元宝枫叶总黄酮的提取研究

用乙醇作为溶剂，采用常规浸提法及超声辅助法对元宝枫叶总黄酮的提取进行了对比研究。通过单因素及正交试验结果得到浸提法的优化条件为：溶剂为体积分数50％的乙醇溶液，料液比1g：25mL，提取时间1．5h，浸提温度70℃。按照此条件提取两次，第一次提取率94．16％，第二次1．36％；超声辅助法的优化条件为：溶剂为体积分数50％的乙醇溶液，料液比1g：15mL，提取时间0．5h，浸提温度60℃。按照此条件提取两次，第一次提取率为96．29％，第二次提取率为3．11％．     

Renalase基因的克隆及表达

目的：克隆与表达人Renalase基因。方法：提取总RNA,RT-PCR获得Renalase cDNA片段,克隆到表达载体pET42b（＋）中,转染大肠杆菌BL21,采用异丙基硫代半乳糖苷诱导,获取融合蛋白,亲和层析纯化后,将产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳与蛋白质印迹分析。结果：克隆到大小为1 029 bp的Renalase cDNA片段,表达载体pET42b（＋）-Renalase经测序证实为所需质粒。获得的融合蛋白经鉴定证实为重组Renalase蛋白。结论：成功对Renalase基因进行克隆与表达,为进一步研究奠定了基础。     

火龙果色素的基本性质及结构鉴定

采用液质联用(HPLC/MS)的方法,将色素的不同组分分离,并对分离组分进行结构鉴定.结果表明:火龙果果肉、果皮色素同为甜菜苷类色素,从果肉中分离出4种甜菜苷色素为betanin,2 descarboxy betanin,phyllocactin,2 descarboxy phyllocactin;果皮中分离出2种甜菜苷色素为be tanin,phyllocactin.火龙果中甜菜苷红色素的质量分数分别为676.9mg/kg(以鲜果肉计),97.7mg/kg(以鲜果皮计).     

质谱技术快速鉴定临床分离丝状真菌的应用

目的探讨质谱（MALDI-TOF MS）在临床分离的丝状真菌快速鉴定中的应用。 方法收集首都医科大学宣武医院2017年1月至2019年1月经形态学鉴定为丝状真菌的菌株，分别采用双甲酸夹心法和甲酸乙腈萃取法提取真菌蛋白并行MALDI-TOF MS鉴定，并与聚合酶链反应（PCR）内转录间隔区（ITS）基因序列测定结果比较；分析丝状真菌菌种分布和标本来源。 结果共收集临床分离的丝状真菌90株，其中曲霉菌属70株（77.78%），青霉菌属6株（6.67%），链格孢霉5株（5.56%），镰刀菌属4株（4.44%），赛多孢菌2株（2.22%），米根霉、根毛霉和哈茨木霉各1株（1.11%）；其中曲霉菌以烟曲霉47株（52.22%）、黄曲霉13株（14.44%）和黑曲霉4株（4.44%）为主。标本主要来源于呼吸道标本（90.0%）（包括痰标本和肺泡灌洗液），其次为角膜和耳道分泌物（3.33%），痰标本中分离率最多的为曲霉菌（59株、65.56%）。MALDI-TOF MS鉴定到种水平82株，与基因测序结果一致率为91.11%（82/90），鉴定准确率显著高于形态学鉴定结果（68.89%，62/90），差异有统计学意义（χ² = 12.02、P = 0.01）；质谱鉴定丝状真菌中的曲霉菌、镰刀菌、赛多孢菌和链格孢霉时准确率高（98.57%～100%）；双甲酸夹心法和甲酸乙腈萃取法前处理的质谱鉴定丝状真菌到种水平的比率分别为91.11%（82/90）和90.00%（81/90），鉴定曲霉菌种水平分别为98.57%（69/70）和97.14%（68/70），但鉴定准确率差异无统计学意义（χ² = 0.34、P = 0.95）；两种前处理方法均可100%鉴定烟曲霉、黄曲霉、赛多孢菌和链格孢霉到种水平，其中89.36%（42/47）烟曲霉和76.92%（10/13）黄曲霉鉴定得分≥ 2.0分。 结论MALDI-TOF MS技术鉴定丝状真菌快速准确，双甲酸夹心法前处理操作更简便，适合实验室常规检测，可用于实验室常规鉴定曲霉菌等常见丝状真菌。     

