叠氮溴化丙锭染料结合环介导等温扩增技术鉴定结核杆菌卡介苗活菌与死菌

目的利用环介导等温扩增技术鉴定结核分枝杆菌卡介苗(BCG)菌株活菌。方法通过在环介导等温扩增之前加入染料叠氮溴化丙锭(PMA),利用PMA染料结合死菌DNA抑制扩增的特性区别活菌和死菌。结果可以抑制死菌扩增而又不影响活菌扩增的最佳PMA浓度为5～10μg/ml,反应液的浊度对反应有明显影响,当浊度低于50NTU时反应可以正常进行。结论利用PMA染料结合环介导等温扩增技术可以成功区别结核分枝杆菌死菌和活菌。     

环介导等温扩增(LAMP)技术的研究进展与展望

环介导等温扩增(LAMP)是2000年报道的一种新的核酸扩增技术,此技术在恒温条件下即可完成核酸的扩增。因具有成本低、耗时少、技术要求低等优点,近年来已被广泛用于病毒、细菌、寄生虫等各种病原体的相关研究。本文就这一技术的研究进展和展望作如下综述。     

环介导等温扩增技术及其在分子诊断中的应用

环介导等温扩增技术作为新兴的分子生物学技术,已经广泛应用于各种病原微生物的分子水平的研究,并且取得了令人鼓舞的成绩。文中就环介导等温扩增技术的原理及在分子诊断中的应用作一综述。     

环介导等温扩增技术、痰涂片镜检法及固体培养法诊断肺结核病的临床价值

[摘要]目的 探讨环介导等温扩增技术、痰涂片镜检法及固体培养法诊断肺结核病的临床价值。方法 选择2019年4月至2020年4月期间于本院就诊的182例初诊肺结核可疑症状患者,所有入选者均提供3份痰标本,分别进行痰涂片镜检法、固体培养法及环介导等温扩增技术检测。分析环介导等温扩增技术、痰涂片镜检法及固体培养法在肺结核病中的诊断效能,计算灵敏度、特异度、准确度、阳性预测值及阴性预测值。结果 环介导等温扩增技术灵敏度（82.08%）、特异度（86.84%）、准确度（84.07%）、阳性预测值（89.69%）、阴性预测值（77.65%）均高于痰涂片镜检法（46.23%、55.26%、50.00%、59.04%、42.42%）,环介导等温扩增技术灵敏度、准确度、阴性预测值均高于固体培养法（58.49%、70.31%、60.00%）,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论肺结核病诊断中环介导等温扩增技术应用价值较高,利于临床提高肺结核病的诊断准确率,在结核病防治机构中具有较好的应用前景。     

微流控LAMP技术在呼吸道病原体检测中的临床应用进展

环介导等温扩增(LAMP)技术的恒温、快速、高效等扩增特点,使它在致病微生物的快速检测方面具有较高的临床应用价值。微流控的应用使得分析过程更加简约化、易操作和微型化。LAMP技术改变了传统核酸扩增方式,它与微流控技术的结合进一步增加其实用性。该文就其在呼吸道病原体细菌、病毒和真菌快速检测中的应用及其优缺点和核酸提取新技术作简述;分析表明微流控LAMP技术在呼吸道感染快速检测方面,具有较大的应用前景。     

人细小病毒B19的环介导等温扩增快速检测方法的建立

目的建立一种简单、快速的核酸检测新方法,即环介导等温扩增方法(LAMP)来检测人细小病毒B19的核酸。方法从GenBank中获得B19病毒VP2基因序列,利用PrimerExplorer V3软件在序列保守区域设计LAMP引物,同时对试验中的几个重要参教进行优化,并评价其敏感性和特异性。结果LAMP检测方法的敏感性高于PCR方法,并且对B19病毒的检测具有特异性。结论建立了环介导等温扩增快速检测方法,此方法灵敏性高、特异性强,不仅适用于实验室检测,更能够广泛用于临床检测。     

基于LAMP的微流控芯片病原体快速检测方法研究进展

急性传染病具有传播速度快、传播范围广、不易控制等特点,严重威胁着广大人民群众的生命安全,其快速检测、早期诊断尤为重要。环介导等温扩增技术(LAMP)是新型的基因扩增技术,可在恒温环境下快速、灵敏、高效、特异地进行基因扩增,具有特异性强、灵敏度高、检测耗时短、操作简便等优点。     

多重核酸检测技术的临床应用现状及未来

多重核酸检测技术具有可同时检测多个靶标、高通量、低成本等优势,满足大规模筛查、定量等检测需求。多重聚合酶链反应广泛应用于病原体、甲基化DNA和突变基因检测以及单核苷酸多态性分型;重组聚合酶扩增、环介导等温扩增等等温扩增技术在即时检测领域有很好的前景;基于规律间隔成簇短回文重复序列（CRISPR）/CRISPR相关蛋白（...     

