细胞因子对人绒毛瘤细胞JARβHCG分泌的影响

人绒毛膜促性激素（ＨＣＧ）的分泌调节机制至今仍不详。本文以经绒毛瘤细胞ＪＡＲ作为人滋养层细胞的模型，研究了ＩＦＮα、ＴＮＦ－α、Ｍ－ＣＳＲＦ、ＴＧＦ－β、ＵＫ和ＮＧＦ等细胞因子对β－ＨＣＧ分泌的影响。结果显示，ＩＦＮα和ＴＮＦ－α能显著地促进βＨＣＧ的分泌的并具有剂量依赖性，ＵＫ则能显著地抑制β－ＨＣＧ的分泌，而Ｍ－ＣＳＦ、ＴＧＦ－β和ＮＧＦ则无明显作用。细胞活性实验表明，高浓度的ＩＦＮα、ＴＮＦ     

转hGM－CSF基因人膀胱癌细胞株的建立及其生物学特性

采用逆转录病毒载体将ｈＧＭ－ＣＳＦ基因导入人膀胱癌细胞株ＢＩＵ－８７细胞中，建立转基因细胞株ＢＩＵ／ＧＭ。经ＰＣＲ－ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｌｏｔ杂交证实ＧＭ－ＣＳＦ基因已整合到ＢＩＵ／ＧＭ细胞基因组中。经流式细胞仪细胞ＤＮＡ周期分析表明，转基因前后ＢＩＵ－８７细胞增殖状态无变化。免疫荧光检测发现ＧＭ－ＣＳＦ基因导入及表达不能促进ＢＩＵ－８７细胞表面ＨＬＡ－ＡＢＣ、ＤＲ、ＤＱ抗原的表达。转基因细胞经６０Ｇｙ／ｓＸ线灭活后，丧失增殖能力，但能维持一定水平的ＧＭ－ＣＳＦ分泌活性达２周。本文为进行转基因瘤苗的深入研究奠定了初步基础。     

重组人肿瘤坏死因子对人结肠癌SW-480细胞的体内作用

目的：探讨ＴＮＦ抗大肠癌的作用及其机制。方法：建立人结肠腺癌裸小鼠移植瘤模型，观察ｒｈＴＮＦ对人结肠腺癌ＳＷ－４８０裸小鼠移植瘤重量、组织学和超微结构及细胞周期动力学的影响。结果：ｒｈＴ－ＮＦ对人结肠腺癌裸小鼠移植瘤具有抑制作用，抑瘤作用呈剂量依赖性；结肠癌细胞围绕血管出现片状坏死，并有大量炎细胞浸润；ｒｈＴＮＦ能明显抑制结肠癌细胞从Ｇ０ ／Ｇ１ 期过渡到Ｓ和Ｇ２Ｍ 期，使细胞增殖指数显著降低，ＤＮＡ抑制率呈剂量依赖性。结论：ｒｈＴＮＦ对大肠癌生长具有抑制作用，可能与ｒｈＴＮＦ诱导的炎症反应及血管损伤有关；ｒｈＴＮＦ能特异性抑制大肠癌细胞从Ｇ０／Ｇ１ 期向Ｓ和Ｇ２Ｍ 期过渡，进而抑制ＤＮＡ合成     

表皮生长因子受体反义基因转染对人恶性胶质瘤细胞体外生长的影响

目的探讨表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）反义基因转染对人恶性胶质瘤细胞Ｕ８７ＭＧ体外生长的影响。方法构建ＥＧＦＲ反义基因表达载体，应用脂质体转染法将其导入Ｕ８７ＭＧ细胞；ＰＣＲ方法鉴定转染克隆；Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹杂交检测ＥＧＦＲ蛋白表达水平；通过绘制生长曲线和软琼脂集落形成实验测定反义ＥＧＦＲ基因对恶性胶质瘤细胞体外生长的抑制作用。结果转染反义ＥＧＦＲ基因的细胞克隆株ＡＳ１ＡＳ６的ＥＧＦＲ蛋白表达水平均有不同程度的降低；ＡＳ１ＡＳ６细胞体外生长明显减慢，ＡＳ１ＡＳ６细胞克隆形成率明显降低。表明Ｕ８７ＭＧ细胞体外生长速度和恶性转化能力均与ＥＧＦＲ表达呈正相关。结论反义ＥＧＦＲ基因转染可以明显抑制Ｕ８７ＭＧ细胞生长，ＥＧＦＲ对Ｕ８７ＭＧ细胞生长具有重要的调控作用     

