抗人血清型IgA单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立和鉴定

本文使用从IgA骨髓瘤患者血清中提出的IgA,免疫BALB/c小鼠,采用常规细胞融合的方法,获得4株针对IgA的单克隆抗体杂交瘤细胞系。抗体效价培养上清为10~(-2),诱生腹水ELISA测定为10~(-1)～10~(-6),冻存6个月后复苏,腹水效价仍保持10~(-1)～10~(-6)。染色体分析为102,基本上是Sp2/0骨髓瘤细胞染色数68和小鼠脾细胞42之和,说明为杂交瘤细胞。专一鉴定:本McAb经ELISA测定证明,仅与IgA起反应,小鼠亚类测定证明为IgG_1本McAb与     

抗人CT抑制物单克隆抗体的制备及应用

作者以CT抑制物免疫的BALB/c小鼠脾细胞,与Sp2/0骨髓瘤细胞在50％PEG(Mr2000)的介导下融合,获得三株分泌抗人CT抑制物McAb的杂交瘤细胞系(A2、F7、G10)。用ELISA测定杂交瘤细胞培养上清及其所诱生的小鼠腹水,特异性抗体效价分别为10~(-2)～10~(-3)及10~(-4)～10~(-6)。抗原阻断试验及取代试验结果表明,这些McAb     

型特异性、构象依赖性HPV16 L1单克隆抗体的制备与鉴定

目的:研制具有型特异性和构象依赖性的人乳头瘤病毒16主衣壳L1蛋白(HPV16 L1)单克隆抗体(mAb).方法:利用昆虫-杆状病毒系统表达有生物活性的HPV16 L1蛋白.非变性条件下纯化HPV16 L1蛋白,免疫6周龄雌性BALB/c小鼠.末次加强免疫后取其脾细胞与骨髓瘤Sp2/0细胞融合,应用间接ELISA筛选阳性克隆.非变性Western blot鉴定mAb的型特异性和构象依赖性,细胞免疫组化确定抗体的型特异性.间接ELISA法测定杂交瘤分泌上清及腹水中抗体效价.mAb亚类试剂盒鉴定mAb亚类.结果:获得1株稳定分泌具有型特异性和构象依赖性的HPV16 L1抗体的杂交瘤细胞株,命名为2E3.2E3杂交瘤细胞株细胞培养上清中抗体效价为1:800;小鼠腹水中抗体效价为1:12 800.亚类鉴定结果为IgG1κ.Western blot及细胞免疫组化分析结果显示,2E3 mAb具有型特异性和构象依赖性,只与非变性的HPV16 L1蛋白发生反应,不与HPV18L1、HPV58L1、HPV11L1产生交叉反应.结论:成功制备了型特异性HPV16 L1 mAb,为进一步研究HPV16 L1的抗原表位奠定了基础.     

抗人C_1~—-INH单克隆抗体的制备及其在分离人血清中C_1~—-INH的应用

本文以C_1~—抑制物免疫的BALB/c小鼠脾细胞,与SP 2/0骨髓瘤细胞在50％PEG的作用下融合,获得三株分泌抗人C_1~—抑制物单克隆抗体的杂交瘤细胞系(A8、F7、G10)。用ELISA测定杂交瘤细胞培养上清及其所诱生的小鼠腹水,特异性抗体效价分别为10~(-2)～10~(-3)及10~(-4)～10~(-6)。抗原阻断试验及取代试验结果表明,这些单抗是C1~—抑制物特异的。杂交瘤细胞液氮冻存半年以上,复苏后仍稳定分泌特异性抗体。经鉴定三株单抗均属IgG1。以F7制成亲和层析柱,分离纯化血清中的C_1~—抑制物,经SDS-PAGE及免疫印迹试验证明,有较高的纯度和良好的活性。本文为今后开展C_1~—抑制物的基础理论及临床应用研究,提供了方便条件。     

32株分泌抗HBsAg单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

<正> 取纯化HBsAg免疫的BALB/c小鼠脾细胞,与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,选原始抗体阳性孔细胞进行多次克隆化。两次融合试验共得32株分泌抗HBsAg-McAb的杂交瘤细胞株。其培液上清的PHA效价为1:32～1:1,024,对流(CEP)效价为1:2～1:16。诱生小鼠腹水的PHA效价,25/32株为10~(-4) ～10~(-5),7/32株>10~(-6),其中8/32株ELISA法效价可达10~(-7)。CEP和AGD效价最高分别达1:6,400和1:3,200。 选出21株分泌抗体能力较强者进行冻存,并对其纯度和特异性进行鉴定。结果证明,21株杂交瘤分泌的McAb均属小鼠IgG_1亚类,能较好地中和乙肝患者血清中的HBsAg。与人白蛋白或正常人血清进行CEP或AGD试验,均无沉淀线出现。说明这些McAb具有良好的纯度和专一性。     