环介导逆转录等温扩增技术在输血前HCV检测中的应用

目的尝试使用环介导逆转录等温扩增技术用于输血前检测HCV RNA。方法同时采用抗-HCVELISA检测和HCV RT-LAMP检测,比较2者检测结果的差异。结果 2 716例输血前标本,ELISA检测发现19例(0.70%)阳性结果,HCV RT-LAMP检测发现32例(1.18%)阳性结果(P<0.05),2种方法在检测效率上具有显著性差异。RT-LAMP检测在灵敏度上略高于ELISA方法。结论基于HNB颜色反应的环介导逆转录等温扩增技术检测HCV的方法具有快速、灵敏度高的特点。     

人类嗜T淋巴细胞病毒LAMP检测方法的应用研究

目的环介导等温基因扩增(LAMP)方法。检测HTLV的效果探讨方法针对人类嗜T淋巴细胞病毒(HTLV)的PX基因,设计4条特异性引物,在BstDNA聚合酶的作用下对HTLV阳性标本进行等温核酸扩增反应,取扩增产物凝胶电泳判断结果。并优化扩增体系和反应条件,初步评定检测方法的检出限。结果HTLV特异性检出的LAMP反应体系,检出限为9.4fg,方法<2h完成检测。结论LAMP方法检测HTLV具有操作简便、成本低、检测周期短等特点,有较高的灵敏度,为HTLV的检测提供了新的发展方向。     

新型冠状病毒核酸检测方法

从2019年12月开始识别和救治新型冠状病毒(SARS-CoV-2)感染的肺炎至今,新型冠状病毒肺炎的确诊病例数已超过70 000例,快速、准确地诊断对于SARS-CoV-2感染的控制至关重要。目前已知的用于人类流感病毒感染的诊断方法主要有:病毒的分离、特异性抗原检测以及核酸扩增等,核酸扩增所需窗口期短、耗时短,因此在病毒的早期、快速诊断中有一定的优势。SARS-CoV-2为单链RNA病毒,针对RNA病毒的较成熟的核酸诊断技术主要有:实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应、逆转录环介导等温扩增、依赖核酸序列扩增、重组酶聚合酶扩增技术和基因芯片等。本文对这些常用的核酸诊断技术的基本原理和在SARS-CoV-2检测中的应用现状进行了综述,为目前抗击疫情的临床一线提供一些有用参考。     

乙型肝炎病毒DNA等温扩增体系的建立

当前乙型肝炎病毒（HBV）的全球感染形势依然严峻，流行病学评估目前世界上有4亿多慢性感染者，高流行区域如我国人群感染率〉15％，基因型分布以B、C型为主。HBV的病毒载量与感染状态密切相关，寻求快速、简便、灵敏、特异的定量手段是对HBV早期诊断、病程监控及流行病学调查的需求。本研究在Notomi T的环介导等温扩增（LAMP）技术基础上，建立起HBV DNA等温扩增的定量检测体系。     

环介导等温扩增技术快速检测脑膜炎奈瑟菌属方法的建立

目的应用环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术建立一种快速敏感的脑膜炎奈瑟氏菌属检测方法。方法针对脑膜炎奈瑟菌属(ctrA)基因序列的6个区域设计4条LAMP引物(2条内引物、2条外引物),同时设计2条环引物,并对反应条件和反应体系进行优化。分别验证该方法的特异性及敏感性,并与普通PCR进行了比较。结果在适宜反应条件所设计引物对脑膜炎奈瑟菌的扩增的特异性及敏感性均较好,与普通PCR方法比较,LAMP敏感性比普通PCR高10倍。结论 LAMP检测速度相比PCR更快速,在60 min内即可完成扩增反应。实验建立的LAMP方法能够快速、灵敏、特异地检测脑膜炎奈瑟氏菌,适合基层检验部门及小型实验室与现场监测等使用。     