肿瘤坏死因子受体(TNFR)基因转移增强TNF对肿瘤细胞的杀伤作用

目的：探讨ＴＮＦＲ基因转移对肿瘤细胞表面ＴＮＦＲ表达量的影响，观察其对ＴＮＦ杀伤膀胱肿瘤细胞作用的影响。方法：建立ＴＮＦＲ的逆转录病毒表达载体，通过转染包装细胞ＰＡ３１７产生完整病毒颗粒；膀胱癌ＢＩＵ８７细胞经病毒感染后，检测细胞表面ＴＮＦＲ数量及ＴＮＦ对其杀伤作用的变化。结果：ＴＮＦＲ基因转移前膀胱癌ＢＩＵ８７细胞表面与ＴＮＦ结合的位点数量平均为９１２个／细胞，经病毒感染后，细胞表面与ＴＮＦ结合的位点数量平均为２８７２个／细胞（Ｐ＜０．０５）；ＴＮＦ对经病毒感染的ＢＩＵ８７细胞的杀伤作用较未经病毒感染者有明显增强（Ｐ＜０．０５）。结论：以逆转录病毒为载体的基因转移方法可以提高肿瘤细胞表面ＴＮＦＲ的表达量，从而增强ＴＮＦ对肿瘤细胞的杀伤作用。     

胰岛素样生长因子Ⅱ受体基因微小卫星不稳定性在肝细胞癌 …

目的：了解胰岛素样生长因子Ⅱ受体（ＩＧＦⅡＲ）微小卫星不稳定性（ＭＩ）在肝细胞癌的表现。方法：用ＱＩＡａｍｐ方法提取肝细胞癌ＤＮＡ,选择７对引物,经ＰＣＲ扩增,走ＤＮＡ序列胶电泳,测定其ＭＩ的阳性率及有无ＩＧＦⅡＲ基因的突变。结果：肝细胞癌ＭＩ阳性率４４．１％（１５／３４）,癌旁组织细胞ＭＩ阳性率２３．５％（８／３４）,二者之间有明显差异（ｐ〈０．０５）。ＩＧＦⅡＲ基因有丢失、插入、替换等突变。结     

逆转录病毒介导的TNFa基因在胶质瘤细胞系（C6）中的表达及对肿瘤细胞恶性生长的影响

利用逆转录病毒载体ＬＸＳＮ构建了含有完整编码ＴＮＦｃＤＮＡ的重组逆转录病毒质粒ｐＬＸＳＮ－ｔｎｆ，用Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ将重组质粒导入病毒包装细胞ｐＡ３１７，经Ｇ４１８筛选培养获得抗性克隆，用ＮＩＨ３Ｔ３细胞测定病毒滴度，获得滴度为５×１０５ＣＦＵ／ｍｌ的细胞克隆。利用病毒上清液感染大鼠胶质瘤细胞系Ｃ６，得到Ｇ４１８抗性克隆细胞Ｃ６ｐＬＸＳＮ－ｔｎｆ，经ＰＣＲ检测，ＴＮＦｃＤＮＡ完整地整合在细胞基因组中。测定Ｃ６ｐＬＸＳＮ－ｔｎｆ细胞上清中ＴＮＦ的生物活性，结果显示ＴＮＦ有相对稳定的表达（４８～１８０Ｕ／ｍｌ１０６ｃｅｌｌｓ／２４ｈ）。实验还显示经ＴＮＦ基因转导的Ｃ６ｐＬＸＳＮ－ｔｎｆ细胞生长速度较之亲本肿瘤细胞Ｃ６明显下降，基因修饰后的肿瘤细胞在Ｗｉｓｔａｒ大鼠体内形成肿瘤的能力明显受到抑制。进一步用超离心法浓缩病毒对胶质瘤移植模型进行了体内治疗研究。     