抗人心肌球蛋白单克隆抗体的制备及其生物学特性初步研究

作者以人心肌球蛋白抗原免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,获得2株(2F1和1F6)分泌抗人心肌单克隆抗体的杂交瘤细胞系。经ELISA检测细胞培养液上清和小鼠诱导的腹水,其抗体效价分别为10~(-2)～10~(-3)和10~(-5)～10~(-6)。抗原区带测定结果,细胞培养液上清及小鼠腹水中的特异性抗体均能与分子量为65 000的蛋白质结合,经酶联二抗及底物处理,呈一条明显的显色带,阴性对照无显色带。抗原阻断     

抗大鼠视网膜神经节细胞诱向因子单克隆抗体的产生及其鉴定

视网膜神经节细胞诱向因子(RGNTF,Retinal ganglion neuronotrop-bic factor)是新发现的一神经生长因子,它能特异性地促进体外培养的视网膜神经节细胞的生长活性。作者用Phast System电泳实验证实,RGNTF的分子量为30kD蛋白质。并用之免疫动物,制备出3株抗RGNTF单克隆抗体,分别命名为A1、D3、E8。经鉴定杂交瘤细胞系染色体大多为端着丝点染色体,并有1～2条中部着丝点染色体。抗体的亚型鉴定A1、D3是IgG3型、E8是IgM型。用ELISA方法测定RGNTF-McAb与相应抗原结合的效价为10~(-4)～10~(-5)结果发现随抗体浓度的增强,抗体与抗原结合率也增加,以E8株结合率最高。本单抗与其它生长因子MGF、EGF无交叉反应,表明其相应抗原是一种新的生长因子。     

人红细胞凝集型单抗的制备与鉴定

目的制备人红细胞凝集型单克隆抗体并进行鉴定。方法以3种方式处理人血红细胞,获得红细胞免疫原,分别免疫Balb/c小鼠。应用杂交瘤技术,取免疫小鼠的脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,以凝集实验筛选分泌凝集型抗体的杂交瘤细胞,继而用有限稀释法克隆3次,并对杂交瘤细胞的稳定性进行测定。通过腹水法制备抗体,亲和层析法纯化抗体,对抗体的特性进行研究。结果 3种方式获得的免疫原均能建立有效的免疫反应,低渗加超声破碎法所获得的小鼠血清抗体效价最高。通过融合获得8株可稳定分泌抗体的杂交瘤细胞,其中,4A1分泌的抗体凝集效价最高。抗体可使4种人血型的红细胞凝集,无种属交叉凝集反应。结论有效制备了针对人红细胞的凝集性单抗,为其之后的应用研究奠定了基础。     

抗人红细胞膜抗原非凝集型单克隆抗体的研制及特性鉴定

目的:制备抗人红细胞膜抗原的非凝集型单克隆抗体(mAb)并鉴定其特性。方法:应用杂交瘤技术,以人O型红细胞膜抗原免疫BALB/c小鼠。取免疫小鼠的脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,用聚凝胺试管法筛选识别红细胞表面共同抗原的抗体,玻片凝集实验剔除凝集型抗体(完全抗体),再将分泌非凝集型mAb(不完全抗体)的杂交瘤细胞株用有限稀释法克隆化3次。对杂交瘤细胞的稳定性和mAb的特性进行鉴定。结果:获得1株可稳定分泌mAb的杂交瘤细胞2E8。mAb2E8为IgG1类,可特异性地识别红细胞膜上的H抗原,没有种属交叉血凝反应。杂交瘤细胞的培养上清与人的A、B、AB和O型红细胞均能产生强凝集,凝集效价为1∶1024,腹水mAb的凝集效价达到1∶64×106。mAb的亲和力用凝集试验检测,出现血凝的时间为7s,3min以内凝块>1mm。结论:成功地制备了针对红细胞膜H抗原的非凝集性mAb,此mAb的凝集效价、相对亲和力及特异性均较良好,为构建双特异性抗体奠定了基础。     

抗人肺鳞癌单克隆抗体的制备及其特性鉴定

目的:制备和鉴定抗人肺鳞癌单克隆抗体(mAb),为肺癌的早期诊断和靶向治疗提供候选抗体药物及为肺癌抗原的筛选提供工具。方法:用肺癌细胞株YTMLC-90做抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0融合,间接ELISA和有限稀释法筛选抗体阳性的杂交瘤细胞获得mAb。染色体计数法鉴定杂交瘤细胞,并进行mAb同种型鉴定;对细胞培养上清液和腹水中的mAb采用间接ELISA法进行初步特异性检测及效价测定;采用Western blot法鉴定其与不同组织抗原结合活性;采用免疫组化染色法鉴定其在肺癌组织中的分布。结果:筛选出5株可稳定分泌抗肺鳞癌mAb的杂交瘤细胞株E2、F9、E11、D5和C6,分泌的抗体均为IgG1亚类,κ亚型。C6染色体数目为89～112条,细胞培养上清和腹水效价分别为1∶1 004和1∶104,ELSA和Western blot结果显示其能特异性与肺癌细胞结合,未见与其他高发癌组织和正常组织结合。结论:成功地制备了能够特异识别肺癌组织的mAb。     