LAMP在临床微生物检测中的应用及进展

环介导等温扩增技术(LAMP)是在等温条件下对目标DNA序列进行扩增的一种技术。在临床微生物检测方面,LAMP与染色镜检、生化鉴定、逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、核磁共振等技术比较,具有方法简单、特异度强、便于观察结果、不需要精密仪器等优势,是一种非常有价值的检测技术。该文主要对LAMP的终点检测方法及LAMP在临床微生物检测上的应用及进展作一综述,并对其应用的优缺点进行了分析,旨在为检验人员选择LAMP作为临床微生物检验手段提供参考。     

LAMP技术在医学检验中的应用

环介导等温扩增(loop-mediated-isothermal-amplification LAMP)技术是近年来发展的一种灵敏、特异、快速的新型基因检测与核酸扩增技术,与传统的PCR方法相比,LAMP不需要热循环,为等温扩增,其检测结果可以通过加入核酸染料SYBR GREEN进行肉眼观察或浊度计即可判定结果.因此,LAMP是一种不需要热循环仪,肉眼即可判定结果的高度特异性,和敏感的DNA扩增技术,适用于现场,基层条件较差的实验室进行病原微生物的快速检测.本文就近年来LAMP/LAMP-RT技术在医学检测中的应用做一综述.     

快速检测大肠埃希菌LAMP方法的建立

目的 建立一种环介导等温扩增(LAMP)反应快速检测大肠埃希菌的方法。方法 根据美国国立卫生研究院基因序列数据库(Genbank)上大肠埃希菌的lacZ(登录号:M74750)基因序列,设计4条特异引物(2条内引物,2条外引物),对lacZ基因进行扩增,对扩增反应进行优化,采用琼脂糖电泳及肉眼观察结果。结果 将提取的13株细菌DNA进行LAMP反应,仅大肠埃希菌得到阳性结果,LAMP检测下限为15cfu/mL。结论 LAMP检测大肠埃希菌是快速、低成本、特异性强、灵敏度高的方法,适合临床开展。     

百日咳实验室核酸检测方法的研究进展

百日咳是一种急性呼吸道传染病。由于疫苗的广泛使用,许多患者感染后不能表现出典型的临床症状。因此,敏感特异、简便快速的实验室检测方法显得尤为重要。与血清学和细菌学方法相比,PCR、环介导等温扩增(LAMP)等核酸检测方法可在1～2 h内得出结果,且灵敏度高、特异性好,可区别诊断百日咳鲍特菌、副百日咳鲍特菌和霍氏鲍特菌引起的百日咳。但在实际应用中,各种方法都有其相应的优势和弊端。该文就百日咳的实验室核酸检测方法的研究进展进行综述。     

可视化等温扩增法快速筛查并分型禽流感病毒

目的:建立一种通用筛查禽流感病毒及其3种亚型的快速核酸检测方法.方法:对20例已知样本扩增禽流感病毒共有的M基因上的一段保守序列快速筛查并确定是否为禽流感病毒,扩增禽流感病毒(H5N1,H7N7,H9N2)3种亚型特异性HA基因上一段序列鉴定禽流感病毒的基因型.采用环介导等温扩增法检测核酸,用肉眼观察双链嵌合染料SYBR Green I荧光显色信号强度.结果:3种禽流感病毒亚型的检测灵敏度均为l0拷贝/管,3组引物间无非特异性扩增.18例阴性,2例阳性,准确性及特异性均为100%.结论:建立的核酸检测方法适合现场快速检测禽流感病毒及其3种亚型.     

环介导等温扩增技术的应用

环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术是针对靶基因的6个区域设计4种特异引物,利用一种链置换型DNA聚合酶(Bst DNA polymerase)在恒温65℃左右保温几十分钟快速进行核酸扩增的方法.由于其具有快速、简便、特异性好、灵敏度高、成本低等优...     

作者更正

《临床检验杂志》2020年第1期《环介导等温扩增技术检测呼吸道样本中肺炎克雷伯菌》一文因作者疏漏,产生错误。现作如下更正:文中甜菜碱浓度优化试验的甜菜碱浓度单位应均为mol/L,非mmol/L。《临床检验杂志》2018年第10期《类风湿关节炎患者血清长链非编码RNA HOTAIR、XIST和H19表达研究》一文作者张立平为该论文的共同第一作者和共同通信作者,特此更正。