IRE-BP 1基因在三种淡色库蚊体内表达量的比较分析

目的进行不同品系淡色库蚊铁离子应答元件结合蛋白1基因表达量的分析。方法据二维电泳获得肽段序列设计引物扩增基因片段,荧光定量PCR检测在淡色库蚊抗性品系、敏感品系、现场采集品系蚊体内的表达水平差异。结果成功扩增淡色库蚊铁离子应答元件结合蛋白1基因片段,荧光定量PCR表明该基因在抗性品系蚊体内的表达量是敏感品系的8.22倍,现场品系是敏感品系的5.17倍。结论淡色库蚊铁离子应答元件结合蛋白1基因可做为新的抗性检测及治理基因靶标。     

铁反应元件结合蛋白2基因在抗性及敏感品系淡色库蚊中表达量的分析

目的 进行不同品系的蚊中铁反应元件结合蛋白2(IREBP2)基因表达量的分析.方法 根据二维电泳获得的肽段序列,设计引物扩增基因片段,荧光定量PCR检测在抗性及敏感品系蚊的表达水平差异.结果 成功扩增淡色库蚊IREBP2基因的片段,荧光定量PCR表明IREBP2基因在抗性品系中的表达量是敏感品系的10.27倍.结论 淡色库蚊的IREBP2基因可做为新的抗性检测及治理的基因靶标.     

淡色库蚊抗药性相关基因--NYD-MLC2基因的克隆与分析

目的:获取淡色库蚊抗药性相关基因NYD-MLC2的cDNA全长序列并鉴定其在抗性品系和敏感品系中的表达差异。方法:根据抑制性差减杂交(SSH)结合cDNA芯片分离获得的淡色库蚊抗药性相关NYD-MLC2基因片段序列设计引物,采用快速扩增cDNA末端法(rapidamplificationofcDNAends,RACE)扩增NYD-MLC2基因3′、5′端,经对位拼接获得全长序列,并进行生物信息学分析;荧光定量PCR验证此基因在抗性和敏感品系的表达差异。结果:获得淡色库蚊NYD-MLC2cDNA全长序列,开放阅读框为630bp(GenBank/NCBIDQ140391),编码210个氨基酸。蛋白质序列分析显示,NYD-MLC2与冈比亚按蚊(Anophelesgambiae)一个未知功能的蛋白同源性最高,为91%;实时荧光定量PCR结果显示,NYD-MLC2在淡色库蚊溴氰菊酯抗性品系中的表达量是敏感品系的4.08倍。结论:获得淡色库蚊抗药性相关NYD-MLC2基因cDNA全长序列,并证实其在淡色库蚊溴氰菊酯抗性品系中高表达,提示NYD-MLC2与淡色库蚊溴氰菊酯抗药性相关,值得进一步研究。     

用荧光半定量RT-PCR检测蚊溴氰菊酯抗性

目的:建立蚊对菊酯类杀虫剂抗性的PCR检测方法。方法:应用荧光半定量RT鄄PCR,检测经SSH结合cDNA芯片分离鉴定的淡色库蚊对溴氰菊酯抗性相关基因NYD鄄Tr在抗性品系与敏感品系中的表达水平。结果:经荧光半定量RT鄄PCR检测,NYD鄄Tr进入指数期的循环数抗性品系早于敏感品系,抗性品系组比敏感品系组先进入指数增长期。结论:以NYD鄄Tr作为靶基因,荧光半定量RT鄄PCR可区分淡色库蚊对溴氰菊酯抗性品系与敏感品系,亦即可检测淡色库蚊溴氰菊酯抗性。     

三种家蝇酚氧化酶基因表达差异研究

目的进行不同品系家蝇酚氧化酶基因表达量差异的分析研究。方法根据酚氧化酶基因序列设计引物扩增基因片段,荧光定量PCR检测在家蝇抗性品系、敏感品系、现场采集品系家蝇体内酚氧化酶的表达水平差异。结果酚氧化酶基因在抗性品系蝇体内的表达量是敏感品系的13.38倍,现场品系是敏感品系的6.24倍。结论家蝇酚氧化酶基因可作为新的抗性检测及治理基因靶标。     