细胞因子对人胃癌细胞胃癌相关抗原MG7Ag表达的调节

探讨细胞因子对人胃癌细胞胃癌相关抗原ＭＧ７Ａｇ表达的调节作用。用基因重组干扰素α（ＩＦＮ－α），干扰素γ（ＩＦＮ－γ），白细胞介素２（ＩＬ－２）和肿瘤坏死因子γ（ＴＮＦ－γ）体外诱导三株人胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１，ＭＧＣ８０３和ＭＫＮ４５胃癌相关抗原ＭＧ７Ａｇ表达。ＩＦＮ－α和ＩＦＮ－γ对胃癌细胞ＭＧ７Ａｇ有促表达作用。ＩＬ－２对三株细胞ＭＧ７Ａｇ无调节作用；ＴＦＮ－α对细胞ＭＧ７Ａｇ表达调节是随     

缺血性急性肾功能衰竭与细胞凋亡

目的：探讨缺血性急性肾功能衰竭（ＩＡＲＦ）与细胞凋亡的关系以及褪黑素（ＭＥＬ）对ＩＡＲＦ的保护作用。方法：用无损伤动脉夹钳夹大鼠双侧肾蒂４５ｍｉｎ再灌注２４ｈ的手术方法制成ＩＡＲＦ动物模型,观察不同剂量ＭＥＬ预防用药对ＩＡＲＦ大鼠血尿素氮（ＢＵＮ）、肌酐（Ｃｒ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ Ｐｘ）、丙二醛（ＭＤＡ）的影响以及对肾小管细胞凋亡的影响。结果：ＩＡＲＦ大鼠ＢＵＮ,Ｃｒ升高,ＳＯＤ,ＧＳＨ Ｐｘ下降,ＭＤＡ上升。形态学显示肾小管细胞出现细胞凋亡。ＭＥＬ能不同程度地逆转上述改变,防止或减少凋亡发生,效应呈剂量依赖性。结论：氧自由基（ＯＦＲ）是ＩＡＲＦ的主要发生机制之一,ＩＡＲＦ确实存在着细胞凋亡的病理改变。ＭＥＬ预防用药能减轻ＩＡＲＦ,减少细胞凋亡的发生。     

重组人肿瘤坏死因子对人结肠癌SW—480细胞的体内作用

目的 探讨ＴＮＦ抗大肠癌的作用及其机制，方法 建立人结肠腺癌裸小鼠移植瘤模型，观察ｒｈＴＮＦ对人结肠腺癌ＳＷ－４８０裸小鼠移植瘤重量、组织学和超微结构及细胞周期动力学的影响。结果 ｒｈＴＮＦ对人结肠腺癌裸小鼠移植瘤具有抑制作用，抑制作用呈剂量依赖性；结肠癌细胞围绕血管出现片状坏死，并有大量炎细胞浸润：ｔｈＴＮＦ能明显抑制结肠癌细胞从Ｇ０／Ｇ１期过渡到Ｓ和Ｇ２Ｍ期，使细胞增殖指数显著降低，ＤＮＡ抑制     

膀胱肿瘤细胞膜肿瘤坏死因子受体测定及其意义

目的探讨膀胱肿瘤细胞膜肿瘤坏死因子受体（ＴＮＦ－Ｒ）的表达情况。方法用放射配基结合分析法测定了体外培养的膀胱癌ＢＩＵ－８７细胞膜ＴＮＦ－Ｒ。结果膀胱肿瘤细胞膜存在ＴＮＦ－Ｒ，当肿瘤细胞１．６×１０６个、ｐＨ７．０～８．０、４℃条件下反应１２０ｍｉｎ时，１２５Ｉ－ＴＮＦ与受体结合反应良好，受体解离常数为０．１５ｎｍｏｌ／Ｌ，数目为８６９个结合位点／细胞。结论由于肿瘤细胞存在ＴＮＦ－Ｒ，因此对膀胱肿瘤进行免疫治疗时，ＴＮＦ可以和受体结合发挥生物学效应以杀灭肿瘤细胞     

EB病毒LMP与EGF自分泌在鼻咽癌细胞生长中的作用及其相互 …

以ＬＭＰ基因转染ＣＮＥ１细胞对象，用放射免疫分析（ＲＩＡ）和细胞增殖实验（ＭＴＴ）等方法，研究ＥＢ病毒ＬＭＰ和ＥＧＰ自分泌在高分化鼻咽细胞株ＣＮＥ１生长增殖中的作用和关系，结果示：从细胞培养液中检获ＥＧＦ；细胞可在血清培养液中生长，说明ＣＮＥ１细胞具有ＥＧＦ自分泌促生长功能，转染ＰＣＭＶα－ＬＭＰＤＮＡ的ＣＮＥ１细胞ＬＭＰ的ＰＣＲ和ＬＭＰ单抗免疫组化检测均为阳性，证明ＬＭＰ基因转染成功，ＥＧＦ自分     

