行滴度比较,结果3种保护剂的二联疫苗中麻疹病毒滴度差异均无显著意义;而对乙脑病毒滴度显示出保护剂Ⅱ和Ⅲ明显优于Ⅰ。选择保护剂Ⅲ制备二联苗和单价苗进行热稳定性试验,其中麻疹病毒在37℃对天及50℃72h的滴度下降均＜1．0Log。乙脑病毒在37℃14天及在50℃24h滴度下降均＜1．0Log。表明保护剂Ⅲ对麻疹沪191株和乙脑14－2株病毒的热保护作用均好。     

冻干麻疹活疫苗病毒滴定条件的选择

我们的研究发现，用Vero细胞置35℃培养滴定麻疹疫苗病毒，细胞病变比37C更为显著，病毒滴度也更高。同批疫苗在35C比在37℃滴度高0.6logTCID；。川．lml（参考苗在35C滴度为《．13、4．13、｛O；在37C滴度为｝5、｝75、｝13）。我们又将本所生产的在37℃不合格的50亚批疫苗经35℃重试，结果96％合格，48亚批疫苗满度在35℃均比在37℃有不同程度增高。经统计学处理，两种温度下疫苗滴度有显著性差异（Pwto·001）。为了分析疫苗在35℃滴度高的原因，我们分别计35℃和37℃培养8天后细胞增长数目，两种温度下细胞增长数目无显著差异（35C…     

流行性乙型脑炎活疫苗接种现场免疫效价监测及热稳定性观察

为了解乙脑活疫苗到达乡村接种现场后的效价和热稳定性，我们于1992年5月在大理州11个乡村接种现场，对成都生物制品研究所生产的冻干动脑活疫苗（在效期内）随机抽取相同批号样品，分别放冰箱（2～8℃）及室温（平均气温18．3～23．9℃），贮存至预防接种工作结束（5～9天，平均6．9天），再冷藏逐级上送至中国药品生物制品检定所，用蚀班法进行滴度检测。检测920111批8份、920215批2份、920221批1份，结果：冰箱组病毒滴度为5．18～5．81PFU／ml（5．465±0．1667）；室温组为5．29～5．72PFU／ml（5．428±0．1175）。两组疫苗病毒滴…     

重组HIV-1腺病毒载体活疫苗的冻干保护剂研究

目的研制重组HIV-1腺病毒载体活疫苗的冻干保护剂。方法在重组HIV-1腺病毒载体活疫苗中加入不同配比的保护剂,在适宜条件下制备成冻干剂型。根据冻干后外观、病毒滴度和热稳定性试验等结果,筛选出冻干保护剂的最适配方。结果以人血白蛋白、海藻糖、甘露醇、右旋糖苷和蔗糖等成分按比例配伍制备的保护剂,对重组HIV-1腺病毒载体活疫苗显示了较好的保护作用。冻干前后疫苗病毒感染性滴度下降在0.17LogCC ID50/ml以内;37℃放置1周,滴度下降0.3LogCC ID50/ml左右;37℃放置3周后,滴度下降约为0.6LogCC ID50/ml。而无保护剂的液体疫苗对照于37℃放置1周,滴度下降近2.5个LogCC ID50/ml。结论以人血白蛋白、海藻糖、甘露醇、右旋糖苷和蔗糖等配伍而制备的保护剂效果较好。     

冻干水痘减毒活疫苗的稳定性

目的 观察冻干水痘减毒活疫苗的稳定性。方法 将样品分别放37℃、22℃、8℃、-15℃及-70℃,不同时间取出,采用蚀斑形成单位（PFU）分别测定样品毒力滴度。结果-15℃以下保存5年或8℃保存92周,疫苗滴度仍很稳定,8℃保存100～124周滴度缓慢下降,但仍保持在规程规定的标准以上。22℃保存30周滴度不变。37℃（模拟长期老化试验）保存1周,滴度下降不超过一个对数指数。37℃保存4周,病毒滴度下降缓慢。结论 水痘 减毒活疫苗稳定性良好。     

重组MVA病毒载体疫苗的冻干保护剂研究

目的研制重组MVA病毒载体疫苗的耐热冻干保护剂。方法在重组MVA病毒载体疫苗中加入不同配比的保护剂,在适宜的条件下制备成冻干剂型。根据冻后外观、病毒滴度和热稳定性等结果,筛选出保护剂的最适配方。结果以海藻糖、甘露醇、右旋糖苷和肌醇等按比例、配伍而成的保护剂,对MVA病毒载体疫苗显示了较好的保护性,疫苗冻干前后病毒滴度下降在0.12LgPFU/ml以内,37℃放置1周,滴度下降0.35LgPFU/ml左右;放置3周,滴度下降不超过1LgPFU/ml。而无保护剂的液体疫苗对照于37℃放置1周,滴度下降近1LgPFU/ml;放置3周,滴度下降3.5LgPFU/ml左右。结论以海藻糖、甘露醇、右旋糖苷和肌醇等配伍而成的保护剂是一种良好的疫苗保护剂。     