淡色库蚊抗性相关基因--NYD-GBE基因的克隆与分析

目的:获取淡色库蚊抗药性相关NYD-GBE基因cDNA全长序列并验证其在抗性品系和敏感品系中的表达差异。方法:根据抑制性差减杂交(SSH)结合cDNA芯片分离获得的淡色库蚊抗性相关NYD-GBE基因片段设计引物,采用快速扩增cDNA末端法(rapidamplificationofcDNAends,RACE)扩增糖原分支酶基因5′、3′端,经对位拼接获得全长序列,并用相应的软件进行生物信息学分析。结果:获得淡色库蚊NYD-GBEcDNA全长序列,开放阅读框为2070bp(GeneBank/NCBIDQ102393),编码689个氨基酸。蛋白质序列分析显示,NYD-GBE与冈比亚按蚊(Anophelesgambiae)和拟暗果蝇(Drosophilapseudoobscura)一个未知功能的蛋白同源性最高,为82%和72%,与人糖原分支酶的基因同源性次之为60%。荧光定量PCR结果显示,NYD-GBE在淡色库蚊溴氰菊酯抗性品系中的表达量是敏感品系的19.7倍。结论:获得淡色库蚊抗药性相关NYD-GBE基因全长cDNA序列,并证实其在淡色库蚊溴氰菊酯抗性品系中高表达,提示NYD-GBE与淡色库蚊溴氰菊酯抗性相关,值得进一步研究。     

转铁蛋白与Bel-7402肝癌细胞耐药性关系的研究

目的 研究转铁蛋白与Bel-7402肝癌细胞耐药性的关系.方法 根据已知转铁蛋白序列设计引物扩增基因片段,荧光定量PCR检测其在敏感Bel-7402细胞株、阿霉素抗性Bel-7402细胞株之间的表达水平差异.结果 成功扩增Bel-7402肝癌细胞转铁蛋白基因片段,荧光定量PCR表明转铁蛋白基因在阿霉素抗性Bel-7402细胞株的表达量是敏感Bel-7402细胞株4.83倍.结论 转铁蛋白基因对肝癌细胞的耐药发生发展存在一定的作用,可为研究肝癌耐药性的备选基因,以及为肝癌耐药性检测提供新的靶标.     

中华按蚊不同株转铁蛋白基因表达水平的比较研究

定量RT-PCR 分析表明,中华按蚊溴氰菊酯抗性品系的转铁蛋白转录水平比敏感品系高11.5 倍,现场采集品系比敏感品系高8.3 倍.不同发育阶段的基因表达差异分析表明,成年雌蚊转铁蛋白mRNA 的表达水平最高,其次是三龄幼虫和卵.中华按蚊溴氰菊酯抗性品系和本地收集的菌株有3 到4 倍的增加相比,和敏感品系相比,中华按蚊溴氰菊酯抗性品系和现场采集品系的转铁蛋白表达水平均有3 到4 倍的增加.这些结果表明,转铁蛋白的表达水平与中华按蚊溴氰菊酯的抗性水平的提高有同步性,提示转铁蛋白对中华按蚊溴氰菊酯对杀虫剂的抗性形成具有一定的作用.     

淡色库蚊对溴氰菊酯抗性和敏感品系差异表达蛋白的研究

目的：获取淡色库蚊对溴氰菊酯敏感和抗性品系的差异表达蛋白,为蚊虫抗药性分子机理的深入研究奠定基础。方法：应用十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS－PAGE）获取敏感和抗性蚊虫水溶性蛋白的电泳谱,并用Labworks^TM分析软件对电泳结果进行分析。结果：淡色库蚊对溴氰菊酯敏感和抗性品系表达蛋白间存在质和量的差异,其中,敏感品系4龄幼虫较抗性品系有1条分子质量为60．3ku的特异带。敏感品系雌性成蚊有1条分子质量为36．1ku的特异带,而抗性品系则有分子质量为97．2ku和36．9ku的2条特异带,在蛋白表达量的差异方面,共有8条蛋白带存在2倍以上的差异。结论：这些质和量的差异表达蛋白可能与淡色库蚊对溴氰菊酯的抗药性有关。     