葡萄籽原花青素结构单元的红外光谱分析

对葡萄籽原花青素粗提物及其纯化物的红外光谱分析发现，在1520～1540cm。有一个峰，从而推断其基本结构单元主要为原花青定（即B环为邻苯二酚）。由于采用体积分数30％乙醇洗脱纯化物除原花青素外还含有一定量的酚酸，而体积分数50％和70％乙醇洗脱纯化物以原花青素（结构单元主要为花青定）为主，因此乙醇洗脱纯化物的红外光谱图在1380～1100cm^-1和750～850cm。有一定差别，而体积分数70％和50％的乙醇洗脱纯化物红外光谱图比较相近，仅在1000～1200cm。处有细微差别．将葡萄籽原花青素在热酸条件下进行醇解，用LC-MS测定其醇解后的基本结构单元，结果表明葡萄籽原花青素醇解产物为矢车菊素，从而证明葡萄籽原花青素基本结构单元为花青定，这与其红外光谱图特征峰的推断相吻合。     

大孔树脂分离提取发酵液中灵芝三萜类物质

利用大孔树脂富集提取发酵液中灵芝三萜。通过比较4种大孔树脂对灵芝三萜的吸附和解吸性能，发现AB-8树脂最适合灵芝三萜的提取。结果表明：控制体积流量为2mL／min、pH值2，AB-8树脂的饱和吸附量达到最大，为8．837mg／g（以干树脂质量计）。确立了最佳洗脱方案，依次用水、体积分数20％、40％、95％乙醇溶液分段洗脱。     

中压液相色谱快速分离纯化Kluyveromyces fragilis β-D-半乳糖苷酶

应用AKTA explorer 100型中压液相色谱快速纯化工艺，系统分离纯化了脆壁克鲁维酵母（Kluyveromyces fragilis）β-D-半乳糖苷酶。K．fragilis发酵生产的菌体细胞经过破碎、离心后的上清液中含有K．fragilis β-D-半乳糖苷酶。粗酶经过AKTA explorer 100中压液相色谱的Hiprep^R 16／10 Source 30Q强阴离子交换柱和Hioad26／60 Superdex凝胶过滤色谱连续两步纯化，酶的回收率为27％，纯化倍数为42。纯化的K．fragilis β-D-半乳糖苷酶在垂直板十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）上，呈现一条染色谱带，表明纯化的酶具有较高的纯度。K．fragilis LFS-8611 β-D-半乳糖苷酶相对分子质量约为60 000。     

酵母蔗糖酶的提取方法

采用甲苯自溶法、冻融法、SDS抽提法3种方法从酵母中提取蔗糖酶,经质量分数50%的乙醇分级沉淀、Mono Q阴离子交换柱层析纯化后,制得高纯度的酵母蔗糖酶。比较了上述3种提取方法并对该酶的部分性质进行了研究。纯化的酶经等电聚焦测定,等电点为5.6,SDS-PAGE鉴定其相对分子质量为60kD。以蔗糖为底物测得酵母蔗糖酶的表观米氏常数Km为0.013mol/L。结果显示3种提取方法各有优劣,冻融法和SDS抽提法的提取效率远高于传统的甲苯自溶法。其中SDS抽提法的效率最高,加之其操作简便,更适合于酵母蔗糖酶大规模的制备提取。     

超声波辅助提取大黄蒽醌类成分

采用正交试验设计法，研究了超声波辅助提取大黄中蒽醌类成分的最佳工艺条件。试验表明：原料按料液比为1g：30mL，在体积分数90％的乙醇中浸润12h后，超声波辅助提取15min，连续提取2次，总蒽醌、游离蒽醌的提取率分别达91．91％和96．48％，明显优于常规煎煮法和乙醇回流法。     

竹柏果皮和果壳中挥发油成分及其抗肿瘤活性研究

摘要目的 比较瑶药竹柏果皮和果壳中挥发油成分,并对两部位的挥发油进行抗肿瘤活性研究。方法应用水蒸气蒸馏法分别从竹柏果皮和果壳中提取挥发油,并结合气相色谱 质谱法分析其化学成分;采用噻唑蓝（MTT）法分别对果皮和果壳挥发油进行抗肿瘤活性研究。结果竹柏果皮挥发油收率为0.23%,分离出21种成分,鉴定18种,主要含有石竹烯,占挥发油总量的72.44%;竹柏果壳挥发油收率为0.15%,分离出15种成分,鉴定其中13种,与果皮共有4种成分;竹柏果皮和果壳挥发油对鼻咽癌细胞均具有抑制增殖活性,半数抑制浓度分别为54.58和114.83 μg·mL－1,果皮挥发油抑制活性较强。结论从竹柏果皮和果壳中提取挥发油主要成分为烯类、醇类、萜类,其中果皮挥发油具有较强的抗肿瘤活性。