抗单纯疱疹病毒单克隆抗休的研究——Ⅰ、产生抗单纯疱疹病毒单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

用HSV—1SM_(44)株免疫C×S/1小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系SP 2/0融合,经HAT选择培养,细胞融合率为100％。ELISA筛选后获得53孔产生抗HSV抗体的杂交瘤阳性孔。对1A12、2A8、1G8、1D10、2C55株细胞系用有限稀释法做2—5次克隆化,阳性克隆率均达到100％。杂交瘤细胞系经连续传代培养4个月,仍能稳定产生单克隆抗体,冻存的细胞系经复苏后亦能稳定产生抗体。应用ELISA及IF试验证明,5种单克隆抗体均与HSV—1和HSV—2标准株呈特异性反应。ELISA测定,杂交瘤培养上清抗体效价为10~(-2)—10~(-3),制备免疫腹水效价为10~(-4)—10~(-7)。5种单克隆抗体与EBV、CMV、JEV和HFRSV无交叉反应。     

淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒GP2单克隆抗体的制备和鉴定

目的制备淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)单克隆抗体(m Ab)。方法采用杂交技术获得并筛选出杂交瘤细胞,收集含单克隆抗体的培养上清行免疫荧光(IFA)、dot-blot、ELISA法鉴定抗体重链类型和测定单克隆抗体的免疫效价。用蛋白G Sepharose亲和层析填料纯化抗体,纯化后的抗体采用SDS-PAGE检测纯化效果,并进一步用Western blot检查抗体对LCMV的作用部位。结果成功获得能稳定分泌抗LCMV的特异性杂交瘤细胞株,顺利获得纯化的单克隆抗体,命名为anti-GP2。免疫荧光、ELISA结果均证实获得的单克隆抗体能识别LCMV抗原。用ELISA法鉴定出该单克隆抗体重链类型为Ig G2b,培养液免疫效价大约为1.35×10~3。蛋白G Sepharose亲和层析填料纯化抗体后经SDS-PAGE检测证实纯化抗体成功。Western blot提示该单克隆抗体对LCMV的作用部位为病毒颗粒表面糖蛋白抗原GP2。结论成功制备出了针对LCMV病毒颗粒表面糖蛋白抗原GP2的单克隆抗体(anti-GP2 m Ab)。     

抗CRP杂交瘤单克隆抗体的制备及研究

应用杂交瘤技术融合Sp2/0瘤细胞与CRP免疫的BALB/c小鼠脾细胞,经选择培养和细胞克隆,建立了4株抗CRP特异性单克隆抗体分泌细胞株242B3、242C4、263A5与263B5,其染色体均在Zn=62～67间,抗体Ig鉴定分别为IgG2a、IgG2a、IgG2b和IgG2b腹水抗体效价为1～3×10~(-5)。     

抗大肠杆菌_(506)株36kD蛋白单抗的制备及其在人精子上的免疫定位

用纯化的36kD蛋白免疫Balb/c小鼠。取免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0以PEG进行细胞融合,融合率为86％。采用ELISA筛选出杂交瘤细胞阳性孔。经过4～7次有限稀释克隆化,共获得7株能稳定分泌36kD相应MCAb的杂交瘤细胞。将杂交瘤细胞分别注射小鼠腹腔,测定腹水McAb的效价为1:5×10~3～1:1×10~5,抗体亚型均为IgG1。用荧光显微镜观察,结果发现EC2作用的人精子头颈部出现明显荧光反应,提示共同抗原存在于人精子头颈部。这些结果有助于进一步探讨细菌感染引起男性不育的机制以及研制细菌避孕疫苗等工作。     

抗人胃癌单克隆抗体的研究——Ⅰ.分泌抗人胃癌细胞单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

用国内胃癌细胞株GGC-81-40免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0-Ag融合,经ELISA法和IFS法筛选,获得了5个产生抗人胃癌细胞单克隆抗体的杂交瘤细胞系。这些杂交瘤细胞系具有双亲代生物学性质,现已传代培养一年多,染色体数为103～105条,免疫球蛋白分型:二株分泌的单抗为IgG_1,其它三株为IgM。它们均分泌高效价的抗体,ELISA测定效价为10~(-5) ,IFS效价为1:500;细胞结合试验与GGC-81-40呈现强阳性反应,但不与正常骨髓细胞,扁桃体T、B细胞以及外周血细胞反应。     