杭州市区淡色库蚊幼虫对5种杀虫剂敏感性测定

为掌握杭州市优势蚊种淡色库蚊对常用杀虫剂的敏感程度,应用现场品系与敏感品系相比较的方法进行了测定。结果表明现场品系的蚊种对溴氰菊酯的敏感性下降了7.5倍,对敌敌畏下降了5.04倍,对残杀威下降3.3倍,对氯菊酯和三氯杀虫酯分别下降了2.1和1.9倍。提示所试的几种药物对淡色库蚊虽未引起明显抗药性,但应注意合理用药延缓抗药性的增加。     

三种抗性品系淡色库蚊对五种杀虫剂的交互抗性

目的了解淡色库蚊对化学杀虫剂的交互抗性,为合理有效地进行蚊虫化学防治提供依据。方法采用WHO生物测定方法测定3种抗性品系淡色库蚊对5种杀虫剂的抗性。结果DDVP抗性品系淡色库蚊抗性水平为8．38倍,对氯氰菊酯、三氯杀虫酯、残杀威和溴氰菊酯的抗性分别为52．50倍、7．61倍、4．74倍和0．75倍;残杀威抗性品系淡色库蚊抗性水平为11．34倍,对氯氰菊酯、DDVP、三氯杀虫酯和溴氰菊酯的抗性分别为8．08倍、2．85倍、2．00倍和1．80倍;氯氰菊酯抗性品系淡色库蚊抗性水平为243．00倍,对溴氰菊酯、三氯杀虫酯、残杀威和DDVP的抗性分别为28．90倍、17．28倍、1．49倍和1．38倍。结论蚊虫对某种杀虫剂产生抗性后,可能对其它杀虫剂也产生不同的交互抗性,用药前应作抗性测定,注意选择药物品种和确定使用剂量。     

淡色库蚊幼虫对三氯杀虫酯和残杀威敏感性观察

目的探讨淡色库蚊幼虫不同发育阶段对杀虫剂的敏感性变化,为科学合理地进行蚊虫化学防治提供依据。方法参照WHO生物测定方法测定淡色库蚊敏感品系、抗三氯杀虫酯品系、抗残杀威品系I～IV幼虫的抗药性。结果淡色库蚊抗三氯杀虫酯品系I龄、II龄、III龄、IV龄幼虫的抗性指数依次为4.35、11.84、16.43、17.28;抗残杀威品系I龄、II龄、III龄、IV龄幼虫的抗性指数依次为2.39、6.26、9.58、11.21。结论蚊幼虫随着个体发育对杀虫剂的敏感性水平逐渐降低,在蚊虫化学防治中应选择敏感的低龄阶段施药。     

洛阳市城区淡色库蚊抗药性现状与预防对策

目的调查洛阳市城区淡色库蚊对常用杀虫剂的抗药性现状,以提出预防对策。结果用WHO生物测定法,测定敏感品系和现场淡色库蚊4龄幼虫对杀虫剂的敏感性及抗性。结果洛阳市城区淡色库蚊对双硫磷、仲丁威、氯菊酯、溴氰菊酯、高效氯氰菊酯等的相对抗性倍数分别为11.63、1.94、2.69、22.94和19.62。结论洛阳市城区淡色库蚊对常用杀虫剂均已产生抗药性。今后应结合当地情况,科学、合理地使用杀虫剂,预防和减缓抗药性的产生。     

淡色库蚊酯酶B1探针制备、测序及现场抗性检测

目的制备淡色库蚊酯酶B1探针,应用于现场抗性检测。方法设计酯酶B1上下游引物,5’端地高辛标记,PCR法制备DNA探针及测序,斑点杂交检测各现场蚊虫抗性。结果找出合适的区分抗性与敏感品系的探针浓度,使抗性与敏感品系杂交点的阳性率有差别。应用酯酶BI探针检测各个现场蚊虫,唐口种群的杂交阳性率为31%,微山种群的杂交阳性率为34%,滕州种群的杂交阳性率为48%。结论应用酯酶B1探针能够检测各现场蚊虫抗性水平。该方法灵敏度高,特异性强,简便实用,为媒介昆虫有机磷杀虫剂抗性分子生物学检测的实用性研究打下了基础。     