EB病毒LMP与EGF自分泌在鼻咽癌细胞生长中的作用及其相互关系

以ＬＭＰ基因转染ＣＮＥ１细胞为对象，用放射免疫分析（ＲＩＡ）和细胞增殖实验（ＭＴＴ）等方法，研究ＥＢ病毒ＬＭＰ和ＥＧＦ自分泌在高分化鼻咽癌细胞株ＣＮＥ１生长增殖中的作用和关系。结果示：从细胞培养液中检获ＥＧＦ；细胞可在无血清培养液中生长。说明ＣＮＥ１细胞具有ＥＧＦ自分泌促生长功能。转染ＰＣＭＶα－ＬＭＰＤＮＡ的ＣＮＥ１细胞ＬＭＰ的ＰＣＲ和ＬＭＰ单抗免疫组化检测均为阳性，证明ＬＭＰ基因转染成功。ＥＧＦ自分泌量和无血清培养下ＥＧＦ的促生长反应，ＬＭＰ转染细胞均高于未转染细胞，表明ＥＢ病毒ＬＭＰ可通过促进ＥＧＦ自分泌而促进鼻咽癌细胞生长增殖。     

rhG—CSF cDNA表达质粒的构建及其在COS7细胞中的表达

目的：构建一个能在哺乳动物细胞中高表达人粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）ｃＤＮＡ的重组质粒。方法：利用化学合成引物，进行ＰＣＲ，对人Ｇ－ＣＳＦｃＤＮＡ５ＡＵＧ侧翼序列进行翻译优化突变。测序确证后，重组人表达载体ｐＥＤ，构建成质粒ＰＥＤ－ＧＣＳＦ，用ＤＥＡＥ－Ｄｅｘｔｒａｎ法转染ＣＯＳ７细胞，ＥＬＩＳＡ法定量测定ｒｈＧ－ＣＳＦ表达水平。结果：转染ＣＯＳ７细胞后４８ｈ收集的上清ｒｈＧ－ＣＳＦ表达量为５     

EXPRESSION OF THE O~6－METHYLGUANINE－DNA METHYLTRANSFERASE GENE IN EIGHT HUMAN TUMOR CELL LINES

ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮＯＦＴＨＥＯ~６－ＭＥＴＨＹＬＧＵＡＮＩＮＥ－ＤＮＡＭＥＴＨＹＬＴＲＡＮＳＦＥＲＡＳＥＧＥＮＥＩＮＥＩＧＨＴＨＵＭＡＮＴＵＭＯＲＣＥＬＬＬＩＮＥＳＣｈｅｎＪｉａｎｍｉｎ；（陈建敏），ＺｈａｎｇＹａｎｐｅｉ；（章扬培）ａｎｄＷｕＹｉ?..     

用血清药理学为芝浸膏GLE的抗肿瘤作用机制

目的：探讨灵芝浸膏（Ｇａｎｏｄｅｒｍａ ｌｕｃｉｄｕｍ Ｅｘｔｒａｃｔ，ＧＬＥ）的抗作用及其机制。方法；采用血清药理学与体内外抑癌实验相结合方法。ＭＴ衍测肿瘤细胞增殖程度，流式细胞仪测细胞凋亡。同时采用生物法测ＴＮＦ－α，ＥＬＩＳＡ测定ＩＦＮ－γ，并用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测ｍＲＮＡ表达。结果：（１）ＧＬＥ（５、１０、２０ｇ．ｋｇ＾－１）灌胃显抑制小鼠移植发现从瘤Ｓ１８０的生长；（２）ＧＬＥ直接加入     