乙型肝炎病毒e抗源单克隆抗体研制及临床初步应用

基因工程菌生产的HBeAg,用十二烷基磺酸钠(SDS)和2-巯基乙醇(2-ME)处理后作为抗原免疫雌牲BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与同系小鼠骨髓瘤细胞(Sp2/0)融合,共获约3000个杂交瘤细胞克隆。经二种不同的ELISA筛选,得到16个分泌抗HBe McAb的杂交瘤细胞系。其中以94.127二株杂交瘤细胞分泌的抗HBe McAb效价较高(ELISA效价均为10~(-6),与HBeAg作琼脂糖双向扩散时还可出现肉眼所见沉淀线)。染色体检查证实为杂交瘤     

一株中和人IL-17免疫活性的单克隆抗体的制备

目的制备抗人IL-17单克隆抗体,并鉴定其中和活性。方法用hIL-17作为免疫和检测抗原,用间接ELISA法筛选分泌抗人IL-17抗体的杂交瘤细胞株,并对抗体进行中和活性鉴定。结果获得1株稳定分泌抗人IL-17单克隆抗体的杂交瘤细胞株,所分泌的单抗类型重链为IgG2b,轻链为κ;该株杂交瘤细胞腹水效价为1∶8.192×105;传30代及液氮中保存6个月,抗体效价稳定;Western Blot检测证明该单抗与人IL-17蛋白特异地结合;单抗亲和常数为8.192×10-9 mol/L;ELISA及Real-time-PCR检测证明该单抗能够有效地阻断人IL-17刺激Hela细胞产生IL-6的作用。结论所制备的抗人IL-17单克隆抗体具有高度的特异性、稳定性及中和活性,为针对IL-17为靶点的抗体药物的开发奠定了基础。     

嗜水气单胞菌抗独特型单克隆抗体的制备和初步鉴定

目的:制备嗜水气单胞菌(Aeromonas hydophila)抗独特型单克隆抗体(AId mAb)并进行鉴定.方法:以具有中和作用的抗嗜水气单胞菌 mAb 1G10免疫 BALB/c小鼠,采用常规杂交瘤技术制备嗜水气单胞菌 AId mAb.用 ELISA法对 mAb的效价及其模拟嗜水气单胞菌的特性进行鉴定.结果:获得4株能稳定分泌嗜水气单胞菌 AId mAb的杂交瘤细胞株,分别命名为1F9、 1H10、 3F5、 4G3.经测定杂交瘤细胞腹水 mAb效价为10 -4～10 -5.竞争抑制实验结果表明 4株 AId mAb均能不同程度地抑制嗜水气单胞菌与兔抗嗜水气单胞菌多克隆抗体结合,其中两株 1F9、 1H10具有较强的抑制作用.用作制备抗独特性抗体腹水的小鼠,其血清均能检测与嗜水气单胞菌进行免疫结合的抗体,经 ELISA检测,其效价为 1: 100 ～1: 1 000.结论:成功地制备了产生嗜水气单胞菌抗独特型抗体的杂交瘤细胞株,为制备该菌的抗独特性抗体疫苗奠定了基础.     

豚鼠气单胞菌抗独特型单克隆抗体的制备和初步鉴定

目的:制备豚鼠气单胞菌(Aeromonascaviae)抗独特型单克隆抗体(AIdmAb)并进行鉴定。方法:以具有中和作用的抗豚鼠气单胞菌mAb1F1免疫BALB/c小鼠,采用常规杂交瘤技术制备豚鼠气单胞菌AIdmAb。用ELISA法对mAb的效价及其模拟豚鼠气单胞菌的特性进行鉴定。结果:获得4株能稳定分泌豚鼠气单胞菌AIdmAb的杂交瘤细胞株,分别命名为1E12、4F6、6G6、7C1。经测定杂交瘤细胞腹水mAb效价为10-3～10-4。竞争抑制实验结果表明4株AIdmAb均能不同程度地抑制豚鼠气单胞菌与兔抗豚鼠气单胞菌多克隆抗体的结合。制备杂交瘤细胞腹水的BALB/c小鼠血清均能与豚鼠气单胞菌反应,其效价为1∶50～1∶800。结论:成功地制备了豚鼠气单胞菌抗独特型mAb的杂交瘤细胞株,为该菌的抗独特型疫苗制备研究奠定了基础。     

分泌抗人甲胎蛋白并对肝癌细胞株有特异性亲和力的单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立和鉴定

采用杂交瘤技术将小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0与人甲胎蛋白免疫的BALB/c小鼠脾细胞融合,,经3～4次有限稀释法克隆,ELISA法筛选,获得分泌抗人甲胎蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株 其上清和腹水效价分别为10~(-2)和10~(-6～-9)。再经间接荧光法、放射免疫法反复