口服脊髓灰质炎活疫苗糖丸的稳定性

目的　考察口服脊髓灰质炎活疫苗糖丸保存在不同温度不同时间毒力的稳定性。方法　将糖丸分别放－２０、２～８、１８～２２和３７℃，并于保存１、１．５、２年；１～６个月；１～６周；１、２、５、７天进行滴度测定。结果　糖丸 放－２０℃２年，２～８℃６个月，１８～２２℃３周，３７℃２天，其毒力滴度仍能达到＞５．７０ＬｏｇＴＣＩＤ５０／ｄｏｓｅ的合格标准。结论口服脊髓灰质炎活疫苗糖丸稳定性良好。     

两种低pH孵放法灭活静注人免疫球蛋白中脂包膜病毒效果比较

目的比较两种低pH孵放法对静注人免疫球蛋白(intravenous immunoglobulins,IVIG)中脂包膜病毒的灭活效果。方法 IVIG中分别加入两种核酸类型的脂包膜病毒水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)及伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)作为指示病毒,以经典工艺(23～25℃灭活21 d)及新工艺[(37±0. 5)℃灭活9 h]低pH(pH为3. 8～4. 4)孵放法进行病毒灭活,分别检测不同灭活时间的病毒滴度,比较灭活效果。结果经典工艺低pH孵放法对VSV灭活效果≥5. 88 logTCID_(50)/0. 1 mL,对PRV的灭活效果≥6. 00 logTCID_(50)/0. 1 mL,且灭活的样品在敏感细胞盲传3代无细胞病变。新工艺低pH孵放法对VSV灭活效果≥4. 62 logTCID_(50)/0. 1 mL,对PRV的灭活效果≥6. 12 logTCID_(50)/0. 1 mL。结论两种低p H孵放法对指示病毒的灭活能力均符合国家标准,但经典工艺对两种指示病毒的灭活效果好且灭活彻底。     

几种理化因子对狂犬病病毒分离株感染力影响的再检测

目的 分析几种理化因子对狂犬病病毒街毒分离株感染力的影响。方法将2006年分离的1株狂犬病街毒BD06株适应细胞后的第18代毒株暴露于不同的理化条件下,通过接种BHK-21细胞测定其病毒滴度(TCID50),观察其感染力的变化。结果 BD06株狂犬病病毒在100℃作用10 s和56℃作用2 min可以完全灭活,在37℃可存活6 d,4℃可存活2周,-20℃以下可存活半年以上;病毒置紫外线灯下30 cm处2 min内全部被灭活;在pH 6～10的中性环境下能够存活,在pH 5以下的弱酸性和pH 11以上的碱性环境中,10 min内可完全灭活;病毒对胰酶稳定;30%以上的丙酮在20 min,2倍体积的氯仿在5 min,75%的乙醇在2 min,0.05%的甲醛在6 h,10%的甲醛在5 min内均可将病毒全部灭活。结论分析了几种理化因子对狂犬病病毒BD06株感染力的影响,为生产实践中灭活狂犬病病毒或消毒提供了参考。     

冻干乙脑减毒活疫苗保护剂的筛选

目的　筛选冻干乙脑活疫苗的保护剂。方法　通过优化组合筛选出A、C、D、E、F 5种保护剂配方 ,其中A为现行生产配方作为对照与其他配方进行比较。结果　使用A保护剂的疫苗在 37℃放置 7d和 2 1d ,病毒滴度分别下降 0 .98和 1.6 6LogPFU/ml;使用D、E保护剂的疫苗热稳定性最好 ,在 37℃放置 7d滴度分别下降 0 .19和 0 .0 7LogPFU/ml,2 1d分别下降 0 .42和 0 .39logPFU/ml。结论　D、E保护剂配方为最佳候选配方     

乙型脑炎灭活疫苗Vero细胞适应毒种的研究

将乙脑P3株鼠脑毒种在Vero细胞中适应性传代，当传至10代时，毒种的CPE和感染性虽无明显变化，但其免疫原性却明显减弱，因此，用在Vero细胞中传递1至2代的几株建立毒种库（P3V1和P3V2），其涵度分别为7．71和78210gpfu／ml。在毒种中加入以山梨醇为主要成分的稳定剂后，4～S℃保存30天，－30℃1年，－60℃2年，滴度降低约0．51ogpfu／ml，在生产中使用效果良好。     