CHANGES OF ENDOTHELIN-1 GENE EXPRESSION IN RAT BRAINS DURING ISCHEMIA AND ISCHEMIC REPERFUSION

ＣＨＡＮＧＥＳＯＦＥＮＤＯＴＨＥＬＩＮ－１ＧＥＮＥＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮＩＮＲＡＴＢＲＡＩＮＳＤＵＲＩＮＧＩＳＣＨＥＭＩＡＡＮＤＩＳＣＨＥＭＩＣＲＥＰＥＲＦＵＳＩＯＮＷｕＷｅｉｐｉｎｇ（吴卫平）；ＫｕａｎｇＰｅｉｇｅｎ（匡培根）ａｎｄＬｉＺｈｅｎｚｈｏ...     

rhG-CSF cDNA高表达质粒的构建及其在COS7细胞中的表达

目的：构建一个能在哺乳动物细胞中高表达人粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）ｃＤＮＡ的重组质粒。方法：利用化学合成引物，进行ＰＣＲ，对人Ｇ－ＣＳＦｃＤＮＡ５＇ＡＵＧ侧翼序列进行翻译优化突变。测序确证后，重组入表达载体ｐＥＤ，构建成质粒ｐＥＤ－ＧＣＳＦ，用ＤＥＡＥ－Ｄｅｘｔｒａｎ法转染ＣＯＳ７细胞，ＥＬＩＳＡ法定量测定ｒｈＧ－ＣＳＦ表达水平。结果：转染ＣＯＳ７细胞后４８ｈ收集的上清ｒｈＧ－ＣＳＦ表达量为５２ｎｇ／ｍｌ，７２ｈ为２３０ｎｇ／ｍｌ，显示ｒｈＧ－ＣＳＦ获得了暂时性高表达。结论：ｐＥＤ－ＧＣＳＦ是一个能在哺乳动物细胞中高效表达ｒｈＧ－ＣＳＦ的真核表达质粒。     

幽门螺杆菌在不同培养基上生长情况的比较

探讨灵芝多糖（Ｇａｎｏｄｅｒｍａ　ｌｕｃｉｄｕｍ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ Ｂ, ＧＬ－Ｂ）对小鼠腹腔巨噬细胞（ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｍａｃｒｏｐｈａｇｅ,ＰＭ）、肿瘤坏死因子α（ｔｕｍｏｒ　ｎｅｃｒｏｓｉｓ　ｆａｃｔｏｒ　ａｌｐｈａ, ＴＮＦα）、肿细胞 γ干扰素（ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ－γ,ＩＦＮγ）的产生及其ｍＲＮＡ表达的影响。方法;采集小鼠ＰＭ和脾淋巴细胞,体外给药,分离细胞培养上清。生物法测定ＴＮＦα。ＥＬＩＳＡ测定ＩＦＮγ;ＲＴ－ＰＣＲ方法检测ｍＲＮＡ的表达。结果：ＧＬ－Ｂ２５～４００ｍｇ·Ｌ~（－１）使正常小鼠ＰＭ培养上清中ＴＮＦα的活性升高,并呈剂量依赖关系,２４ ｈ达高峰,７２ ｈ后开始减少。 ＧＬ－Ｂ对小鼠 ＰＭ的 ＴＮＦα ｍＲＮＡ表达有显著促进作用。ＧＬ－Ｂ１２．５～２００ｍｇ~（－１）明显增加正常小鼠脾细胞培养上清中ＩＦＮγ产生。２４ｈ内随培养时间的延长而增加,４８ ｈ后开始减少。ＧＬ－Ｂ对ＩＦＮγｍＲＮＡ的表达有促进作用。结论：灵芝多糖ＧＬ－Ｂ明显促进小鼠ＰＭ及脾细胞 ＴＮＦα和 ＩＦＮβ ｍＲＮＡ的表达,增加 ＴＮＦα和 ＩＦＮβ的产生。     

重组TNF－α基因逆转录病毒转移系统的构建

将人ＴＮＦ－αｃＤＮＡ功能片段０．９ｋｂ克隆于逆转录病毒载体ＰＬＪ，构建成重组逆转录病毒载体ＰＬＪ－ＴＮＦ；在磷酸钙介导下，将其导入包装细胞ψＣＲＩＰ和ψＣＲＥ中，经克隆筛选，获得了病毒滴度为１０６ＣＦＵ／ｍｌ能稳定、高效分泌含ＴＮＦ－α基因重组病毒颗粒的细胞株ＰＬＪＣ－５。