二氧化碳与BG-lure引诱剂诱蚊效果比较研究

目的 比较BG-trap捕蚊器在现场使用CO₂和BG-lure引诱剂（BG）的诱蚊效果。方法 2020年8—9月,设置2处现场,间隔100 m,每个现场设置2个点位,分别布放1个BG-trap捕蚊器,彼此间隔 5 m。每个点位设置不同流量CO₂及不同数量BG,次日同一现场2个捕蚊装置交换位置。收集各捕蚊器所捕捉的蚊虫,分类和记录捕获的蚊虫种类、性别和捕获数,并进行统计。结果 BG +/ CO₂ -和BG -/ CO₂ +捕获白纹伊蚊密度分别为14只和31只,淡色库蚊分别 2只和16只,差异均有统计学意义（t=-2.675,-4.873,P<0.05）。在BG +条件下,CO₂ +组白纹伊蚊雌蚊、淡色库蚊雌蚊和白纹伊蚊雄蚊密度分别是CO₂ -组的2.6（25/9.5）、12.0（12/1）和3.0（12/4）倍,差异均有统计学意义（t=-4.119,-4.592, -3.284,P<0.01）,提示吸引白纹伊蚊雌蚊、淡色库蚊雌蚊和白纹伊蚊雄蚊CO₂更有效;在BG -条件下,CO₂ +组白纹伊蚊雌蚊、淡色库蚊雌蚊和白纹伊蚊雄蚊密度分别是CO₂-组的1.8（18/10）、15.5（15.5/1.0）和2.0（9.0/4.5）倍,差异均有统计学意义（t=-2.868,-5.259,-2.508,P<0.05）;在CO₂ +条件下,BG +组白纹伊蚊和淡色库蚊密度分别是BG -组的1.4 （43.5/31）和0.78（12.5/16.0）倍,差异无统计学意义（t=-0.943,0.709,P>0.05）;在CO₂ -条件下,BG +组白纹伊蚊和淡色库蚊是BG-组的1.0（14/14）和2.0（2.0/1.0）倍,差异无统计学意义（t=-0.500,-1.000,P>0.05）;在BG -条件下,添加0、 1和2份干冰捕获白纹伊蚊雌蚊密度分别为10只、17.5只和18只,三组差异有统计学意义（F=3.942,P<0.05）,捕获淡色库蚊雌蚊分别为1只、13只和18只,三组差异有统计学意义（F=13.881,P<0.05）,但添加1份和2份干冰捕获白纹伊蚊雌蚊和淡色库蚊雌蚊,差异无统计学意义（t=0.112,-0.540,P>0.05）;在CO₂ -条件下,添加0、1和2份BG捕获白纹伊蚊和淡色库蚊雌蚊分别为10只、10只、9.5只和1只、1只、1.5只,三组差异无统计学意义（F=0.120,0.477,P>0.05）。 结论 使用BG-trap捕蚊器监测中,CO₂诱蚊效果优于BG引诱剂,且用100 mL/min流量CO₂能更节省使用成本。     

山东省五地市淡色库蚊对常用杀虫剂的抗药性现状

目的 了解山东省5地市淡色库蚊对常用化学杀虫剂的抗性现状。方法 幼虫浸渍法。结果 淡色库蚊对氯氰菊酯、溴氰菊酯和DDVP均为高度抗性；对残杀威嘉祥县和腾州市为高度抗性，济宁市任城区、邹城市和泰安市为中度抗性；对三氯杀虫酯则腾州市和济宁市任城区为高度抗性，其余三地市为初步抗性。结论 该蚊对氯氰菊酯、溴氰菊酯和DDVP的抗性较高是长期大量用药和使用频率高所致；对残杀威产生的抗性则可对与该药和有机磷杀虫剂具有交互抗性有关。