CTN株疫苗对中国狂犬病病毒街毒代表株的保护性

目的研究人用狂犬病病毒CTN株疫苗对中国狂犬病病毒街毒代表株的保护性,为评估该疫苗的适用性提供依据。方法用CTN株疫苗免疫昆明小鼠,用3株具有代表性的街毒株CQ92、HN06、J和标准攻击毒株CVS经脑内和肌肉攻击,以未免疫小鼠进行脑内和肌肉攻击为对照,观察CTN株疫苗的保护效果。结果原倍和5倍稀释的疫苗免疫的小鼠经3株街毒肌肉攻击后,均得到100%的保护,与对照组比较,差异均有极显著意义;经3株街毒脑内攻击后,原倍疫苗免疫的小鼠均得到100%的保护,5倍稀释的疫苗免疫的小鼠对3株街毒CQ92、HN06、J的保护率分别为85%、75%和77.8%,与对照组比较,差异均有极显著意义。结论CTN株疫苗总体上能有效预防我国目前狂犬病的流行。     

抗狂犬病马血清效价ELISA检测试剂的制备

目的制备检测抗狂犬病马血清效价的ELISA试剂。方法采用ELISA间接法。先用抗狂犬病病毒IgY包被酶标板,并确定其最适包被浓度;制备酶标二抗,并确定其最佳使用浓度。对试剂的灵敏度、特异性、精密性、稳定性及与小鼠中和试验结果的相关性进行考核。结果抗狂犬病病毒IgY和酶标二抗的最适浓度分别为10!g/ml和1∶1500,试剂灵敏度为0.072IU/ml,特异性良好,批间及试验间变异系数均小于11%,37℃放置3和5d检测样品结果与放置前差异无显著意义,与小鼠中和试验结果呈正相关。结论所制备的抗狂犬病马血清效价ELISA检测试剂盒,可用于抗狂犬病马血清效价的检测。     

狂犬病病毒抗体竞争ELISA检测方法的建立及初步应用

目的建立狂犬病病毒抗体竞争ELISA检测方法,用于不同株狂犬病疫苗免疫后抗体水平的检测。方法用市售的不同狂犬病疫苗株抗原免疫NIH小鼠,制备免疫血清,用不同的疫苗株抗原包被酶标板,分别测定小鼠血清抗体效价,并通过不同株抗原抗体的交叉中和实验,分析抗原的差异性;在此基础上,将不同毒株抗原按不同比例混合包被酶标板,分别测定阳性血清样本,并与快速免疫荧光抑制试验(RFFIT)检测结果比较,确定包被抗原模式,建立狂犬病病毒抗体竞争ELISA检测方法,绘制标准曲线,确定最佳定量范围及灵敏度,确定Cut-off值;并对其特异性、精密性、准确性及稳定性进行验证;用建立的方法与其他市售狂犬病病毒抗体检测试剂分别检测血清样品,分析检测结果的一致性及相关性。结果狂犬病病毒抗原AG∶CTN-1=4∶1为最适包被抗原模式,试剂经优化后,检测抗体效价范围在535.00～33.44 mIU/ml之间,具有良好的线性关系(r>0.99),最低检出限为8.36 mIU/ml,Cut-off值为0.735 mIU。该方法检测人血清白蛋白、破伤风阳性血清、乙肝表面抗原阳性血清、白喉阳性质控血清均未发生反应;试验内变异系数在6.68%～7.84%之间;回收率在97.25%～104.50%之间;试剂置37℃3 d,与4℃保存试剂测定结果差异无统计学意义(P>0.05)。该方法检测血清样品与市售狂犬病病毒抗体检测试剂比较,均具有良好的一致性;与RFFIT测定结果比较,二者差异无统计学意义(P>0.05),回归方程为Y=-0.475+3.246 X,相关系数为0.801。结论已建立了狂犬病病毒抗体竞争ELISA检测方法,可用于大规模狂犬病病毒抗体的筛查。     

噬菌体展示的1型糖尿病疫苗种子的稳定性

目的观察在不同温度保存条件下噬菌体展示的1型糖尿病疫苗种子的稳定性。方法将噬菌体展示的1型糖尿病疫苗种子样品分为两组,一组添加等体积的80%甘油,另一组不添加甘油,分别于不同温度条件下存放不同时间后取样,用噬斑法检测滴度。结果在37℃和25℃条件下保存,噬菌体疫苗种子滴度下降较快,在4℃和-20℃条件下保存噬菌体疫苗种子滴度下降相对较慢;37℃、25℃及4℃条件下保存,添加甘油并无明显的保护作用,而在-20℃条件下保存,添加甘油有明显的保护作用。结论噬菌体展示的1型糖尿病疫苗种子可在4℃条件下短期保存,-20℃条件下长期保存,并可添加甘油作为保护剂。